Производные (1,2,3-триазолил)-1,2,5-оксадиазола, потенцирующие no-зависимую активацию растворимой формы гуанилатциклазы

 

Изобретение относится к новым химическим соединениям, в частности к производным (1,2,3-триазолил)-1,2,5-оксадиазола общей формулы I, где R = NH₂ или и, если R¹ = Н, то R² - низший гидроксиалкил, или, если R¹ - низший алкил, низший гидроксиалкил, арил, то R² = Н, низший гидроксиалкил или радикал общей формулы -C(О)R³, где R³ = ОН, NH₂, низший алкил или низший алкоксил, потенцирующие NO-зависимую активацию растворимой формы гуанилатциклазы (рГЦ). Описываемые производные (1,2,3-триазол-1-ил)-1,2,5-оксадиазола, оказывающие селективное потенцирующее действие на NO-зависимую активацию рГЦ, расширяют арсенал специфических регуляторов активности рГЦ. 1 табл.

Изобретение относится к новым химическим соединениям, в частности к производным (1,2,3-триазолил)-1,2,5-оксадиазола общей формулы I: где, R = NH₂ или и, если R¹ = H, то R² - низший гидроксиалкил, или, если R¹ - низший (гидрокси)алкил, арил, то R² = H, низший гидроксиалкил или радикал общей формулы -C(O)R³, где R³ = OH, NH₂, низший алкил или низший алкоксил, потенцирующие NO-зависимую активацию растворимой формы гуанилатциклазы (рГЦ).

Описываемые производные (1,2,3-триазолил)-1,2,5-оксадиазола вышеуказанной общей формулы I, где R, R¹ и R² имеют вышеуказанные значения, могут найти применение в биохимии для изучения строения и механизма действия рГЦ, в частности, для исследования регуляции активности данного фермента с помощью NO-доноров.

Гуанилатциклаза [КФ 4.6.1.2; гуанозин-5'-трифосфат-пирофосфатлиаза (циклизующая)] является ферментом, катализирующим биосинтез гуанозин-3', 5'-циклофосфата (цГМФ) - универсального регулятора внутриклеточного метаболизма (F.Murad "Regulation of cytosolic guanylyl cyclase by nitric oxide: The NO-cGMP signal transduction system" Adv. Pharmacol. 1994, v. 26, p. 19-33 [l]). ГЦ существует в двух формах - мембранной и растворимой и играет ключевую роль в регуляции таких физиологических процессов, как сокращение и расслабление гладких мышц кровеносных сосудов и агрегация тромбоцитов. Основным эндогенным активатором рГЦ является оксид азота (NO), который в результате взаимодействия с атомом железа гема, входящего в состав фермента, образует комплекс нитрозил-гем.

Известны различные тиолсодержащие органические соединения (напр., 1,4-дитиотреитол), которые повышают степень активации рГЦ донорами оксида азота, в частности, нитропруссидом натрия (ННП) (Н.Н.Белушкина, И.К.Ряпосова, И.С. Северина "Роль тиолов в стимуляции растворимой гуанилатциклазы новым классом активаторов ферментов, генерирующих окись азота". Бюлл. Экспер. Биол. Мед. 1997, N 1, с. 39-42 [2]).

Данный эффект обусловлен усилением генерации NO из ННП (и ряда органических нитратов и N-оксидов) в присутствии тиолов. На препаратах рГЦ из тромбоцитов человека степень потенцирования активирующего действия ННП 1,4-дитиотреитолом составляла 170 - 210% [2].

Известны различные производные 1,2,3-триазола и 1,2,5-оксадиазола ("Comprehensive Heterocyclic Chemistry II", Eds. A. R. Katritzky, Ch. W. Rees, E. F. V. Scriven, Pergamon, 1996, v. 4, p. 1,229 [3]), однако влияние данных соединений на NO-зависимую активацию рГЦ не изучено.

