Способ прогнозирования угрожающих преждевременных родов

 

Использование: в области медицины, в частности, в акушерстве. Сущность изобретения: определяют в периферической крови беременных женщин после 20 недель гестации относительное содержание Т-лимфоцитов, несущих на своей поверхности структуры, реагирующие с альфа₂-микроглобулином фертильности (Т-АМГФ-РОК) и при показателях менее 20% прогнозируются угрожающие преждевременные роды. Технический результат: способ позволяет прогнозировать угрожающие преждевременные роды с точностью 94%, является доступным в выполнении. Использование способа способствует проведению ранних профилактических мероприятий, направленных на снижение частоты преждевременных родов. 1 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству, и может быть использовано для прогнозирования угрожающих преждевременных родов, начиная с 20 недель беременности.

Предлагаемый способ позволяет прогнозировать угрожающие преждевременные роды, начиная с 20 недель гестации за 10 недель до появления клинических признаков заболевания.

Актуальность разработанного способа определяется высокой частотой преждевременных родов, которая по литературным данным составляет от 3 до 30%, и в 72 - 85% случаев они являются причиной неонатальной смертности.

Известен способ диагностики угрозы прерывания беременности у беременных без клинических признаков данной патологии на момент обследования, но с последующим развитием клинической картины по повышению на 75% хемилюминесценции сыворотки крови в присутствии сульфата железа и тетра-трет-бутилтетрафенилпорфина по отношению к норме.

Недостатками данного способа являются: неспецифичность данного метода; изменение показателей хемилюминесценции в зависимости от времени экспозиции; отсутствие данных о том, за сколько недель до появления клинических признаков угрозы прерывания беременности действуют прогностические критерии; применение данного способа предполагает использование дорогостоящего оборудования и реактивов.

Наиболее близким к заявленному способу является способ прогнозирования угрозы прерывания беременности путем определения уровня хорионического гонадотропина (ХГ) в сыворотке крови беременных и уровня хорионических антител. (Авт. св. N 1698781, C O1 N 33/53, 1991). По данному способу угроза прерывания беременности прогнозируется при значениях угрозо-метрического коэффициента (К) более 2,0. Угрозо-метрический коэффициент вычисляется по формуле: К = 4,87 + 7,79 {1-exp[В·(С_хг-2,45)]}, где В = 0,11 - 0,05(log₂T - 10), С_хг - кратность снижения уровня ХГ относительно нормы для данного срока беременности, T - обратный титр противохорионических антител в сыворотке крови беременных.

Данный способ был выбран нами в качестве прототипа, однако он имеет ряд существенных недостатков: по данным литературы уровень ХГ в сыворотке крови беременных во второй половине физиологической беременности колеблется в интервале 10000 - 70000 МЕ, а в предлагаемом способе не указывается конкретное значение в пределах данного интервала, от которого следует вычислять угрозометрический коэффициент; определение сывороточного ХГ во второй половине беременности малоинформативно для определения угрозы прерывания беременности и совсем не информативно для прогнозирования угрожающих преждевременных родов; отсутствуют данные о сроках гестации, в которые предлагается использовать данный способ;
отсутствуют данные о сроках появления изменений в прогностических критериях прототипа;
отсутствуют данные о точности способа-прототипа;
расчет угрозометрического коэффициента затруднен, так как не определено понятие exp, присутствующее в формуле.

Указанные недостатки предлагается устранить в заявляемом способе.

Целью способа является повышение точности прогнозирования угрожающих преждевременных родов, начиная с 20 недель гестации.

Указанная цель достигается тем, что в периферической крови беременных женщин в сроки гестации после 20 недель в обогащенной популяции Т-клеток определяется относительное содержание лимфоцитов, несущих на своей поверхности структуры, реагирующие с альфа₂-микроглобулином фертильности (Т-АМГФ-розеткообразующие клетки - Т-АМГФ-РОК), и при значениях показателя менее 20% прогнозируются угрожающие преждевременные роды с точностью 94%.

Способ осуществляется следующим образом.

