Штамм дрожжей exophiala nigrum, используемый для обработки семян и выращивания растений

 

Использование: биотехнология, сельское хозяйство, получение средств, повышающих урожай растений. Сущность изобретения: штамм дрожжей A-26 Exophiala nigrum получен путем облучения штамма R-11 Exophiala nigrum. Штамм A-26 депонирован во всесоюзной коллекции промышленных микроорганизмов под N У-748. При культивировании штамма на жидких питательных средах, содержащих азот, фосфор и калий при температуре 18-20^oC и аэрации в течение 2-3 суток титр клеток достигает 1-5 ·10⁸ кл/мл. Полученную суспензию используют в качестве препарата, применяемого в растениеводстве. Суспензия содержит гормоны (цитокинины) и ферменты (оксигеназы). Препарат повышает урожай растений и устойчивость их к заболеваниям. 17 табл.

Изобретение относится к сельскохозяйственному растениеводства, садоводства и лесного хозяйства, а именно к биотехнологическим подходам регулирования размножения, роста и развития растений; повышения их устойчивости и урожайности за счет использования специальных микроорганизмов.

Известно использование штаммов рода Trichoderma для обработки семян растений, когда семена за 1 - 3 дня до посева опудривают споровомицелиальным препаратом с целью подавления развития возбудителей заболеваний сельскохозяйственных растений [1].

Известен штамм Bacillus thuringiensis ИМП-215, обладающий фунгицидным действием в отношении фитопатогенных грибов [2].

Известен штамм Streptomyces hidroscopicus M A 500, продуцирующий антибиотики, активные против аспергиллов, пенициллов нейроспоры и ряда других грибов, в т.ч. фитопатогенов [9].

Известны штаммы актиномицетов АТСС 39271, 39272, 39273 семейства Streptomyces, применяемые в виде водной суспензии спор с титром 1 х 10 спор/мл, для внесения в почву или обработки семян путем их погружения в суспензию с целью предупреждения грибных болезней растений [3].

Известен препарат, который готовится на основе непатогенов из семейства Pseudomonaceae с добавлением макро- и микроэлементов и ростовых веществ, который усиливает рост растений, повышает устойчивость к болезням. Предназначается для применения в растениеводстве, виноградарстве, плодоводстве и лесоводстве [7].

Недостатком этого препарата является то, что использование даже не патогенных штаммов Pseudomonaceae представляет определенную опасность для здоровья человека, поскольку через плазмиды возможна передача свойств вирулентности и патогенности от патогенных и условнопатогенных штаммов Pseudomonaceae к непатогенным. Кроме того, этот препарат неудобен в биотехнологическом отношении: для приготовления этого препарата требуется большое число сложных и дорогостоящих добавок, он недостаточно эффективен.

Более эффективны регуляторы роста микробного происхождения [8].

Известен штамм эндомикоризного гриба Glomus sp. N 7, используемый для повышения урожая сельскохозяйственных растений, используемый для инокуляции семян перед посевом [4]. Инокуляция повышает урожай зерна за счет улучшения фосфорного питания сельскохозяйственных растений на бедных подвижным фосфором дерново-подзолистых почвах, а также при создающемся дефиците фосфора на плодородных почвах при внесении азотно-калийных удобрений. Данный штамм принят за прототип.

Недостатками данного штамма является сложность получения инокуляционного материала, поскольку штамм относится к облигатным симбионтам и не способен размножаться на искусственных питательных средах, оказывает положительное действие только для ограниченного набора семейств, родов и видов, эффективен только в определенных почвенно-климатических условиях. Кроме того, обладает сравнительно низкой способностью повышать урожайность, не оказывает существенного влияния на улучшение продовольственных и диетических свойств получаемой продукции растениеводства.

Цель изобретения - получение нового штамма, удобного в биотехнологическом отношении, обеспечивающего при инокуляции улучшение роста и развития растений, повышающего их урожайность, устойчивость к неблагоприятным абиотическим и биотическим факторам, улучшающим качество получаемой продукции растениеводства, обеспечивающим экологические преимущества в технологии растениеводства.

