Композиция циклоспорина для перорального введения (варианты) и способ достижения иммуносупрессии в организме реципиента

 

Изобретение может быть использовано в медицине, например при трансплантации органов. Композиция содержит циклоспорин, по меньшей мере один спиртовой растворитель, имеющий 2-3 атома углерода, по меньшей мере одно неионное полиоксиалкиленовое поверхностно-активное вещество (ПАВ) и по меньшей мере один полигликоль. ПАВ выбрано из группы, включающей полиоксиэтиленовые спирты и моноэфиры жирных кислот и этоксилированных полиолов с 4-6 атомами углерода. Полигликоль имеет молекулярную массу 800-1000 дальтонов. Спиртовой растворитель предпочтительно составляет 5-75 об.% композиции, а ПАВ 5-80%. Композиция может находиться в твердой капсуле. Вариант композиции дополнительно содержит физиологически приемлемый носитель, причем композиция практически является безводной. Способ достижения иммуносупрессии в организме реципиента заключается в пероральном введении реципиенту заявленной композиции. Изобретение позволяет вводит лекарство пероральным путем, что более удобно для пациента, без возникновения побочных эффектов. 3 с. и 13 з.п.ф-лы, 6 ил. , 1 табл.

Настоящая заявка представляет собой частичное продолжение заявки с серийным N 08/620021, зарегистрированной 21 марта 1996 года, которая представляет собой частичное продолжение заявки с серийным N 08/519689, зарегистрированной 25 августа 1995 года, и эти заявки включены в настоящую заявку в качестве ссылок.

ВВЕДЕНИЕ ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ НАСТОЯЩЕЕ ИЗОБРЕТЕНИЕ Область техники, к которой относится настоящее изобретение - лекарственные формы циклоспорина, предназначенные для перорального введения.

ИЗВЕСТНЫЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ Несмотря на попытки избежать отторжения трансплантата путем перекрестного типирования тканей реципиента и донора, в большинстве методов трансплантации, в которых донорский орган вводится реципиенту, для сохранения жизнеспособности донорского органа в теле реципиента решающее значение имеет иммуносупрессорная терапия. В методах трансплантации используются ряд иммунодепрессантов (иммунодепрессивных средств), включая азатиоприн, метотрексат, циклофосфамид, FK-506, рапамицин и кортикостероиды. Агенты, которые наиболее часто используются в иммуносупрессорной терапии, благодаря их предпочтительному действию на реакции, опосредованные Т-лимфоцитами, представляют собой циклоспорины.

Циклоспорины - это класс циклических полипептидов, состоящих из одиннадцати аминокислот, которые вырабатываются в качестве метаболита грибком вида Tolypocladium inflatum Gams. Показано, что циклоспорины обратимо ингибируют иммунокомпетентные лимфоциты, в частности T-лимфоциты, во время фаз G₀ и G₁ клеточного цикла. Показано также, что циклоспорины обратимо ингибируют выработку и выделение лимфокина. Хотя известны различные циклоспорины, но наиболее широко используется циклоспорин A.

Сообщается, что использование циклоспорина A продлевает выживание аллогенных трансплантатов, включая кожу, сердце, почку, поджелудочную железу, костный мозг, тонкую кишку и легкое. Для аллогенных трансплантаций показано, что циклоспорин A подавляет гуморальный иммунитет и в значительной степени иммунные реакции, опосредованные клетками, включая: отторжение аллотрансплантата, задержанная гиперчувствительность, экспериментальный аллергический энцефаломиелит, адъювантный артрит Фройнда и реакция "трансплантат против хозяина". Хотя с помощью циклоспорина A достигается успех, но после пересадки необходимо продолжать введение этого средства, поскольку благоприятные последствия циклоспориновой терапии носят обратимый характер, и если введение циклоспорина прекратить, то произойдет отторжение трансплантата.

Хотя разработаны лекарственные формы циклоспорина как для внутривенного, так и для перорального их введения, пероральное введение циклоспорина является предпочтительным, благодаря более удобному введению лекарства и лучшей переносимости его пациентом. Кроме того, внутривенное введение циклоспорина может вызвать анафилактические реакции, а при пероральном введении этого средства побочных эффектов не наблюдалось. Лекарственные формы циклоспорина, предназначенные для перорального введения, которые к настоящему времени разработаны и имеются в продаже, включают в себя лекарственные формы как в виде мягких желатиновых капсул, так и в виде растворов, обе из которых продаются под торговыми марками SANDIMMUNE® и NEORAL^тм. При использовании в иммуносупрессивной терапии лекарственных форм циклоспорина, предназначенных для перорального введения, как лица, оказывающие медицинскую помощь, так и производители должны быть осведомлены о многих связанных с этим проблемах. При использовании лекарственных форм циклоспорина, предназначенных для перорального введения, биологическая доступность циклоспорина может быть ограничена из-за того, что циклоспорин не растворяется в воде, а также из-за того, что циклоспорин имеет тенденцию выпадать в осадок в водной среде. Кроме того, концентрация циклоспорина в лекарственных формах, предназначенных для перорального введения, может быть ограничена из-за гидрофобности циклоспорина. И, наконец, существует ряд проблем, связанных с упаковкой и стабильностью при хранении лекарственных форм, предназначенных для перорального введения. Например, при использовании лекарственных форм циклоспорина в виде мягких желатиновых капсул должна применяться герметичная упаковка, которая неудобна из-за ее громоздкости и дороговизны. Кроме того, лекарственные формы циклоспорина могут быть нестабильными при пониженных температурах, поскольку может произойти кристаллизация циклоспорина.

