Способ устранения пирогенности пирогенала при сохранении его иммуностимулирующей активности

 

Изобретение относится к способам получения иммуностимуляторов, лишенных таких побочных эффектов, как пирогенность. Согласно изобретению водный раствор пирогенала, взятого в концентрации 10-100 мкг/мл, подвергают гамма-облучению в дозе 40 или 120 кГр (дискретные значения). Технический результат: способ обеспечивает устранение пирогенности пирогенала. 4 з.п. ф-лы.

Изобретение относится к фармации, конкретно к способам получения иммуностимуляторов на основе природных полисахаридов, и может найти применение при создании соответствующих лекарственных композиций.

Пирогенал представляет собой комплексный препарат липополисахаридов и полисахаридов, выделенных из бактерии Pseudomomas aeruginosa и некоторых других микроорганизмов (М.Д. Машковский. "Лекарственные средства", часть 2, стр. 174-175, М. : Медицина, 1988 г.). Препарат применяют в хирургии при спаечной болезни, послеожоговых келоидных рубцах и контрактурах; в урологии - для лечения стриктур уретры и мочеточников, хронических простатитов и уретритов; в гинекологии - при воспалениях придатков матки; в венерологии - в качестве неспецифического иммуностимулятора в комплексной терапии сифилиса; в офтальмологии - для лечения увеитов, иридоциклитов, герпесвирусной инфекции глаз, вирусных кератитов и конъюнктивитов; в дерматологии - при псориазе, стрептодермии, нейродермитах; в косметологии - для заживления крупных дефектов кожи без образования грубого рубца; в аллергологии - в терапии бронхиальной астмы.

Введение пирогенала (внутримышечно) сопровождается повышением температуры (отсюда и название: "пирос" - по-гречески "огонь, жар", "геннао" - "порождаю"). Обычно вводимую дозу подбирают так, чтобы температура тела не повышалась более чем до 37,5-38oС; в ряде случаев, однако отмечаются потрясающий озноб и лихорадка (до 39,5oС) с головной болью и болями в пояснице.

Показано, что пирогенал не только стимулирует эмиссию противовоспалительных монокинов: интерлейкинов-1 и -6, фактора некроза опухолей и других, но и усиливает фагоцитоз, ускоряет образование антител, интерферона, - иными словами, проявляет иммуностимулирующую активность (см. выше относительно его использования в терапии сифилиса). Наличие побочных эффектов (вплоть до рвоты) серьезно ограничивает медицинское применение пирогенала в качестве иммуностимулятора и побуждает искать пути устранения токсического (пирогенного) действия пирогенала.

При мягком кислотном гидролизе пирогенала [Angewandte Chemie (Intl. Ed. In Eng.), 1954, 66, стр. 404-417] или при обработке его катионогенным полипептидом полимиксином В (Immunochemistry, 1976, 13, стр. 813-818) происходит отщепление липоидного компонента (так называемого липида А), ответственного за токсичность пирогенала в целом (D.C. Morrison, "Bacterial Endotoxins..." - in: Reviews of Infect. Diseases. - 1983, том 5, Дополнение 4, стp. S733-S747).

Целью изобретения является создание способа устранения у пирогенала его пирогенности при сохранении его иммуностимулирущей активности, - способа, который не требовал бы применения агрессивных или дорогостоящих и редких химических реактитов и допускал бы точное и легкое управление процессом.

Поставленная цель достигнута благодаря тому, что в способе устранения пирогенности пирогенала при сохранении его иммуностимулирующей активности, предусматривающем физико-химическое воздействие на пирогенал, находящийся в водном растворе, указанное воздействие осуществляют в виде гамма-облучения при мощности дозы 35-45 или 115-125 кГр, при этом концентрацию исходного липополисахарида берут равной 10-100 мкг/мл, а в качестве источника гамма-излучения используют кобальт-60. В предпочтительном варианте облучению подвергают официнальный (фармакопейный) раствор пирогенала концентрации 100 мкг/мл при мощности дозы 40 или 120 кГр.

