Способ получения и/или очистки клавулановой кислоты или ее фармацевтически приемлемых солей или эфиров, соль клавулановой кислоты с аминокислотой

 

Использование: в химии клавулановой кислоты и ее производных, обладающих антибиотической активностью. Сущность изобретения: способ получения и/или очистки клавулановой кислоты или ее фармацевтически приемлемых солей или эфиров контактированием неочищенной клавулановой кислоты или ее лабильным производным в органическом растворителе с аминокислотой формулы II NH₂-R³ (II), где R³ - остаток аминокислоты, такой как аминофенилуксусная или аргинин, в котором карбоксильная группа аминокислоты может быть этерифицирована, выделением соли квавулановой кислоты с аминокислотой формулы II, превращением ее в клавулановую кислоту или ее соль, или эфир. Раскрыты также соли клавулановой кислоты с аминокислотой формулы II в качестве промежуточных продуктов при получении и/или очистке клавулановой кислоты или ее эфиров. 2 с. и 37 з.п.ф-лы, 1 табл.

Изобретение относится к новому способу получения клавулановой кислоты (1) и ее фармацевтически приемлемых солей и эфиров.

Клавулановую кислоту обычно получают ферментацией микроорганизма, выделяющего клавулановую кислоту, например, различных микроорганизмов, принадлежащих к различным разновидностям Streptomyces, например S.clavuligerus NRRL 3585, S. jumoninensis NRRL 5741, S.Katsurahamanus IFO 13716 и Streptomyces P 6621 FERM P284 и т.д. как описано в патенте Японии Kokai 80-162993. Получающийся водный бульон может быть подвергнут стандартным процессам очистки и концентрирования, включая, например, фильтрование и хроматографическую очистку, в соответствии с описанным в патенте Великобритании N 150897 и патенте Японии Kokai 80-62993, перед экстракцией водного раствора органическим растворителем для получения раствора неочищенной клавулановой кислоты в органическом растворителе.

Патент Великобритании N 1508977 помимо прочего сообщает, что соли клавулановой кислоты можно получить, абсорбируя клавуланат анион в фильтрованном бульоне не анионообменную смолу, элюируя его со смолы при помощи электролита, обессоливая получающийся раствор, пропуская обессоленный раствор через дополнительную анионообменную смолу, хроматографически элюируя его со смолы при помощи электролита, обессоливая получающийся раствор с последующим удалением растворителя. Этот способ может быть использован с получением приемлемых выходов чистого вещества, но использование колонок со смолой предполагает значительные затраты, а они могут создать ограничения при осуществлении крупномасштабного производства. Поэтому было бы желательно иметь альтернативную методику, которая включала бы несколько стадий утилизации смолы.

Патент Великобритании N 1543563 описывает способ получения солей клавулановой кислоты через осаждение клавуланата лития. Патент Великобритании N 1578739 в качестве фармацевтических соединений описывает различные аминные соли клавулановой кислоты. Европейский патент N 0026044 описывает использование трет-бутиламинной соли клавулановой кислоты в качестве полезного промежуточного вещества для получения клавулановой кислоты. Соль описана в патенте Бельгии N 862211, но только в качестве приемлемого компонента для фармацевтических препаратов. Патент Португалии N 94.908 описывает использование три(низший алкил)аминных солей и диметиланилиновых солей клавулановой кислоты в способе очистки клавулановой кислоты, в котором образуется триэтиламинная соль клавулановой кислоты, а затем переводится в силилдиэфир клавулановой кислоты. Европейский патент N 088178A описывает способ очистки клавулановой кислоты, в котором органические амины могут быть использованы для образования промежуточной аминной соли с клавулановой кислотой в неочищенном растворе.

Изобретение предусматривает использование соли клавулановой кислоты с амином формулы (II): в качестве промежуточного вещества для способа получение клавулановой кислоты или ее фармацевтически приемлемых солей и эфиров, где R¹, R² и R³ выбирают в соответствии со следующими правилами: (1) R¹ представляет собой необязательно замещенную циклическую группу формулы: R-(chr⁴)_m где m представляет собой ноль или целое число от 1 до 5, R представляет собой циклическую систему необязательно замещенного алифатического углеводорода, содержащую от 3 до 8 атомов углерода в цикле, R⁴ представляет собой водород или алкил, амино- или гидроксизамещенный алкил или замещенный алкил, содержащий замещенную аминогруппу, или группу с той же самой общей формулой, что и вышеприведенная R¹;
R² и R³ можно выбрать их тех же самых групп, из которых выбирают R¹, где из водорода, алкила, алкенила, амино- или гидроксизамещенных алкила или алкенила, или алкила, или алкенила, содержащих замещенную аминогруппу, но за исключением циклогексиламина; или
(2) R¹, R² и R³, каждый сам по себе, одинаковые или различные, независимо выбирают из водорода, алкила, алкенила, амино- или гидрокси-, или алкоксизамещенных алкила, или алкенила, или замещенных алкила, или алкенила, содержащих замещенную аминогруппу, но за исключением трет-бутиламина, втор-бутиламина, N,N -диметилэтиламина, 1,2-диметилпропиламина, неопентиламина и 2-амино-3,3-диметилбутана; и при условии, что если амин (II) представляет собой триметиламин или триэтиламин, соль клавулановой кислоты с амином (II) образуется посредством реакции клавулановой кислоты или ее лабильного производного в растворе или в органическом растворителе с амином (II), или его лабильным производным, и соль затем выделяют из органического растворителя в качестве отдельной фазы или в отдельную фазу; или
(3) R¹ представляет собой необязательно замещенную арильную группу общей формулы:

где R⁴ представляет собой водород или один более заместителей, а
m представляет собой ноль или целое число от 1 до 5, и
R² и R³ независимо из водорода, алкила, амино- или гидроксизамещенного алкила или замещенного алкила, содержащего замещенную аминогруппу, или группы с той же самой общей формулой, что и R¹, при условии, что, если R⁴ представляет собой водород, а m является нулем, тогда R² и R³ не являются оба метилом; но за исключением бензилтретбутиламина; или
(4) R¹ и R² и необязательно R³ вместе с показанным атомом азота являются остатком необязательно замещенной гетероциклической системы, включающей атом азота в качестве члена цикла, и необязательно включающей один или более дополнительных гетероатомов в цикле, а если R³ не является частью циклической системы, его независимо выбирают из водорода, алкила, амино- или гидроксизамещенного алкила или замещенного алкила, содержащего замещенную аминогруппу; на за исключением пиперидина; или
(5) R¹ представляет собой группу общей формулы

где R⁴ и R⁵ независимо представляют собой водород, алкил, аминозамещенный алкил или алкил замещенный, содержащий замещенную аминогруппу, а R² и R³ независимо выбирают из водорода, алкила, амино- или гидроксизамещенного алкила или замещенного алкила, содержащего замещенную аминогруппу, а m представляет собой ноль или целое число от 1 до 5; или
(6) Один или оба из R¹ и R² являются водородом, а R³ представляет собой остаток аминокислоты, в котором карбоксильная группа аминокислоты может быть этерифицирована или может находиться в форме амида.