Таким образом, желательные лекарственные формы циклоспорина, предназначенные для перорального введения, должны решать по крайней мере некоторые из вышеперечисленных проблем. В идеале, лекарственные формы, предназначенные для перорального введения, должны способствовать высокой биологической доступности, включать в себя высокие концентрации циклоспорина и быть пригодными для изготовления как жидких, так и твердых капсульных форм лекарств.

ОТНОСЯЩАЯСЯ К ДАННОЙ ЗАЯВКЕ ЛИТЕРАТУРА В публикации Physician's Desk Reference (1994) pp 2071-2074 описываются лекарственные формы циклоспорина, предназначенные для перорального введения, которые в последнее время имеются в продаже под торговой маркой SANDIMMUNE ®.

Лекарственные формы циклоспорина, предназначенные для перорального введения, описываются также во вкладыше в упаковке лекарства NEORAL^TM, (1995) (Сандоз Фармацевтикалс Корпорейшн, Ист Хановер, Нью Джерси, 07936).

Представляющие интерес для настоящей заявки патенты США, описывающие циклоспорины и их производные, включают в себя NN 4220641, 4639434, 4289851 и 4384996. Патент США N 5047396 описывает препарат циклоспорина, предназначенный для внутривенного введения. В патентах США NN 4388307, 4970076 и 4990337 описывается получение лекарственных форм циклоспорина, предназначенных для перорального введения.

Изготовление твердых капсул, предназначенных для перорального введения фармацевтических средств, описано в патентах США NN 4822618, 4576284, 5120710 и 4894235.

КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ Настоящее изобретение касается лекарственных форм циклоспорина, предназначенных для перорального введения, а также их использования в иммуносупрессивной терапии. В лекарственных формах по настоящему изобретению циклоспорин присутствует в перорально пригодном фармацевтическом носителе, включающем в себя по крайней мере один спиртовой растворитель, содержащий от 2 до 3 атомов углерода, в комбинации по крайней мере с одним неионным поверхностно-активным веществом. Кроме того, лекарственные формы по настоящему изобретению могут также включать в себя один или более сорастворителей, причем применяющиеся в данном изобретении сорастворители представляют собой сложные эфиры жирных кислот и диолы, предпочтительно полигликоли. Эти лекарственные формы циклоспорина можно упаковывать в виде твердых капсул. Данные лекарственные формы являются существенно безводными, что уменьшает выпадение в осадок циклоспорина из лекарственной формы и увеличивает его биологическую доступность.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ФИГУР На фиг. 1 показаны максимальные концентрации циклоспорина (K_max), полученные у крыс, для нескольких лекарственных форм, предназначенных для перорального введения согласно настоящему изобретению, где K_max представлена в виде относительной величины, по сравнению с показателем K_max, полученным для лекарственной формы для перорального введения SANDIMMUNE® ORAL (SO).

На фиг. 2 показано время (T_max), за которое достигается K_max для каждой из лекарственных форм, показанных на фиг. 1, где T_max представлено в виде относительной величины, по сравнению с _max лекарственной формы SANDIMMUNE® ORAL (SO).

На фиг. 3 показано относительное значение площади под кривой (ППК) концентрации в крови и времени, для каждой из лекарственных форм, показанных на фиг. 1, где ППК дается как относительная величина, по сравнению со значением ППК для лекарственной формы SANDIMMUNE® ORAL (SO).

На фиг. 4 показаны максимальные концентрации (K_max), полученные у человека, для нескольких лекарственных форм по настоящему изобретению, предназначенных для перорального введения, а также для раствора SANDIMMUNE® ORAL (обозначенного на фигуре как "Sand").

На фиг. 5 показано время (T_max), за которое достигается K_max, для каждой из лекарственных форм, представленных на фиг. 4.

На фиг. 6 показана площадь под кривой концентрации-времени (ППК) для каждой из лекарственных форм, показанных на фиг. 4.

ОПИСАНИЕ КОНКРЕТНЫХ ВАРИАНТОВ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ Данное изобретение касается лекарственных форм циклоспорина, предназначенных для перорального введения, которые способствуют увеличению биологической доступности и могут быть изготовлены в виде капсул, в частности твердых капсул. В лекарственных формах по настоящему изобретению циклоспорин находится в перорально пригодном носителе, включающем в себя по крайней мере один спиртовой растворитель, содержащий от 2 до 3 атомов углерода, в комбинации по крайней мере с одним неионным поверхностно-активным веществом. Кроме того, лекарственные формы по настоящему изобретению могут включать в себя по крайней мере один сорастворитель, причем сорастворители, применяющиеся в данном изобретении, включают в себя сложные эфиры жирных кислот и диоды, предпочтительно один или более полигликолей. Каждый из компонентов лекарственных форм по настоящему изобретению является фармацевтически пригодным. В дополнение к тому, что лекарственные формы по настоящему изобретению способствуют высокой биологической доступности, они также обеспечивают воспроизводимую величину поглощения циклоспорина для различных партий конкретных лекарственных форм. Лекарственные формы по настоящему изобретению находят применение в иммуносупрессивной терапии.