Наиболее близким к описываемым соединениям по действию и структуре является известный 1-бензил-3-[5-(гидроксиметил)-2-фуранил]индазол (YC-1) формулы II: усиливающий активацию рГЦ различными модуляторами активности данного фермента, в том числе и донорами NO (A.Mulsch, J. Bauersachs et al. "Effect of YC-1, an NO-independent, superoxidesensitive stimulator of soluble guanylyl cyclase, on smooth muscle responsiveness to nitrovasodilators" Br. J. Pharmacol. 1997, v. 120, p. 681-689 [4]). Так, YC-1 в концентрации 3 мкМ обладал максимальным потенцирующим эффектом, он усиливал активацию рГЦ из легких быка 1 мкМ ННП в 2.3 раза, при этом он сам активировал фермент ~ в 2 раза. В результате изучения влияния YC-1 на активность рГЦ было сделано предположение о наличии на ферменте аллостерического участка связывания данного соединения. Показано, что в результате взаимодействия YC-1 с рГЦ уменьшается скорость диссоциации NO из комплекса нитрозил-гем и увеличивается максимальная скорость ферментативной реакции (A. Friebe, M. Russwunn et al. "A point-mutated guanylyl cyclase with features of theb YC-1 stimulated enzyme: implications for the YC-1 binding site?" Biochemistry 1999, v. 38, p. 15253-15257 [5]).

В настоящее время проводится широкий поиск соединений, способных селективно потенцировать активацию рГЦ NO-генерирующими соединениями и усиливать их антигипертензивное действие, при этом особый интерес представляют такие вещества, которые не оказывают выраженного влияния на другие биологические объекты. Однако показано, что YC-1 активирует эндотелиальную NO-синтазу (P. Wohlfart, T. Malinski et al. "Release of nitric oxide from endothelial cells stimulated by YC-1, an activator of soluble guanylyl cyclase" Br. J. Pharmacol. 1999, v. 128, p. 1316-1322 [6]) и ингибирует различные изоформы фосфодиэстераз циклических нуклеотидов (J. Galle, U. Zabel et al. "Effects of the soluble guanylyl cyclase activator, YC-1, on vascular tone cyclic GMP levels and phosphodiesterase activity" Br. J. Pharmacol. 1999, v. 127, p. 195-203 [7]).

Цель изобретения - создание новых азолсодержащих гетероциклических соединений, обладающих селективным потенцирующим действием на NO-зависимую активацию рГЦ.

Цель достигается новыми производными (1,2,3-триазолил)-1,2,5-оксадиазола вышеуказанной общей формулы I, где R, R¹ и R² имеют вышеуказанные значения, потенцирующими NO-зависимую активацию рГЦ.

Описываемые производные (1,2,3-триазолил)-1,2,5-оксадиазола вышеуказанной общей формулы I, получают кипячением соответствующих моноазидофуразана и замещенного ацетилена (или 1,3-дикарбонильного соединения) в метиловом или этиловом спирте с последующим выделением полученных продуктов обычными приемами. Предложенный способ основан на известных реакциях циклоприсоединения азидов к соответствующим производным ацетилена (Th. Finley, Chem. Heterocyclic Compounds/Eds. A. Weissberger, E. C. Taylor. New-York, 1980, v. 39, p. 1 [8]) или 1,3-дикарбонильным соединениям (A. Group, M. Kovacic, B. Kranjc-Skraba, B. Mihelchic, S. Simonic, B. Stanovnik and M. Tisler "Reactions of azidoazolopyridazines with 1,3-dicarbonylic compounds", Tetrahedron, 1974, v. 30, p. 2251-2256 [9]), при необходимости, с последующей модификацией функциональных групп синтезированных соединений. В качестве исходных азидов использовали 3-азидо-4-аминофуразан, полученный диазотированием 3,4-диаминофуразана нитрозилсерной кислотой с последующей обработкой соли диазония азидом натрия (О.А. Ракитин, О.А. Залесова, А.С. Куликов, Н.Н. Махова, Т.И. Годовикова и Л.И. Хмельницкий "Синтез и реакционная способность фуразанил- и фуроксанилдиазониевых солей", Изв. РАН, Сер. хим., 1993, N 11, с. 1949-1953 [10] ) и 5-[4-азидо(1,2,5)оксадиазолил] -5H-[1,2,3] триазоло[4,5-с] [1,2,5] оксадиазол, полученный взаимодействием бисдиазониевой соли диаминоазофуразана с азидом натрия и последующим термолизом образовавшегося 3,3'-диазидо-4,4'-азофуразана (A. Gunasecaran and J. H. Boyer "Dense Energetic Compounds of C, H, N, and O Atoms. III. 5-[4-Nitro-(1,2,5-oxadiazolyl] -5H-[l, 2,3] triazolo[4,5-c][1,2,5]oxadiazole", Heteroatom. Chemistry, 1993, v. 4, N 5, p. 521-524 [11]).