Если не указано особо, то когда в настоящем описании упоминают алкильные группы или замещенные алкильные группы, они могут соответственно содержать от 1 до 6 атомов углерода в алкильной системе. Приемлемые заместители в аминогруппах включают алкил.

В вышеприведенном правиле (I) амин (II) в соответствии изобретением отличается от амина, в котором R¹ представляет собой циклоалкильную группу, а m ноль, а R² и R³ оба выбирают из циклоалкила или из водорода или C_nH_2n+1, где n составляет от 1 до 7.

В вышеприведенном правиле (I) циклическая группа R может быть в соответствии с изобретением насыщенной, причем m соответственно является нулем. Группа R может быть моноциклической или полициклической, а каждый цикл может в соответствии с изобретением содержать 5, 6 или 7 атомов углерода в цикле, включая атомы, являющиеся общими для циклов в конденсированных или мостичных циклических системах. В соответствии с изобретением циклическая группа R может быть незамещенной.

В соответствии с изобретением амин (II) может включать две или более циклические группы R¹ или конденсированную циклическую систему R¹ или замещенную циклическую систему R, содержащую, например, один или более алкильных заместителей, таких как метил. В соответствии с изобретением R² и R³ могут быть отличны от водорода, например один или оба могут представлять собой алкил или замещенный алкил.

Примеры таких аминов включают циклопентиламин, циклогептиламин, N,N-диметилциклогексиламин, дециклогексиламин, адамантиламин, N,N -диэтилциклогексиламин, N-изопропилциклогексиламин, N-метилциклогексиламин, циклопропиламин, циклобутиламин, норборниламин и дигидроабиетиламин.

В вышеприведенном правиле (2) амин (II) в соответствии с изобретением отличается от амина, в котором R¹ представляет собой водород или C_NH_2n+1, где n составляет от 1 до 7, а R² и R³ также оба выбирают из водорода или C_nH_2n+1, где n составляет от 1 до 7.

В соответствии с изобретением в выше приведенном правиле (2) R¹ может представлять собой алкильную или замещенную алкильную группу общей формулы:

где
R⁴, R⁵ и R⁶ независимо представляют собой C_1-10 алкил или замещенный алкил, содержащий замещенную аминогруппу.

В соответствии с изобретением R⁴, R⁵ и R⁶ могут все представлять собой алкил, причем два из R⁴, R⁵ или R⁶ соответственно представляют собой метил. Примеры таких аминов трет-октиламин (т.е. 2-амино-2,4,4-третметил-пентан) и трет-амиламин. Кроме того, два из R⁴, R⁵ или R⁶ могут представлять собой алкил, а один может представлять собой гидроксизамещенный алкил. Примеры таких аминов включают 1-гидрокси-2-метил-2-пропиламин.

Или же в вышеприведенном правиле (2) R¹ может в соответствии с изобретением представлять собой C_1-20 алкил, например C_8-20 алкил, C_1-20алкенил, C_1-20 гидроксиалкил или C_1-20 аминоалкил.

Примеры подобных аминов включают три-н-пропиламин, три-н-октиламин, три-н-бутиламин, диметиламин, изо-пропиламин, ди-н-гексиламин, ди-н-бутиламин, диэтиламин, 2-аминоэтанол, N,N-диэтилэтаноламин, N, N-диметилэтаноламин, этаноламин, н-бутиламин, н-гексиламин, н-октадециламин, N-этилэтаноламин, 1-гидроксиэтиламин, диэтаноламин, N,N-диметилэтаноламин, N-этилдиэтаноламин, 1,6-диаминогексан, триэтаноламин, диизобутиламин, диизопропиламин, 2-метоксиэтиламин, гидроксиламин, аммиак, метиламин, этиламин, н-пропиламин, н-бутиламин, н-пентиламин, н-гексиламин, н-гептиламин, н-октиламин, н-нониламин, н-дециламин, н-ундециламин, н-додециламин, н-пропил-2-амин, н-бутил-2-амин, н-пентил-2-амин, н-гексил-2-амин, н-гептил-2-амин, н-октил-2-амин, н-нонил-2-амин, н-децил-2-амин, н-ундецил-2-амин, н-додецил-2-амин, н-гексил-3-амин, н-гептил-3-амин, н-октил-3-амин, н-нонил-3-амин, н-децил-3-амин, н-ундецил-3-амин, н-додецил-3-амин, н-октил-4-амин, н-нонил-4-амин, н-ундецил-4-амин, н-додецил-4-амин, н-нонил-5-амин, н-децил-5-амин, н-ундецил-5-амин, н-додецил-5-амин и н-октадециламин.

В выше приведенном правиле (3) амин (II) в соответствии с изобретением не является амином, у которого R² и R³ выбирают из водорода или C_nH_2n+1, где n составляет от 1 до 7, или бензилом или замещенным бензилом.

В выше приведенном правиле (3) приемлемые замещающие группы R⁴ включают C_1-6 алкил, например метил, фенил или необязательно замещенный фенил, группы карбоновых или сульфоновых кислот или группы производных этих кислот, таких как эфиры (например, C_1-6 алкилэфиры) и амиды; нитро и галоген, например, бром. В соответствии с изобретением m может составлять ноль, 1 или 2, а R⁵ может представлять собой водород или метил. В соответствии с изобретением R² и R³ могут представлять собой водород, или один из R² и R³ может представлять собой водород, а другой может быть ароматической группой той же самой общей формулы, что и R¹.

Примеры таких аминов включают 1-фенилэтиламин, п-толуидин, п-аминобензойную кислоту, п-броманилин, этил-4-аминобензоат (т.е. бензокаин), бензиламин, дифениламин, п-метиламинобензол, сульфонамид, м-нитроанилин, N,N'-дибензилэтилендиамин (т.е. бензатин), дифенилметиламин, 4-метилбензиламин и 4-фенилбутиламин.

В выше приведенном правиле (4) циклическая система может быть ароматической или алифатической и может быть моноциклической или полициклической. В соответствии с изобретение6м каждый цикл в системе может содержать 5 или 6 атомов в цикле, включая атомы азота в цикле и включая атомы, поделенные между циклами. Приемлемые необязательные заместители в циклической системе включают алкил, амино, замещенную амино, оксо и галоген. Если циклическая система включает гетероатомы в цикле, помимо показанного атома азота, эти гетероатомы могут в соответствии с изобретением быть выбраны из азота и кислорода.

Примеры классов этих аминов включают замещенные пиперидины и необязательно замещенные пиперидины, например такие, в которых заместители выбирают из алкил, гидроксиалкил, галоген, амино, замещенный амино, и аминозамещенного алкила. Конкретные примеры таких аминов включают N-этилпиперидин, 2,6-диметилпиперидин, 2-метил-N-гидроксипропилпиперидин (т.е. циклометикан), 4-метилпиперазин, 1-метил-4-фенилпиперазин, N-этилморфоламин, гексаметиленимин, пиридин, 2-пропилпиридин, 3-хлоро-2-аминопиридин, морфоламин, 1,5-диазабицикло[4,3,0] нон-5-ен, 1,4-диазабицикло[2,2,2]октан, пирролидон, хинуклидин и ксантинол.