В данной области техники известны ряд циклоспоринов, которые проявляют иммуносупрессивную активность, и которые можно вводить в виде лекарственных форм по настоящему изобретению, предназначенных для перорального введения. Циклоспорины, которые можно вводить в виде лекарственных форм по настоящему изобретению, включают в себя циклоспорин A, циклоспорин B, циклоспорин C, циклоспорин D и циклоспорин G, а также их синтетические аналоги. См. Указатель фирмы Merck (1989), 2759. Лекарственные формы для перорального введения по настоящему изобретению особенно подходят для введения циклоспорина A. Когда его вводят в виде лекарственных форм по настоящему изобретению, циклоспорин присутствует в них в концентрациях в интервале от 50 до 150 мг/мл, обычно от 100 до 150 мг/мл, в расчете на объем носителя, являющегося компонентом данной лекарственной формы.

Носитель, являющийся компонентом лекарственных форм по настоящему изобретению, включает в себя компонент, являющийся спиртовым растворителем, причем этот спиртовой растворитель включает в себя по крайней мере один спирт, обычно не более трех различных спиртов, предпочтительно - не более двух различных спиртов, причем спирты обычно имеют от 2 до 3 атомов углерода и от 1 до 2 гидроксильных групп, таким образом, не более 1 гидроксильной группы приходится на 1,5 атома углерода. Подходящие спирты включают в себя этанол и пропиленгликоль, предпочтительно абсолютный этанол. Общее количество спиртового растворителя в данной лекарственной форме составляет не менее чем около 1% (объемного), обычно не менее 3% (объемных), и может достигать 95% (объемных), но, как правило, находится в интервале от около 5 до 75% (объемных), обычно от около 5 до 60% (объемных) и предпочтительно от 10 до 60% от объема данной лекарственной формы. Когда в данной лекарственной форме в качестве спиртового растворителя присутствует этанол, то количество этанола может быть в интервале от 5 до 25% (объемных), обычно от около 5 до 20% (объемных), предпочтительно от около 10 до 25% от объема лекарственной формы, а если в качестве спиртового растворителя присутствует пропиленгликоль, то количество пропиленгликоля в лекарственной форме по настоящему изобретению может быть в интервале от 5 до 90% (объемных), обычно от около 5 до 85% (объемных), предпочтительно от около 10 до 50% от объема лекарственной формы.

В перорально пригодном носителе также присутствует по крайней мере одно неионное полиоксиалкиленовое поверхностно-активное вещество, обычно не более двух неионных полиоксиалеиленовых поверхностно-активных веществ. Эти полиоксиалиленовые поверхностно-активные вещества должны иметь гидрофильно-липофильный баланс (ГЛБ) от около 5 до 20, обычно от около 8 до 16. Предпочтительно, чтобы неионные полиоксиалкиленовые поверхностно-активные вещества, используемые в фармацевтических лекарственных формах по настоящему изобретению, были бы соединениями полиоксиэтилена. Соединения полиоксиэтилена, применимые для данного изобретения, включают в себя: этоксилированные спирты, т.е. полиоксиэтиленовые спирты или этоксилированные жирные спирты, в которых спиртовые группы, как правило, имеют от 10 до 18, обычно от 10 до 14 атомов углерода, а также их эфирные и сложно-эфирные заместители; и полиоксиэтиленовые производные частичных эфиров жирных кислот, обычно моноэфиров, и полиолов, имеющих от 4 до 6 атомов углерода, обычно 6 атомов углерода, причем полиолы могут представлять собой ангидриды полиолов, например сорбитан. Жирно-кислотные группы поверхностно-активного вещества по данному изобретению, как правило, имеют от 10 до 18 атомов углерода. Количество этиленоксидных групп, как правило, составляет от 2 до 30, обычно от около 2 до 25. Предпочтительными поверхностно-активными веществами являются эфир лауриловой кислоты и полиоксиэтилена (4) (БРИДЖ 30 ®) и полиоксиэтилен (20) моносорбитан моноолеат (ТВИН 80 ®). Общее количество неионных поверхностно-активных веществ, присутствующих в лекарственной форме по данному изобретению, находится в интервале от 5 до 80%, обычно от 5 до 70%, предпочтительно от 5 до 65%, более предпочтительно от 5 до 60% (объемных), более предпочтительно от 20 до 75% (объемных) и часто от 50 до 80% от лекарственной формы. Если в лекарственной форме присутствует ТВИН 80 ®, то обычно он присутствует в количествах от 5 до 80%, предпочтительно от 5 до 70%, более предпочтительно от 5 до 60% и более предпочтительно от 10 до 15% от веса лекарственной формы. Если в лекарственной форме по настоящему изобретению присутствует БРИДЖ 30®, то обычно он присутствует в количествах от 10 до 45%, предпочтительно от 15 до 40% от объема лекарственной формы.

Лекарственные формы по настоящему изобретению могут также включать в себя один или более сорастворителей, обычно не более трех разных сорастворителей, предпочтительно не более двух разных сорастворителей, причем подходящие сорастворители включают в себя сложные эфиры жирных кислот и диолы, при этом сорастворитель может представлять собой на 100% сложный эфир жирной кислоты, на 100% диол или их комбинацию. В лекарственных формах, включающих в себя 100% сложного эфира жирной кислоты или 100% диола, различные сложные эфиры жирных кислот или диолы могут использоваться в комбинациях. Общее количество сорастворителя, присутствующего в данной лекарственной форме, может находиться в интервале от около 20 до 80% (объемных) и обычно находится в интервале от 25 до 75% (объемных). Если в лекарственной форме присутствует сорастворитель, то соотношение сорастворителя к растворителю в лекарственных формах по настоящему изобретению может находиться в интервале от 1:1 до 15: 1, но обычно оно находится в интервале от 1:1 до 13:1.