Поставленная задача решается за счет нового штамма Exophiala nigrum A-26, который повышает урожайность растений, удобен в биотехнологическом отношении, способен размножаться на искусственных питательных средах, сохраняя свои свойства при пересевах позволяет с повышенной эффективностью стимулировать рост и развития растений, повышать иммунитет и общую устойчивость растений к неблагоприятному действию биотических и абиотических факторов, существенно улучшает качество получаемой продукции.

Штамм дрожжей Exophiala nigrum A-26 получен путем УФ-облучения. Штамм A-26 храниться в коллекции Внедренческой фирмы "Клон". Штамм депонирован в ВКПМ под номером У-748.

Штамм имеет следующую характеристику: 1. Номенклатурные данные A-26; Родовое название: Exophiala, видовое - nigrum.

Происхождение: получен как мутант индуцированный действием УФ-облучения от штамма R-11 R. nigrum Павленко В.В. в 1987 году. Исходный штамм R-11 Exophiala nigrum был выделен из пробы байкальской воды, взятой из поверхности слоя в 5 м от берега в районе г. Байкальска в сентябре 1977 г. Предварительная индентификация штамма R-11, его изучение и описание проведены Павленко В. В. , Харламовым В.М., Чемериловой В.И. (5). Он используется для улучшения очистки сточных вод ЦБК (6), хранится в лаборатории Внедренческой фирмы "Клон".

2. Способ создания штамма A-26 Exophiala nigrum.

УФ-мутагенез при дробном облучении. На поверхности агаровых пластинок чашек Петри, заполненных питательной средой, наносили газон клеток 4-х суточной культуры R-11 Exophiala nigrum. Клетки распределяли по поверхности равномерно с помощью шпателя. На каждую чашку наносили 1 - 3 тысячи клеток штамма R-11. Поверхность агаровых пластинок с нанесенными на них клетками штамма R-11 облучали лампой БУФ-60, расположенной на расстоянии 60 см от поверхности чашек. Облучение проводили дозировано: 30' - 30' с перерывом между экспозициями 120 мин. После облучения чашки инкубировали в термостате при 22^oC в течение 4-х суток. При указанном режиме на чашках вырастало в среднем 50-100 колоний (выживаемость около 10%).

Мутант A-26 выделен как морфологический, при визуальном анализе цвета и морфологии колоний, выросших после облучения клеток R-11. От исходного штамма он отличался более светлой серовато-бурой окраской. При многократных клонированиях новый признак сохранялся. В последующих экспериментах установлено, что частота ревертирования штамма A-26 меньше 1 · 10⁷, что является еще одним подтверждением мутационной природы штамма A-26.

3. Биотехнологические характеристики штамма A-26.

Штамм A-26 продуцирует комплекс ростовых веществ и ферментов, стимулирующих прорастание семян, процессы корнеобразования, урожайность, а также повышающих иммунитет растений и устойчивость. Предназначен для использования при размножении и выращивании растений, для обработки семян и посадочного материала.

В табл. 1 представлены сведения о важных биотехнологических свойствах предлагаемого штамма A-26. Отсутствие сведений о биотехнологических свойствах прототипа обусловлено тем, что штамм Glomus sp. N 7 не растет на искусственных средах, а поэтому невозможно провести его сравнительное изучение. В табл. 1 приведены некоторые сведения о биотехнологических свойствах исходного штамма R-11, который используется для очистки сточных вод [6]. Способность исходного штамма стимулировать рост и развитие растений, повышение их урожайности выяснилось позже. Сравнительные исследования показали, что штамм A-26 по активности превосходит родительский R-11 E. nigrum.

4. Условия культивирования.

Возможно поверхностное и глубинное культивирование на средах, применяемых для выращивания дрожжей.

5. Морфолого-культурные свойства штамма A-26.

Клетки размером 8,4 x 4,2 - 7,0 x 2,8 мкм, размножаются верхушечным, реже - боковым почкованием, чаще односторонним. Почки овальные или овально-грушевидные.

При культивировании на специальных средах способен переходить к мицелиальному росту. Гифы мицелия образуются из крупных клеток. Мицелий септированный, нерегулярно разветвленный, в основном истинный, субстратный или воздушный образует хламидоспоры овальной формы, слегка удлиненные, трубка прорастания располагается на верхушке, размеры хламидоспор 10,0 х 6,3 мкм - 11,5 х 7,3 мкм.

Половой процесс не обнаружен.

