Производные 2-фенилиндола, смесь их изомеров, или отдельные изомеры, или их физиологически приемлемые соли, фармацевтическая композиция, проявляющая антипролиферативную активность

 

Изобретение относится к производным 2-фенилиндола, смеси их изомеров или отдельных изомеров общей формулы I, где R¹ - неразветвленный или разветвленный C₁-C₈-алкил или водород; R² - остаток формулы CO-NH₂ или -CH_2-OH. Соединения формулы I используют в фармацевтической композиции, проявляющей антипролиферативную активность в эффективном .количестве. 2 с. и 2 з.п.ф-лы, 5 табл.

Изобретение относится к новым гетероциклическим соединениям с ценными биологическими свойствами, в частности к индолсодержащим соединениям, которые можно применять в качестве антиартериосклеротического средства (см. заявку ЕР N 0 114 027, кл. C 07 D 209/18, A 61 K 31/405, олуб. 25.07.1984 г. ).

Задачей изобретения является расширение ассортимента индолсодержащих соединений, обладающих биологической активностью, в частности антиартериосклеротической и антирестенозной активностью.

Поставленная задача решается предлагаемыми производными 2-фенил-индола общей формулы (I) где R¹ - неразветвленный или разветвленный алкил с 1-8 атомами углерода или водород, R² - остаток формулы -CO-NH₂ или -CH₂-ОН, смесью их изомеров, или отдельными изомерами, или их физиологически приемлемыми солями.

Физиологически приемлемыми солями предлагаемых соединений могут являться соли предлагаемых веществ с минеральными кислотами, карбоновыми кислотами или сульфокислотами. Особенно предпочтительными являются соли с такими кислотами, как, например, хлористо-водородная кислота, бромисто-водородная кислота, серная кислота, фосфорная кислота, метансульфокислота, этансульфокислота, толуолсульфокислота, бензолсульфокислота, нафталиндисульфокислота, уксусная кислота, пропионовая кислота, молочная кислота, винная кислота, лимонная кислота, фумаровая кислота, малеиновая кислота или бензойная кислота.

Физиологически приемлемыми солями могут также являться соли металла или аммониевые соли предлагаемых соединений, имеющие свободную карбоксильную группу. Особенно предпочтительными являются, например, соли натрия, калия, магния или кальция, а также аммониевые соли, производимые от аммиака, или органических аминов, таких, как, например, этиламин, ди- или триэтиламин, ди- или триэтаноламин, дициклогексиламин, диметиламиноэтанол, аргинин, лизин, этилендиамин или 2-фенилэтиламин.

Предлагаемые соединения могут иметься в виде стереоизомеров, которые представляют собой прямую и обратную формы (энантиомеры), или не являются таковыми (диастереомеры). Изобретение относится к энантиомерам, или диастереомерам, или их соответствующим смесям. Рацемические формы, а также диастереомеры известным образом можно разделять на чистые стереоизомеры.

Предпочтительными являются соединения общей формулы (I), где R¹ - неразветвленный или разветвленный алкил с 1-6 атомами углерода или водород, R² - остаток формулы -CO-NH₂ или -CH₂-OH, смесь их изомеров или отдельные изомеры или их физиологически приемлемые соли.

Особенно предпочтительными являются соединения общей формулы (I), где R¹ - неразветвленный или разветвленный алкил с 1-5 атомами углерода или водород, R² - остаток формулы -CO-NH₂ или - СН₂-ОН,
смесь их изомеров, или отдельные изомеры, или их физиологически приемлемые соли.

Предлагаемые соединения общей формулы (I) получают за счет того, что соединения общей формулы (II)

где R¹ имеет вышеуказанное значение и
R³ означает неразветвленный или разветвленный алкоксил с 1-4 атомами углерода или гидроксил, подвергают омылению получаемую при этом кислоту, в случае необходимости после предварительной активации, подвергают взаимодействию с производными фенилглицина общей формулы (III)

где R² имеет вышеуказанное значение,
в среде инертных растворителей, в присутствии основания и/или дегидратирующего средства.

Вышеприведенный способ поясняется схемой 1 (см. в конце описания).