Сложные эфиры жирных кислот, которые могут служить в качестве сорастворителей в лекарственных формах по настоящему изобретению - это такие сложные эфиры жирных кислот, в которых углеводородная цепь жирной кислоты имеет в длину от 12 до 18, обычно от 14 до 18 атомов углерода, причем сложный эфир жирной кислоты является моноэфиром низшего спирта. Подходящие сложные эфиры жирных кислот, как правило, включают в себя четную цепь жирной кислоты, причем углеводородная цепь может быть насыщенной или ненасыщенной, обычно имеющей не более двух сайтов ненасыщенности. Жирные кислоты, применимые для данного изобретения, как правило, животного или растительного происхождения, и включают в себя пальмитат, стеарат, пальмитолеат, линолеат, линоленат и им подобные, в особенности миристат и олеат. Спирт моноэфира жирной кислоты представляет собой низший спирт, имеющий длину от 2 до 4 атомов углерода, обычно длину от 2 до 3 атомов углерода, с разветвлениями или без них. Сложные эфиры жирных кислот, особо предпочтительные для данного изобретения - это изопропилмиристат и этилолеат. Изопропилмиристат, если он присутствует, составляют от около 15 до 75% (объемных), и этилолеат, если он присутствует, составляет от 15 до 75% от объема всей лекарственной формы. Обычно сложный эфир жирной кислоты присутствует в количестве не менее, чем равном (по объему) и до 8 раз превышающем количество поверхностно-активного вещества данной лекарственной формы, обычно не более, чем в 5-кратном количестве по отношению к количеству поверхностно-активного вещества в данной лекарственной форме (по объему). Сложный эфир жирной кислоты предпочтительно является безводным.

В лекарственных формах по настоящему изобретению также могут присутствовать диолы, причем диолы могут присутствовать в дополнение к сорастворителю, представляющему собой сложный эфир жирной кислоты, либо взамен его. Предпочтительно, чтобы диолы были безводными. Диолы, применимые для данного изобретения в качестве сорастворителей, как правило, при физиологических температурах представляют собой жидкости и включают в себя диолы, имеющие от 8 до 28 атомов углерода, обычно от 16 до 20 атомов углерода, причем диол может представлять собой полиаксиалкилендиол, в котором алкилен может иметь от 2 до 3 атомов углерода, однако диолы, имеющие значительно большее количество атомов углерода, тоже находят применение. Диолы, подходящие для использования в качестве сорастворителей, могут иметь молекулярную массу в интервале от 200 до 10000 дальтон, обычно от около 300 до 10000 дальтон, более обычно от 400 до 10000 дальтон, предпочтительно от 800 до 10000 дальтон. Диолы, предпочтительные для данного изобретения, включают в себя полиэтиленгликоли, в частности полиэтиленгликоль 200 (ПЭГ₂₀₀), полиэтиленгликоль 300 (ПЭГ₃₀₀), полиэтиленгликоль 400 (ПЭГ₄₀₀), полиэтиленгликоль 600 (ПЭГ₆₀₀), полиэтиленгликоль 1000 (ПЭГ₁₀₀₀), полиэтиленгликоль 3400 (ПЭГ₃₄₀₀), полиэтиленгликоль 8000 (ПЭГ₈₀₀₀) и им подобные. Если диолы присутствуют в качестве сорастворителей в лекарственных формах по настоящему изобретению, то они, как правило, составляют от 5 до 60%, обычно от 5 до 55% от веса лекарственной формы. Диолы, особенно полиэтиленгликоли с высокой молекулярной массой (т.е. такие, как полиэтиленгликоли, имеющие молекулярную массу от 1000 или выше), могут функционировать в качестве вещества, адсорбирующего молекулы воды, которые могут присутствовать в лекарственных формах, таким образом значительно уменьшая возможность выпадения циклоспорина в осадок из лекарственной формы, что может произойти из-за наличия свободных молекул воды.

В лекарственных формах по настоящему изобретению сами по себе сорастворители могут придавать лекарственной форме желательные физические свойства, такие как вязкость, стабильность и т.п. Когда это желательно, лекарственная форма может также включать в себя дополнительные агенты, которые могут придать лекарственной форме желаемые физические свойства, такие как загустители, суспендирующие средства, отвердители и т.п., и перечень таких агентов включает в себя акацию, карбоксиметилцеллюлозу, гидроксипропилцеллюлозу, лецитин, метилцеллюлозу, полиэтиленгликоли с высокой молекулярной массой, например, такие полиэтиленгликоли, которые имеют молекулярную массу в интервале от 1000 до 10000, обычно от 1000 до 8000 Дальтон, более обычно от 1000 до 6000 дальтон, повидон, альгинат натрия, трагакант и т.п. В лекарственных формах по настоящему изобретению также могут присутствовать ряд микрокомпонентов, которые выполняют различные функции, такие как ингибиторы ферментов, консерванты, антиоксиданты, антимикробные агенты, стабилизаторы, ароматизаторы и т. п. Общее количество этих загустителей и прочих добавок, если они присутствуют в лекарственной форме, обычно составляет не более 55 весовых %, обычно 45 весовых %, более обычно 25 весовых % данной лекарственной формы. В лекарственных формах по настоящему изобретению могут также присутствовать ряд наполнителей, как это известно в данной области техники. Такие дополнительные агенты предпочтительно являются безводными.

Данные лекарственные формы существенно безводные, что означает, что они содержат менее 1,0 объемного % воды, более предпочтительно менее 0,1 объемного % воды.