В пробирку, содержащую 25 ед гепарина, забирают 1 мл крови из локтевой вены и добавляют 1 мл среды 199, подслаивают 1 мл фиколл-верографина с градиентом плотности 1,078. Клеточную фракцию лимфоцитов получают методом скоростного центрифугирования при 200 g в течение 20 мин. Лимфоциты собирают в интерфазе среда 199-фиколл-верографин и отмывают 2 раза средой 199 центрифугированием при 200 g в течение 10 мин. К суспензии клеток в концентрации 2·10⁶ кл/мл добавляют равный объем диагностикума, содержащего 1% эритроцитов барана, обработанных стандартным методом папаином и цистеином. Полученная смесь инкубируется 10 мин при 37^oC, центрифугируется 10 мин при 200 g и инкубируется 1 ч при 4^oC. Клеточная суспензия ресуспендируется в 0,5 мл среды 199 и наслаивается на 0,3 мл фиколл-верографина с плотностью 1,078. Т-лимфоциты, образовавшие розетки с эритроцитами барана, отделяют от В-клеток центрифугированием при 200 g в течение 10 мин. Надосадочная жидкость сливается, а эритроциты барана в осадке лизируются методом осмотического шока в 1 мл воды с последующим добавлением 10 мл среды 199 и отмыванием в центрифуге при 200 g в течение 10 мин. Клетки, содержащиеся в осадке, разводятся в 0,1 мл среды 199 и смешиваются с 0,1 мл диагностикума, содержащего 1% взвесь эритроцитов быка, проинкубированных с раствором препарата АМГФ в концентрации 100 нг/мл в течение 1 ч при комнатной температуре. Клетки с диагностикумом инкубируют 5 мин при 37^oC, центрифугируют 5 мин при 200 g и инкубируют 1 ч при 4^oC. Образовавшиеся розетки фиксируются в 0,05 мл 3% раствора глютарового альдегида и делается мазок на предметном стекле. Высушенный мазок окрашивается по Романовскому, подсчет клеток производится методом светового микроскопирования на 100 клеток, положительными считаются лимфоциты, прикрепившие 3 и более эритроцитов диагностикума.

Новизна заявляемого способа заключается в том, что впервые предлагается прогнозировать угрожающие преждевременные роды у женщин с отсутствием клинической картины данной патологии после 20 недель гестации по определению в обогащенной фракции Т-лимфоцитов относительного содержания клеток, несущих на своей поверхности структуры, реагирующие с АМГФ.

Ранее показатель содержания АМГФ в сыворотке крови беременной женщины и в семенной плазме мужа использовался для диагностики осложнений беременности и прогнозирования состояния плода. Однако, показатель содержания иммунокомпетентных клеток, реагирующих с АМГФ, для прогнозирования угрожающих преждевременных родов используется впервые. Вероятно значительное уменьшение пула клеток, реагирующих с АМГФ, отражает снижение супрессорной активности, что приводит к постепенному усилению материнского ответа на антигены плода и проявлению цитотоксических реакций, направленных на его отторжение.

Использование предлагаемого способа позволяет выявить угрозу преждевременных родов за 10 недель до появления клинических признаков, что дает возможность осуществить раннюю профилактику данной акушерской патологии.

Существенным отличием способа является установление прогностического параметра содержания Т-лимфоцитов, несущих на своей поверхности структуры, реагирующие с АМГФ, при количественном значении которого менее 20% прогнозируются угрожающие преждевременные роды.

Сущность заявляемого способа поясняется следующими примерами:
Пример 1. Пациентка П., 23 лет. Беременность первая, желательная, наступила на первом году регулярной половой жизни. Из анамнеза - нарушений менструальной функции, гинекологических и экстрагенитальных заболеваний не выявлено. На учете в женской консультации состоит с 7 недель беременности, беременность протекала благоприятно. При обследовании в 25 недель беременности жалоб не предъявляла, при наружном осмотре матка овиидной формы, в нормальном тонусе, возбудимость ее не повышена. Головка придлежит над входом в малый таз. Сердцебиение плода ясное, ритмичное, 140 ударов в минуту. При влагалищном исследовании: наружные половые органы развиты правильно, влагалище нерожавшей, шейка матки цилиндрической формы, без дефектов слизистой оболочки, плотной консистенции, длиной до 3 см, наружный зев сомкнут. Матка в нормальном тонусе, безболезненная при пальпации. Через передний свод пальпируется головка плода, высоко над входом в малый таз, костные контуры таза не изменены, крестцовая впадина емкая, мыс не достигается. Своды свободные, выделения молочного цвета, в умеренном количестве. По данным УЗИ патологии не выявлено. Содержание ТБГ в крови, эстриола и прегнандиола в моче в пределах нормы. Диагноз: беременность 25 недель.

Содержание ХГ в крови 20000 МЕ/л (при норме 10000 - 30000 МЕ/л). Заключение: прогнозируется физиологическое течение беременности.

Обследование по заявляемому способу: содержание Т-АМГФ-РОК 16% (при норме 20% и более). Заключение: прогнозируется угроза недонашивания беременности.