Рост на плотных средах.

На агаризованных средах при температуре 22^oC колонии дрожжевого типа появляются на 2 - 3 сутки. Штрих прямой, профиль выпуклый, край ровный, цвет серовато-бурый, темный с блеском. Консистенция пастоообразная. Через месяц штрих уплотненный, слегка складчатый, неравномерно опушенный. Гигантская колония достигает диаметра 18 - 26 мм, выпуклая по краям, опушенная, серовато-бурого цвета, край ровный, центр приподнятый, консистенция пастообразная, уплотненная. На бедных средах (минимальной) край опушенный, на YEP-по краю валик темного цвета.

Рост в жидкой среде.

При росте в минимальной среде в условиях перемешивания помутнение наблюдается на 2 сутки, на 3 - 4 сутки суспензия темная буроватого оттенка. В отсутствие перемешивания на дне темный осадок дрожжевых клеток: пленки или кольца нет. Через месяц в отсутствии перемешивания на поверхности дерновинка мецелия, обильный осадок на дне; запаха, пенообразования не наблюдается, pH сдвигается в кислую сторону.

6. Физиолого-биохимические свойства штамма A-26.

а) Рост штамма в зависимости от условий в сравнении со штаммом R-11 (исходный) характеризуется данными, приведенными в табл. 2.

Прототип Glomus sp. 7 поддерживается на микоризованных корнях, что ограничивает возможность исследования физиолого-биохимических свойств.

б) Отношение к источникам углерода: штамм A-26 не сбраживает сахара, способен ассимилировать глюкозу, сахарозу, арабинозу, рамнозу, дульцит, мальтозу, лактозу (слабо), галактозу (слабо), рафинозу, манит; способен утилизировать фенолы и лигнин.

в) Отношение к источникам азота: штамм A-26 способен использовать широкий набор источников азота (табл. 3).

г) Другие особенности штамма A-26: штамм A-26 способен расти на минимальной среде без витаминов, не нуждается в дополнительных факторах роста, обнаруживает слабую протеолитическую активность: разжижение желатина послойное. Жир не гидролизует. Эфиры и крахмалоподобные соединения не образует. Аминолитической активностью не обладает 7. Маркерные признаки штамма A-26.

Штамм A-26 содержит мутацию, блокирующую один из этапов синтеза меланина. Вместо черного, характерного для родительского штамма пигмента, штамм A-26 синтезирует буроватый пигмент. Ревертирует спонтанно с частотой ниже 1 · 10⁷: - при анализе выборки в 1 · 10⁷ колоний, спонтанного ревертирования к исходному фенотипу не выявлено.

При культивировании на твердых средах пигмент не выделяет. Продуцирует комплекс ростовых веществ и ферментов определяющих свойство штамма стимулировать рост, устойчивость и урожайность растений. Эти свойства стабильны при хранении в течении 3-х месяцев и сохраняются при пересевах. Периодичность посевов музейных образцов штамма A-26 Exophiala nigrum - 3 месяца.

8. Гено- и хемотаксономические характеристики штамма A-26 не изучали.

9. При проверке патогенных, вирулентных, аллергенных, токсикогенных и токсических свойств установлена полная безопасность штамма A-26 E. nigrum.

Штамм A-26 E. nigrum рекомендован для практического использования как безопасный для теплокровных организмов и растений.

10. Примеры использования штамма A-26 E. nigrum .

Пример 1. Подготовку маточной культуры штамма A-26 E. nigrum, необходимую для изготовления биопрепарата, осуществляли следующим образом. Музейный образец штамма A-26 E. nigrum пересевали на чашки Петри с твердой средой. На 4 - 5 сутки после посева просматривали газон выросших колений и в случае отсутствия посторонней микрофлоры использовали для наращивания маточной культуры A-26 в жидкой среде. В 1-2-х литровые колбы, заполненные на 2/3 объема стерильной жидкой средой, опускали 1 агаровую пластинку с газоном выросших на ней клеток штамма A-26.

Колбы со средой, инокулированной штаммом A-26, помещали на качалку или магнитные мешалки и культивировали при постоянном перемешивании 24 ч при температуре 20 - 22^oC. На вторые сутки, когда титр суспензии достигал 1-5 · 10⁸ кл/мл. Полученную маточную культуру переносили в ферментеры большего размера, заполненные стерильной жидкой средой того же состава. Возможно использование упрощенных вариантов жидких сред, содержащих азот, фосфор и калий в соотношении 90 : 60 : 30.