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. 4-Амино-3-(5-гидроксиметил-1,2,3-триазол-1-ил)-1,2,5- оксадиазол (1).

Смесь 2.3 г (0.018 моль) 3-азидо-4-аминофуразана и 12 мл (11.64 г, 0.207 моль) пропаргилового спирта в 20 мл MeOH кипятят 10 ч, отфильтровывают осадок, промывают CH₂Cl₂, сушат на воздухе. Получают 1.66 г (50%) целевого продукта. Т. пл. 195-196^oC (EtOAc); R_f 0.34 ("Silufol", CHCl₃ - Me₂CO - MeOH 10: 2: 1). ИК (KBr), ν/см^-1: 3480, 3335, 3260, 3160 (NH₂; OH), 3130, 2930, 2865 (CH), 1640, 1585, 1450, 1425, 1350, 1310, 1280, 1230, 1110, 1055, 985, 870. ¹H ЯМР ([²H₆] ДМСО) δ: 7.95 (1H, с, 4'-H); 6.45 (2H, с, NH₂); 5.56 (1H, т, J = 3.6, OH); 4.90 (2H, д, J = 3.6, 5'-CH₂). ¹³C ЯМР ([²H₆] ДМСО) δ: 151.77 (C₄); 142.94 (C₃); 141.05 (C_5'); 133.09 (C_4'); 53.69 (5'-CH₂). Масс-спектр, m/z (I%): 182 (100 [M]⁺), 154 (23 [M-N₂]⁺), 153 (29 [M-N₂H]⁺), 138 (83), 124 (25), 106 (100), 84 (100). Найдено, %: C 33.05; H 3.37; N 46.28. Вычислено, %: C 32.96; H 3.29; N 46.20.

Пример 2. 4-Амино-3-(4-гидроксиметил-1,2,3-триазол-1-ил)-1,2,5-оксадиазол (2).

Маточный раствор после отфильтровывания соединения 1 (см. предыдущий пример) кипятят 24 ч, концентрируют до 1/3 первоначального объема, отфильтровывают смесь соединений 1 и 2. После кристаллизации из нитрометана получают 0.97 г (29%) целевого продукта 2. Т. пл. 146-147^oC (сух. EtOAc); R_f 0.22 (CHCl₃ - Me₂CO - MeOH 10:2:1). ИК (KBr), ν/см^-1: 3480, 3320, 3265, 3155 (NH₂, OH), 3110, 2960, 2900 (CH), 1635, 1590, 1460, 1260, 1240, 1220, 1065, 1050, 1020, 1000, 980, 865, 835. ¹H ЯМР ([²H₆] ДМСО) δ: 8.56 (1H, с, 5'-H); 6.52 (2H, с, NH₂); 5.80 (1H, с, OH); 4.63 (2H, с, 4'-CH₂). ¹³C ЯМР ([²H₆] ДМСО) δ: 151.05 (C₄); 149.21 (C_4'); 142.90 (C₃); 122.96 (C_5'); 54.52 (4'-CH₂). Масс-спектр, m/z (I%): 182 (50 [M]⁺), 153 (32 [M-N₂H]⁺), 137 (85 [M-N₂-OH] ⁺), 111 (50), 106 (100), 97 (100), 95 (46), 84 (60), 82 (70), 61 (8), 60 (30), 59 (8), 58 (18), 57 (50), 56 (30). Найдено, %: C 33.16; H 3.42; N 46.32. Вычислено, %: C 32.96; H 3.29; N 46.20.

