Таксоиды, способ их получения и фармацевтическая композиция на их основе

 

Изобретение относится к новым таксоидам общей формулы I, в которой R обозначает линейный или разветвленный алкильный радикал с 1-6 атомами углерода, Z обозначает атом водорода или радикал общей формулы II, где R₁ обозначает бензоильный радикал или радикал R₂-O-СО-, в котором R₂ обозначает алкильный радикал с 1-8 атомами углерода, R₃ обозначает фенильный радикал. Новые продукты общей формулы I, в которой Z обозначает радикал общей формулы II, обладают замечательными противоопухолевыми и антилейкемическими свойствами. Описываются также способ их получения и фармацевтическая композиция на их основе. 3 с. и 4 з.п.ф-лы.

Настоящее изобретение относится к новым таксоидам общей формулы (I): в которой R обозначает линейный или разветвленный алкильный радикал с 1-6 атомами углерода, линейный или разветвленный алкенильный радикал с 2-6 атомами углерода, линейный или разветвленный алкинильный радикал с 2-6 атомами углерода, циклоалкильный радикал с 3-6 атомами углерода, циклоалкенильный радикал с 4-6 атомами углерода, арильный радикал, 5-6-членный гетероциклический ароматический радикал; Z обозначает атом водорода или радикал общей формулы (II): в которой R₁ обозначает бензоильный радикал, возможно замещенный одним или несколькими атомами или радикалами, одинаковыми или разными, выбираемыми среди атомов галогена и алкильных радикалов с 1-4 атомами углерода, алкоксильных радикалов с 1-4 атомами углерода или трифторметильного радикала; теноильный или фуроильный радикал или радикал R₂-O-CO, в котором R₂ обозначает: - алкильный радикал с 1-8 атомами углерода, алкенильный радикал с 2-8 атомами углерода, алкинильный радикал с 3-8 атомами углерода, циклоалкильный радикал с 3-6 атомами углерода, циклоалкенильный радикал с 4-6 атомами углерода, бициклоалкильный радикал с 7-10 атомами углерода, причем эти радикалы возможно замещены одним или несколькими заместителями, выбираемыми среди атомов галогена и гидроксильного радикала, алкоксильного радикала с 1-4 атомами углерода, диалкиламино-радикала, каждая алкильная часть которого содержит 1-4 атома углерода, пиперидино-, морфолино-радикала, пиперазин-1-ильного радикала (возможно замещенного в положении 4 алкильным радикалом с 1-4 атомами углерода или фенилалкильным радикалом, алкильная часть которого содержит 1-4 атома углерода), циклоалкильного радикала с 3-6 атомами углерода, циклоалкенильного радикала с 4-6 атомами углерода, фенильного радикала (возможно замещенного одним или несколькими атомами или радикалами, выбираемыми среди атомов галогена и алкильных радикалов с 1-4 атомами углерода или алкоксильных радикалов с 1-4 атомами углерода), циано-радикала, карбоксильного радикала или алкоксикарбонильного радикала, алкильная часть которого содержит 1-4 атома углерода; - фенильный радикал или α- или β-нафтильный радикал, возможно замещенный одним или несколькими атомами или радикалами, выбираемыми среди атомов галогена и алкильных радикалов с 1-4 атомами углерода или алкоксильных радикалов с 1-4 атомами углерода; или 5-членный гетероциклический ароматический радикал, выбираемый среди фурильного и тиенильного радикалов; - или насыщенный гетероциклический радикал с 4-6 атомами углерода, возможно замещенный одним или несколькими алкильными радикалами с 1-4 атомами углерода; R₃ обозначает линейный или разветвленный алкильный радикал с 1-8 атомами углерода, линейный или разветвленный алкенильный радикал с 2-8 атомами углерода, линейный или разветвленный алкинильный радикал с 2-8 атомами углерода, циклоалкильный радикал с 3-6 атомами углерода, фенильный или α- или β-нафтильный радикал, возможно замещенный одним или несколькими атомами или радикалами, выбираемыми среди атомов галогена и алкильных, алкенильных, алкинильных, арильных, аралкильных, алкоксильных, алкилтио-, арилокси-, арилтио-, гидроксильного, гидроксиалкильного, меркапто-, формильного, ацильного, ациламино-, ароиламино-, алкоксикарбониламино-, амино-, алкиламино-, диалкиламино-, карбоксильного, алкоксикарбонильного, карбамоильного, алкилкарбамоильного, диалкилкарбамоильного, циано-, нитро- и трифторметильного радикалов; или 5-членый ароматический гетероцикл, содержащий один или несколько гетероатомов, одинаковых или разных, выбираемых среди атомов азота, кислорода или серы, и возможно замещенный одним или несколькими заместителями, одинаковыми или разными, выбираемыми среди атомов галогена и алкильных, арильных, амино-, алкиламино-, диалкиламино-, алкоксикарбониламино-, ацильного, арилкарбонильного, циано-, карбоксильного, карбамоильного, алкилкарбамоильного, диалкилкарбамоильного или алкоксикарбонильного радикалов, имея в виду, что алкильные или алкилсодержащие заместитель фенильного радикала, α- или β-нафтильного радикала и ароматических гетероциклических радикалов, содержат 1-4 атома углерода; алкенильные и алкинильные радикалы содержат 2-8 атомов углерода и что арильные радикалы представляют собой фенильные или α- или β-нафтильные радикалы.

Предпочтительно, арильные радикалы, представленные символами R и R₃, означают фенильные или α- или β-нафтильные радикалы, возможно замещенные одним или несколькими атомами или радикалами, выбираемыми среди атомов галогена (фтор, хлор, бром, иод) и алкильных, алкенильных, алкинильных, арильных, арилалкильных, алкоксильных, алкилтио-, арилокси-, арилтио-, гидроксиалкильного, меркапто-, формильного, ацильного, ациламино-, алкоксикарбониламино-, амино-, алкиламино-, диалкиламино, карбоксильного, алкоксикрабонильного, карбамоильного, диалкилкарбамоильного, циано-, нитро- и трифторметильного радикалов, имея в виду, что алкильные радикалы и алкильные части других радикалов содержат 1-4 атома углерода, что алкенильные и алкинильные радикалы содержат 2-8 атомов углерода и что арильные радикалы представляют собой фенильные или α- или β-нафтильные радикалы.