Титр исходной суспензии после внесения маточной культуры 1-10 · 10⁵ кл/мл. Культивирование в ферментере при t 18 - 20^oC при постоянном или периодическом (интервалы 20'-20') барботировании воздухом или механическом перемешивании. Через 2-3 суток титр суспензии клеток достигал 1 - 5 · 10⁸ кл/мл.

Полученная суспензия используется в дальнейшем в качестве препарата, применяемого в растениеводстве. В нем, кроме живых клеток A-26 содержатся метаболиты, продуцируемые клетками: - гормоны (ИУК, цитокинин и др.) и ферменты - оксигеназы.

Пример 2. Исследовали стимулирующее действие штамма A-26 на прорастание семян огурца сорта "Нежинский". Для обработки использовали суспензию штамма A-26 с титром 1 · 10⁷ кл/мл (опыт N 1) и с титром 5 · 10⁵ кл/мл (опыт N 2). Их готовили из маточной культуры. В зависимости от титра ее разбавляли в 10 или 50 раз для варианта опыт N 1 и в 200 или 1000 раз для варианта опыт N 2. Для разбавления использовали жидкую минимальную среду.

Штамм Glonus sp. N 7 невозможно использовать в аналогичных условиях: его действие на прорастание семян неизвестно.

Обработку суспензией и проращивание семян осуществляли в чашках Петри. На дне чашки помещали по 10 отколиброванных семян огурца и вносили по 25 мл суспензии соответствующего титра.

Эффективность обработки оценивали по таким показателям как длина корня, стебля и семядолей; количество придаточных корней, вес проростка. В табл. 4 приведены результаты испытаний.

Представленные в таблице данные свидетельствуют, что обработка семян суспензией A-26 (опытный вариант 1) и суспензией разбавленной в 20 раз с титром 5 · 10⁵ кл/мл (опытный вариант 2) обладают высокими стимулирующими свойствами. Проростки имеют наибольшую массу, укороченный, сильно развитый корень с наибольшим числом придаточных корешков. Укороченный, хорошо развитый стебель. Причем лучшие показатели развития проростков наблюдали в варианте опыта 1, где использовали титр 1 · 10⁷. Снижение титра клеток A-26 ниже 5 · 10⁵ нецелесообразно, т.к. положительные эффекты действия штамма A-26 на прорастание семян существенно снижаются. Повышение титра суспензии штамма A-26 выше 1 · 10⁷ так же нецелесообразно, т.к. в этом случае наблюдается торможение ростовых процессов, вследствие завышенных концентраций ростовых веществ продуцируемых клетками штамма A-26.

Пример 3. Сравнивали влияние инокуляции эндомикорикоризными грибами штаммом Glomus sp. N 7 (прототип) и штаммом Exophiala nigrum A-26 на урожай зерна овса в вегетационных опытах. Использовали окультуренную почву пашни, опыт ставили аналогично описанному для Glomus sp. N 7 в примере N 1 [4].

В вегетационный сосуд емкостью 3 л помещали сухую нестерильную почву, характеризующуюся содержанием гумуса 2,9%, общего азота 0,19%, Р₂O₅ (по Крисанову) 2.5 мг/100 г почвы, pH 6.6. Далее в сосуд вносили в качестве инокуляционного материала суспензию клеток Exophiala nigrum A-26 с титром 1 · 10⁷ кл/мл из расчета 200 мл на 1 кг почвы. После тщательного перемешивания с инокуляционным материалом почву засевали поверхностно простерилизованными семенами овса. Полив почвы, как и в случае с Glomus sp. N 7 осуществляли до 60% полной влагоемкости. Результаты опыта в сравнении с данными для Glomus sp. N 7 [4] представлены в табл. 5.