В качестве растворителя пригодны стандартные органические растворители, не изменяющиеся в условиях реакции. Сюда предпочтительно относятся простые эфиры, такие, как, например, диэтиловый эфир, диоксан, тетрагидрофуран, гликольдиметиловый эфир, или углеводороды, такие, как, например, бензол, толуол, ксилол, гексан, циклогексан или нефтяные фракции, или галогенированные углеводороды, такие, как, например, дихлорметан, трихлорметан, тетрахлорметан, дихлорэтилен, трихлорэтилен или хлорбензол, или этилацетат, триэтиламин, пиридин, диметилсульфоксид, диметилформамид, триамид гексаметилфосфорной кислоты, ацетонитрил, ацетон или нитрометан. Можно также применять смеси приведенных растворителей. Предпочтительными являются дихлорметан, тетрагидрофуран и диметилформамид.

В качестве оснований для вышеописанного способа можно в основном применять неорганические или органические основания. Сюда предпочтительно относятся гидроокиси щелочного металла, как, например гидроокись натрия или калия, гидроокиси щелочноземельного металла, например, гидроокись бария, карбонаты щелочного металла, как, например, карбонат натрия, калия или цезия, карбонаты щелочноземельного металла, как, например, карбонат кальция, или алкоголяты щелочного или щелочноземельного металла, как, например, метанолат натрия или калия, этанолат натрия или калия или трет. бутилат калия, или органические амины (триалкиламины с 1-6 атомами углерода в каждой алкильной группе) как, например, триэтиламин, или гетероциклы, как, например, 1,4- диазабицикло[2.2.2] октан, 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен, пиридин, диаминопиридин, метилпиперидин или морфолин. В качестве оснований можно также применять щелочные металлы, как, например, натрий, или их гидриды, как, например, гидрид натрия. Предпочтительными являются гидрид натрия, карбонат калия, триэтиламин, триметиламин, пиридин, трет.бутилат калия, 1,8- диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен или 1,4-диазабицикло[2.2.2]октан.

В общем основание применяют в количестве от 0,05 до 10 моль, предпочтительно от 1 до 2 моль, на 1 моль соединения формулы (II).

Реакцию в общем осуществляют при температуре от -50 до +100^oC, предпочтительно от -30 до +60^oC.

Реакцию в общем осуществляют при атмосферном давлении. Можно, однако, также осуществлять его при повышенном или пониженном давлении (например, в диапазоне от 0,5 до 5 бар).

Амидирование может осуществляться, при необходимости, через галоидангидриды указанной кислоты или ее смешанные ангидриды, получаемые в результате взаимодействия соответствующих кислот с тионилхлоридом, трихлоридом фосфора, пентахлоридом фосфора, трибромидом фосфора, оксалилхлоридом или хлорангидридом метансульфокислоты.

В качестве дегидратирующих веществ пригодны карбодиимиды, как, например, диизопропилкарбодиимид, дициклогексилкарбодиимид или гидрохлорид N-(3- диметиламинопропил)-N'-этилкарбодиимида или же карбонильные соединения, как, например, карбонилдиимидазол или 1,2-оксазолиевые соединения, как, например, 2-этил-5-фенил-1,2-оксазолий-3- сульфонат, или ангидрид пропанфосфоновой кислоты, или изобутилхлороформат, или гексафторфосфат бензотриазолилокси-трис- (диметиламино)фосфония, или амид сложного дифенилового эфира фосфорной кислоты, или хлорангидрид метансульфокислоты, в случае необходимости в присутствии оснований, таких как, например, триэтиламин, или N-этилморфолин, или N-метилпиперидин, или дициклогексилкарбодиимид и N-гидроксисукцинимид.

Соединения формулы (II) являются новыми и их получают в результате взаимодействия соединений общей формулы (IV)

где L - типичная удаляемая группа, как, например, хлор, бром, йод, тозилат или мезилат, предпочтительно бром, и
R⁴ - неразветвленный или разветвленный алкоксил с 1-4 атомами углерода или карбоксил,
с соединениями общей формулы (V)

где в среде инертных растворителей, в случае необходимости в присутствии основания, и, если R¹ ≠ H, последующего алкилирования по стандартным методам.

В качестве растворителей и оснований можно применять вышеприведенные растворители и основания. Предпочтительными являются диметилформамид и трет. бутилат калия.

Алкилирование в общем осуществляют в среде одного из вышеприведенных растворителей, предпочтительно диметилформамид с алкилгалогенидами с 1 - 8 атомами углерода, предпочтительно йодидами, в диапазоне температур от 0^oC до комнатной температуры при атмосферном давлении.