Эффекты воздействия лучистой энергии на полисахариды, находящиеся вне "материнской" клетки и, следовательно, не защищенные клеточными органеллами, в литературе описаны: так, гамма-облучение водных растворов полисахаридов из S. Typhi в дозе 1 Мрад вызывает значительную деструкцию ("Радиобиология", 1970, 10, стр. 468). Известно, далее, что уменьшение иммуногенности форменных элементов крови может быть достигнуто при облучении УФ-светом в дозе 120-13500 Дж/м2 (заявка ЕПВ 229830), а в процессе облучения клеток млекопитающих УФ-светом (280-320 нм, 10-200 Дж/м2) образуются гликопротеины, проявляющие иммуносупрессорную (подавляющие иммунитет) активность (заявка ЕПВ 489732). С другой стороны, инактивация виpуcoв-кoнтaминантoв человеческого лейкоцитарного интерферона обеспечивается согласно патенту Российской Федерации 2080877 гамма-облучением в дозе 15-25 кГр.

Нами было обнаружено, что облучение пирогенала в водном растворе гамма-радиацией в строго определенных дозах сопровождается утратой пирогеналом своей пирогенности при сохранении иммуностимулирующей активности, что, по-видимому, обусловлено отщеплением липида А или, вероятнее всего, и других фрагментов молекулы пирогенала (в пользу последнего предположения свидетельствует дискретный характер радиационного воздействия: либо 35-45, либо 115-125 кГр, при этом промежуточные дозы подобного эффекта не вызывают). Косвенно сказанное подтверждается сдвигом профиля иммуностимулирующей активности в сторону активации В-лимфоцитов после гамма-облучения пирогенала дозой 120 кГр.

Детально изобретение поясняется следующими примерами.

Пример 1. Официнальный раствор пирогенала, выпускаемый в ампулах по 1 мл и имеющий концентрацию 100 мкг/мл, подвергают гамма-облучению от источника кобальт-60 в дозе 40 кГр.

Пример 2. Поступают аналогично примеру 1 с тем отличием, что дозу увеличивают до 120 кГр.

Пример 3. На белых беспородных мышах-самцах с массой 18-20 г производили оценку влияния раствора, полученного согласно примеру 1, на гуморальный иммунный ответ к эритроцитам барана, о чем судили по титру гемагглютининов в сыворотке крови и по числу антителообразующих клеток (АОК) в селезенке животных, иммунизированных эритроцитами барана. Титр гемагглютининов и число АОК определяли на 6-е сутки после иммунизации животных оптимальной дозой эритроцитов барана, т.е. 5108 эритроцитов на мышь, внутрибрюшинно. Число АОК определяли слайд-методом Каннингэма. Раствор вводили внутрибрюшинно двукратно, с интервалом в два дня, в дозе 5 и 10 мкг/мышь, первое введение - спустя сутки после иммунизации. Среднее значение (из 12) log2 титра гемагглютининов составило 8,0, а число АОК на 106 спленоцитов равнялось 400, что соответствовало величинам для самого пирогенала.

Пример 4. На кроликах породы шиншилла осуществляли оценку пирогенной реакции на введение раствора, полученного согласно примеру 2: на трех животных - в дозе 50 мкг/кг, а еще три кролика служили контролем (пирогенал, доза 50 мкг/кг). Ректальную термометрию производили с помощью электронного термометра до введения раствора, спустя 2, 6 и 8 часов после введения. В случае раствора облученного пирогенала соответствующие величины составили 38,40,2o/39,40,4o/38,70,8o/38,40,8o, а в случае пирогенала - 38,70,7o/40,30,5o/39,60,2o/38,40,2o.

Формула изобретения

1. Способ устранения пирогенности пирогенала при сохранении иммуностимулирующей активности, предусматривающий физико-химическое воздействие на пирогенал, находящийся в водном растворе, отличающийся тем, что указанное воздействие осуществляют в виде гамма-облучения в дозе 35-45 или 115-125 кГр.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что начальную концентрацию пирогенала выбирают равной 10-100 мкг/мл.