Полученные данные подтверждают, что штамм A-26 E. nigrum эффективно действует в случае использования его для инокуляции почвы. Прибавка урожая овса в вегетационных сосудах, заполненных предварительно инокулированной штаммом A-26 почвой составляет 26,1 - 27,2%, что существенно выше, чем в случае с Glomus sp. N 7 - способность расти и размножаться на искусственных питательных средах, позволяет использовать его непосредственно для инокуляции семян и другого посадочного материала, а не только почвы, как в случае в прототипом. Благодаря этому возможно применение предлагаемого штамма A-26 в производственных условиях на больших площадях без существенного усложнения обычной технологии выращивания зерновых, кормовых и овощных культур: в садоводстве и лесоразведении.

Пример 4. В производственных условиях исследовали влияние штамма A-26 на рост развития, скорость созревания и урожайность пшеницы, ячменя и овса. В опытных вариантах использовали штамм A-26. Маточную культуру готовили как описано в примере N 1, далее ее разбавляли в 10 - 50 раз до титра 1 · 10⁷ - 5 · 10⁵ кл/мл. Обработку проводили в день посева или за 1 - 3 дня до посева с помощью машин для протравливания семян: ПС-10 или "Мобитокс". Расход клеточно-ферментной суспензии A-26 10 - 15 л на одну тонну зерна. Для озимых и яровых культур установлено, что A-26 стимулирует всхожесть, снижает процент пораженных гнилью семян. В табл. 6 представлены данных о состоянии всходов озимой пшеницы Безостая -1, а так же проценты непроросших здоровых и непроросших, пораженных гнилью семян. Учет проводили через 1 месяц после посева. Размер учетных делянок 30 см по рядку, по пять повторностей в каждом варианте.

Обработка семян злаков перед посевом клеточно-ферментной суспензией A-26 стимулирует формирование мощного узла кущения у растений. Мощная корневая система обеспечивает хороший контакт с почвой что, в свою очередь, является основой для лучшего снабжения растений влагой и минеральными солями. Под действием A-26 обеспечивается закладка и развитие большего числа стеблей. В табл. 7 представлены данные об увеличении продуктивной кустистости у разных сортов пшениц под действием A-26.

Оценку величины продуктивной кустистости осуществляли за 1-2 недели до уборки. Отбирали снопы с равных по площади делянок, чаще всего размер учетной делянки равнялся 1/16 м² (0.0625 м²). В опытном и контрольном вариантах отбирали и анализировали по 3 - 7 снопов. Продуктивную кустистость оценивали как отношение числа стеблей с колосом к числу растений в каждом из снопов. В табл/ 7 представлены средние величины продуктивной кустистости для разных сортов пшениц.

Как для озимых, так и для яровых пшениц, продуктивная кустистость в опытных вариантах, где семена перед посевом обрабатывали штаммом A-26, существенно выше, чем в контроле. Превышение продуктивной кустистости составляет 25,0-37,5%. При этом установлено разница в загущенных посевах меньше, а в незагущенных больше. Учитывая факты увеличения процента всхожести семян под действием A-26, с одной стороны, и увеличения продуктивной кустистости под действием A-26, с другой стороны, логично снизить нормы высева зерновых в случае применения штамма A-26. Наиболее целесообразным представляется снижение нормы высева на 20-30 по сравнению с контролем, где инокуляцию не применяли.

В табл. 8 представлены результаты, полученные при проведении полевых испытаний (деляночные испытания), по оценке урожайности в опытных и контрольных вариантах. В опыте норма высева снижена на 20% по сравнению с контролем. Оценивали урожайность ячменя (сорт Рассвет) и яровой пшеницы (сорт Скала). Семена за сутки перед посевом инокулировали суспензией A-26 E. nigrum.

Таким образом установлено, что инокуляция семян штаммом A-26 перед посевом обеспечивает прибавку урожая даже в том случае, когда норма высева снижена по сравнению с необработанным A-26 контролем. Прибавка урожая для ячменя составила 9,2 ц/га (51.1%), а для пшеницы - 5,8 ц/га (35,8%).

Анализ структуры урожая позволил установить, что прибавка урожая обусловлена увеличением продуктивной кустистости, повышением озерненности колоса и увеличением массы зерна.

В табл. 9 приведены данные, полученные при проведении производственных испытаний, о влиянии штамма A-26 на урожайность пшениц.

По сравнению с контролем, где инокуляцию клеточно ферментной суспензией A-26 не проводили, урожайность пшениц в опыте повышается на 5,8 - 10,9 ц/га (18,9 - 37,5%), для яровых пшениц и на 10,3 - 11,2 ц/га (26,6 - 45,1%) для озимых сортов пшениц.