Пример 3. 4-Амино-3-(4,5-дигидроксиметил-1,2,3-триазол-1-ил)-1,2,5-оксадиазол 3.

Смесь 2.8 г (0.022 моль) 3-азидо-4-аминофуразана и 3.8 г (0.044 моль) бутиндиола-1,4 в 50 мл EtOH кипятят до тех пор, пока азид полностью не прореагирует (24 ч). Реакционную смесь упаривают в вакууме до начала выпадения обильного осадка. Отфильтровывают осадок, промывают небольшим количеством EtOH, сушат на воздухе. Получают 1.85 г (39.4%) целевого продукта. Маточник концентрируют в вакууме и дополнительно отфильтровывают 0.83 г (17.6%) целевого продукта. В сумме получают 2.68 г (57%) соединения 3. Т. пл. 162-163^oC (H₂O); R_f 0.25 (CHCl₃ - Me₂CO - MeOH 10:2:1). ИК (KBr), ν/см^-1: 3440, 3370, 3310, 3260 (NH₂, OH), 3000, 2950, 2870 (CH), 1635, 1575, 1460, 1350, 1285, 1255, 1190, 1140, 1070, 1030, 1000, 970, 870. ¹H ЯМР ([²H₆] ацетон) δ: 6.05 (2H, с, NH₂); 5.10 (1H, т, J = 5.4, 5'-CH₂OH); 4.96 (1H, т, J = 5.4, 4'-CH₂-OH); 4.34 (2H, д, J = 5.4, 5'-CH₂); 4.20 (2H, д, J = 5.4, 4'-CH₂). ¹³C ЯМР ([²H₆] ацетон) δ: 143.05 (C₄); 136.68 (C_4'); 133.84 (C₃); 127.67 (C_5'); 44.75 (4'-CH₂); 42.29 (5'-CH₂). Масс-спектр, m/z (I%): 212 (21 [M]⁺), 165 (20), 153 (100), 136 (100), 110 (85), 94 (43), 84 (100). Найдено, %: C 33.77; H 3.71; N 39.12. Вычислено, %: C 33.96; H 3.76; N 39.50.

Пример 4. 4-Амино-3-[5-(1-гидроксиэтил)-1,2,3-триазол-1-ил]-1,2,5-оксадиазол (4).

Смесь 1 г (0.0079 моль) 3-азидо-4-аминофуразана и 0.83 г (0.012 моль) 3-бутин-2-ола в 30 мл MeOH кипятят 70 ч, упаривают в вакууме досуха. Остаток растворяют в 20 мл кипящей воды, раствор охлаждают, прибавляют 1 г KI. На следующий день отфильтровывают осадок, сушат на воздухе. Получают 0.45 г (29%) целевого продукта. Т. пл. 118-119^oC (H₂O); R_f 0.67 (PhH - EtOAc 3: 1,3-кратное элюирование). ИК (KBr), ν/см^-1: 3475, 3320, 3250, 3220 (NH₂, OH), 3010, 2950, 2780, 2740 (CH), 1650, 1590, 1480, 1450, 1390, 1350, 1310, 1290, 1235, 1160, 1130, 1110, 1090, 1070, 1040, 1000, 990, 900, 870, 850,750, 730. ¹H ЯМР ([²H₆] ДМСО) δ: 7.93 (1H, с, 4'-H); 6.52 (2H, с, NH₂); 5.80 (1H, д, J = 5.7, OH); 5.10 (1H, м, CH); 1.43 (3H, д, J = 7.3, CH₃). ¹³C ЯМР ([²H₆] ДМСО) δ: 152.46 (C₄); 145.10; 143.26; 131.95 (C_4'); 59.69 (C-OH); 22.65 (CH₃). Масс-спектр, m/z (I%): 197 (37 [MH]⁺), 196 (100 [M]⁺), 181 (2 [M-CH₃] ⁺), 179 (4 [M-CH₃-OH]⁺). Найдено, %: C 36.51; H 4.08; N 42.72. Вычислено, %: C 36.73; H 4.12; N 42.85.