Соединения формул (III), (IV) и (V) общеизвестны.

Биологическая активность предлагаемых соединений общей формулы (I), представляющая собой ингибирование пролиферации клеток гладких мышц, благодаря которой их можно применять для лечения артериосклероза и рестеноза, подтверждается следующим опытом.

Опыт по выявлению ингибирования пролиферации клеток гладких мышц предлагаемыми соединениями
Для определения антипролиферативного действия соединений применяют клетки гладких мышц, получаемые из аорт свиней известным методом (см. Р. Росс, J. Cell. Biol. 50, 172, 1971 г.). Клетки помещают в пригодные чашки, как правило, пластины с 96 углублениями, и культивируют при 37^oC в течение 2 - 3 дней в среде 199 вместе с 7,5 % ТЭС и 7,5 % СНТ (сыворотка новорожденных телят), 2 ммоль L-глутамина и 15 ммоль буфера HEPES, pH 7,4, в атмосфере, содержащей 5% двуокиси углерода. Затем клетки синхронизируют на 2-3 дня путем удаления сыворотки, после чего их возбуждают к росту с помощью сыворотки или других факторов. Одновременно к среде добавляют испытуемые соединения. Через 16-20 часов добавляют ³Н-тимидин и по истечении дальнейших 4 часов определяют включение этого вещества в ДНК клеток, способную к осаждению трихлоруксусной кислотой. Для определения значений КТ₅₀ вычисляют концентрацию активного начала, которая при последовательном разведении активного начала обеспечивает 50%-ное торможение включения тимидинина, вызываемого 10 % ТЭС. Результаты опыта сведены в таблице A (см. в конце описания).

Предлагаемые соединения относятся к категории малотоксичных веществ.

С учетом вышеприведенных данных о биологической активности предлагаемых соединений дальнейшим объектом изобретения является фармацевтическая композиция с антиартериосклеротической и антирестенозной активностью, содержащая наряду с, по меньшей мере, одной инертной нетоксичной, фармацевтически приемлемой целевой добавкой соединение вышеуказанной общей формулы (I), смесь его изомеров, или отдельный изомер, или его физиологически приемлемую соль в эффективном количестве.

Предлагаемая композиция может иметься в виде стандартных препаратов, таких, как, например, таблетки, драже, пилюли, грануляты, аэрозоли, сиропы, эмульсии, суспензии и растворы. Препараты содержат терапевтически эффективное соединение, как правило, в концентрации около 0,5 - 90% от веса смеси, то есть в количествах, достаточных для достижения нижеприведенного диапазона дозировки. Под "целевой добавкой" подразумевают любые стандартные носители и вспомогательные вещества.

Препараты получают, например, путем смешивания активных начал с растворителями и/или носителями, в случае необходимости с применением эмульгаторов и/или диспергаторов, при этом, например, в случае использования воды в качестве разбавителя можно употреблять, в случае необходимости, органические растворители в качестве вспомогательных растворителей.

Нижеследующие примеры поясняют возможные препаративные формы предлагаемой фармацевтической композиции.

Препарат А
Таблетки состава: 20 мг соединения примера 1 в качестве активного вещества, 60 мг микрокристаллической целлюлозы (торговый продукт Авицел PH 101), 38 мг поливинилпирролидона под торговым названием Полиплаздон XL, 20 мг поливинилпирролидина с молярной массой 250, 1 мг додецилсульфата натрия и 1 мг стеарата магния, приготовляют следующим образом.

Соединение примера 1 диспергируют в жидкой среде, содержащей поливинилпирролидон с молярной массой 250 и додецилсульфат натрия. К получаемой дисперсии добавляют микрокристаллическую целлюлозу и поливинилпирролидон под названием Полиплаздон X и получаемую смесь гранулируют в кипящем слое с последующей сушкой. Получаемые гранулы просеивают, после чего добавляют стеарат магния. Получаемую смесь перемешивают и перерабатывают в круглые таблетки весом 120 мг и диаметром 7 мм.

Препарат Б
Соединение примера 3 микронизируют. Перед применением его суспендируют в воде.

Препарат В
Жидкий препарат состава: 0,1 мг/мл (жидкого препарата) соединения примера 5 в качестве активного вещества, 10% этанола, 5% этоксилированного нонилфенола (торговый продукт Кремофор EL) и воды до 100% приготовляют следующим образом.