Штамм A-26 оказывает положительное влияние на качество зерна, муки и хлеба. Образцы зерна для проведения полного технологического анализа зерна, муки и хлеба отбирали во время уборки урожая. Результаты анализов приведены в табл. 10.

Применение штамма A-26 позволяет получать продукцию растениеводства не содержащую остаточных пестицидов. Это обусловлено во первых тем, что ферменты - оксигеназы, продуцируемые штаммом A-26 способны с высокой активностью осуществлять деструкцию многих пестицидов, накопившихся в почве. Во-вторых, применение A-26 позволяет исключить протравливание семян ядами, поскольку установлено, что обработка семян штаммом A-26 повышает общую устойчивость растений, в том числе устойчивость к болезням. В опытных вариантах отсутствовали или встречались значительно реже, чем в контрольных вариантах, корневые гнили, твердая и пыльная головня. Растения меньше страдали от бурой ржавчины.

В табл. 11 представлены данные о влиянии A-26 на снижение процента растений, пораженных пыльной головней. Растения, развивающиеся из обработанных A-26 семян, "уходят" от головни.

Таким образом, штамм A-26 стимулирует у злаков устойчивость к неблагоприятным условиям и болезням, увеличивает кустистость, в том числе продуктивную кустистость, повышает урожайность, сокращает сроки прохождения стадий развития, ускоряя созревание, повышает качество зерна и муки за счет увеличения масса зерна, повышения содержания в зерне белка и клейковины.

Пример 5. Исследовали влияние штамма A-26 на устойчивость к вирусным и бактериальным заболеваниям, урожайность и скорость созревания картофеля. Клубки картофеля обрабатывали перед посадкой штаммом A-26 Exophiala nigrum (опыт) и штамма R-11 (контроль-1), приготовление как описано в примере 1. Дополнительно в качестве контрольных были заложены варианты, где клубки обрабатывали триходермином (контроль-2) и химическим препаратом купрозаном (контроль-3). Обработку клубней осуществляли в момент посадки. Через форсунки кортофелесажалки СКМ-4 препарат - раствор или суспензию клеток и ферментов из емкости подавали в сошник через распылитель при помощи шестеренчатого насоса. Клубни, падая через выбросное окно, проходили через зоны распыла и равномерно обрабатывались препаратом.

В табл. 12 представлены данные, свидетельствующие о положительном влиянии штамма A-26 Exophiala nigrum на устойчивость растений картофеля к поражению вирусными, бактериальными и грибными заболеваниями. Процент пораженных болезнями и удаленных растений в варианте с A-26 значительно ниже, чем в контрольных вариантах. Кроме того установлено, что в опытном варианте, где клубки перед посадкой обрабатывали штаммом A-26, урожайность была выше чем в контрольных вариантах на 5 -35%, а созревание наступило на 10-15 дней раньше.

Пример 6. Исследовали влияние штамма A-26 на урожайность и качество получаемой продукции овощных культур. Применение штамма A-26 при выращивании овощей позволяет получать диетическую продукцию с повышенным содержанием витаминов и сахаров; не содержащих избыточных нитратов.

В табл. 13 представлены данные о содержании нитратов у моркови и капусты, выращенных из семян, обработанных перед посевом A-26 (опыт A-26) и не обработанных (контроль б/о).

Применение A-26 для выращивания томатов повышает их устойчивость к болезням и вредителям, повышает их урожайность, улучшает их вкусовые качества.

В табл. 14 представлены данные о содержании в плодах томатов, выращенных с применением A-26, сахаров, витамина C, а также содержание сухого вещества.

Применение A-26 для выращивания сахарной свеклы повышает ее урожайность, увеличивает сахаристость, повышает устойчивость к заболеваниям.

Диетические свойства овощной продукции, выращенной с применением штамма A-26 E. nigrum, повышаются еще за счет того, что в них не содержится остаточных пестицидов в их метаболитов. Это обусловлено тем, что A-26 позволяет выращивать овощи без применения пестицидов или резко сократить их использование. Кроме того, штамм A-26 продуцирует ферменты, способные осуществлять деструкцию пестицидов, применявшихся для обработки растений, сохранившихся в почве от предыдущих обработок.