В вышеприведенном правиле (5) R⁴ и R⁵ могут в соответствии с изобретением оба представлять собой водород или один может быть водородом, а другой алкилом. R² и R³ могут в соответствии с изобретением представлять собой водород или алкил. Примеры таких аминов включают этилендиамин, N,N-диэтилэтилендиамин, N,N'-диизопропилэтилендиамин и триэтилентетрамин.

В вышеприведенном правиле (6) аминокислота может представлять собой аминокислоту, существующую в природе. Эфиры аминокислот могут содержать алкильные группы или замещенные алкильные группы или замещенные алкильные группы, например, бензил.

Примеры таких аминов включают аргинин, орнитин, гистидин, лизин, бензилглицин, 3-амино-3-метилбутановую кислоту, L-этиллизинат, L-метилгистидинат, метил N-карбобензилокси-L-лизинат, метил L-фенилаланат, этил глицилглицинат, этил п-гидроксифенилглицинат, этил глицинат, этил L-титрозинат, п-метоксибензил, α -аминофенилацетат, н-бутил a -аминофенилацетат, метиларгинат, бензилглицин, бензилфенилглицин, п-метоксибензилфенилглицин, этилфенилглицин, п-нитробензил п-гидроксифенилглицидин, п-нитробензилсерин, н-бутилсерин, метиларгинин, диметилглутамат, п-нитробензилтирозинат, п-нитроюензилглицинат, бензилглицинат, п-нитробензил a -амино-п-гидроксифенилацетат, п-нитробензил a -аминофенилацетат, этил a -амино-п-гидроксифенилацетат, этид L-титрозинат.

Когда амин (II) содержит более одного атома азота, клавулановая кислота может образовывать соль с одним или более атомами азота, например, как в N, N'-диизопропилэтилендиаминдиклавуланате.

Среди упомянутых выше аминов предпочтительными аминами являются фенилэтиламин, трет-амиламин, трет-октиламин, 1-гидрокси-2-метил-2-пропиламин, циклопентиламин, циклогептиламин, 1-адамантиламин, N-этилпиперидин, N,N'-диизопропилэтилендиамин и N,N-диметилциклогексиламин.

В следующем аспекте настоящее изобретение предусматривает способ получения и/или очистки клавулановой кислоты или ее фармацевтически приемлемых солей или эфира, причем этот способ включает:
I) контактирование неочищенной клавулановой кислоты или ее лабильного производного в растворе в органическом растворителе с амином формулы (II) или его лабильным производным;
II) выделение соли клавулановой кислоты, образованной с амином формулы (II), и
III) превращение образованной таким образом соли в клавулановую кислоту или ее фармацевтически приемлемые соль или эфир.

В способе настоящего изобретения соль клавулановой кислоты и амина (II) можно использовать для очистки неочищенной клавулановой кислоты во время ее получения. Поэтому соль можно получить в растворе клавулановой кислоты или ее лабильного производного, содержащем примеси, выделяя соль в виде отдельной фазы, например в виде твердого осадка, из раствора, содержащего остаточные примеси, затем повторно образовывая клавулановую кислоту или образовывая ее фармацевтически приемлемые соль или эфир.

Приемлемые лабильные производные клавулановой кислоты включают соли, например, соли щелочных металлов, такие как клавуланаты лития или натрия, или эфиры, например силилэфиры. Приемлемые лабильные производные амина (II) включают соли, например, фосфат, борат, хлорид, хлорат, перхлорат, бромид, толуолсульфонат или алконоаты, такие как ацетат иди этилгексаноат. Обычно амин (II) как таковой приводят в контакт с неочищенной клавулановой кислотой как таковой в растворе в органическом растворителе.

Вышеописанный способ в соответствии с изобретением осуществляют в органическом растворителе в качестве растворителя для клавулановой кислоты и амина (II), этот растворитель предпочтительно по существу сухой, например, содержащий менее 6 г/л, например, 0,26-0,6 г/л воды, может содержать некоторое количество воды. Приемлемая степень сухости может быть достигнута посредством стандартных способов обезвоживания, например цетрифугированием. Вода, присутствующая в растворителе, может быть растворена или находиться в виде капель отдельной фазы.

Раствор клавулановой кислоты в органическом растворителе может быть получен посредством экстракции подкисленного водного раствора клавулановой кислоты, например вышеупомянутой ферментационной жидкости. Если начальным источником клавулановой кислоты является бульон, получающийся при ферментации микроорганизма, образующего клавулановую кислоту, такого, например, как вышеупомянутые, тогда для получения экстракты в растворителе с приемлемой концентрацией клавулановой кислоты для использования в настоящем способе может быть желательно не экстрагировать бульон как таковой, а, по крайней мере, удалить некоторые суспендированные в бульоне твердые вещества, например, посредством фильтрования, предшествующего экстракции. Кроме того, может быть также желательно предварительно концентрировать водный раствор клавулановой кислоты, полученный при ферментации, так, чтобы, например, водный раствор клавулановой кислоты был в несколько раз концентрированнее по клавулановой кислоте, чем исходный бульон, например, предварительно концентрировать до концентрации, составляющей приблизительно 10-100 мг/мл, например 10-40 мг/мл, например 10-25 г/л клавулановой кислоты.

Приемлемые способы предварительного концентрирования включают абсорбцию клавулановой кислоты на анионообменную смолу с последующим элюированием клавулановой кислоты со смолы водным раствором электролита, например хлорида натрия, и необязательным обессоливанием. Также предпочтительно до экстракции растворителем подкислить водный раствор, например бульон или предварительно сконцентрированный водный раствор, например, до pH от 1 до 3, например pH около от 1,5 до 2,5. Также предпочтительно высушить или обезводить органический растворитель до формирования соли с амином (II), например, до менее чем 6 г/л воды. Предпочтительно экстракцию осуществлять при температуре от 5 до 15^oC.

Приемлемые органические растворители, в которых неочищенная клавулановая кислота может контактировать с амином (II), включают углеводородные растворители, такие как толуол и гексан, эфиры, такие как тетрагидрофуран, диоксан, диэтиловый эфир, галогенированные растворители, например дихлорметан и хлороформ, кетоны, такие как ацетон и метилизобутилкетон, и сложные эфиры, например этилацетат. Растворители, включающие карбонильную группу, например растворители формулы (III):

в которых R⁸ представляет собой алкильную группу C_1-6 или алкоксильную группу C_1-6, а R⁹ представляет собой алкильную группу, являются примерами подкласса приемлемых растворителей, например органические кетоны или органические алкановые эфиры. Настоящее изобретение также предполагает использование смесей таких растворителей.

Более приемлемым органическим растворителем является растворитель, который можно использовать непосредственно для экстракции подкисленного водного раствора, например органические алкилалканоатные эфиры, кетоны и некоторые алифатические спирты или их смеси, например этилацетат, метилацетат, пропилацетат, н-бутилацетат, метилэтилкетон, метиллизобутилкетон, тетрагидрофуран, бутанол и смеси этих растворителей. Среди них наиболее приемлемыми, по-видимому, являются метилизобутилкетон, метилэтилкетон и этилацетат. Приемлемые смеси растворителей включают метилэтилкетон/метилизобутилкетон и тетрагидрофуран/метилзобутилкетон. Предпочтительным растворителем является этилацетат.

