Способ получения пирогенала

 

Изобретение относится к медицине, фармацевтической промышленности и касается способа получения пирогенала. Сущность изобретения состоит в том, что способ получения пирогенала включает культивирование микробной массы культур Sal. Typhose и Ps. aeruginosa, ферментативный гидролиз, отделение осадка, концентрирование гидролизата, поэтапную обработку целевого продукта органическим растворителем с последующим высушиванием, при этом культивирование проводят с добавлением ростовых факторов в течение 12-15 ч, добавляют формалин до конечной концентрации формальдегида 0,2%, выдерживают не менее 3 ч, концентрацию гидролизата осуществляют методом лиофилизации, получают препарат, содержащий углеводы 4010%, белок не более 3%, нуклеиновые кислоты не более 5%. Технический результат: предлагаемый способ позволяет обезопасить и сократить технологический процесс, а также стандартизировать выпускаемый препарат.

Изобретение относится к медицине, фармацевтической промышленности и касается способов получения пирогенала (липополисахарида), используемого при изготовлении пирогенала инъекционного и пирогенала в ректальных свечах, применяемых для лечения различных заболеваний.

Известен способ получения пирогенала (1), включающий культивирование микробной массы в реакторе (40-42 ч), работу с живой биомассой, упаривание гидролизата микробной массы.

Однако этот способ длителен, трудоемок, а работа с живой биомассой биологически опасна. Кроме того, пирогенал, получаемый таким способом, не имеет физико-химической характеристики, позволяющей судить о степени очистки и стандартности выпускаемого препарата.

Предлагаемый способ позволяет обезопасить и сократить технологический процесс, уменьшить число выращиваний микробной массы и стандартизировать выпускаемый препарат.

Это достигается путем сокращения времени выращивания микробной массы в реакторе, обезвреживания культуральной жидкости в конце выращивания, замены упаривания гидролизата на лиофилизацию и введения физико-химических методов контроля.

Пример. В реактор с полусинтетической средой засевают суточную культуру S. typhi или Ps.aeruginosa. Выращивание культуры проводят при 37oC с постоянным перемешиванием, аэрацией, добавлением ростовых факторов и поддерживанием уровня pH среды в течение 12-15 ч. Эти условия культивирования позволяют получить большой выход микробной массы (15-16 млрд./мл микробных клеток). В конце выращивания культуры в реактор добавляют формалин до конечной концентрации формальдегида 0,2%. Экспозиция не менее 3 часов.

Полученную обезвреженную биомассу суспендируют в дистиллированной воде из расчета 0,5 л воды на 10 г сухой биомассы и доводят pH среды до 8,0-8,2 добавлением 2 н. щелочи. К смеси добавляют 0,05 г фермента и проводят гидролиз в бутыли емкостью 10 л в течение 5 суток. Для предохранения смеси от прорастания добавляют 30-40 мл толуола. Во время гидролиза pH среды поддерживают на исходном уровне добавлением щелочи. Через 2,5 суток добавляют еще 0,05 г фермента. По окончании гидролиза осадок отделяют от гидролизата сепарированием или центрифугированием.

Гидролизат микробной массы концентрируют методом лиофилизации. Лиофилизат растворяют в 1 л дистиллированной воды и при энергичном перемешивании вливают в десять объемов 96-градусного этанола, содержащего 0,5% ацетата натрия. Выпавший осадок после 18-20 ч отстаивания отделяют центрифугированием, четыре - пять раз растворяют в небольших порциях (по 20 мл) нагретой до кипения воды, каждый раз отделяя раствор центрифугированием. Нерастворившийся осадок отбрасывают, а водные растворы, соединенные вместе, вливают при энергичном перемешивании в шесть объемов 95%-ного фенола, нагретого до 60-65oC. Выпавший осадок через 18-20 ч отделяют центрифугированием и вновь несколько раз обрабатывают горячей водой.

Соединенные водные вытяжки повторно вливают в шесть объемов 95%-ного фенола при 60-65oC. Выпавший осадок отделяют центрифугированием, многократно обрабатывают нагретой до кипения водой и диализуют против водопроводной воды до полного удаления фенола. После дополнительного диализа против дистиллированной воды в течение суток диализат центрифугируют. Осадок отбрасывают, а активное вещество выделяют вливанием надосадочной жидкости в десять объемов 96-градусного этанола, содержащего 0,5% ацетата натрия. Выпавший липополисахарид отделяют центрифугированием, промывают спиртом и ацетоном. Далее высушивают на воздухе.

Полученный вышеописанным способом пирогенал имеет следующие физико-химические показатели: углеводы - (4010)%; белок - не более 3%; нуклеиновые кислоты - не более 5%.