Предпочтительно, гетероциклические радикалы, представленные символами R и R₃, означают 5-членные гетероциклические ароматические радикалы, содержащие один или несколько гетероатомов, одинаковых или разных, выбираемых среди атомов азота, кислорода или серы, возможно замещенные одним или несколькими заместителями, одинаковыми или разными, выбираемыми среди атомов галогенов (фтор, хлор, бром, иод) и алкильных радикалов с 1-4 атомами углерода, арильных радикалов с 6-10 атомами углерода, алкоксильных радикалов с 1-4 атомами углерода, арилокси-радикалов с 6-10 атомами углерода, амино-радикалов, алкиламино-радикалов с 1-4 атомами углерода, диалкиламино-радикалов, каждая алкильная часть которых содержит 1-4 атома углерода, ациламино-радикалов, ацильная часть которых содержит 1-4 атома углерода, алкоксикарбониламино-радикалов, содержащих 1-4 атома углерода, ацильного радикала с 1-4 атомами углерода, арилкарбонильного радикала, арильная часть которого содержит 6-10 атомов углерода, циано-, карбоксильного, карбамоильного радикалов, алкилкарбамоильного радикала, алкильная часть которого содержит 1-4 атома углерода, диалкилкарбамоильного радикала, каждая алкильная часть которого содержит 1-4 атома углерода, или алкоксикарбонильного радикала, алкоксильная часть которого содержит 1-4 атома углерода.

Более конкретно, настоящее изобретение относится к продуктам формулы (I), в которой R обозначает алкильный радикал с 1-4 атомами углерода; Z обозначает атом водорода или радикал общей формулы (II), в которой R₁ обозначает бензоильный радикал или радикал R₂-O-CO-, в котором R₂ обозначает трет-бутильный радикал, и R₃ обозначает алкильный радикал с 1-6 атомами углерода, алкенильный радикал с 2-6 атомами углерода, циклоалкильный радикал с 3-6 атомами углерода, фенильный радикал, возможно замещенный одним или несколькими атомами или радикалами, одинаковыми или разными, выбираемыми среди атомов галогена (фтор, хлор) и алкильных (метил), алкоксильных (метокси), диалкиламино-(диметиламино-), ациламино-(ацетиламино), алкоксикарбониламино-(трет-бутоксикарбониламино-) или трифторметильного радикалов; или 2- или 3-фурильный радикал, 2- или 3-тиенильный радикал или 2-, 4- или 5-тиазолильный радикал.

Еще более конкретно, настоящее изобретение относится к продуктам общей формулы (I), в которой R обозначает метильный радикал;
Z обозначает атом водорода или радикал общей формулы (II), в которой R₁ обозначает бензоильный радикал или радикал R₂-O-CO-, в котором R₂ обозначает трет-бутильный радикал, и R₃ обозначает изобутильный, изобутенильный, бутенильный, циклогексильный, фенильный, 2-фурильный, 3-фурильный, 2-тиенильный, 3-тиенильный, 2-тиазолильный, 4-тиазолильный или 5-тиазолильный радикал.

Продукты общей формулы (I), в которой Z обозначает радикал общей формулы (II), обладают замечательными противоопухолевыми и антилейкемическими свойствами.

Согласно настоящему изобретению продукты общей формулы (I), в которой R и Z имеют вышеуказанное значение, могут быть получены путем воздействия металлоорганического производного общей формулы
R - X (III)
в которой R имеет вышеуказанное значение и X обозначает атом металла, такой, как атом лития, или остаток магнийорганического соединения (Mg-Y, в котором Y обозначает атом галогена), на продукт общей формулы (IV):

в которой Z₁ обозначает атом водорода или радикал общей формулы (V)

в которой R₁ и R₃ имеют вышеуказанное значение; и или
R₄ обозначает атом водорода и R₅ обозначает защитную группу гидроксильной функции или R₄ и R₅ вместе образуют гетероцикл, с образованием продукта общей формулы (VI):

в случае необходимости с последующей заменой защитных групп, обозначаемых К₅ и/или R₄ и R₅, атомами водорода.

Обычно способ осуществляют в инертном органическом растворителе, таком как простой эфир (тетрагидрофуран), при температуре от -78^oC до 30^oC.

Предпочтительно, R₄ обозначает атом водорода и R₅ обозначает защитную группу гидроксильной функции, или R₄ и R₅ вместе образуют насыщенный 5- или 6-членный гетероцикл.

Когда R₄ обозначает атом водорода, R₅ обозначает предпочтительно метоксиметильный, 1-этокси-этильный, бензилоксиметильный, триметилсилильный, триэтилсилильный, β-триметилсилилэтоксиметильный, бензилоксикарбонильный или тетрагидропиранильный радикал.

Когда R₄ и R₅ вместе образуют гетероцикл, то он предпочтительно представляет собой оксазолидиновый цикл, возможно монозамещенный или гем-дизамещенный в положении 2.

Замену защитных групп R₅ и/или R₄ и R₅ атомами водорода можно осуществлять в зависимости от их природы следующим образом:
1) когда R₄ обозначает атом водорода и R₅ обозначает защитную группу гидроксильной функции, замену защитных групп атомами водорода осуществляют с помощью неорганической кислоты (соляная кислота, серная кислота, фтороводородная кислота) или органической кислоты (уксусная кислота, метансульфокислота, трифторметансульфокислота, п-толуолсульфокислота), используемой индивидуально или в виде смеси, работая в органическом растворителе, выбираемом среди спиртов, простых эфиров, сложных эфиров, алифатических углеводородов, алифатических галогенированных углеводородов, ароматических углеводородов или нитрилов, при температуре от -10^oC до 60^oC;
2) когда R₄ и R₅ вместе образуют насыщенный 5- или 6-членный гетероцикл и предпочтительно оксазолидиновый цикл общей формулы (VII)