Приемлемые растворители для амина (II) включают вышеупомянутые растворители, в которых клавулановая кислота может растворяться или экстрагироваться, например ацетон, этилацетат, метилизобутилкетон и метилэтилкетон.

По-видимому, особенно желательно включить в систему растворителя кетоны, например ацетон, поскольку они, по-видимому, ингибируют образование соли клавулановой кислоты и амина (II) в виде масла.

Как правило, для получения соли клавулановой кислоты используют один эквивалент амина (II) на 1 моль клавулановой кислоты или его небольшой избыток. Растворы клавулановой кислоты и амина (II) можно, например, смешивать медленно при перемешивании и перемешивать смесь в течение некоторого времени после того, как закончено добавление. Реакцию между клавулановой кислотой или ее лабильным производным и амином в соответствии с изобретением осуществляют при температуре ниже температуры окружающей среды, например от 0 до 15^oC, например от 0 до 10^oC, например от 0 до 5^oC. Приемлемая концентрация клавулановой кислоты или ее лабильного производного в растворе составляет, по крайней мере, 1,0 г/л, например в пределах от 1,0 до 4,0 г/л клавулановой кислоты. Может быть полезным дополнительно концентрировать экстракт в растворителе до концентрации, избыточной по отношению к этой, например выше 20 г/л.

Например, в другой методике амин (II) можно вводить, примешивая его к потоку раствора клавулановой кислоты в растворителе, таким образом, что соль образуется в потоке или в растворе, или в виде частиц, или суспендированных капель растворенной соли в суспензии. Амин (II), вводимый этим способом, можно вводить индивидуально или можно вводить в виде раствора в растворителе, например в том же самом органическом растворителе, в котором растворяют клавулановую кислоту.

Желаемую соль клавулановой кислоты и амина (II) можно затем выделить. Таким образом, соль клавулановой кислоты и амина (II) отделяют от большинства или всех примесей. Выделение можно осуществлять стандартным способом, например посредством центрифугирования или фильтрования.

В альтернативной методике выделения соль клавулановой кислоты и амина (II) моно выделить из органического растворителя, если растворитель полностью или частично не смешивается с водой, посредством контактирования растворителя с водой с тем, чтобы экстрагировать соль, которая может находиться в растворе или в суспензии, из органического растворителя и получить водный раствор соли. Поскольку соли клавулановой кислоты с амином (II) прекрасно растворимы в воде, такой водный раствор можно хорошо сконцентрировать, например, до около 20-30% мас.

При использовании этого способа очень большая часть органических примесей в растворе клавулановой кислоты в органическом растворителе остается в органическом растворителе, тогда как клавулановую кислоту в виде соли с амином (II) в относительно чистом состоянии получают в водном растворе. Полученный таким образом водный раствор клавулановой кислоты можно подвергнуть дальнейшей стандартной обработке, например очистке или превращению в клавулановую кислоту, или в фармацевтически приемлемые соль, или эфир в соответствии с нижеописанным.

В другой альтернативной или дополнительной методике клавулановую кислоту и амин можно смешивать в растворе в первом органическом растворителе, затем соль можно отделить от раствора посредством добавления второго органического растворителя. В соответствии с изобретением первый органический растворитель может представлять собой органический сложный эфир, например этилацетат, а второй растворитель может, например, быть галогенированным растворителем, таким как хлороформ, простым эфиром, например диэтиловым эфиром, углеводородом, например толуолом, спиртом, например этанолом, или растворителем вышеприведенной формулы (III), например ацетоном или метилизобутилкетоном.

Некоторые из вышеупомянутых солей клавулановой кислоты, по-видимому, являются новыми соединениями и, сами по себе, представляют дополнительный аспект настоящего изобретения, например соли клавулановой кислоты и фенилэтиламина, третамиламина, 1-гидрокси-2-метил-2-пропиламина, N-этилпиперидина, N,N-диметилциклогексиламина и N,N'-диизопропилэтилендиамина.

В одном предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения соль клавулановой кислоты и амина (II) можно использовать в виде ацетонного сольвата. Ацетонные сольваты в некоторых случаях обладают преимущественной устойчивостью и показателями чистоты по сравнению с солями клавулановой кислоты с аминами как таковыми. Такие сольваты особенно полезны при использовании в настоящем изобретении, поскольку часто их можно выделить в виде стабильного кристаллического соединения с высокой чистотой.

Соответственно настоящее изобретение также предусматривает соль клавулановой кислоты с амином (II) в виде ацетонного сольвата. Во время выделения и/или сушки некоторое количество ацетона может быть потеряно, поскольку прочность сольватации может не быть высокой, но количество ацетона в продукте не является определяющим.

Ацетонный сольват может быть образован при контактировании клавулановой кислоты с амином (II) в присутствии ацетона. Как правило, когда соль осаждается, раствор, содержащий клавулановую кислоту, можно смешать с, по крайней мере, таким же объемом ацетона, содержащим амин.

Амин (II) может быть растворен в ацетоне и смешан с раствором клавулановой кислоты в органическом растворителе. Предпочтительные растворители органические включают этилацетат, тетрагидрофуран, метилэтилкетон, метилизобутилкетон и смеси таких растворителей, среди этих растворителей предпочтителен этилацетат. Или же водный раствор соли клавулановой кислоты и амина (II), полученный посредством экстракции водой в соответствии с вышеописанным, может быть смешать с ацетоном для образования сольвата. В соответствии с изобретением концентрированный водный раствор соли может быть смешан с избытком ацетона для образования сольвата.

Перекристаллизация соли клавулановой кислоты или ацетонного сольвата может быть полезной для дополнительного уменьшения содержания примесей. Обычный растворитель для перекристаллизации представляет собой водный ацетон. Подобную перекристаллизацию осуществляют стандартным образом, например соль или сольват растворяют в воде, образуют небольшим количеством ацетона, фильтруют и затем обрабатывают большими объемами ацетона с необязательным перемешиванием и/или охлаждением с тем, чтобы получить перекристаллизованный продукт.

Еще в одном аспекте настоящее изобретение предлагает способ получения клавулановой кислоты или ее фармацевтически приемлемых соли или эфира, причем этот способ включает превращение соли клавулановой кислоты и амина формулы (II) в ее фармацевтически приемлемые соль или эфир.

Фармацевтические соли или эфиры клавулановой кислоты, полученные посредством способов настоящего изобретения, включают производные, описанные в патентах Великобритании N 1508977 и 1508978, включенных в настоящее описание в качестве ссылки.

Наиболее пригодные фармацевтически приемлемые соли включают фармацевтически приемлемые соли щелочных и щелочноземельных металлов, например соли натрия, калия, кальция и магния. Среди этих солей предпочтительны соли натрия и калия, наиболее предпочтительны соли калия.

Приемлемые эфиры включают эфиры, расщепленные с образованием клавулановой кислоты или ее соли посредством химических методов, например гидрогенолиза или биологических методов.

Соль клавулановой кислоты и амина (II) необязательно в виде ацетонного сольвата может быть превращена в клавулановую кислоту или ее фармацевтически приемлемые соль, или эфир посредством, например, ионного замещения в случае свободной кислоты или солей, или посредством этерификации.