Активное вещество растворяют в этаноле при 60^oC, добавляют этоксилированный нонилфенол и перемешивают. Затем медленно добавляют воду и охлаждают. Вместо воды можно также применять физиологический раствор поваренной соли.

Аппликацию предлагаемых соединений или композиции осуществляют стандартным образом, предпочтительно орально или парентерально, в частности чрезъязычно или внутривенно.

В случае парентеральной аппликации можно применять растворы активного начала с употреблением пригодных жидких носителей.

В общем оказалось преимущественным для достижения эффективных результатов давать активное начала в количестве, равном около 0,001 - 20 мг/кг, предпочтительно около 0,01 - 5 мг/кг от веса тела при внутривенной аппликации, а при оральной аппликации - около 0,01 - 50 мг/кг, предпочтительно 1 - 10 мг/кг от веса тела.

В случае необходимости все-таки может быть необходимым отклоняться от вышеуказанных количеств, а именно в зависимости от веса тела или же вида аппликации, индивидуального отношения к лекарству, вида препарата и момента или промежутка времени, в который осуществляется аппликация. Так, в некоторых случаях может быть достаточным применять меньше активного начала, чем вышеуказанное минимальное количество, а в других случаях необходимо превышать вышеназванную максимальную концентрацию. В случае аппликации больших количеств рекомендуется распределять их суточную дозу на несколько разовых доз в течение дня.

Нижеследующие примеры поясняют получение исходных соединений.

Пример I
Сложный трет.бутиловый эфир транс-2-[4-(2-фенилиндол-3-ил-метил)-фенил] циклогексан-1 -карбоновой кислоты

К 2,8 г (25 ммоль) трет. бутилата калия при 0^oC в 20 мл диметилформамида прикапывают раствор 5,1 r (25 ммоль) 2- фенилиндола и перемешивают в течение 30 минут. Затем в течение 30 минут к получаемой смеси прикапывают раствор 13,4 г (25 ммоль) 60%- ного сложного трет. бутилового эфира транс-2-(п- бромметилфенил)циклогексан-1-карбоновой кислоты в 130 мл диметилформамида и в течение ночи доводят до комнатной температуры. Сгущают, подают в смесь диэтилового эфира и воды, отделяют от осадка и три раза экстрагируют диэтиловым эфиром. Сушат над сульфатом натрия, сгущают, после чего продукт очищают путем хроматографии на силикагеле марки 60 с применением в качестве элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 10:1.

Выход: 2,21 г (19 % теории)
R_f = 0,27 (смесь петролейного эфира и этилацетата в соотношении 10:1)
Пример II
транс-2-[4-(2-фенилиндол-3-ил-метил)-фенил] циклогексан-1- карбоновая кислота

2,2 r (4,7 ммоль) соединения примера I в 15 мл дихлорметана перемешивают с 15 мл трифторуксусной кислоты в течение 2 часов при комнатной температуре. Смесь сгущают, еще два раза смешивают с диэтиловым эфиром, сгущают, вновь подают в диэтиловый эфир, один раз экстрагируют 0,5 н. гидроокисью натрия и два раза - водой (pH 5). Объединенные водяные фазы с применением 1 н. уксусной кислоты доводят до pH 4 и дважды экстрагируют этилацетатом. Объединенные этилацетатные фазы сушат над сульфатом натрия и сгущают.

Выход: 1,8 г (100% теории)
R_f = 0,31 (смесь дихлорметана, метанола и аммиака в соотношении 9:1:0,1)
Пример III
Сложный трет. бутиловый эфир транс-2-[4-(1-метил- 2-фенилиндол-3-ил-метил)-фенил]циклогексан-1-карбоновой кислоты

0,4 г (13,2 ммоль) 80%-ного гидрида натрия суспендируют в 20 мл диметилформамида, охлаждают до 0^oC, после чего прикапывают раствор 5,6 г (12 ммоль) исходного соединения примера I в 50 мл диметилформамида. После 30-минутного перемешивания к смеси прикапывают 2,0 г (14,4 ммоль) метилйодида. После перемешивания в течение часа при 0^oC медленно нагревают до комнатной температуры, при которой перемешивают еще в течение часа. Для переработки осторожно смешивают с водой и три раза экстрагируют этилацетатом. Объединенные органические фазы сушат над сульфатом натрия, фильтруют и сгущают, после чего продукт очищают путем хроматографии на силикагеле марки 60 с применением в качестве элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 10:1.