в которой R₁ имеет вышеуказанное значение, R₆ и R₇, одинаковые или разные, обозначают атом водорода, алкильный радикал с 1-4 атомами углерода, аралкильный радикал, алкильная часть которого содержит 1-4 атома углерода, а арильная часть предпочтительно обозначает фенильный радикал, возможно замещенный одним или несколькими алкоксильными радикалами с 1-4 атомами углерода, или арильный радикал, обозначающий предпочтительно фенильный радикал, возможно замещенный одним или несколькими алкоксильными радикалами с 1-4 атомами углерода, или R₆ обозначает алкоксильный радикал с 1-4 атомами углерода или тригалогенметильный радикал, такой как трихлорметил, или фенильный радикал, замещенный тригалогенметильным радикалом, таким как трихлорметил, и R₇ обозначает атом водорода, или R₆ и R₇ вместе с атомом углерода, с которым они связаны, образуют 4-7-членный цикл, замену защитной группы, обозначаемой R₆ и R₇, атомами водорода можно осуществлять, в зависимости от значений R₁, R₆ и R₇, следующим образом:
а) когда R₁ обозначает трет-бутоксикарбонильный радикал, R₆ и R₇, одинаковые или разные, обозначают алкильный радикал или аралкильный (бензильный) радикал или арильный (фенильный) радикал, или R₆ обозначает тригалогенметильный радикал или фенильный радикал, замещенный тригалогенметильным радикалом, и R₇ обозначает атом водорода, или R₆ и R₇ вместе образуют 4-7-членный цикл, обрабатывают сложный эфир общей формулы (VI) неорганической или органической кислотой, возможно в органическом растворителе, таком как спирт, с получением продукта общей формулы (VIII):

в которой R и R₃ имеют вышеуказанное значение,
который ацилируют с помощью бензоилхлорида, в котором фенильное ядро возможно замещено, теноилхлорида, фуроилхлорида или продукта общей формулы (IX):
R₂-O-CO-X (IX)
в которой R₂ имеет вышеуказанное значение и X обозначает атом галогена (фтор, хлор) или остаток -O-R₂ или -O-CO-O-R₂, для получения продукта общей формулы (I), в которой Z обозначает радикал общей формулы (II).

Предпочтительно, продукт общей формулы (VI) обрабатывают муравьиной кислотой при температуре около 20^oC.

Предпочтительно, ацилирование продукта общей формулы (VIII) с помощью бензоилхлорида, в котором фенильный радикал возможно замещен, теноилхлорида, фуроилхлорида или продукта общей формулы (IX) осуществляют в инертном органическом растворителе, выбираемом среди сложных эфиров, таких как этилацетат, изопропилацетат или н-бутилацетат, и алифатических галогенированных углеводородов, таких как дихлорметан или 1,2-дихлор-этан, в присутствии неорганического основания, такого как гидрокарбонат натрия, или органического основания, такого как триэтиламин. Реакцию проводят при температуре 0-50^oC, предпочтительно около 20^oC;
б) когда R₁ обозначает бензоильный радикал, возможно замещеный, теноильный или фуроильный радикал или радикал R₂O-CO-, в котором R₂ имеет вышеуказанное значение, R₆ обозначает атом водорода или алкоксильный радикал с 1-4 атомами углерода или фенильный радикал, замещенный одним или несколькими алкоксильными радикалами с 1-4 атомами углерода, и R₇ обозначает атом водорода, замену защитной группы, обозначаемой R₆ и R₇, атомами водорода осуществляют в присутствии неорганической кислоты (соляная кислота, серная кислота) или органической кислоты (уксусная кислота, метансульфокислота, трифторметансульфокислота, п-толуолсульфокислота), используемой индивидуально или в виде смеси, в стехиометрическом или каталитическом количестве, работая в органическом растворителе, выбираемом среди спиртов, простых эфиров, сложных эфиров, алифатических углеводородов, алифатических галогенированных углеводородов и ароматических углеводородов, при температуре от -10^oC до 60^oC, предпочтительно при 15-30^oC.

Продукт общей формулы (IV) может быть получен путем окисления продукта общей формулы (X):

в которой Z₁ имеет вышеуказанное значение.

Обычно окисление проводят с помощью окислителя, выбираемого предпочтительно среди хлорхромата пиридиния, дихромата пиридиния. бихромата калия, бихромата аммония, бихромата пиридиния или оксида марганца, в условиях, при которых не затрагивается остальная часть молекулы.

В зависимости от природы используемого окислителя окисление осуществляют в безводной органической среде или в водно-органической среде.

Обычно окисление проводят при температуре 0-50^oC.

Продукты общей формулы (X) могут быть получены путем воздействия галогенида щелочного металла (хлорид натрия, иодид натрия, фторид калия) или азида щелочного металла (азид натрия) или четвертичной аммониевой соли или фосфата щелочного металла на производное баккатина III или 10-дезацетил-баккатина III общей формулы (XI):

в которой Z₁ имеет вышеуказанное значение.

Обычно реакцию проводят в органическом растворителе, выбираемом среди простых эфиров (тетрагидрофуран, диизопропиловый эфир, метилтрет-бутиловый эфир) и нитрилов (ацетонитрил), используемых индивидуально или в виде смеси, при температуре от 20^oC до температуры кипения реакционной смеси.

Продукт общей формулы (XI) может быть получен путем воздействия производного трифторметансульфокислоты, такого, как ангидрид или N-фенил-трифторметансульфонамид, на продукт общей формулы (XII):

в которой Z₁ имеет вышеуказанное значение.

Обычно реакцию проводят в инертном органическом растворителе (возможно галогенированные алифатические углеводороды, ароматические углеводороды) в присутствии органического основания, такого как третичный алифатический амин (триэтиламин) или пиримидин, при температуре от -50^oC до +20^oC.

Продукты общей формулы (XII) могут быть в условиях, описанных в европейских патентах EP 0 253 738 или EP 0 336 841 или в международной заявке PCT ВОИС 92/095589.

Новые продукты общей формулы (I), получаемые путем осуществления способов согласно изобретению, могут быть очищены известными методами, такими как кристаллизация или хроматография.

Продукты общей формулы (I), в которой Z обозначает радикал общей формулы (I), обладают замечательными биологическими свойствами.

Ин витро, измерение биологической активности осуществляют при использовании тубулина, извлекаемого из головного мозга свиньи, по методу M.L.Shelanski и сотр., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 70, 765-768 (1973). Изучение деполимеризации микротрубочек в тубулине осуществляют по методу G.Chauviere и сотр., C.R.Acad. Sci., 293, серия II, 501-503 (1981). При этом изучении продукты общей формулы (I), в которой Z обозначает радикал общей формулы (II), оказываются по крайней мере в такой же степени активными, как таксол и Таксотер.