Пример 5. 4-Амино-3-{4-[1-гидрокси-1-метил(этил)]-1,2,3-триазол-1-ил}-1,2,5-оксадиазол (5).

Смесь 1 г (0.0079 моль) 3-азидо-4-аминофуразана и 1 г (0.012 моль) 2-метил-3-бутин-2-ола в 30 мл EtOH кипятят 70 ч, упаривают в вакууме. К остатку (густое масло) прибавляют воду и отфильтровывают осадок. Получают 1.44 г (87%) целевого продукта. Т пл. 110-111^oC (H₂O); R_f 0.11 (PhH - EtOAc 3:1). ИК (KBr), ν/см^-1: 3415, 3340, 3230 (NH₂, OH), 2990, 2950, 2890 (CH), 1650, 1600, 1570, 1470, 1440, 1410, 1385, 1300, 1280, 1200, 1170, 1120, 1080, 1040, 995, 930, 910, 865, 770, 740. ¹H ЯМР ([²H₆] ДМСО) δ: 8.54 (1H, с, 5'-H); 6.60 (2H, с, NH₂); 5.40 (1H, с, OH); 1.54 (6H, с, 2CH₃). ¹³C ЯМР ([²H₆] ДМСО) δ: 156.96 (C_4'); 151.01 (C₄); 142.90 (C₃); 120.77 (C_5'); 66.94 (C-OH); 30.35 (CH₃). Масс-спектр, m/z (I%): 211 (4 [MH]⁺), 210 (4 [M]⁺), 195 (4 [M-CH₃] ⁺), 168 (3 [M-CH₃-OH]⁺). Найдено, %: C 39.76; H 4.75; N 39.86. Вычислено, %: C 40.00; H 4.80; N 40.00.

Пример 6. 4-Амино-3-{ 4,5-бис[1-гидрокси-1-метил(пропил)]-1,2,3-триазол-1-ил}-1,2,5-оксадиазол (6).

Смесь 0.53 г (0.0042 моль) 3-азидо-4-аминофуразана и 1 г (0.0062 моль) 3,6-диметил-4-октан-3,6-диола в 25 мл MeOH кипятят 100 ч, упаривают в вакууме досуха, промывают водой, сушат на воздухе. Получают 1.14 г (92%) целевого продукта. Т. пл. 159-160^oC (H₂O); R_f 0.81 (Ph-H - Me₂CO 1:1). ИК (KBr), ν/см^-1: 3430, 3340, 3250 (NH₂, OH), 2980, 2950, 2810 (CH), 1650, 1580, 1510, 1470, 1440, 1410, 1390, 1350, 1290, 1200, 1170, 1130, 1040, 1005, 930, 865, 810, 740. ¹H ЯМР ([²H₆] ацетон) δ: 6.45 (1H, д, J = 15.3, OH); 6.02 (2H, с, NH₂); 5.62 (1H, д, J = 15.3, OH); 2.27-1.76 (4H, м, 2CH₂); 1.75 (3H, д, J = 4.2, CH₃); 1.52 (3H, д, J = 4.2, CH₃); 0.97-0.80 (6H, м, 2CH₂CH₃). ¹³C ЯМР ([²H₆] ДМСО) δ: 153.77; 149.60; 149.50; 145.05; 144.89; 142.79; 72.06 (C-OH); 71.50 (C-OH); 35.84 (CH₂); 34.83 (CH₂); 29.06 (CH₃); 28.37 (CH₃); 8.34 (CH₂CH₃); 7.85 (CH₂CH₃). Масс-спектр, m/z (I%): 296 (2 [M] ⁺), 281 (4 [M-CH₃]⁺), 267 (20), 249 (10), 222 (11), 192 (47), 124 (45), 123 (93). Найдено, %: C 48.57; H 6.70; N 28.06. Вычислено, %: C 48.63; H 6.82; N 28.37.

Пример 7. 5-{4-{4,5-бис(гидроксиметил)-1,2,3-триазол-1-ил}-1,2,5-оксадиазолил}-5H-[1,2,3]триазоло[4,5-c][1,2,5]оксадиазол (7).