В табл. 16 представлены данные о повышении устойчивости растений огурцов к болезням. Семена огурца замачивали в клеточно-ферментной суспензии штамма A-26 (приготовление препарата описано в примере 1). Семена помещали на 3 - 10 ч в прохладное (15 - 18 C) место. Сеяли как обычно. После появления всходов проводили периодическую обработку штаммом A-26.

Штамм A-26 помогает выращивать экологически чистые овощи, ускоряя деструкцию пестицидов. В табл. 17 представлены результаты полупроизводственных испытаний способности штамма A-26 разлагать синтетический перетроид "Суми-альфа", применяемый для борьбы с насекомыми - вредителями, отличающийся высокой персистентностью.

Растения капусты обрабатывали препаратом "Суми-альфа". Через 24 ч половину участка обрабатывали клеточно-ферментной суспензией штамма A-26 (опыт), вторую - водой (контроль).

Через 48, 96 и 144 ч отбирали образцы растений опытного и контрольного вариантов, анализировали в них содержание "Суми-альфа".

Пример 7. Штамм A-26 использовали для выращивания меристемной гвоздики. Перед высадкой корни рассады гвоздики мульчировали в специально приготовленной болтушке из глинистой почвы, перегноя и суспензии штамма A-26 с титром 5 · 10 кл/мл. Суспензию готовили как описано в примере 1. Титр рабочей суспензии доводили до нужного путем разбавления водой. В течение первого месяца после высадки опытные грядки поливали суспензией штамма A-26 один раз в неделю. В контроле при высадке рассады гвоздики корни растений мульчировали болтушкой, приготовленной на воде. Полив осуществляли как обычно.

При сравнении опытного и контрольного вариантов было отмечено: а) у растений в опыте первые бутоны появились значительно раньше, чем в контроле; б) качество цветов в опытном варианте было существенно выше, чем в контроле; в) количество цветов в опыте было в 2,5 раза больше, чем в контроле; г) растения опытного варианта отличались здоровым видом, повышенной устойчивостью к болезням и вредителям.

д) выращивание цветом с применением штамма A-26 позволило исключить обработку ядами.

Таким образом, штамм A-26 Exophiala nigrum по сравнению с прототипом Glonus sp. N 7 удобен при размножении на искусственных средах и длительном хранении в музейных коллекциях, стабильно сохраняет ценные для практического использования в растениеводстве свойства. Кроме того этот штамм не требователен к субстрату. Комплекс перечисленных в примерах 1 - 7 свойств обуславливает преимущества использования предлагаемого штамма в практике растениеводства.

Источники информации 1. Методические рекомендации по применению триходермина в овощеводстве. Сост. Николаева С.Н., Буймистру П.Д., Бондаренко А.Н. Кишинев, 1987, с. 9-11.

2. Авт. св. СССР N 1144377, кл. C 12 P 1/04/ (C 12 P 1/04; C 12 R 1 : 07) 1983.

3. Заявка (Франция) N 2524486, кл. C 12 N 1/20, A 01 N 63/04//C 12 R 1/465, 1983.

4. SU Авт. св. N 1145503,кл. A 01 N 63/00, C 12 N 1/14 (C 12 N 1/14, C 12 R 1: 645) 1983 - прототип.

5. Павленко В.В., Чемерилова В.И., Харламов В.Ш. Использование "черных дрожжей" в токсико-генетических экспериментах. В кн. Исследования по генетике ВНП 9. Издательство Ленинградского университета, 1981, с.9 - 17.

6. Авт. св. СССР N 1071637, кл. C 12 N 15/00/ C 02 F 3/34; C 12 R 1/00, 1982.

7. Заявка (Франция) N 2594294, кл. A 01 N 63/03; 65/00. 1987.

8. Муромцев Г.С. и др. Регуляторы роста растений, микробного происхождения - Успехи микробиологии М., 1984, вып. 19, с. 106 - 135.

9. Патент (США) N 4575500, кл. A 01 N 57/12, C 07 F 9/09, НКИ 514/121, 1984.

Формула изобретения

Штамм дрожжей Exophiala nigrum ВКПМ У-748, используемый для обработки семян и выращивания растений.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5