Ин виво, продукты общей формулы (I), в которой Z обозначает радикал общей формулы (II), оказываются активными на мыши, которой трансплантирована меланома B16, в дозах 1-10 мг/кг интраперитонеально, а также в отношении других "жидких" или твердых опухолей.

Новые продукты обладают противоопухолевыми свойствами и в особенности эффективностью в отношении опухолей, которые резистентны к Таксолу или Таксотеру. К таким опухолям относятся опухоли ободочной кишки, которые имеют повышенную экспрессию гена mdr I (ген, устойчивый ко многим лекарственным средствам). Устойчивость ко многим лекарственным средствам обычно означает устойчивость опухоли к различным веществам различных структур и механизмов действия. Таксоиды вообще известны тем, что они очень хорошо распознаются экспериментальными опухолями, такими как P388/ДОХ, представляющая собой линию клеток, выбираемую по ее устойчивости к доксорубицину (ДОХ), которая экспрессируют mdr I.

Заявитель осуществил испытания на оценку антипролиферативных свойств новых соединений согласно описанному ниже протоколу.

Согласно тесту на ингибирование клеток (IC50) соединение по примеру 1 показало ингибирующую концентрацию 0,0400 мкг/мл в отношении клеток P388, а в отношении клеток P388, резистентных к доксомбицину, ингибирующая концентрация составила 0,6300 мкг/мл.

Оценка антипролиферативных свойств
Концентрацию лекарственного средства, дающего 50% ингибирования роста (IC₅₀), определяли из двух или трех отдельных экспериментов в 96-луночном планшете для микрокультивирования. Клеточные линии, высеянные при 3·10⁴-3·10⁵ клеток/мл (0.2 мл/лунка), выращивали в течение 96-120 часов в присутствии различных концентраций лекарственного средства (каждая точка повторялась четырежды). Затем клетки инкубировали в течение 16 часов с 0,02% нейтральным красным. Клетки промывали и подвергали лизису с 1% SDS. Включение красителя, отражающего клеточный рост и жизнеспособность, оценивали путем измерения оптической плотности для каждой лунки при 540 и 346 нм, используя Titertec многолуночный спектрофотометр. В экспериментах клонирования KB клетки человеческого эпидермоидного рака в экспоненциальном росте обрабатывали в течение 1 часа в жидкой среде, затем промывали и выливали с Noble Difco Agar в чашки Петри (4 чашки/концентрация), как описано ранее. Число клеточных клонов (> 60 клеток) измеряли спустя 15 дней после инкубации при 37^oC в увлажненной атмосфере с 5% CO₂.

Следующие примеры иллюстрируют настоящее изобретение.

Пример 1
К раствору 260 мг 4 α -ацетокси-2 α -бензоилокси-5 β , 20-эпокси-1 β -гидрокси-7,8 β -метилен-9,10-диоксо-19-нор-11-таксен-13 α -ил-3-трет-бутоксикарбонил-2-(4-метокси-фенил)-4-фенил-1,3- оксазолидин-5-карбоксилата-(2R,4S,5R) в 5 см³ тетрагидрофурана, находящемся в атмосфере аргона, при температуре около -78^oC прикапывают 0,116 см³ 3М раствора метилмагнийиодида в диэтиловом эфире. Спустя 75 минут при -78^oC, прикапывают дополнительные 0,116 см³ 3М раствора метилмагнийиодида в диэтиловом эфире. Реакционную смесь перемешивают в течение 30 минут при -78^oC, затем в течение 18 часов при температуре около 0^oC. После охлаждения до температуры около -78^oC прикапывают 0,116 см³ 3М раствора метилмагнийиодида в диэтиловом эфире, после чего оставляют реагировать в течение 20 минут при -78^oC, в течение 30 минут при 0^oC, затем в течение 30 минут при 20^oC. Реакционную смесь обрабатывают с помощью 1 см³ водного насыщенного раствора хлорида аммония и 5 см³ этилацетата. После декантации водную фазу экстрагируют с помощью 1,5 см³ этилацетата, органические фазы объединяют, сушат над сульфатом магния, фильтруют через стеклянный (фриттированный) фильтр и концентрируют при пониженном давлении (0,27 кПа) при температуре около 40^oC. Таким образом получат 240 мг оранжевого цвета меренги, которую очищают путем хроматографии при атмосферном давлении на 10 г диоксида кремния (0,063 - 0,2 мм), который находится в колонке диаметром 1,6 см (элюирующее средство: смесь метанола с дихлорметаном в соотношении 3:97 по объему), собирая фракции по 5 см³. Фракции, содержащие только целевой продукт, объединяют и концентрируют досуха при пониженном давлении (0,27 кПа) при 40^oC в течение 2-х часов. Таким образом получают 0,15 г 4 α -ацетокси-2 α -бензоилокси-5 β , 20-эпокси- 1β,10β -дигидрокси-10 α -метил-7,8 β -метилен-9-оксо-19-нор-11-таксен-13 α -ил-3-трет- бутоксикарбонил-2-(4-метокси-фенил)-4-фенил-1,3-оксазолидин-5- карбоксилата-(2R,4S,5R) в форме меренги ярко-желтого цвета.

