Штамм streptomyces cremeus subsp. nebramycini фбм-0002 - продуцент апрамицина

 

Изобретение относится к биотехнологии. Штамм-продуцент монокомпонентного апрамицина Strepomyces cremeus subsp. nebramycini ФБМ-0002 получен из популяции штамма St. cremeus subsp. nebramycini 2242, образующего небрамициновый комплекс (апрамицин и тобрамицин) путем индуцированного мутагенеза с последующим отбором вариантов, резистентных к аналогам аминокислот. Новый штамм отличается способностью к повышенному синтезу апрамицина с биологической активностью 5000 мкг/мл. 2 табл.

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к производству препаратов, используемых в ветеринарии.

Наиболее близким по технической сущности к предлагаемому изобретению является штамм Streptomyces cremeus subsp. nebramycini N 2242.

Цель изобретения - получение нового штамма - продуцента апрамицина, обеспечивающего более высокий уровень продуктивности антибиотика.

Поставленная цель достигается в результате мутагенного действия нитрозогуанидина на исходный штамм N 2242 (депонирован в ВКПМ под номером S-794) с последующим отбором мутантов на среде, содержащей различные селективные факторы (схема получения штамма представлена на табл.1).

Полученный новый штамм депонирован в коллекции культур НПО "Фармбиомед" под номером ФБМ-0002 (см. справку о депонировании).

Штамм ФБМ-0002 является монокомпонентным продуцентом и обладает повышенной продуктивностью апрамицина (5 г апрамицина на 1 л культуральной жидкости) по сравнению с исходным штаммом N 2242, образующим небрамициновый комплекс в виде двух основных компонентов (2 г тобрамицина и 2 г апрамицина на 1 л культуральной жидкости).

Штамм ФБМ-0002 характеризуется культурально- морфологическими и физиологическими признаками, приведенными в табл.1.

Микроморфологические признаки.

Цепочки спор - спиральные, спирали растянуты с 2-6 оборотами, споры - гладкие.

Физиолого-биохимические свойства.

Аэроб, растет при 24-37^oC, оптимум - 37^oC. Желатину разжижает. Молоко пептонизирует. Крахмал гидролизует. Сахарозу инвертирует. На клетчатке не растет. Восстанавливает нитраты до нитритов. Меланоиды не образует при росте на среде Треснера с лимоннокислым железом.

Отношение к углеводам: хорошо использует фруктозу, глюкозу; умеренно - инозит, сахарозу; не использует раффинозу, арабинозу, рамнозу, ксилозу и маннит.

Антагонистические свойства.

Продуцируемый Streptomyces cremeus subsp. nebramycini ФБМ-0002 апрамицин подавляет рост грамположительных и грамотрицательных бактерий и дрожжеподобных грибков: Staphylococcus aureus, Sarcina lutea, Bacillus micoides, Escherichia coli, Providencia stuartii, Saccharomyces sp. и др.

Предлагаемый штамм иллюстрируется следующим примером.

Споровым материалом с мицелием культуры ФБМ-0002, выращенной на агаровой среде, засевают питательную среду (100 мл в колбах Эрленмейера, объемом 750 мл) и выращивают 24-36 ч при 37^oC на качалке при 220-240 об/мин. Состав посевной среды, %: глицерин - 2,0; кукурузный экстракт - 2,0; животный жир - 0,75; хлористый аммоний - 0,2; хлористый натрий - 0,3; мел - 0,5; вода водопроводная. Выросшим мицелием в количестве 2-5% засевают питательную среду (100 мл в колбах Эрленмейера, объемом 750 мл) следующего состава, %: соевая мука - 3,5; животный жир - 1,5; глюкоза - 1,5; хлористый аммоний - 0,6; сернокислый магний - 1,1; сернокислый марганец - 0,025; мел - 0,7; вода водопроводная. Ферментацию проводят на качалке при 220-240 об/мин, 37^oC в течение 72-120 ч. Антибиотическую активность культуральной жидкости определяют методом диффузии в агар с использованием тест-культуры Bacillus subtilis АТСС 6633. Антибиотическая активность по апрамицину к концу ферментации - 5000 мкг/мл.

Продуцируемый штаммом ФБМ-0002 апрамицин представляет собой белый порошок, хорошо растворимый в воде и не растворимый в органических растворителях.

По физико-химическим свойствам, антибактериальной активности и токсикологической характеристике антибиотик соответствует известному препарату апрамицина, применяемому в мировой практике при лечении заболеваний сельскохозяйственных и домашних животных.

На всех этапах селекции был использован в качестве мутагенного фактора нитрозогуанидин.

Литература: Авторское свидетельство СССР 1735369 A1, кл. C 12 P 19/50, 16.08.90.

Формула изобретения

Штамм Streptomyces cremeus subsp. nebramycini ФБМ-0002 - продуцент апрамицина.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2