Лекарственные формы по настоящему изобретению являются стабильными в условиях широкого температурного интервала, что означает, что физическая целостность лекарственной формы не нарушается, например не происходит кристаллизации активного вещества циклоспорина. Температурный интервал, в котором лекарственные формы по настоящему изобретению сохраняют стабильность, включает в себя и пониженные температуры, такие, которые используются при хранении в холодильнике, где такие пониженные температуры обычно находятся в интервале от 0 до 15^oC, как правило, от 2 до 8^oC.

Лекарственные формы по настоящему изобретению пригодны для введения как в жидкой, так и в капсульной форме, например в виде твердых или мягких капсул. Способы изготовления твердых капсул, заключающих в себе жидкие лекарственные формы, известны в данной области техники и описаны в патентах США NN 4822618 и 4576284, описания которых включены в настоящее описание в качестве ссылок. Как правило, твердые капсулы, которые находят применение для лекарственных форм по настоящему изобретению, включают в себя две части: компонент корпуса и компонент колпачка. Компоненты корпуса и колпачка соединяют вместе, в результате получают замкнутую полость определенного объема, заключенную в корпус твердой капсулы. Компоненты корпуса и колпачка можно изготовить из гидрофильного полимера, такого как крахмал или желатин. В процессе изготовления твердой капсулы в компонент корпуса наливают жидкую лекарственную форму, а затем капсулу запечатывают с помощью колпачка, который надевают поверх корпуса. Уплотнение между этими двумя компонентами капсулы можно сделать герметичным, предотвратив тем самым утечку лекарственной формы из капсулы с помощью герметика, как описано в Европатенте 116744, описание которого включено в настоящее описание в качестве ссылки. Чтобы не допустить разложения капсул в желудке, капсулы, заключающие в себе лекарственные формы по настоящему изобретению, можно покрыть энтеросолюбильным покрытием, которое ингибирует разложение капсулы в кислой среде желудка. В данной области техники известен ряд энтеросолюбильных покрытий. См., например, патент США N 5206219, описание которого включено в данное описание в качестве ссылки.

Лекарственные формы по настоящему изобретению можно вводить субъектам, нуждающимся в них, вместе с одним или более иммунодепрессантами, причем иммунодепрессанты, используемые для совместного введения с лекарственными формами циклоспорина по настоящему изобретению, включают в себя, например, рапамицин, FK-506, микофеноловую кислоту, их аналоги и производные, азатиоприн, метотрексат, циклофосфамид, кортикостероиды и любое другое иммунодепрессантное соединение или молекулу или их аналог.

Лекарственные формы по настоящему изобретению находят применение в иммуносупрессивной терапии. Иммуносупрессивная терапия показана при большом числе различных болезней, включая идиопатический почечный синдром, инсулинозависимый диабет I типа, синдром Бенчета, активную стадию болезни Крона, гипопластическую анемию, тяжелую кортикостероидозависимую астму, псориаз, ревматоидный артрит и прочие болезни, при которых иммунная система может играть патогенную роль. Особый интерес представляет использование лекарственных форм по настоящему изобретению при трансплантациях, включающих в себя как аллогенные, так и ксеногенные пересадки органов, тканей и клеток, где иммунодепрессия желательна для обеспечения сохранения жизнеспособности пересаженного органа, или ткани, или клеток после их трансплантации, т.е. для предотвращения отторжения трансплантата или для предотвращения реакции "трансплантат против хозяина", например, после пересадки костного мозга.

При использовании лекарственных форм по настоящему изобретению для применения к реципиенту иммуносупрессивной терапии перорально вводят эффективное количество циклоспорина, чтобы добиться желаемого уровня иммунодепрессии у реципиента, в зависимости от того состояния, на которое направлено лечение. При пересадках первоначальную дозу циклоспорина обычно вводят перед хирургической операцией или после нее. Вслед за трансплантацией донорского органа реципиенту, циклоспорин, как правило, назначают реципиенту повторно, т. е. хронически, для поддержания иммунодепрессии. Первоначальную дозировку вводят за 4-12 часов до трансплантации, и ее величина может находиться в интервале от 5 до 18 мг/кг веса тела реципиента, обычно от 5 до 15 мг/кг веса реципиента. После операции обычно продолжают вводить лекарство в первоначальной дозировке, ежедневно, в течение от 1 до 3 недель, обычно от 1 до 2 недель. Затем эту дозировку можно постепенно снизить до поддерживающей дозы в 3 до 10 мг/кг в день, обычно от 3 до 6 мг/кг в день. Скорость, с которой снижают дозировку до уровня поддерживающей дозы, может находиться в интервале от 3 до 8% в неделю и обычно составляет около 5% в неделю. Дозировку обычно регулируют на основании самого нижнего содержания лекарства в крови, чтобы поддерживать концентрацию от 100 до 350 нг/мл, на основании измерений, проведенных с помощью ВЭЖХ, радиоиммуноанализа, ИФА или анализа с помощью автоматического анализатора TDx. Лекарственные формы по настоящему изобретению можно вводить вместе с дополнительными агентами в случаях, если дополнительные лечебные мероприятия рекомендуются или известны в данной области техники. Например, лекарственные формы по настоящему изобретению можно вводить вместе с надпочечниковыми кортикостероидами, азатиоприном и им подобными.