Раствор 75 мг 4 α -ацетокси-2 α -бензоилокси-5 β , 20-эпокси- 1β,10β- -дигидрокси-10 α -метил-7,8 β -метилен-9-оксо-19-нор-11-таксен-13 -ил-3-трет-бутоксикарбонил-2-(4-метокси-фенил)-4-фенил-1,3- оксазолидин-5-карбоксилата-(2R,4S,5R) в 1,5 см³ 0,1 н. раствора хлороводородной кислоты в этаноле перемешивают при температуре около 20^oC в течение 5 часов. Добавляют дополнительные 0,5 см³ 0,1 н. раствора хлорводородной кислоты в этаноле. Спустя 16 часов выдерживания при температуре около 5^oC добавляют дополнительные 0,5 см³ 0,1 н. раствора хлороводородной кислоты в этаноле и раствор перемешивают в течение еще 3-х часов при температуре около 20^oC. Реакционную смесь разбавляют с помощью 2,5 см³ дихлорметана, 2,5 см³ водного насыщенного раствора гидрокарбоната натрия и 2 см³ дистиллированной воды. После декантации водную фазу экстрагируют с помощью 5 см³ дихлорметана, органические фазы объединяют, сушат над сульфатом магния, отфильтровывают через стеклянный (из фриттированного стекла) фильтр и концентрируют при пониженном давлении (0,27 кПа) при температуре около 40^oC. Таким образом получают 124 мг меренги желтого цвета, которую очищают путем препаративной тонкослойной хроматографии (5 препаративных пластин Мерк, силикагель 60F254, толщина 0,5 мм, выделяют в растворе в дихлорметане, элюирующее средство: смесь метанола с дихлорметаном (5:95 по объему)). После элюирования зоны, соответствующей основному продукту, с помощью смеси метанола с дихлорметаном (10:90 по объему), отфильтровывания через стеклянный (из фриттированного стекла) фильтр, затем выпаривания растворителей при пониженном давлении (0,27 кПа) при температуре около 40^oC получат 37 мг 4 α -ацетокси-2 α -бензоилокси-5 β , 20-эпокси- 1β,10β -дигидрокси-10 α -метил-7,8 β -метилен-9-оксо-19-нор-11-таксен-13 α -ил-3-трет- бутоксикарбониламино-2-гидрокси-3-фенилпропионата-(2R,3S) в виде меренги белого цвета, характеристики которого следующие:
¹H-ЯМР-спектр (600 МГц, CDCl₃, δ в м.д. (миллионные доли): 1,21 (с., 3H: CH₃); 1,22 (с. , 9H: C(CH₃)₃); 1,28 (с., 3H: CH₃); 1,38 (м., 1H: H в положении 7); 1,68 и 2,31 (2м., 1H каждый: CH₂ в положении 19); 1,70 (с., 3H: CH₃ в положении 10); 1,85 (с., 1H: OH в положении 1); 1,87 (с., 3H: CH₃); 2,17 и 2,33 (2 м., 1H каждый: CH₂ в положении 14); 2,17 и 2,43 (соответственно, д. и дт., J = 16 и J = 16 и 4,5 Гц, 1H каждый: CH₂ в положении 6); 2,41 (с., 3H: COCH₃); 3,25 (м., 1H: OH в положении 2); 4,05 и 4,35 (2д. , J = 9 Гц, 1H каждый: CH₂ в положении 20); 4,30 (д., J = 7 Гц, 1H: H в положении 3); 4,42 (c., 1H: OH в положении 10); 4,60 (м., 1H: OH в положении 2); 4,75 (д. , J = 4 Гц, 1H: H в положении 5); 5,30 (м., 1H: H в положении 3); 5,38 (д., J = 10 Гц, 1H: CONH); 5,67 (д., J = 7 Гц, 1H:H в положении 2); 6,33 (т.уширенный, J = 9 Гц, 1H:H в положении 13); 7,30 (т., J = 7,5 Гц, 1H: ароматический в положении 3'H в пара-положении); 7,37 (д., J = 7,5 гц, 2H: ароматический в положении 3'H в пара-положении); 7,40 (т., J = 7,5 Гц, 2H: ароматический в положении 3'H в мета-положении); 7,51 (т., J = 7,5 Гц, 2H: OCOC₆H₅ H в мета-положении); 7,60 (т., J = 7,5 Гц, 1H: OCOC₆H₅ H в пара-положении); 8,17 (д., J = 7,5 Гц, 2H: OCOC₆H₅ H в орто-положении).

4 α -ацетокси-2α -бензоилокси-5 β , 20-эпокси-1 β -гидрокси-7,8 β -метилен-9,10-диоксо-19-нор-11-таксен-13 α -ил-3-трет-бутоксикарбонил-2-(4-метокси-фенил)-4-фенил-1,3- оксазолидин-5-карбоксилат-(2R, 4S, 5R) может быть получен следующим образом.

К раствору 900 мг 4 α -ацетокси-2α -бензоилокси-5 β , 20-эпокси- 1β,10β- -дигидрокси-7,8 β -метилен-9-оксо-19-нор-11-таксен-13 α -ил-3-трет-бутоксикарбонил-2-(4-метокси-фенил)-4-фенил-1,3- оксазолидин-5-карбоксилата-(2R, 4S, 5R) в 9 см³ дихлорметана, находящегося в атмосфере аргона, при температуре около 20^oC, добавляют 0,5 г молекулярного сита 4 , затем порциями добавляют 0,43 г хлорхромата пиридиния. Реакционную смесь перемешивают в течение 90 минут при температуре около 20^oC, затем отфильтровывают через стеклянный фильтр (из фриттированного стекла), выложенный Clarcel'ем. После промывки твердого остатка дихлорметаном фильтраты концентрируют при пониженном давлении (0,27 кПа) при температуре около 40^oC. Таким образом получают 1,13 г коричневого лака, который очищают путем хроматографии при атмосферном давлении на 40 г диоксида кремния (0,063 - 0,2 мм), которые находятся в колонке диаметром 2,2 см
(элюирующее средство : смесь метанола с дихлорметаном в соотношении 2 : 98 по объему), собирая фракции по 10 см³. Содержащие только целевой продукт фракции объединяют и концентрируют досуха при пониженном давлении (0,27 кПа) при 40^oC в течение 2-х часов. Таким образом получают 0,63 г 4 α -ацетокси-2α -бензоилокси-5 β , 20-эпокси-1 β -гидрокси-7,8 β -метилен-9,10-диоксо-19-нор-11-таксен-13 α -ил-3-трет-бутоксикарбонил-2-(4-метокси-фенил)-4-фенил-1,3- оксазолидин-5-карбоксилата-(2R,4S,5R) в виде желто-зеленой меренги.

4 α -Ацетокси-2α -бензоилокси-5 β , 20-эпокси- 1β,10β -дигидрокси-7,8 β -метилен-9-оксо-19-нор-11-таксен-13 α -ил-3-трет-бутоксикарбонил-2-(4-метокси-фенил)-4-фенил-1,3- оксазолидин-5-карбоксилат-(2R, 4S, 5R) может быть получен следующим образом.