Ионное замещение можно осуществлять, используя ионообменные смолы, например, пропуская раствор соли через слой катионообменной смолы в натриевой, калиевой или кальциевой форме. Пригодные катионообменные смолы включают Amberlite IR 120 и равноценные смолы.

Или же ионное замещение можно осуществлять посредством реакции протонированного аминного катиона с сольобразующим соединением, которое может быть основанием, например, карбонатом, бикарбонатом или гидроксидом фармацевтически приемлемого щелочного или щелочноземельного металла, или солью органической карбоновой кислоты с фармацевтически приемлемым катионом, таким как щелочной или щелочноземельный металл, например, солью алкановой кислоты формулы (IV):
R¹⁰-CO₂H
где
R¹⁰ представляет собой алкильную группу, содержащую, например, от 1 до 20 атомов углерода, предпочтительно от 1 до 8 атомов углерода. Примеры приемлемых солей включают ацетаты, пропионаты или этилгексаноаты, причем 2-этилгексаноат калия и 2-этилгексаноат натрия являются предпочтительными. Обычно соль клавулановой кислоты и амина (II) в растворе может быть приведена во взаимодействие со солью щелочного металла и кислоты (IV) в растворе или суспензии в приемлемом растворителе, который может, например, представлять собой органический растворитель, воду или смесь воды и органического растворителя, например изопропанола. В соответствии с изобретением растворы соли клавулановой кислоты и амина (II) и сольобразующего соединения можно смешать и позволить кристаллизоваться фармацевтически приемлемые соли.

В соответствии с изобретением реакцию можно осуществлять при температуре ниже температуры окружающей среды, например от 0 до 15^oC, например от 0 до 10^oC, приемлемо от 0 до 0,5^oC. В соответствии с изобретением, если соль клавулановой кислоты с амином (II) образуется в водном растворе, ее можно высадить, смешивая водный раствор с избытком ацетона.

Приемлемые способы этерификации включают:
a) реакцию соли клавулановой кислоты и амина (II) с соединением формулы Q-R¹¹, где Q представляет собой легко замещаемую группу, а R¹¹ является органической группой.

b) реакцию соли клавулановой кислоты и амина (II) со спиртом или триолом в присутствии средства, промотирующего конденсацию, например, карбодиимида; и
c) реакцию соли клавулановой кислоты и амина (II) с диазосоединением.

Предыдущие способы включают стадии, в которых соль клавулановой кислоты и амина (II) сначала превращается в клавулановую кислоту или еще одну ее соль, а впоследствии превращается в желаемый эфир. Дополнительные детали способов этерификации описываются в патентах Великобритании N 1508977 и 1508978. Использование настоящего изобретения позволяет легче получать соли и эфиры клавулановой кислоты, чем используя способы патентов Великобритании N 1508977 и 1543563.

Далее изобретение иллюстрируется рядом примеров.

Пример 1. В каждом из нижеперечисленных примеров использовали одну и ту же методику, а именно амин смешивали с клавулановой кислотой в растворе ТГФ, и наблюдали быструю кристаллизацию с образованием твердой соли (см. таблицу).

Пример 2. В нижеследующем примере соль клавулановой кислоты и амина получали в растворе в первом органическом растворителе, а затем посредством смешивания со вторым органическим растворителем высаживали из раствора в виде твердого осадка.

2a. Трет-октиламин. Сырьевой раствор клавулановой кислоты в этилацетате, содержащий приблизительно 28 г/л клавулановой кислоты в неочищенном виде, получали посредством экстракции неочищенного ферментационного бульона S.elavuligerus этилацетатом. К 46 мл сырьевого раствора добавляли трет-октиламин (0,84 г). Через 10 минут смесь становилась мутной и выкристаллизовывались мелкие кристаллы соли. К аликвоте раствора добавляли хлороформ, что приводило к образованию игл большего размера. К следующей аликвоте добавляли ацетон, что снова приводило к образованию игольчатых кристаллов, но меньшего размера и медленнее, чем с хлороформом. К оставшейся части раствора добавляли приблизительно 20 мл хлороформа, затем объем толуол, приблизительно равный начальному объему раствора, что приводило к осаждению значительного количества игольчатых кристаллов.

2b. Дициклогексиламин. К 46 мл сырьевого раствора, полученного как и для вышеприведенного 2a, добавляли дициклогексиламин (1,18 г). Это приводило к прозрачному раствору. Ацетон добавляли к одной аликвоте, получая мелкий аморфный осадок.

2c. Аммиак. К 500 мл сырьевого раствора, полученного как и для вышеприведенного 2a, добавляли аммиак (21,1 мл 2,5 М 2-этилгексаноата аммония в этилацетате, т. е. приблизительно 1 эквивалент). Добавляли 50 мл промышленного метилированного спирта (IMS) приводило к быстрому образованию осадка из мелких игл. Отмечалось, что, когда использовали неочищенный раствор клавулановой кислоты, как ясно показывал цвет раствора, значительное количество окрашенных примесей оставалось в растворе. Выход 75%
2d. N, N-Диметилциклогексиламин. К 500 мл сырьевого раствора, полученного, как в примере 2a, добавляли N,N-диметилциклогексиламин (6,7 мл). В начале добавления образовывалось масло. Постепенно добавляли ацетон (150 мл), что приводило к мутному раствору. Отбирали аликвоту этого мутного раствора и к ней добавляли диэтиловый эфир, что приводило к кристаллизации. Диэтиловый эфир (100 мл) добавляли к основной массе раствора, что приводило к немедленной кристаллизации. Кристаллы (13,4 г) отфильтровывали и промывали ацетоном.

2e. Трет-октиламин. К 500 мл сырьевого раствора, полученного как в примере 2a, добавляли трет-октиламин (6,7 г). Раствор становился слегка туманным. Добавляли ацетон (20 мл), что проясняло раствор. К аликвоте раствора добавляли диэтиловый эфир, что приводило к немедленной кристаллизации. Диэтиловый эфир (55 мл) добавляли к основной массе раствора, что приводило к кристаллизации. Кристаллы отфильтровывали и промывали ацетоном. Выход (12,9 г) представлял 77% извлечения клавулановой кислоты из раствора.

2f. Бензатин. Бензатин диацетат (9,16 г) перемешивали с водным гидроксидом натрия (5H, 10,15 мл). Водный раствор экстрагировали этилацетатом (55 мл) и экстракт добавляли к сырьевому раствору клавулановой кислоты, полученному как в примере 2a, (1 л). Сначала образовывалось масло. Добавляли ацетон (600 мл) и образовывались кристаллы (добавляли около 10 мл диэтилового эфира, представляющего собой остаток от опыта с испытательной трубкой). Затем добавляли метилизобутилкетон (200 мл), смесь доводили до 2 л ацетоном. Полученные кристаллы отфильтровывали и промывали ацетоном. Выход составлял 11,5 г, представляя 59,1% извлечение клавулановой кислоты.