Введение лекарственных форм по настоящему изобретению вместе с пересадкой донорского органа реципиенту приведет к продлению жизнеспособности донорского органа в теле реципиента, в результате подавления иммунной реакции реципиента на присутствие донорского органа. Под "продлением жизнеспособности" подразумевается, что донорский орган остается жизнеспособным в теле реципиента в течение более длительного периода времени, чем в том случае, если бы иммуносупрессорная терапия не проводилась вместе с пересадкой органа. Таким образом, продление жизнеспособности включает в себя поддержание жизнеспособности в течение неопределенного периода времени. Донорский орган считается жизнеспособным в течение того периода, когда он сохраняет свою функциональность в теле реципиента.

Лекарственные формы по настоящему изобретению можно также приготовить в виде водных коллоидных дисперсий наночастиц циклоспорина, обладающих хорошей биологической доступностью. В таких случаях наночастицы являются существенно сферическими, циклоспорин присутствует в аморфной форме, а средний размер частиц, как правило, составляет менее чем около 1000 нм, более чем около 50 нм, как правило, в интервале около 200 до 800 нм, обычно в интервале около 200 до 600 нм. Как правило, по крайней мере около 50% от общего веса циклоспорина присутствует в виде частиц, размер которых находится в пределах указанного интервала. Могут присутствовать и более крупные частицы, в частности, в виде агрегатов из наночастиц, причем их средний диаметр, как правило, составляет менее 50 мкм, более обычно - менее 25 мкм, а количество агрегатов не превышает 40 весовых % от общего количества циклоспорина.

Количество аморфных частиц циклоспорина в такой композиции должно быть достаточным для терапевтического эффекта. Поскольку данная лекарственная форма может быть образована путем введения в водную среду перед приемом лекарства или напрямую в желудочном соке, то конкретную концентрацию установить нельзя, поскольку растворение в желудке точно определить нельзя. При приготовлении водного раствора перед пероральным введением циклоспорин обычно присутствует в нем в количестве около 0,01-2,5 весовых процентов, как правило - около 0,01-0,5 весовых процентов. Температура смешивания может быть в интервале от 10 до 50^oC, обычно в интервале от 20 до 40^oC. Обычно приготовление смеси включает в себя перемешивание в течение достаточного времени, чтобы обеспечить растворение циклоспорина.

Коллоидная аморфная суспензия наночастиц достаточно стабильна для того, чтобы приготовленная суспензия могла сохранять свои свойства в течение некоторого времени до введения лекарства (без осаждения), обычно до 6 часов, как правило, до около 3 часов.

Дополнительные подробности, касающиеся приготовления и использования лекарственных форм из наночастиц циклоспорина по настоящему изобретению, можно найти в публикации PCT/US97/04627.

Нижеследующие примеры предлагаются лишь с целью иллюстрации изобретения, и данное изобретение ими не ограничивается.

ОПИСАНИЕ ЭКСПЕРИМЕНТОВ Несколько лекарственных форм циклоспорина для перорального введения было приготовлено согласно настоящему изобретению. Биологическую доступность циклоспорина во многих приготовленных лекарственная формах исследовали на крысах и на людях.

I. ЛЕКАРСТВЕННЫЕ ФОРМЫ ЦИКЛОСПОРИНА ДЛЯ ПЕРОРАЛЬНОГО ВВЕДЕНИЯ
Приготовили нижеследующие лекарственные формы циклоспорина A для перорального введения. В каждом случае указанное количество циклоспорина A, поверхностно-активного вещества и этанола или пропиленгликоля помещали в мерную колбу на 1,0 мл и в некоторых случаях доводили до окончательного объема в 1,0 мл путем добавления нужного объема сложного эфира жирной кислоты и/или диола (см. таблицу).

II. ИЗУЧЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКОЙ ДОСТУПНОСТИ ДЛЯ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ 1-6 И 7-16
Биологическую доступность циклоспорина в лекарственных формах 1-6 и 7-16 изучали следующим образом. В качестве показателя биологической доступности определяли следующие фармакокинетические параметры: (а) максимальная концентрация циклоспорина в крови (K_max); (б) время (T_max), требующееся для достижения K_max; и площадь под кривой (ППК), изображающей взаимосвязь концентрации и времени. В дополнение к лекарственным формам 1-6 и 7-16 изучали также биологическую доступность для перорального раствора SANDIMMUNE® Oral (SO) в аналогичных условиях с целью сравнения. Для каждой из вышеуказанных лекарственных форм использовали не подвергавшихся ранее воздействию циклоспорина A крыс линии Sprague Dawiey, весом по 250-350 граммов, которых кормили стандартным гранулированным кормом (Agway®3000, Грэнвил Милл, Гринсборо, Северная Каролина) и водой ad libitum (по желанию). За один день до эксперимента в правую яремную и правую бедренную вены вставляли силиконовые канюли под легкой эфирной анестезией. После голодания в течение ночи вводили циклоспорин A через желудочный зонд.

На следующий день после введения циклоспорина отбирали пробы крови по 200 мкл из яремной вены в 0,5-миллилитровые полипропиленовые микроцентрифужные пробирки, содержащие 0,3 мг лиофилизированного Na ЭДТА и сразу же встряхивали в течение 10 секунд. Время отбора проб крови для животных, которым перорально ввели лекарственные формы, составляло 0, 0,5, 1, 2, 4, 8, 12, 24, 36, 48 и 72 часа после введения лекарственной формы.