К раствору 1,8 г 4 α -ацетокси-2α -бензоилокси-5 β, 20-эпокси- 1β,10β- -дигидрокси-9-оксо-7 β -трифторметансульфонилокси- 11-таксен-13 α -ил-3-трет-бутоксикарбонил-2-(4-метокси-фенил)-4- фенил-1,3-оксазолидин-5-карбоксилата-(2R, 4S, 5R) в 20 см³ ацетонитрила и 3 см³ тетрагидрофурана добавляют 1,5 г хлорида натрия и 0,5 г молекулярного сита 4 . Реакционную смесь доводят до кипения с обратным холодильником в инертной атмосфере аргона в течение 1 часа, доводят затем обратно до температуры около 20^oC и фильтруют через стеклянный фильтр. Твердый остаток промывают с помощью 10 см³ этилацетата. Фильтраты объединяют, сушат над сульфатом магния, отфильтровывают через стеклянный фильтр и концентрируют при пониженном давлении (0,27 кПа) при температуре около 40^oC. Таким образом получают 1,6 г меренги желтого цвета, которую очищают путем хроматографии при атмосферном давлении на 60 г диоксида кремния (0,063 - 0,2 мм), находящихся в колонке диаметром 3 см (элюирующее средство : этилацетат с дихлорметаном в соотношении 20 : 80 по объему), собирая фракции по 10 см³. Содержащие только целевой продукт фракции объединяют и концентрируют досуха при пониженном давлении (0,27 кПа) при 40^oC в течение 2-х часов. Таким образом получают 0,91 г 4 α -ацетокси-2α -бензоилокси-5 β , 20-эпокси- 1β,10β -дигидрокси-7,8 β -метилен-9-оксо-19-нор-11-таксен-13 α -ил-3-трет-бутоксикарбонил-2-(4-метокси-фенил)-4-фенил-1,3- оксазолидин-5-карбоксилата-(2R,4S,5R) в виде белого цвета меренги.

4 α -Ацетокси-2α -бензоилокси-5 β , 20-эпокси- 1β,10β -дигидрокси-9-оксо-7 β -трифторметансульфонат- 11-таксен-13 α -ил-3-трет-бутоксикарбонил-2-(4-метокси-фенил)-4- фенил-1,3-оксазолидин-5-карбоксилат-(2R,4S,5R) может быть получен следующим образом.

К раствору 1,9 г 4 α -ацетокси-2α -бензоилокси-5 β , 20-эпокси- 1β,7β, 10 β -тригидрокси-9-оксо-11-таксен-13 α -ил-3-трет- бутоксикарбонил-2-(4-метокси-фенил)-4-фенил-1,3-оксазолидин-5- карбоксилата-(2R, 4S,5R) в 20 см³ безводного дихлорметана и 0,68 см³ безводного пиридина, находящегося в атмосфере аргона, при температуре около -35^oC, прикапывают 0,54 см³ ангидрида трифторметансульфокислоты. Реакционную смесь перемешивают в течение 10 минут при -35^oC, 90 минут при температуре около -5^oC, затем при температуре около -15^oC добавляют 5 см³ дистиллированной воды. После декантации водную фазу снова экстрагируют с помощью 2 см³ дихлорметана, органические фазы объединяют, сушат над сульфатом магния, отфильтровывают через стеклянный фильтр (из фриттированного стекла) и концентрируют при пониженном давлении (0,27 кПа) при температуре около 40^oC. Таким образом получают 2,4 г масла желтого цвета, которое очищают путем хроматографии при атмосферном давлении на 100 г диоксида кремния (0,063 - 0,2 мм), содержащихся в колонке диаметром 3,2 см (элюирующее средство : смесь метанола с дихлорметаном в соотношении 2 : 98 по объему), собирая фракции по 15 см³. Содержащие только целевой продукт фракции объединяют и концентрируют досуха при пониженном давлении (0,27 кПа) при 40^oC в течение 2-х часов. Таким образом получают 1,23 г 4 α -ацетокси-2α -бензоилокси-5 β , 20-эпокси- 1β,10β -дигидрокси-9-оксо-7 β -трифторметансульфонат- 11-таксен-13 α -ил-3-трет-бутоксикарбонил-2-(4-метокси-фенил)-4- фенил-1,3-оксазолидин-5-карбоксилата-(2R, 4S,5R) в виде бледно-желтого цвета меренги.

4 α-Ацетокси-2-α -бензоилокси-5 β , 20-эпокси- 1β,7β,10β -тригидрокси-9-оксо-11-таксен-13 α -ил-3-трет- бутоксикарбонил-2-(4-метокси-фенил)-4- фенил-1,3-оксазолидин-5-карбоксилат-(2R, 4S, 5R) может быть получен следующим образом.

Раствор 3,95 г 4 α -ацетокси-2α -бензоилокси-5 β , 20-эпокси-1 β -гидрокси-9-оксо- 7β,10β -бис-(2,2,2-трихлор-этокси) карбонилокси-11-таксен-13 α -ил-3-трет-бутоксикарбонил-2-(4-метокси- фенил)-4-фенил-1,3-оксазолидин-5-карбоксилата-(2R,4S,5R) в смеси 20 см³ метанола и 7 см³ уксусной кислоты нагревают при перемешивании в атмосфере аргона до температуры около 60^oC, затем добавляют 2 г цинкового порошка. Реакционную смесь после этого перемешивают в течение 15 минут при 60^oC, затем охлаждают до температуры около 20^oC и отфильтровывают через снабженный целитом стеклянный фильтр (из фриттированного стекла). Стеклянный фильтр промывают 2 раза по 15 см³ метанолом. Фильтрат концентрируют досуха при пониженном давлении (0,27 кПа) при температуре около 40^oC. К остатку добавляют 100 см³ дихлорметана. Органическую фазу промывают 2 раза по 10 см³ водным насыщенным раствором гидрокарбоната натрия, затем с помощью 10 см³ дистиллированной воды. Органическую фазу сушат над сульфатом магния, отфильтровывают на стеклянном фильтре, затем концентрируют досуха при пониженном давлении (2,7 кПа) при 40^oC. Получают 5,57 г белого цвета меренги, которую очищают путем хроматографии на 300 г диоксида кремния (0,063 - 0,2 мм), содержащихся в колонке диаметром 6 см (градиент элюирования : смесь метанола с дихлорметаном от 0 : 100 до 2 : 98 по объему), собирая фракции по 100 см³. Содержащие только целевой продукт фракции объединяют и концентрируют досуха при пониженном давлении (0,27 кПа) при 40^oC в течение 2-х часов. Таким образом получают 2,52 г 4 -ацетокси-2α -бензоилокси-5 β , 20-эпокси- 1β,7β,10β -тригидрокси-9-оксо-11-таксен-13 α -ил-3-трет-бутоксикарбонил-2- (4-метокси-фенил)-4-фенил-1,3-оксазолидин-5-карбоксилата- (2R,4S,5R) в виде белого цвета меренги.