3. Способ по любому из пп. 1 и 2, отличающийся тем, что гамма-облучение осуществляют в дозе 40 или 120 кГр.

4. Способ по любому из пп. 1-3, отличающийся тем, что гамма-облучению подвергают официнальный раствор пирогенала в ампуле.

5. Способ по любому из пп. 1-4, отличающийся тем, что в качестве источника гамма-излучения используют кобальт-60.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине и биотехнологии и может применяться в хирургии в качестве ранозаживляющего материала при лечении инфицированных и обычных ран, ожогов, гнойно-трофических язв, абсцессов в стоматологии
Изобретение относится к биотехнологии и может применяться в животноводстве

Изобретение относится к биотехнологии, ветеринарии, медицине и может быть использовано для профилактики и лечения инфекционных болезней рыб, животных и человека, вызываемых микроорганизмами
Изобретение относится к медицине, фармацевтической промышленности и касается способа получения пирогенала

Изобретение относится к области биотехнологии, медицины, ветеринарии и касается получения пробиотиков комплексного действия

Изобретение относится к области медицины и ветеринарии, а именно к фармакологии, в частности к пробиотикам, и может быть использовано при коррекции микробиоценоза организма человека (детей и взрослых) и животных

Изобретение относится к биотехнологии и медицинской ветеринарии, а именно к получению сухих лекарственных форм для перорального или интраназального применения, обладающих пробиотической, иммуномодулирующей и противовирусной активностью, и может быть использовано для неспецифической профилактики инфекционных заболеваний, связанных с нарушениями в иммунокомпетентных зонах кишечника и печени, способствующих вследствие этого развитию вторичных дисбактериозов птицы, находящейся в условиях промышленного птицеводства

Изобретение относится к медицине, в частности к венерологии, и касается лечения трихомониаза
Изобретение относится к медицине, а именно к ревматологии, и может быть использовано для лечения анкилозирующего спондилоартрита
Изобретение относится к медицине, фармацевтической промышленности и касается способа получения пирогенала
Изобретение относится к области медицины, в частности к абдоминальной хирургии

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к способу выделения биологически активной фракции (БАФ), содержащей преимущественно S-липополисахарид (ЛПС) из грамотрицательных бактерий, производящих эндотоксичные ЛПС, и может быть использовано в профилактических и лечебных целях
Изобретение относится к медицине, в частности к неврологии, и может быть использовано для лечения спастической диплегии при детских церебральных параличах
Изобретение относится к медицине, онкологии и может быть использовано при лечении поверхностных злокачественных новообразований кожи, резистентных к химиолучевому лечению или имеющих противопоказания к оперативному лечению

Изобретение относится к области биотехнологии и микробиологии и может быть использовано в медицине и фармацевтической промышленности

Изобретение относится к микробиологии и иммунологии

Группа изобретений относится к области фармакологии и медицины и касается иммуностимулирующей композиции и способов ее применения для усиления иммунного ответа, в частности для лечения инфекций, вызванных бактериальными и вирусными патогенами, к адъювантным композициям и способам усиления иммуногенности антигена при использовании в качестве адъюванта в составе вакцин. Фармацевтическая композиция на основе лигандов паттерн-распознающих рецепторов содержит мурамилпептид структурной формулы N-ацетилмурамил-L-аланил-D-изоглютамин и липополисахарид или липид А при следующем соотношении компонентов, масс.%: мурамилпептид структурной формулы N-ацетилмурамил-L-аланил-D-изоглютамин от 0,00001 до 0,01, липополисахарид или липид А - от 0,00001 до 0,01, растворитель - остальное. Группа изобретений обеспечивает высокую иммуностимулирующую активность и пролонгированность действия композиции. 3 н. и 4 з.п. ф-лы, 6 пр., 1 табл.. 9 ил.
Наверх