Смесь 1 г (0.0045 моль) 5-[4-азидо(1,2,5)оксадиазолил]- 5H-[1,2,3]триазоло[4,5-c][1,2,5]оксадиазола и 0.58 г (0.0067 моль) бутиндиола-1,4 в 30 мл MeOH кипятят 35 ч, упаривают досуха, промывают небольшим количеством воды, сушат на воздухе. Получают 1.04 г (75%) целевого продукта. Т. пл. 148-149^oC (PhH); R_f 0.15 (PhH - EtOAc 3:1). ИК (KBr), ν/см^-1: 3475, 3335 (OH), 2960, 2940, 2890 (CH), 1605, 1490, 1470, 1430, 1365, 1300, 1270, 1240, 1220, 1200, 1180, 1135, 1120, 1060, 1040, 1010, 980, 960, 900, 840, 810, 730. ¹H ЯМР ([²H₆] ДМСО) δ: 5.56 (1H, т, J = 4.5, OH); 5.35 (1H, с, OН); 4.75 (2H, д, J = 4.5, CH₂); 4.67 (2H, с, CH₂). ¹³C ЯМР ([²H₆] ДМСО) δ: 165.85; 150.11; 146.13; 144.61; 138.56; 54.10 (CH₂); 52.71 (CH₂). Масс-спектр, m/z (I%): 307 (1 [MH] ⁺), 289 (1 [M-H₂O]⁺), 260 (1 [M-H₂O-N₂]⁺), 84 (50), 55 (100). Найдено, %: C 31.27; H 1.89; N 45.52. Вычислено, %: C 31.38; H 1.98; N 45.75.

Пример 8. 4-Амино-3-(4-ацетил-5-метил-1,2,3-триазол-1-ил)-1,2,5-оксадиазол (8).

Раствор 1 г (0.0079 моль) 3-азидо-4-аминофуразана и 0.95 г (0,0095 моль) ацетилацетона в 10 мл MeOH в присутствии 0.5 г (0.006 моль) MgSO₄ кипятят в течение 8 ч, отфильтровывают горячим, упаривают досуха, промывают остаток холодной водой, сушат на воздухе. Получают 1.53 г (93%) целевого продукта 8. Т. пл. 145^oC (MeOH); R_f 0.55 (PhH EtOAc 3:1). ИК (KBr), ν/см^-1: 3430, 3340 (NH₂), 1710 (C= O), 1650, 1610, 1580, 1560, 1530, 1480, 1415, 1370, 1310, 1270, 1240, 1205, 1120, 1060, 1025, 1000, 980, 960, 930, 870, 770. ¹H ЯМР (CDCl₃), δ: 4.46 (2H, с, NH₂), 2.61 (3H, с, COMe), 2.48 (3H, с, Me). ¹³C ЯМР (CDCl₃) δ: 192.95, 152.40, 142.77, 142.26, 140.16, 27.79, 9.62; Масс-спектр, m/z (I%): 208 (10 [M]⁺), 181 (21 [М-N₂]⁺), 165 (100 [M-COCH₃]⁺).

Пример 9. 4-Амино-3-(5-метил-4-этоксикарбонил-1,2,3-триазол-1-ил)-1,2,5-оксадиазол (9).

Раствор 1 г (0,0079 моль) 3-азидо-4-аминофуразана и 1,24 г (0,0095 моль) этилацетоацетата в 10 мл MeOH в присутствии 0,5 г (0,006 моль) MgCO₃ кипятят в течение 8 ч. Реакционную массу обрабатывают аналогично примеру 8. Получают 1.54 г (82%) соединения 9. Т.пл. 121-122^oC (PhH); R_f 0.53 (PhH EtOAc 3:1); ИК (KBr), ν/см^-1: 3440, 3340 (NH₂), 3010 (CH), 1750 (C=O), 1640, 1590, 1480, 1450, 1420, 1390, 1360, 1320, 1240, 1220, 1150, 1120, 1060, 1020, 1000, 980, 870, 850. ¹H ЯМР ([²H₆] ДМСО) δ: 1.34 (3H, т, ³J = 8.3 Гц, CH₃), 2.63 (3H, с, CH₃), 4.46 (2H, к, ³J = 8.3 Гц, CH₂), 6.65 (2H, с, NH₂). ¹³C ЯМР ([²H₆] ДМСО) δ: 160.5 (C=O), 152.4 (C₄), 142.4 (C_5'), 141.7 (C_4'), 136.3 (C₃), 61.0 (CH₂), 14.1 (CH₃-CH₂), 9.7 (CH₃).