Пирогенал применяют для изготовления пирогенала инъекционного и пирогенала в ректальных свечах, используемых для лечения различных заболеваний.

Литература 1. Планельес Х.Х., Будницкая П.З. Авторское свидетельство N 169198, Бюллетень N 6, 11.03.1965 г.

Формула изобретения

1. Способ получения пирогенала, включающий культивирование микробной массы культур Sal. Typhose и Ps. aeruginosa, ферментативный гидролиз, отделение осадка, концентрирование гидролизата, поэтапную обработку целевого продукта органическим растворителем с последующим высушиванием, отличающийся тем, что культивирование проводят с добавлением ростовых факторов в течение 12 - 15 ч, добавляют формалин до конечной концентрации формальдегида 0,2%, выдерживают не менее 3 ч, концентрацию гидролизата осуществляют методом лиофилизации, получают препарат, содержащий углеводы 40 10%, белок не более 3%, нуклеиновые кислоты не более 5%.

PD4A - Изменение наименования обладателя патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение

(73) Новое наименование патентообладателя:Учреждение Российской академии медицинских наук Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф.Гамалеи РАМН (RU)

Адрес для переписки:123098, Москва, ул.Гамалеи, 18, НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи РАМН

Извещение опубликовано: 10.02.2010        БИ: 04/2010



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области биотехнологии, медицины, ветеринарии и касается получения пробиотиков комплексного действия

Изобретение относится к области медицины и ветеринарии, а именно к фармакологии, в частности к пробиотикам, и может быть использовано при коррекции микробиоценоза организма человека (детей и взрослых) и животных

Изобретение относится к биотехнологии и медицинской ветеринарии, а именно к получению сухих лекарственных форм для перорального или интраназального применения, обладающих пробиотической, иммуномодулирующей и противовирусной активностью, и может быть использовано для неспецифической профилактики инфекционных заболеваний, связанных с нарушениями в иммунокомпетентных зонах кишечника и печени, способствующих вследствие этого развитию вторичных дисбактериозов птицы, находящейся в условиях промышленного птицеводства

Изобретение относится к кормопроизводству, в частности к способам приготовления кормов для животных, содержащих лечебно-профилактические добавки
Изобретение относится к области ветеринарии
Изобретение относится к микробиологической, медицинской, пищевой и комбикормовой промышленности и может быть использовано при микробиологическом синтезе целевых продуктов и их вторичной переработке для повышения биологической ценности микробной биомассы, получения пищевых и вкусовых добавок, производства фармацевтического сырья и лекарственных препаратов

Изобретение относится к ветеринарии, и может быть использовано для лечения воспалительных процессов бронхолегочного аппарата молодняка крупного рогатого скота
Изобретение относится к медицине, а именно к ревматологии, и может быть использовано для лечения анкилозирующего спондилоартрита

Изобретение относится к медицине, в частности к венерологии, и касается лечения трихомониаза
Изобретение относится к способам получения иммуностимуляторов, лишенных таких побочных эффектов, как пирогенность
Изобретение относится к области медицины, в частности к абдоминальной хирургии

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к способу выделения биологически активной фракции (БАФ), содержащей преимущественно S-липополисахарид (ЛПС) из грамотрицательных бактерий, производящих эндотоксичные ЛПС, и может быть использовано в профилактических и лечебных целях
Изобретение относится к медицине, в частности к неврологии, и может быть использовано для лечения спастической диплегии при детских церебральных параличах
Изобретение относится к медицине, онкологии и может быть использовано при лечении поверхностных злокачественных новообразований кожи, резистентных к химиолучевому лечению или имеющих противопоказания к оперативному лечению

Изобретение относится к области биотехнологии и микробиологии и может быть использовано в медицине и фармацевтической промышленности

Изобретение относится к микробиологии и иммунологии

Группа изобретений относится к области фармакологии и медицины и касается иммуностимулирующей композиции и способов ее применения для усиления иммунного ответа, в частности для лечения инфекций, вызванных бактериальными и вирусными патогенами, к адъювантным композициям и способам усиления иммуногенности антигена при использовании в качестве адъюванта в составе вакцин. Фармацевтическая композиция на основе лигандов паттерн-распознающих рецепторов содержит мурамилпептид структурной формулы N-ацетилмурамил-L-аланил-D-изоглютамин и липополисахарид или липид А при следующем соотношении компонентов, масс.%: мурамилпептид структурной формулы N-ацетилмурамил-L-аланил-D-изоглютамин от 0,00001 до 0,01, липополисахарид или липид А - от 0,00001 до 0,01, растворитель - остальное. Группа изобретений обеспечивает высокую иммуностимулирующую активность и пролонгированность действия композиции. 3 н. и 4 з.п. ф-лы, 6 пр., 1 табл.. 9 ил.
Наверх