Содержание циклоспорина A, включая некоторые из его метаболитов, определяли в цельной крови с помощью поляризационного иммунофлуоресцентного анализа (ПИФ) (с использованием анализатора Tdx, лаборатория Эббот). Вкратце, 150 мкл образца цельной крови количественно переносили в 1,5-миллилитровую микроцентрифужную пробирку. Клетки лизировали и растворяли с 50 мкл способствующего растворению реагента, содержащего поверхностно-активное вещество. Затем белки осаждали с помощью 300 мкл ацетонитрила. После центрифугирования надосадочную жидкость подвергли ПИФ-анализу в автоматическом анализаторе TDx по методике, рекомендованной Эббот Диагностикс. Поскольку анализ с помощью TDx был разработан для образцов крови человека, то некоторые из рекомендованных процедур модифицировали следующим образом. Приготовили серию стандартных растворов с известной концентрацией циклоспорина A путем добавления известного количества циклоспорина A к крысиной крови, обработанной ЭДТА. Если ожидалось, что концентрация циклоспорина A в образце будет выше 1,0 мкг/мл, то образец крови разбавляли в 10 раз 0,1-М фосфатным буфером, pH 7,0. Для разбавленных образцов строили другую калибровочную кривую с серией стандартных растворов, содержащих известные количества циклоспорина A, которые состояли на 10% (по объему) из крысиной крови, а на 90% - из фосфатного буфера.

Описательные фармакокинетические параметры получили с помощью некомпартментальных анализов. Максимальную концентрацию (K_max) и время, за которое эта концентрация достигается (T_max), определяли с помощью изучения профиля зависимости концентрации и времени для каждой крысы. Площадь под кривой (ППК) концентрации времени от времени 0 до точки последних данных (ППК_0--->>t) рассчитывали с помощью линейно-трапецеидального метода. Остаточную площадь под концевой частью кривой концентрации-времени (ППК_t→∞) определяли как соотношение последней наблюдаемой концентрации в крови (K^*) к константе скорости первого порядка, связанной с фазой окончательного выведения профиля зависимости концентрации-времени (λ_z). Контакт скорости (λ_z) определяли с помощью логарифмически-линейной регрессии данных концентрации-времени в кажущейся концевой логарифмически-линейной фазе кривой зависимости концентрации-времени (т.е. брали последние от 3 до 5 точек данных в зависимости от анализируемой кривой). Общую ППК ( ППК_t→∞ ) определяли как сумму ( ППК_t→∞ ) и ( ППК_t→∞ ).

Результаты по каждой лекарственной форме сравнивали с результатами, полученными для SO, и они представлены в фиг. 1-3. Эти результаты показывают, что для большинства лекарственных форм более высокая биологическая доступность циклоспорина наблюдалась для лекарственных форм по настоящему изобретению, по сравнению с показателями раствора для перорального применения SANDIMMUNE® ORAL (SO), что видно из более высоких значений ППК для лекарственных форм по настоящему изобретению.

III БИОЛОГИЧЕСКАЯ ДОСТУПНОСТЬ ДЛЯ ЧЕЛОВЕКА ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ 9, 17-20 И 21-25.

В качестве испытуемых субъектов использовали 48 здоровых мужчин в возрасте от 19 до 55 лет с отклонениями от идеального веса не более 20%. Провели однодозовое рандомизированное троекратно-перекрестное испытание на фоне голодания, дважды-слепым методом. 48 субъектов рандомизированно разделили на 6 групп по 8 субъектов. Каждая группа получала одну дозу в 300 мг циклоспорина из вышеуказанных лекарственных форм или пероральный раствор SANDIMMUNE® ORAL (SO) три раза, причем каждое введение лекарства было отделено от другого 7-дневным периодом вымывания.

Субъектам было необходимо голодать 10 часов до и 4 часа после введения дозы. Воду во время испытания разрешали пить по желанию, за исключением периода, который начинался за 1 час до введения дозы и кончался через 2 часа после введения дозы. Перед введением дозы брали пробы крови по 15 мл. Для введения дозы смешивали 3 мл (300 мг) лекарственной формы с 200 мл разбавителя и вводили перорально. Пробы крови по 10 мл брали через интервалы времени t = 0, 0,5, 1, 1,5, 2, 3, 4, 6, 8, 10, 12, 16, 20 и 24 часа. По окончании исследования также взяли пробу крови 15 мл.

Концентрации циклоспорина A в образцах цельной крови определяли с помощью автоматического анализатора TDx (Эббот Диагностикс, Н. Чикаго, Иллинойс) в соответствии с инструкциями производителя данного прибора.

Некомпартментальные фармакокинетические показатели получили с помощью стандартных методов. Максимальную концентрацию в цельной крови (K_max) и время ее наступления (T_max) получили путем компиляции данных взаимосвязи концентрации-времени. Площадь под кривой (ППК) концентрации в крови-времени рассчитали с помощью линейно-трапецеидального правила по отношению к последний концентрации в крови выше предела чувствительности (25 нг/мл) и экстраполировали до бесконечности.

Определили средние значения для наблюдаемых значений K_max, T_max и ППК для каждой лекарственной формы. Средние значения для каждой лекарственной формы представлены на фигурах 4-6. Результаты показывают, что для каждой испытуемой лекарственной формы K_max достигалась по крайний мере вдвое быстрее, чем для раствора SANDIMMUNE® Oral (SO), в тех же самых условиях. Более того, ППК, наблюдаемая для испытуемых лекарственных форм, была по крайней мере на 2000 нг•час/мл больше, чем наблюдаемая для раствора Oral (SO), в тех же самых условиях. На основе этих результатов делается вывод, что лекарственные формы 9, 17-20 и 21-25 обеспечивают более высокую биологическую доступность, чем раствор Oral для перорального введения (SO).