Пример 10. 4-Амино-3-(4-карбокси-5-метил-1,2,3-триазол-1-ил)-1,2,5- оксадиазол (10).

Раствор 1 г (0,0042 моль) 9 и 0.2 г (0,005 моль) NaOH в 20 мл 50%-ного этанола кипятят 1 ч. Охлаждают реакционный раствор до комнатной температуры, прибавляют 0,4 мл конц. HCl, отфильтровывают выпавший осадок, промывают водой и сушат на воздухе. Получают 0.8 г (91%) соединения 10. Т. пл. 230-231^oC (ацетон); R_f 0.36 (EtOAc); ИК (KBr), ν/см^-1: 3424, 3304 (NH₂), 2920 (CH), 2770, 2696, 2560, 1725 (C= O), 1640, 1585, 1550, 1470, 1410, 1360, 1310, 1240, 1210, 1160, 1095, 1050, 990, 975, 890, 790, 770, 740; ¹H ЯМР ([²H₆] ДМСО) δ: 6.48 (2H, с, NH₂), 2.72 (3H, с, CH₃); Масс-спектр, m/z (I%): 210 (50 [M] ⁺), 193 (2 [M-OH]⁺), 182 (2 [M-N₂]⁺), 166 (10), 153 (8), 134 (50), 125 (20), 109 (25), 83 (100).

Пример 11. 4-Амино-3-(5-фенил-4-этоксикарбонил-1,2,3-триазол-1-ил)-1,2,5-оксадиазол (11).

Раствор 1 г (0,0079 моль) 3-азидо-4-аминофуразана и 1,82 г (0,0095 моль) этилбензоилацетата в 20 мл этанола в присутствии 0,5 г (0,006 моль) MgCO₃ кипятят 2 ч. Реакционную смесь обрабатывают аналогично примеру 8. Получают 1,92 г (81%) 11. Т. пл. 138-139^oC (MeOH); R_f 0,39 (PhH-EtOAc 5:1); ИК (KBr), ν/см^-1: 3470, 3420, 3350 (NH₂), 3010 (CH), 1750, 1740 (C=O), 1650, 1590, 1560, 1490, 1455, 1430, 1390, 1360, 1320, 1290, 1260, 1230, 1220, 1150, 1125, 1040, 1010, 990, 874, 870, 770, 700; ¹H ЯМР ([²H₆] ДМСО) δ: 7.50 (5H, м, Ph), 6.67 (2H, с, NH₂), 4.25 (2H, к, ³J = 8.3 Гц, CH₂), 1.16 (3H, т, ³J = 8.3 Гц, CH₃); ¹³C ЯМР ([²H₆] ДМСО) δ: 159.7, 153.3, 143.4, 142.2, 136.4, 130.6, 129.9, 128.3, 123.3, 60.9, 13.8; Масс-спектр, m/z (I%): 300 (15 [M⁺] ), 270 (5 [M-NO]⁺), 242 (4 [M-NO-N₂]⁺), 145 (100).

Пример 12. 4-Амино-3-(4-аминокарбонил-5-метил-1,2,3-триазол-1-ил)-1,2,5-оксадиазол (12).

К 30 мл концентрированного водного раствора аммиака прибавляют 1 г (0,0042 моль) 9 и кипятят 10 ч. После охлаждения реакционной смеси выпавшие кристаллы отфильтровывают, промывают холодной водой и сушат на воздухе. Получают 0.6 г (68%) 12. Т. пл. 268-269^oC; R_f 0.43 (EtOAc); ИК (KBr), ν/см^-1: 3456, 3392, 3328, 3184 (NH₂), 1680 (C=O), 1632, 1568, 1452, 1420, 1376, 1312, 1160, 1088, 1052, 976, 864, 800, 772, 720; ¹H ЯМР ([²H₆] ДМСО) δ: 7.98 (1H, с, CONH), 7.60 (1H, с, CONH), 6.62 (2H, с, NH₂), 2.65 (3H, с, CH₃); ¹³C ЯМР ([²H₆] ДМСО) δ: 162.0, 152.4, 142.5, 139.4, 138.5, 9.2.

