Способ окраски нервных структур на гистологическом препарате

 

Использование: в области медицины, а именно нейрогистологии. Сущность изобретения: импрегнацию гистологического препарата проводят при 10 - 15^oC и pH 5,5 - 5,7 раствором содержащим 3,04 - 3,14 мас.% сернокислого марганца, 0,53 - 0,78 мас.% цистеина и воду, осаждение марганца 0,5 - 1,0% раствором ферроцианида калия и преобразование осадка 0,1 - 0,2% раствором азотнокислого серебра и 0,3 - 0,6% раствором сульфида натрия. Способ позволяет селективно окрасить нервные структуры органа, увеличить их контраст и плотность. 2 ил.

Изобретение относится к медицине, а именно к нейрогистологическим методам исследования.

Целью изобретения являются увеличение количества выявляемых нервных структур в органах, улучшение их контраста и повышении точности локализации.

Способ осуществляется следующим образом.

В кровоток органа, например легких, перфузируют раствор, содержащий 5%-ную глюкозу, до полного освобождения сосудов от крови. Далее в те же сосуды перфузируют раствор, содержащий сернокислый марганец и цистеин. Температура раствора 10-15^oC и pH 5,5 - 5,7.

Орган извлекают и помещают в емкость с той же жидкостью на 15-20 мин. Затем в артерии органа вводят 0,5-1,0%-ный раствор ферроцианида калия. Дополнительно орган помещают в тот же состав на 15-20 мин, после чего его фиксируют в 10%-ном растворе формалина.

Срезы толщиной 20 - 40 мкм готовят на замораживающем микротоме, последовательно проводят через 0,1 - 0,2%-ный раствор азотнокислого серебра и 0,3 - 0,6%-ный раствор сульфида натрия. Возможна докраска препаратов любыми гистологическими красителями.

Пример. Легкое через сосуды перфузируют 5%-ным раствором глюкозы. Сосуды промывают до выхода светлого раствора. Далее вводят раствор, содержащий сернокислый марганец и цистеин при следующих соотношениях компонентов мас.%: Сернокислый марганец - 3,04 - 3,14 Цистеин - 0,53 - 0,78 Вода - Остальное ^oC pH этого раствора составляет 5,5 - 5,7, а температура 10 - 15^oC.

Затем перевязывают трахею, извлекают легкие из грудной клетки и помещают в раствор того же состава на 15-20 мин. После в сосуды вводят 0,5 - 1,0%-ный раствор ферроцианида калия и легкие дополнительно выдерживают 15 - 20 мин. в этой же жидкости. Далее орган фиксируют в 10%-ном формалине путем перфузии и погружения. Срезы толщиной 20 - 40 мкм приготавливают на замораживающем микротоме и после тщательной промывки в дистиллированной воде последовательно проводят через 0,1 - 0,2%-ный раствор азотнокислого серебра, дистиллированную воду, 0,3 -0,6%-ный раствор сульфида натрия.

Срезы красят гематоксилин-эозином и исследуют под микроскопом. На срезах хорошо видна структура нервных волокон и их окончаний (фиг. 1 и 2), при докраске гематоксилин-эозином в дополнение хорошо видены клеточные структуры.

Способ позволяет увеличить контраст нервных структур, особенно при выявлении их в органах, поскольку именно в органах тяжело полностью выявить все отделы периферической нервной системы. При импрегнации предложенным способом также хорошо выражена плотность нервных проводников и повышается точность их локализации, что также позволяет учесть эти критерии при оценке и анализе нервных структур в органе.

Формула изобретения

Способ окраски нервных структур на гистологическом препарате путем импрегнации в растворе, содержащем сернокислый марганец, осаждения марганца ферроцианидом калия и преобразование осадка азотнокислым серебром и сульфидом натрия, отличающийся тем, что импрегнацию проводят при 10 15^oС и рН 5,5 5,7 раствором, дополнительно содержащим цистеин при следующих соотношениях компонентов, мас.

Сернокислый марганец 3,04 3,14 Цистеин 0,53 0,78 Вода Остальное при этом осаждение производят 0,5 1,0%-ным раствором ферроцианида калия, а преобразование осадка 0,1 0,2%-ным раствором азотнокислого серебра и 0,3 0,6%-ным раствором сульфида натрия.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2