Выход: 1,2 г (40 % теории)
R_f = 0,47 (смесь петролейного эфира и этилацетата в соотношении 10:1)
Нижеследующие примеры поясняют получение целевых продуктов вышеуказанной формулы (I). В этих примерах используется условное сокращение "диа", обозначающее диастереомер.

Пример 1
транс-2-[4-(2-фенилиндол-3-ил-метил)фенил] циклогексан- 1-карбонил-(L-фенилглициноламид)

0,14 г (1 ммоль) L-фенилглицинола в атмосфере аргона в 10 мл дихлорметана смешивают с 0,41 г (1 ммоль) соединения примера II и 0,16 г 1-гидрокси-1H-бензотриазола, охлаждают до -10^oC, после чего смешивают с 0,3 мл триэтиламина (2 ммоль) и 0,23 г (1,2 ммоль) гидрохлорида N-(3-диметиламинопропил)-N-этилкарбодиимида и перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. После разбавления дихлорметаном экстрагируют хлористым аммонием, бикарбонатом натрия, водой и хлористым натрием, сушат над сульфатом натрия, сгущают и очищают путем хроматографии на силикагеле марки 60 с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и этанола в соотношении 100:5.

Выход: 85,4 мг транс-диа Б (51,6 % теории)
R_f = 0,44 (смесь дихлорметана и метанола в соотношении 95: 5)
Аналогично примеру 1 получают приведенное в таблице 1 соединение (см. в конце описания).

Пример 3
транс-2-[4-(2-фенилиндол-3-ил-метил)фенил] циклогексан- 1-карбонил-(фенилглицинамидо)амид

0,16 г (1 ммоль) фенилглицинамида суспендируют в 10 мл дихлорметана, смешивают с 0,41 г (0,1 ммоль) соединения примера II и 0,16 г (1,1 ммоль) 1-гидрокси-1H-бензотриазола и охлаждают до -10^oC. К смеси добавляют 0,3 мл триэтиламина и 0,3 г гидрохлорида N-(3-диметиламинопропил)-N-этилкарбодиимида и перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. После разбавления дихлорметаном встряхивают вместе с хлористым аммонием, бикарбонатом натрия, водой и хлористым натрием, органическую фазу сушат над сульфатом натрия и сгущают. Продукт очищают путем хроматографии на силикагеле марки 60 с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, этанола и аммиака в соотношении 100:5:0,1.

Выход: 0,29 г транс-диа Б (51,6 % теории)
R_f = 0,3 (смесь дихлорметана и метанола в соотношении 95:5)
Аналогично примеру 3 получают приведенное в таблице 2 соединение (см. в конце описания).

Аналогично примерам 1 и 2 получают приведенные в таблице 3 соединения (см. в конце описания).

Аналогично примерам 3 и 4 получают приведенные в таблице 4 соединения (см. в конце описания).

Формула изобретения

1. Производные 2-фенилиндола общей формулы I

где R¹ - неразветвленный или разветвленный алкил с 1 - 8 атомами углерода или водород;
R² - остаток формулы -CO-NH₂ или -CH₂-OH,
смесь их изомеров, или отдельные изомеры, или их физиологически приемлемые соли.

2. Производные 2-фенилиндола общей формулы I по п.1, где R¹ - неразветвленный или разветвленный алкил с 1 - 6 атомами углерода или водород, R² - остаток формулы -CO-NH₂ или -CH₂-OH, смесь их изомеров, или отдельные изомеры, или их физиологически приемлемые соли.

3. Производные 2-фенилиндола общей формулы I по п.1, где R¹ - неразветвленный или разветвленный алкил с 1 - 5 атомами углерода или водород, R² - остаток формулы -CO-NH₂ или -CH₂-OH, смесь их изомеров, или отдельные изомеры, или их физиологически приемлемые соли.

4. Фармацевтическая композиция, проявляющая антипролиферативную активность, содержащая активное начало и, по меньшей мере, одну инертную нетоксичную, фармацевтически приемлемую целевую добавку, отличающаяся тем, что в качестве активного начала содержит соединение общей формулы I

где R¹ - неразветвленный или разветвленный алкил с 1 - 8 атомами углерода или водород;
R² - остаток формулы -CO-NH₂ или -CH₂-OH,
смесь его изомеров, или отдельный изомер, или его физиологически приемлемую соль в эффективном количестве.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6