Пример 13. Влияние производных (1,2,3-триазол-1-ил)-1,2,5-оксадиазола на NO-зависимую активацию рГЦ.

Препарат рГЦ получали центрифугированием (105000 g) тромбоцитов человека, выделенных из венозной крови доноров известным способом. Активность фермента определяли по количеству образовавшегося цГМФ иммуноферментным способом с использованием наборов реактивов для количественного определения цГМФ АО "Биоиммуноген" (РФ).

Инкубационная смесь для определения активности (общий объем пробы 150 мкл) приготавливалась при 0-4^oC и содержала 50 мМ Трис-HCl (pH 7.6), 1 мМ ГТФ, 4 мМ MgCl₂, 4 мМ креатинфосфат, 100 мкг (50 ед/мг) креатинфосфокиназы, 10 мМ теофиллин и полученный ферментный препарат (10-20 мкг белка). При определении потенцирующего действия в среду инкубации вносили изучаемое соединение в виде раствора в водном ДМСО. Концентрация соединения в пробе составляла 10 мкМ, ДМСО - 0.02%/об. Контрольная проба показала полное отсутствие влияния ДМСО в указанной концентрации на базальную активность рГЦ. Через 10 мин в инкубационную смесь добавляли расчетное количество водного раствора ННП, необходимое для достижения соответствующей концентрации в пробе (1-100 мкМ). Пробы инкубировали в водяном термостате при 37^oC в течение 15 мин. Реакцию останавливали перенесением проб на 2 мин в кипящую водяную баню с последующим охлаждением в водяной бане. После отделения денатурированного белка центрифугированием (10 мин при 1500 g) в полученном супернатанте определяли количество образовавшегося цГМФ вышеуказанным способом. Определение белка проводили по способу Лоури, в качестве стандарта использовали бычий сывороточный альбумин. Для оценки степени потенцирования NO-зависимой активации рГЦ проводили сравнение полученных данных с удельной активностью фермента в тех же условиях в отсутствии соединений общей формулы I.

Предлагаемые производные (1,2,3-триазолил)-1,2,5-оксадиазола потенцировали NO-зависимую активацию рГЦ, вызываемую 1-100 мкМ ННП, при этом они не оказывали выраженного эффекта на базальную активность фермента. Результаты изучения влияния соединения 2 на активность рГЦ, стимулированную ННП, представлены в таблице 1. Так, соединение 2 в концентрации 10 мкМ потенцировало активацию рГЦ 1 мкМ ННП в 2.57 раза.

Согласно известным данным [4], наиболее близкий структурный аналог соединений настоящего изобретения - YC-1 в концентрации 3 мкМ обладал максимальным потенцирующим эффектом, он усиливал активацию рГЦ из легких быка 1 мкМ ННП в 2.3 раза, при этом он влиял на базальную активность фермента (активировал рГЦ ~ в 2 раза).

Таким образом, описываемые производные (1,2,3-триазол-1-ил)-1,2,5-оксадиазола, оказывающие селективное потенцирующее действие на NO-зависимую активацию рГЦ, расширяют арсенал специфических регуляторов активности рГЦ.

Формула изобретения

Производные (1,2,3-триазолил)-1,2,5-оксадиазола общей формулы I где R - NH₂ или
если R¹ - H, то R² - низший гидроксиалкил, или, если R¹ - низший алкил, низший гидроксиалкил, арил, то R² - H, низший гидроксиалкил или радикал общей формулы -C(O)R³;
R³ - OH, NH₂, низший алкил или низший алкоксил, потенцирующие NO- зависимую активацию растворимой формы гуанилатциклазы (рГЦ).

РИСУНКИ

Рисунок 1