4 α -Ацетокси-2α -бензоилокси-5 β , 20-эпокси-1 β -гидрокси-9-оксо-7 β , 10 β -бис(2,2,2-трифтор-этокси)карбонилокси-11-таксен-13 α -ил-3-трет-бутоксикарбонил-2-(4-метокси-фенил)-4-фенил-1,3- оксазолидин-5-карбоксилата-(2R, 4S, 5R) может быть получен в условиях, описанных в международной заявке PCT ВОИС 94/07878.

Новые продукты общей формулы (I), в которой Z обозначает радикал общей формулы (II), обладают значительной ингибирующей активностью в отношении анормальной пролиферации клеток и также обладают терапевтическими свойствами, позволяющими лечить заболевания с патологическими состояниями, связанными с анормальной пролиферацией клеток. Патологические состояния включают анормальную пролиферацию злокачественных и незлокачественных клеток различных тканей и/или органов, включающих, но не ограничивающих, мышечные, костные или соединительные ткани, кожу, головной мозг, легкие, половые органы, лимфатические или почечные системы, грудные или кровяные клетки, печень, пищеварительный аппарат, поджелудочную железу и щитовидные или адренальные железы. Эти патологические состояния также могут включать псориаз; твердые опухоли; раковые заболевания женских половых желез, женской груди, головного мозга, простаты, ободочной кишки, желудка, почек или тестикул; саркому Капоши; холангиокарциному; хориокарциному; нейробластому; опухоль Вильмса; болезнь Ходжкина; меланомы; множественные миеломы; хронические лимфоцитарные лейкемии; острые или хронические гранулоцитарные лимфомы. Новые продукты согласно изобретению особенно пригодны для лечения рака женской половой железы (яичника). Продукты согласно изобретению могут быть использованы для предохранения от или замедления появления патологических состояний и их рецидивов или для лечения этих патологических состояний.

Продукты согласно изобретению можно вводить больному в различных формах, в зависимости от пути введения, которым предпочтительно является парентеральный путь введения. Введение парентеральным путем включает внутривенное, интраперитональное, внутримышечное или подкожное введение. В особенности предпочтительно интраперитональное или внутривенное введение.

Настоящее изобретение также включает фармацевтические композиции, которые содержат, по крайней мере, один продукт общей формулы (I) в достаточном количестве для применения в терапии человека или животных. Композиции можно приготовлять обычными способами, используя одно или несколько фармацевтически приемлемых вспомогательных средств, носителей или эксципиентов. Пригодные носители включают разбавители, стерильные водные среды и различные нетоксичные растворители. Предпочтительно композиции находятся в виде водных растворов или суспензий, растворов для инъекции, которые могут содержать эмульгаторы, красители, консерванты или стабилизаторы.

Выбор вспомогательных средств или эксципиентов может определяться растворимостью и химическими свойствами продукта, конкретным способом введения и пригодными фармацевтическими применениями.

Для парентерального введения используют стерильные водные или неводные растворы или суспензии. Для приготовления неводных растворов или суспензий могут быть использованы природные растительные масла, такие как оливковое масло, кунжутное масло или парафиновое масло, или пригодные для инъекций сложные органические эфиры, как этилолеат. Водные стерильные растворы могут представлять собой раствор фармацевтически приемлемой соли в воде. Водные растворы пригодны для внутривенного введения, если надлежащим образом установлено pH и соблюдена изотоничность, например, с помощью достаточного количества хлорида натрия или глюкозы. Стерилизацию можно осуществлять путем нагревания или любым другим способом, который не ухудшает композицию.

Само собой разумеется, что все продукты, входящие в композиции согласно изобретению, должны быть чистыми и нетоксичными в используемых количествах.

Композиции содержат эффективное количество активного соединения, например, не менее 0,01% терапевтически активного продукта. Количество активного соединения в композиции обычно соответствует прописываемой дозировке. Предпочтительно, композиции готовят таким образом, чтобы разовая доза содержала около 0,01 - 1000 мг активного продукта для введения парентеральным путем.

Терапевтическую обработку можно осуществлять наряду с другими видами терапии, включающими прием антинеопластических медикаментов, введение моноклональных антител, иммунологическую терапию или рентгенотерапию или модификаторы биологических ответов. В качестве модификаторов ответов можно, например, назвать лимфокины и цитокины, такие как интерлейкины, интерфероны (α,β или δ), и фактор некроза опухоли. Другие химиотерапевтические агенты, пригодные для лечения нарушений, возникающих вследствие анормальной пролиферации клеток, включают, но не исчерпывающим образом, алкилирующие агенты, такие как горчичные газы, как мехлорэтамин, циклофосфамид, мелфалан и хлорамбуцил; алкилсульфонаты, например, бисульфан; нитрозомочевины, например, кармустин, ломустин, семустин и стрептозоцин; триазены, такие как дикарбазин; антиметаболиты, такие, как аналоги фолиевой кислоты, например, метотраксат; аналоги пиримидина, например, фторурацил и цитарабин; аналоги пуринов, такие как меркаптопурин и тиогуанин; природные продукты, такие как алкалоиды vinca, как винбластин, винкристин и вендезин; эпиподофиллотоксины, такие как этопозид и тенипозид; антибиотики, такие как дактиномицин, даунорубицин, доксорубицин, блеомицин, пликамицин и митомицин; ферменты, такие как L-аспарагиназа; различные факторы, такие, как координационные платиновые комплексы, например, цисплатин; замещенные мочевины, такие как гидроксимочевина; производные метилгидразина, такие как прокарбазин; адренокортикоидные супрессоры, такие как митотан и аминоглютетимид; гормоны и антагонисты, такие как адренокортикостероиды, например, преднизон; прогестины, такие как гидроксипрогестеронкапроат, метоксипрогестеронацетат и мегестролацетат; эстрогены, как диэтилстильбестрол и этинилэстрадиол; антиоэстрогены, такие как тамоксифен; андрогены, как тестостеронпропионат и флюоксиместерон.