Пример 3. Раствор клавулановой кислоты в этилацетате (приблизительно 20 мг/мл) разбавляли равным объемом ацетона. Затем при 10^oC в течение 1/2 часа по каплям добавляли раствор трет-октиламина в ацетоне (1,25 моль - эквивалента). После дальнейшего перемешивания в течение 1 часа осажденные кристаллы собирали, промывали ацетоном и сушили в вакууме. Осадок образовывался довольно быстро и был белого цвета. Выход (скорректированный в зависимости от чистоты) 76%
Пример 4. 0,012 М раствор бензилклавуланата в ТГФ каталитически гидрировали, получая раствор клавулановой кислоты в ТГФ. К этому раствору (100 мл) при температуре окружающей среды добавляли 1-аминоадамантан (25 мл 0,012 М в ТГФ). Происходила быстрая кристаллизация. Раствор перемешивали при температуре окружающей среды в течение 30 мин, затем при 5^oC в течение 2 ч. Раствор затем фильтровали, а кристаллы промывали и сушили. Выход 83% Температура плавления соли составляла 190-192^oC (d).

Пример 5. Бензилклавуланат (очищенный посредством Sephadex хроматографии, 20 г, 0,07 моль) растворяли в тетрагидрофуране (отогнан с гидрида кальция, 400 мл) и добавляли катализатор (10%) палладия на древесном угле (5,7 г). Смесь гидрировали с перемешиванием при температуре окружающей среды и около 15psi в течение 20-30 мин. Состояние реакции контролировали посредством тонкослойной хроматографии, используя пластины из диоксида кремния, проявленные этилацетатом и визуализированные с использованием трифенилтетразолийхлоридного распылительного средства. Rf клавулановой кислоты 0,0, бензилового эфира 0,4.

Реакционную смесь фильтровали и набивку фильтра хорошо промыавали. Смешанные фильтраты (500 мл), содержащие клавулановую кислоту, обрабатывали при перемешивании 2-амино-2,4,4-триметилпентаном (9,0 г, 0,07 моль) в сухом тетрагидрофуране (50 мл). Кристаллизация наблюдалась в течение одной минуты. Смесь перемешивали в течение 0,5 ч при температуре окружающей среды и затем 2 ч при 5^oC. Продукт отфильтровывали, промывали сухим тетригдрофураном (100 мл) и сушили в вакууме в течение 12 часов, получая 23,0 г 100% названной соли, имеющей температуру плавления 160-170^oC.

Пример 6. Приготовление осуществляли как в примере 5, используя бензилклавуланат (0,9 г, 0.003 моль) и обрабатывая получающийся раствор клавулановой кислоты 2-амино-2-метилпропаном (0,22 г, 0,003 моль) в сухом тетрагидрофуране (10 мл). Названную соль получаем в количестве 0,6 г, 73% выход, с температурой плавления 150-152^oC.

Пример 7. Приготовление осуществляли как и в примере 5, используя бензилклавуланат (0,9 г, 0,003 моль) и обрабатывая получающийся раствор клавулановой кислоты D (+) 1-метилбензиламином в сухом тетрагидрофуране (10 мл). Смесь хранили при 5^oC в течение двух дней, в течение этого времени протекала медленная кристаллизация. Фильтрование давало названную соль 0,6 г, 62% выход, имеющую температуру плавления 125^oC (d).

Пример 8. Водный раствор клавуланата лития смешивали с водным раствором алкиламмоний фосфата. Осажденный фосфат лития отфильтровывали и аминоклавуланатную соль осаждали путем добавления ацетона. Было обнаружено, что можно использовать также клавуланат натрия, но в этом случае имелась необходимость добавления этанола, чтобы подержать выделение фосфата натрия. Также можно использовать гидрохлориды аминов.

Таким же образом клавуланат лития использовали для получения N-этилпиперидинклавуланата, и клавуланат натрия использовали для получения N-этилпиперидинклавуланата.

Пример 9. Неочищенный экстракт клавулановой кислоты, представляющий собой сырой экстракт из ферментационного бульона S.clavuligerus, после некоторой предварительной очистки при помощи ионообмена (500 мл, 21 мг/мл в этилацетате) смешивали с ацетоном (150 мл) и постепенно обрабатывали раствором N, N-диметилциклогексиламина (6,7 мл) в ацетоне (25 мл). Аликвоту удаляли и обрабатывали диэтиловым эфиром, происходила немедленная кристаллизация. Затравка кристаллами основной массы раствора приводила к быстрой кристаллизации белых пластинок, эта кристаллизация становилась более полной при добавлении простого эфира (110 мл). Аминную соль отфильтровывали, промывали ацетоном (3х100 мл) и сушили на воздухе. Выход 13,4 г, 82% выделение, 64,9 pfa (теоретическое 61,0%).

Пример 10. К неочищенному раствору клавулановой кислоты, использованному в примере 9 (500 мл, 21 мг/мл), дополнительно содержащему ацетон (20 мл), добавляли трет-октиламин (7,7 г, 1,0 экв.), что давало небольшую туманность. Добавление диэтилового эфира (55 мл) вызывало выделение аминной соли в виде мелких белых игл, которые отфильтровывали и промывали ацетоном. Выход 12,9 г, 77,2% выделение, 62,8 pfa (теоретическое 60,6%).

Пример 11. Неочищенный раствор клавулановой кислоты в этилацетате (1 л, 10,14 мг/мл), полученный экстракцией ферментационного бульона S.clavuligerus этилацетатом и некоторой предварительной очисткой путем ионообмена, смешивали с ацетоном (600 мл) и затем обрабатывали бензатином (6,15 г) в этилацетате (55 мл). Смесь начинала кристаллизоваться по мере того, как добавление бензатина близилось к завершению. Затем для того, чтобы сделать осаждение более полным, добавляли метилизобутилкетон (200 мл). Кристаллы отфильтровывали и промывали ацетоном (3·100 мл). Выход 11,5 г, 67,0% выделение.

Пример 12. Повторяли методику примера 11, используя неочищенный влажный (приблизительно 1% воды) раствор клавулановой кислоты в этилацетате. К отдельным 1 л порциям этого раствора добавляли при перемешивании избыток чистого этилендиамина, N,N'-диэтилендиамина и N,N-диизопропилэтилендиамина, причем количество каждого амина было в избытке по отношению к количеству, необходимому для образования диаммониевой соли с клавулановой кислотой. После непрерывного перемешивания образовывался осадок соли. Дополнительное количество кристаллов получали добавлением избытка ацетона. Осажденную диаммониевую соль отфильтровывали и промывали ацетоном.

Сформированные таким образом кристаллы каждой из диаммониевых солей превращали в клавуланат калия посредством растворения соли в минимальном количестве воды с последующим добавлением раствора избыточного количества 2-этиленгексаноата калия в изопропиловом спирте. После непрерывного перемешивания осадок клавулатаната калия образовывался, его отфильтровывали, промывали изопропиловым спиртом и сушили.

Пример 13. Раствор клавулановой кислоты (0,0046 моль) в тетрагидрофуране (30 мл) обрабатывали раствором триметиламина в метаноле (1,0 мл 25 мас.) раствора, приблизительно 0,0042 моль), получая бледно-желтый раствор. Кристаллизацию вызывали, затравливая раствор кристаллами и выдерживая его при комнатной температуре. Кристаллизация была быстрой, дающей мелкие иглы, и завершалась при выстаивании в течение ночи при 4^oC. Продукт отфильтровывали, промывали небольшим объемом свежего растворителя (приблизительно 5 мл) и сушили в вакууме. Выход 0,9 г (75%), температура плавления более 310^oC, медленно становящийся коричневым при температуре выше приблизительно 130^oC.

