Способ получения сульфатированных гликозаминогликанов

 

Изобретение относится к медицинской промышленности и может быть использовано для получения сульфатированных гликозаминогликанов из костной ткани. Сущность изобретения: костную крошку размером 700-2000 мкм гидролизуют в течение 24-48 ч в 0,4 Н растворе гидроксида натрия, нейтрализуют до рН 6,8-7,8, удаляют надосадок центрифугированием при 3000-5000 об/мин в течение 20-40 мин, добавляют в надосадок этанол в соотношении 1:2, добавляют трихлоруксусную кислоту до 5% концентрации, диализуют последовательно против насыщенного хлорида натрия и воды, осаждают сульфатированные гликозаминогликаны этанолом в присутствии 1% ацетата натрия, сушат под вакуумом и лиофилизируют. Технический результат: увеличение выхода целевого продукта и получение сульфатированных гликозаминогликанов в виде сухого лиофильного порошка.

Изобретение относится к медицине, а более конкретно к медицинской промышленности, и может быть использовано для получения сульфатированных гликозаминогликанов из костной ткани, применяемых в качестве лекарственных средств.

Ближайшим аналогом получения сульфатированных гликозаминогликанов является способ получения сульфатированных гликозаминогликанов из роговиц сельскохозяйственных животных путем гидролиза раствором фермента - папаина с последующим кипячением, добавлением трихлоруксусной кислоты, цетрифугированием и диализом (RU патент N 2056851).

Однако при обработке роговицы ферментом часть гликозаминогликанов остается в неразрушенной ткани, что приводит к снижению выхода целевого продукта, с помощью данного способа могут быть получены только растворенные сульфатированные гликозаминогкликаны.

Задачей изобретения является разработка универсального способа получения сульфатированных гликозаминогликанов из костной ткани.

Техническим результатом изобретения является получение целевого продукта нативных сульфатированных гликозаминогликанов в виде сухого лиофильного порошка.

Технический результат достигается тем, что, согласно изобретению, в способе получения сульфатированных гликозаминогликанов, включающем гидролиз биологической ткани, добавление трихлоруксусной кислоты до 5% концентрации, центрифугирование и диализ, в качестве биологической ткани используют кость сельскохозяйственных животных или человека в виде костной крошки размером от 700 до 2000 мкм, гидролиз костной крошки проводят в течение 24-48 часов в 0,4 H растворе гидроксида натрия, нейтрализуют до pH 6,8-7,8, удаляют надосадок центрифугированием при 3000-5000 об/мин в течение 20-40 минут, добавляют в надосадок этанол в соотношении 1: 2 (этанол), а после добавления трихлоруксусной кислоты диализуют последовательно против насыщенного хлорида натрия и воды, затем осаждают сульфатированные гликозаминогликаны этанолом в присутствии 1% ацетата натрия, сушат под вакуумом и лиофилизируют.

Согласно изобретению, костную ткань измельчают до крошки размером 700-2000 мкм, так как ее размер менее 700 мкм приводит к затруднению выделения сульфатированных гликозаминогликанов, а при ее размере более 2000 мкм - время их выхода увеличивается. Гидролиз костной крошки проводят в течение 24-48 часов в 0,4 H раствора гидроксида натрия, что позволяет провести полный гидролиз свободных белков кости.

Удаляют надосадок центрифугированием. При центрифугировании менее 3000 об/мин осаждается менее 50% гидролизата, а при более 5000 об/мин часть основного продукта уходит в осадок.

Затем добавляют в надосадок этанол в соотношении 1:2 (этанол), установленном экспериментально. Далее добавляют трихлоруксусную кислоту до 5% концентрации.

Затем проводят последовательный диализ против насыщенного хлорида натрия и воды, что позволяет удалить из раствора остатки белков, аминокислот и других примесей. Осаждение сульфатированных гликозаминогликанов в присутствии 1% ацетата натрия позволяет получить кислую, кисло-солевую или основную солевую форму конечного продукта.

После осаждения гликозаминогликаны сушат под вакуумом и лиофилизируют.

Пример конкретного выполнения способа получения сульфатированных гликозаминогликанов.

1 кг костной крошки размером 2000 мкм гидролизуют в течение 24-48 часов в 0,4 H растворе гидроксида натрия, нейтрализуют до pH 6,8-7,8, удаляют надосадок центрифугированием 4000 об/мин в течение 30 минут, добавляют в надосадок этанол в соотношении 1:2 (этанол), добавляют трихлоруксусную кислоту до 5% концентрации, диализуют последовательно против насыщенного хлорида натрия и воды, затем осаждают сульфатированные гликозаминогликаны этанолом в присутствии 1% ацетата натрия, сушат под вакуумом и лиофилизируют.

Изобретение может быть использовано для получения сульфатированных гликозаминогликанов из костной ткани в виде сухого лиофильного порошка, применяемых в качестве лекарственных средств.

Формула изобретения

Способ получения сульфатированных гликозаминогликанов, включающий гидролиз биологической ткани, добавление трихлоруксусной кислоты до 5% концентрации, центрифугирование и диализ, отличающийся тем, что в качестве биологической ткани используют кость сельскохозяйственных животных или человека в виде костной крошки размером от 700 до 2000 мкм, гидролиз костной крошки проводят в течение 24 - 48 ч в 0,4 Н растворе гидроксида натрия, нейтрализуют до pH 6,8 - 7,8, удаляют насадок центрифугированием при 3000 - 5000 об/мин в течение 20 - 40 мин, добавляют в насадок этанол в соотношении 1:2, а после добавления трихлоруксусной кислоты до 5% концентрации диализуют последовательно против насыщенного хлорида натрия и воды, затем осаждают сульфатированные гликозаминогликаны этанолом в присутствии 1% ацетата натрия, сушат под вакуумом и лиофилизируют.

MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 22.04.2002

Номер и год публикации бюллетеня: 5-2004

Извещение опубликовано: 20.02.2004