Используемые для осуществления методов согласно изобретению дозы представляют собой такие, которые позволяют осуществлять профилактику или максимум терапевтического ответа. Дозы изменяются в зависимости от формы введения, конкретно выбранного продукта и присущих излечиваемому субъекту характеристик. Обычно дозы представляют собой такие, которые терапевтически эффективны для лечения нарушений, вызываемых вследствие анормальной пролиферации клеток. Продукты согласно изобретению можно вводить настолько часто, насколько необходимо для достижения желательного терапевтического эффекта. Некоторые больные могут быстро реагировать на относительно слабые или сильные дозы, нуждаясь потом в незначительных или нулевых дозах. Обычно незначительные (слабые) дозы используют в начале лечения и, если необходимо, все более и более сильные дозы вводят вплоть до достижения оптимального эффекта. Для других больных может оказаться необходимым введение доз 1-8 раз в день, предпочтительно 1-4 раза, в зависимости от физиологических особенностей рассматриваемого больного. Также можно для некоторых больных вводить только 1-2 дозы в сутки.

Для человека дозы обычно составляют 0,01 - 200 мг/кг. При введении интраперитональном дозы обычно составляют 0,1 - 100 мг/кг и предпочтительно 0,5 - 50 мг/кг и еще более предпочтительно 1 - 10 мг/кг. При введении внутривенном дозы обычно составляют 0,1 - 50 мг/кг и предпочтительно 0,1 - 5 мг/кг и более предпочтительно 1 - 2 мг/кг. Разумеется, для выбора наиболее соответствующей дозы нужно учитывать путь введения, массу больного, общее состояние его здоровья, его возраст и все факторы, которые могут влиять на эффективность лечения.

Следующий пример иллюстрирует композицию согласно изобретению.

Пример 2
40 мг полученного в примере 1 продукта растворяют в 1 см³ Эмульфора ЭЛ 620 и 1 см³ этанола, затем раствор разбавляют путем добавления 18 см³ физиологической сыворотки.

Композицию вводят путем перфузионных вливаний в течение 1 часа с физиологическим раствором.

Формула изобретения

1. Таксоиды общей формулы I

в которой R обозначает линейный или разветвленный алкильный радикал с 1 - 6 атомами углерода;
Z обозначает атом водорода или радикал общей формулы II

в которой R₁ обозначает бензоильный радикал или радикал R₂-O-CO-, в котором R₂ обозначает алкильный радикал с 1 - 8 атомами углерода;
R₃ обозначает фенильный радикал.

2. Таксоиды по п. 1, в которых R обозначает алкильный радикал с 1 - 4 атомами углерода, Z обозначает атом водорода или радикал общей формулы II, в которой R₁ обозначает бензоильный радикал или радикал R₂-O-CO-, в котором R₂ обозначает трет-бутильный радикал, и R₃ обозначает фенильный радикал.

3. Таксоиды по п.1, в которых R обозначает метильный радикал, Z обозначает атом водорода или радикал общей формулы II, в которой R₁ обозначает бензоильный радикал или радикал R₂-O-CO-, в котором R₂ обозначает трет-бутильный радикал, и R₃ обозначает фенильный радикал.

4. Способ получения таксоида по любому из пп.1 - 3, отличающийся тем, что металлоорганическое производное общей формулы III
R - X,
в которой R имеет указанное значение;
X обозначает атом металла, такой, как атом лития, или остаток магнийорганического соединения,
вводят во взаимодействие с продуктом общей формулы IV

в которой Z₁ обозначает атом водорода или радикал общей формулы V

в которой R₁ и R₃ имеют указанное в любом из пп.1 - 3 значение;
и/или R₄ и R₅ вместе образуют оксазолидиновый цикл,
с получением продукта общей формулы VI

где R и Z₁ имеют указанные значения,
затем, в случае необходимости, заменяют защитные группы, обозначаемые R₅ и/или R₄ и R₅, атомами водорода.

5. Способ по п.4, отличающийся тем, что производное металла вводят во взаимодействие, работая в инертном органическом растворителе и при температуре от -78 до +30^oC.

6. Способ по п.4, отличающийся тем, что замену защитных групп R₅ и/или R₄ и R₅ осуществляют следующим образом: когда R₄ и R₅ вместе образуют оксазолидиновый цикл общей формулы VII

в которой R₁ имеет указанное в любом из пп.1 - 3 значение;
R₆ и R₇ одинаковые или разные, обозначают атом водорода, алкильный радикал с 1 - 4 атомами углерода, фенильный радикал, возможно замещенный одним или несколькими алкоксильными радикалами с 1 - 4 атомами углерода,
замену защитной группы, обозначаемой R₆ и R₇, атомами водорода можно осуществлять в зависимости от значений R₁, R₆ и R₇ следующим образом: когда R₁ обозначает трет-бутоксикарбонильный радикал, R₆ и R₇, одинаковые или разные, обозначают алкильный радикал или фенильный радикал, обрабатывают сложный эфир общей формулы VI неорганической или органической кислотой, в случае необходимости в органическом растворителе, таком, как спирт, с получением продукта общей формулы VIII

в которой R и R₃ имеют указанное в любом из пп.1 - 3 значение,
который ацилируют с помощью продукта общей формулы IX
R₂-O-CO-X,
в которой R₂ имеет указанное значение;
X обозначает атом галогена (фтор, хлор) или остаток -O-R₂ или O-CO-O-R₂,
с целью получения продукта общей формулы I, в которой Z обозначает радикал общей формулы II, когда R₁ обозначает бензоильный радикал или радикал R₂O-CO-, в котором R₂ имеет указанное в любом из пп.1 - 3 значение, R₆ обозначает атом водорода или алкоксильный радикал с 1 - 4 атомами углерода или фенильный радикал, замещенный одним или несколькими алкоксильными радикалами с 1 - 4 атомами углерода, и R₇ обозначает атом водорода, замену защитной группы, обозначаемой R₆ и R₇, атомами водорода осуществляют в присутствии неорганической или органической кислоты, используемой индивидуально или в виде смеси, в стехиометрическом или каталитическом количестве, работая в органическом растворителе, выбираемом среди спиртов, простых эфиров, сложных эфиров, алифатических углеводородов, алифатических галогенированных углеводородов и ароматических углеводородов, при температуре от -10 до +60^oC.

7. Фармацевтическая композиция, обладающая противоопухолевой активностью, отличающаяся тем, что она содержит, по крайней мере, один продукт по любому из пп.1 - 3, в котором Z обозначает радикал общей формулы II, в эффективном количестве, в сочетании с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми продуктами, которые являются инертными или фармакологически активными.