Проба B 24641: Найдено, C 51,32; H 7,15; N 10,68.

C₁₁H₁₈N₂O₅ требует, C 51,16; H 7,02; N 10,84.

Проба A 15230: Найдено 77,2; 76,4% (рассчитано 77,1% приблизительно 99,5% чистота)
Вода 1,18; 1,34%
Качество соединения (в виде кремовоокрашенных мелких иголок) ухудшается при стоянии на воздухе в течение нескольких дней. Соединение поглощает воду и медленно становится желтым.

Пример 14. Ниже приведены способы получения вышеупомянутого вещества, поскольку каждый дает несколько отличающийся результат. Первый дает умеренный выход продукта, содержащего воду до степени, соответствующей полугидрату, тогда как второй дает по существу безводное вещество, хотя и с низким выходом.

14A. Клавулановую кислоту (0,00346 моль) в тетрагидрофуране (25 мл) обрабатывали триэтиламином (0,4 г, 0,00346 моль) и смешивали, получая гомогенный прозрачный раствор. Кристаллизацию инициировали посредством затравливания раствора кристаллами и завершали, выдерживая в течение ночи при 4^oC. Продукт отфильтровывали и сушили в вакууме. Выход 0,7 г (63%) в виде больших белых игл.

Проба B 24639: Найдено, C 54,74; H 7,95; N 8,94.

C₁₄H₂₄N₂O₅ требует, C 56,05; H 8,00; N 9,33.

C₁₄H₂₄N₂O₅ · 1/2 H₂O требует, C 54,36; H 8,14; N 9,05.

Проба A 15220: Имидазол 61,0; 61,1% (рассчитано 64,4% приблизительно 95,0% чистота)
Вода 2,64% (полугидрат требует 12,91%)
14B. Клавулановую кислоту (0,021 моль) в тетрагидрофуране (60 мл) обрабатывали триэтиламином (2,1 г, 0,021 моль) и перемешивали получающийся прозрачный раствор, затравленный истинной солью. Продукт начинал кристаллизоваться при комнатной температуре в виде длинных игл, причем процесс завершался в течение ночи при 4^oC. Продукт собирали фильтрованием, промывали на фильтре свежим раствором (приблизительно 10 мл) и диэтиловым эфиром (приблизительно 20 мл) и, наконец, сушили в вакууме, получая белый кристаллический продукт. Выход 1,7 г (27%).

Проба B 24676: Найдено, C 56,07; H 7,83; N 9,32.

C₁₄H₂₄N₂O₅ требует, C 56,05; H 8,00; N 9,33.

C₁₄H₂₄N₂O₅ · 1/2 H₂O требует, C 54,36; H 8,14; N 9,05.

Проба A 15268: Имидазол 65,1; 65,1% (рассчитано 66,3% приблизительно 98,2% чистота)
Вода 0,9%
[α] 24 47,0^o (c 0,2% в воде)
Аналогично соли триметиламина качество продукта ухудшается при стоянии на воздухе в течение нескольких дней.

Эти два примера иллюстрируют получение солей клавулановой кислоты высокой чистоты из растворов клавулановой кислоты в органических растворителях.

Пример 15. Отдельные образцы триметиламинклавуланата и триэтиламинклавуланата из примеров 13 и 14 растворяют в минимальном количестве холодной воды. К этим растворам при перемешивании добавляют концентрированный раствор 2-этилгексаноата калия в изопропаноле. После непрерывного перемешивания кристаллы клавуланата калия выделяются и могут быть отфильтрованы, промыты холодным изопропанолом и высушены.

Пример 16. Неочищенный водный раствор клавулановой кислоты, получаемый из ферментационного бульона S.clavuligerus предварительной очисткой, включающей ионообменную хроматографию или в основном вышеописанную, содержащий приблизительно 17,1 г/л, подкисляли 25 об. серной кислотой до pH 2,0 и затем непрерывно экстрагировали в этилацетат. Этилацетатный экстракт охлаждали до 2^oC, обезвоживали центрифугированием, затем сушили MgSO₄, затем пропускали через CPG угольную колонку. На этой стадии этилацетатный экстракт содержал 6,02 г/л клавулановой кислоты и затем его концентрировали посредством выпаривания до концентрации 25,7 г/л клавулановой кислоты и использовали при этой концентрации. Содержание влаги в концентрате составляло приблизительно 0,26 об.

7,8 мл трет-Октиламина смешивали с 25 мл свежего этилацетат. Эту смесь медленно добавляли к 2 л обогащенного клавуланатом этилацетатногог экстракта, снова разбавляли свежим этилацетатом при быстром перемешивании до титра 23,0 г/л. Суспензию перемешивали при 5^oC еще час. Трет-октиламинклавуланат впоследствии отделяли фильтрованием и промывали этилацетатом. Заключительную сушку осуществляли в течение ночи в вакуумной печи при 20^oC с отводом азота. Вес продукта 6,13 г.

Пример 17. 5 г Аминной соли, полученной в примере 16, растворяли в 97 мл изопропанола. Продукт не растворялся легко и было найдено необходимым применять мягкое нагревание до 24^oC с тем, чтобы осуществить полное растворение. 14 мл 1,5 H 2-тилгексаноата калия в изопропаноле добавляли в течение 10 мин. Суспензию непрерывно перемешивали в течение 1,5 ч при 5^oC. Продукт клавуланат калия затем отфильтровывали, промывали небольшим количеством изопропанола, затем ацетона и сушили в вакууме в течение ночи с отводом азота при 20^oC. Вес продукта 3,16 г.

Пример 18. Отфильтрованный (RVF) ферментационный бульон S.clavuligerus, содержащий 2 г/л клавулановой кислоты, подкисляли 25 об. серной кислоты до pH 1,6 и непрерывно экстрагировали в этилацетат. Экстракт в растворителе охлаждали до 3^oC, затем обезвоживали центрифугированием, затем сушили MgSO₄, затем пропускали через CPG угольную колонку. Обработанный углем экстракт затем концентрировали выпариванием до концентрации клавулановой кислоты приблизительно 20 г/л с содержанием влаги приблизительно 0,06 об.

13,5 мл трет-Октиламина смешивали с 43 мл свежего этилацетата. Эту смесь медленно добавляли к 400 мл обогащенного клавуланатом экстракта в этилацетате при титре клавулановой кислоты 20 г/л и быстром перемешивании. Суспензию перемешивали при 5^oC еще час. Затем трет-октиламинклавуланат отделяли фильтрованием и промывали этилацетатом. Заключительную сушку осуществляли в течение ночи в вакуумной печи при 20^oC с отводом азота. Вес продукта 12,44 г.