IV. УСТОЙЧИВОСТЬ К НИЗКИМ ТЕМПЕРАТУРАМ ЖИДКИХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ 9 И 18
Жидкие лекарственной формы 9 и 18 циклоспорина A и раствор для перорального введения NEORAL^TM хранили при различных низких температурах и определяли их физические характеристики. Конкретно, жидкие лекарственные формы 9 и 18 циклоспорина A и раствор для перорального введения NEORAL^TM хранили с вечера до следующего дня либо при температуре -10^oC, либо от 2 до 8^oC. При температуре -10^oC как лекарственная форма 18, так и раствор для перорального введения NEORAL^TM затвердители, в то время как лекарственная форма 9 не затвердела, хотя она стала очень вязкой. Интересно отметить, что в хранившемся на холоде растворе лекарственной формы 9 не было никаких признаков выпадения кристаллического осадка циклоспорина A. Когда все лекарственные формы перенесли в условия температуры окружающей среды, то затвердевшая лекарственная форма 18 оттаяла быстрее, чем затвердивший раствор для перорального введения NEORAL^TM.

При хранении в условиях от 2 до 8^oC раствор для перорального введения NEORAL^TM загустевал до состояния пасты, в то время как лекарственные формы 9 и 18 оставались вязкими жидкостями. Ни в одной из хранившихся на холоде лекарственных форм 9 и 18 не наблюдалось выпадения в осадок циклоспорина A.

Из вышеописанных результатов и их обсуждения очевидно, что созданы новые лекарственные формы циклоспорина, имеющие повышенную биологическую доступность. Лекарственные формы по настоящему изобретению способны включать в себя высокие концентрации циклоспорина и остаются стабильными при хранении в условиях широкого интервала температур, включая низкие температуры, обычно используемые при хранении в условиях холодильника. Лекарственные формы по настоящему изобретению пригодны для использования в форме капсул, включая твердые капсулы, что обеспечивает легкость их хранения и обращения с ними.

Все публикации и заявки на патенты, процитированные в настоящем описании изобретения, включены в него в качестве ссылок, так как если бы каждая отдельная публикация или заявка на патент была бы конкретно и индивидуально указана как включенная в настоящее описание в качестве ссылки.

Хотя некоторые подробности настоящего изобретения описаны с помощью иллюстраций и примеров с целью сделать его более понятным, но специалистам в данной области техники совершенно очевидно, в свете рекомендаций, вытекающих из настоящего изобретения, что в нем можно произвести определенные изменения и модификации, которые не выходят за пределы сущности и объема прилагаемой формулы изобретения.

Формула изобретения

1. Композиция циклоспорина для перорального введения, состоящая в основном из циклоспорина; по крайней мере, одного спиртового растворителя, имеющего от 2 до 3 атомов углерода; по крайней мере, одного неионного полиоксиалкиленового поверхностно-активного вещества, выбираемого из группы, состоящей из полиоксиэтиленовых спиртов и моноэфиров жирных кислот и этоксилированных полиолов, имеющих от 4 до 6 атомов углерода; и по крайней мере, одного полигликоля, причем, по крайней мере, один из полигликолей имеет мол. массу в интервале от 800 до 10 000 дальтонов.

2. Композиция по п.1, в которой полигликоль представляет собой полиэтиленгликоль.

3. Композиция по п.2, в которой спиртовой растворитель составляет от около 5 до 75 об.% композиции.

4. Композиция по п.2, в которой спиртовой растворитель составляет от около 10 до 25 об.% композиции.

5. Композиция по п.4, в которой спиртовой растворитель представляет собой абсолютный этанол.

6. Композиция по п.2, в которой, по крайней мере, одно неионное полиоксиалкиленовое поверхностно-активное вещество составляет от около 5 до 80 вес.% композиции.

7. Композиция по п.2, в которой, по крайней мере, одно неионное полиоксиалкиленовое поверхностно-активное вещество составляет от около 10 до 50 вес.% композиции.

8. Композиция по п.2, в которой, по крайней мере, одно неионное полиоксиалкиленовое поверхностно-активное вещество составляет от около 20 до 75 об.% композиции.

9. Композиция по п.2, в которой, по крайней мере, одно неионное полиоксиалкиленовое поверхностно-активное вещество выбрано из группы, состоящей из моно-олеата полиоксиэтилен (20) моносорбитана и лаурилового эфира полиоксиэтилена (4).

10. Композиция по п.2, в которой, по крайней мере, один полиэтиленгликоль представляет собой полиэтиленгликоль с мол.массой от 1000 до 8000 дальтон.

11. Композиция по п.2, в которой, по крайней мере, один полиэтиленгликоль представляет собой смесь двух различных полиэтиленгликолей с разными массами.

12. Композиция по п.2, в которой, по крайней мере, один полиэтиленгликоль составляет от 20 до 80 вес.% композиции.

13. Композиция по п.1, в которой концентрация циклоспорина составляет 100 мг/мл, концентрация абсолютного спирта составляет 12,5%, а концентрация моно-олеата полиоксиэтилен (20) моносорбитана составляет 400 мг/мл.

14. Композиция по п.1, которая находится в твердой капсуле.

15. Композиция циклоспорина для перорального введения, включающая циклоспорин и физиологически пригодный носитель, причем композиция является по существу безводной.

16. Способ достижения иммуносупрессии в организме реципиента, включающий пероральное введение указанному реципиенту композиции циклоспорина по любому из пп.1 - 15.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6, Рисунок 7, Рисунок 8, Рисунок 9, Рисунок 10, Рисунок 11