Катамнез. В сроке 34 недели беременности появились признаки угрозы преждевременных родов. Пациентка предъявляла жалобы на тянущие схваткообразные боли внизу живота. При осмотре определялось повышение тонуса и возбудимости матки. При влагалищном исследовании шейка матки до 2 см длинной, мягкая, цервикальный канал пропускает 1 исследующий палец до середины его длины. По УЗИ определялось повышение тонуса матки. Женщина госпитализирована в специализированный стационар, где проводилась попытка пролонгирования беременности, однако, в сроке 35 недель беременности произошло преждевременное излитие околоплодовых вод, и спонтанно развилась родовая деятельность. Беременность закончилась преждевременными родами в сроке 35 недель и рождением ребенка с оценкой 6 - 7 баллов по шкале Апгар с признаками недоношенности и хронической внутриутробной гипоксии.

Пример 2. Пациентка К., 21 год. Настоящая беременность вторая, желательная, в первом браке. Первая беременность закончилась самопроизвольным выкидышем в сроке 7 - 8 недель. Менструальная функция не нарушена. Из перенесенных заболеваний отмечает ветряную оспу в детстве. Гинекологических и экстрагенитальных заболеваний не выявлено. На учете в женской консультации состоит с 12 недель беременности, беременность протекала благоприятно. При обследовании в 22 недели беременности жалоб не предъявляла. При наружном осмотре матка в нормальном тонусе, сердцебиения плода выслушиваются, ритмичные, 140 уд/мин. При влагалищном исследовании патологии не выявлено. Содержание ТБГ в крови, эстриола и прегнандиола в моче в пределах нормы. По данным УЗИ патологии не выявлено. Диагноз: беременность 22 недели.

Содержание ХГ в крови 22000 МЕ/л. Заключение: прогнозируется физиологическое течение беременности.

Обследование по заявляемому способу: содержание Т-АМГФ-РОК - 20%. Заключение: прогнозируется физиологическое течение беременности.

Катамнез. Беременность в дальнейшем протекала благоприятно, закончилась своевременными родами и рождением ребенка с оценкой по шкале Апгар 8 - 9 баллов. Мать и ребенок выписаны домой на 5 сутки после родов в удовлетворительном состоянии.

Пример 3. Пациентка М. , 22 год. На учете в женской консультации с 8 недель беременности. Беременность вторая, желательная, в первом браке. Первая беременность закончилась самопроизвольным выкидышем в сроке 7 недель. Из анамнеза: менструальная функция не нарушена, гинекологических и экстрагенитальных заболеваний не выявлено. Беременность протекала благоприятно. При обследовании в 32 недели беременности жалоб не предъявляла. Шевеления плода ощущает с 20 недель беременности. При наружном осмотре матка в нормальном тонусе, сердцебиения плода выслушиваются, ритмичные, 140 уд/мин. При влагалищном исследовании патологии не выявлено. Содержание ТБГ в крови, эстриола и прегнандиола в моче в пределах нормы. По данным УЗИ патологии не выявлено. Диагноз: беременность 32 недели.

Содержание ХГ в крови - 29000 МЕ/л. (при норме 14000 - 70000 МЕ/л). Заключение: прогнозируется физиологическое течение беременности.

Обследование по заявляемому способу: Т-АМГ-РОК - 32%. Заключение: прогнозируется физиологическое течение беременности.

Катамнез. Беременность закончилась своевременными родами и рождением ребенка с оценкой по шкале Апгар 9 - 10 баллов. Мать и ребенок выписаны домой на 5 сутки после родов в удовлетворительном состоянии.

Данные исследований приведены в таблице.

Преимущества заявляемого способа:
1. Высокая точность - 94%, чувствительность - 100%, специфичность - 92%.

2. Прогнозирование угрожающих преждевременных родов за несколько недель до появления клинических признаков акушерской патологии.

3. Малое количество крови (1 мл), необходимое для проведения исследования.

4. Доступность проведения методики в любой клинической лаборатории, так как исследование не требует специального оборудования.

5. Взятие крови в декретированные сроки, при посещении женской консультации.

Формула изобретения

Способ прогнозирования угрожающих преждевременных родов по исследованию клеток периферической крови, отличающийся тем, что в крови беременной женщины после 20 недель гестации определяют относительное содержание Т-лимфоцитов, несущих на своей поверхности структуры, реагирующие с альфа₂-микроглобулином фертильности, и при показателях менее 20% прогнозируют угрощающие преждевременные роды.

РИСУНКИ

Рисунок 1