Пример 18. 11 г Соли амина, полученной в примере 18, растворяли в 213 мл изопропанола. Продукт не растворялся легко даже после применения мягкого нагревания до 24^oC. Для того, чтобы обеспечить растворение, добавляли воду (3,75 мл). Как только получали раствор, добавляли дополнительный изопропанол (100 мл) для того, чтобы перед кристаллизацией снизить содержание воды. Через 15 мин добавляли 30 мл 1,5H 2-этилгексаноата калия в изопропаноле. Суспензию непрерывно перемешивали в течение 1,5 ч при 5^oC. Продукт клавуланат калия затем отфильтровывали, промывали небольшими количествами изопропанола, затем ацетона и сушили в вакууме в течение ночи при 20^oC с отводом азота. Вес продукта 7,29 г.

Формула изобретения

1. Способ получения и/или очистки клавулановой кислоты или ее фармацевтически приемлемых солей или эфиров, включающий контактирование неочищенной клавулановой кислоты в органическом растворителе с производным амина, выделение соли клавулановой кислоты, образованной с производным амина, превращение образованной таким образом соли в клавулановую кислоту или ее фармацевтически приемлемые соль или эфир, отличающийся тем, что в качестве производного амина используют аминокислоту формулы II
NH₂ R³,
где R³ представляет собой остаток аминокислоты, такой как аминофенилуксусная или аргинин, в котором карбоксильная группа аминокислоты может быть этерифицирована,
которую контактируют с неочищенной клавулановой кислотой или ее лабильным производным.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что лабильным производным клавулановой кислоты является соль щелочного металла.

3. Способ по п.2, отличающийся тем, что солью щелочного металла является натриевая или литиевая соль.

4. Способ по любому из пп.1 3, отличающийся тем, что органический растворитель является по существу сухим.

5. Способ по п.4, отличающийся тем, что органический растворитель содержит менее 6 г/л воды.

6. Способ по п.4, отличающийся тем, что органический растворитель содержит от 0,25 до 0,6 г/л воды.

7. Способ по любому из пп.4 6, отличающийся тем, что органический растворитель высушен посредством удаления воды из раствора центрифугированием.

8. Способ по любому из пп.1 7, отличающийся тем, что неочищенную клавулановую кислоту получают ферментацией микроорганизма, продуцирующего клавулановую кислоту.

9. Способ по п.8, отличающийся тем, что, по крайней мере, некоторые твердые вещества, суспендированные в бульоне неочищенной клавулановой кислоты, удаляют.

10. Способ по п.9, отличающийся тем, что твердые вещества удаляют фильтрованием.

11. Способ по п.9 или 10, отличающийся тем, что водный раствор клавулановой кислоты, полученный ферментацией, предварительно концентрируют перед экстракцией.

12. Способ по п.11, отличающийся тем, что водный раствор клавулановой кислоты предварительно концентрируют до концентрации 10 100 мг/мл.

13. Способ по п.11, отличающийся тем, что водный раствор клавулановой кислоты предварительно концентрируют до концентрации 10 40 мг/мл.

14. Способ по п.11, отличающийся тем, что водный раствор клавулановой кислоты предварительно концентрируют до концентрации 10 25 мг/мл.

15. Способ по любому из пп.11 14, отличающийся тем, что процесс предварительного концентрирования проводят абсорбцией клавулановой кислоты на ионообменную смолу с последующим элюированием клавулановой кислоты со смолы водным раствором электролита.

16. Способ по п.15, отличающийся тем, что электролитом является хлорид натрия.

17. Способ по п.15 или 16, отличающийся тем, что полученный концентрат обессолен.

18. Способ по любому из пп.8 17, отличающийся тем, что бульон или водный раствор клавулановой кислоты подкисляют перед экстракцией растворителем.

19. Способ по п. 18, отличающийся тем, что бульон или водный раствор клавулановой кислоты подкисляют до рН от 1 до 3.

20. Способ по п. 18, отличающийся тем, что бульон или водный раствор клавулановой кислоты подкисляют до рН от 1,5 до 2,5.

21. Способ по любому из пп.1 20, отличающийся тем, что экстракцию неочищенной клавулановой кислоты или ее лабильного производного в органический растворитель проводят при температуре от 5 до 15^oС.

22. Способ по любому из пп.1 21, отличающийся тем, что органический растворитель, используемый для экстракции неочищенной клавулановой кислоты или ее лабильного производного, выбирают из группы, состоящей из углеводородных растворителей, эфиров, галогенированных растворителей, кетонов.

23. Способ по п.22, отличающийся тем, что растворители выбирают из группы, состоящей из толуола, гексана, тетрагиlрофурана, диоксана, диэтилового эфира, дихлорметана, хлорформа, ацетона, метилизобутилкетона и этилацетата.

24. Способ по любому из пп.1 23, отличающийся тем, что соль клавулановой кислоты и амина получают обработкой клавулановой кислоты или ее лабильного производного в органическом растворителе одним эквивалентом на 1 моль или небольшим избытком аминокислоты (II), как определено в п.1.

25. Способ по п.24, отличающийся тем, что соль клавулановой кислоты и амина получают при температуре от 0 до 15^oС.

26. Способ по п.24 или 25, отличающийся тем, что амин вводят примешиванием его к потоку раствора клавулановой кислоты в органическом растворителе.

27. Способ по любому из пп.1 26, отличающийся тем, что выделение соли клавулановой кислоты и амина проводят экстракцией органического растворителя, содержащего соль амина, водой, экстрагируя соль и затем превращая соль амина в клавулановую кислоту или ее фармацевтически приемлемые соли или эфир.

28. Способ по любому из пп.1 27, отличающийся тем, что соль клавулановой кислоты и амина перекристаллизовывают.

29. Способ по п.28, отличающийся тем, что соль клавулановой кислоты и амина перекристаллизовывают в водном ацетоне.

30. Способ по любому из пп.1 29, отличающийся тем, что соль клавулановой кислоты и амина превращают в ее фармацевтически приемлемую соль ионным замещением.

31. Способ по п.30, отличающийся тем, что ионное замещение осуществляют, пропуская раствор соли амина через слой катионнообменной смолы в натриевой, калbевой или кальциевой форме.

32. Способ по п. 30, отличающийся тем, что ионное замещение проводят протонированием катиона амина соединением предшественником соли.

33. Способ по п.32, отличающийся тем, что соединением предшественником соли является этилгексаноат калия.

34. Способ по любому из пп.30 33, отличающийся тем, что растворителем является органический растворитель, вода или смесь воды с органическим растворителем.

35. Способ по любому из пп.30 33, отличающийся тем, что реакцию проводят при температуре ниже температуры окружающей среды.

36. Способ по п.35, отличающийся тем, что реакцию проводят при температуре от 0 до 10^oС.

37. Способ по п.36, отличающийся тем, что реакцию проводят при температуре от 0 до 0,5^oС.

38. Способ по любому из пп.1 37, отличающийся тем, что аминокислоту формулы II выбирают из аргинина, п-метоксибензил-α-аминофенилацетата, н-бутил-a-аминофенилацетата, метиларгината, метиларгинина, п-нитробензил-a-амино-п-гидроксифенилацетата, п-нитробензил-a-аминофенилацетата, этил-a-амино-п-гидроксифенилацетата.

39. Соль клавулановой кислоты с аминокислотой формулы II
NH₂ R³,
где R³ представляет собой остаток аминокислоты, такой как аминофенилуксусная или аргинин, в котором карбоксильная группа может быть этерифицирована.

РИСУНКИ

Рисунок 1