Питательная среда для выращивания родококков

 

Изобретение относится к микробиологии, медицине и ветеринарии, в частности к бактериологии микроорганизмов рода родококкус. Модифицированную среду Сотона обогащают дополнительным источником углерода и азота. В качестве пленкообразующего вещества и дополнительного источника углерода включают жидкий парафин (н-алканы с количеством атомов углерода в цепи от С.12 до С. 17). В качестве дополнительного источника азота - аммоний азотнокислый. Такое изменение среды позволило повысить как скорость роста, так и высеваемость родококков из проб объектов внешней среды и биоматериалов от людей и животных. 2 табл.

Изобретение относится к микробиологии, ветеринарии и может быть использовано в медицине, в частности для высевания проб объектов внешней среды, клинического и патологического материалов на выделение и выращивание родококков.

В практике бактериологических лабораторий для выделения и выращивания родококков используют различные по минеральному составу жидкие синтетические и агаризованные среды: Мюнца, нитритный агар по Виноградскому, Бушнелла - Хааса, Фрея и Хагана и т.д. (1). Все перечисленные среды мало отличаются по химическому составу, физическим свойствам и поэтому эффективность их использования практически одинаковая.

Известно, что родококки способны усваивать различные углеродистые субстраты, содержащие в цепи от С.9 до 0.23 атомов углерода Поэтому лучшие результаты были получены в случаях добавления в среду Мюнца и в нитритный агар по Виноградскому н-алканов (С.12-23). Имеются сообщения (2,3) о том, что на перечисленных средах с добавлением н-алканов значительно лучше выделяются большинство родококков из проб, взятых с объектов внешней среды (почва, вода, продукты растительного и животного происхождения и т.д.). Однако все они оказались мало эффективными для выделения родококков из клинического материала от больных людей и патологического материала, полученного от животных, что и является их недостатком.

Наиболее близким по технической сущности к заявляемому изобретению является среда Сотона, содержащая в качестве источника углерода глицерин, а в качестве источника азота - аммоний лимоннокислый двухзамещенный L-аспарагин, обычно используемый в микробиологии туберкулеза. Данная среда была модифицирована (4,5) дополнительным внесением в ее состав двухзамещенного лимоннокислого аммония, сернокислого цинка, а железо лимоннокислое аммиачное заменили сернокислым железом.

Состав среды прототипа, г/л: 1. L-аспарагин - 5,0 2. Лимонная кислота - 4,0 3. Аммоний лимоннокислый двухзамещенный - 2,0 4. Калий фосфорнокислый двухзамещенный - 5,0 5. Магний сернокислый - 0,5 6. Железо сернокислое - 0,05 7. Цинк сернокислый - 0,1 8. Глицерин - 50,0 9. Вода дистиллированная - До одного литра
Реакция (рН) среды доводится до 7,3-7,4 25%-ным раствором аммиака и автоклавируется при давлении один атм в течение 15 мин.

Недостатком данной среды является низкий процент высеваемости и малая скорость роста родококков из мокроты людей и патологического материала от животных.

Целью изобретения является повышение эффективности использования питательной среды для выделения и выращивания родококков за счет изменения химического состава и физических свойств среды.

Поставленная цель достигается тем, что в модифицированную среду Сотона в качестве дополнительного источника углерода вносится жидкий парафин с содержанием атомов углерода от С.12 до С.17 и в качестве источника азота - аммоний азотнокислый в следующих количествах, г/л:
1. L-аспарагин - 5,0
2. Лимонная кислота - 4,0
3. Аммоний лимоннокислый двухзамещенный - 2,0
4. Калий фосфорнокислый двухзамещенный - 5,0
5. Магний сернокислый - 0,5
6. Железо сернокислое - 0,05
7. Цинк сернокислый - 0,1
8. Глицерин - 50,0
9. Аммоний азотнокислый - 0,2
10. Вода дистиллированная - До одного литра
pH среды доводится до 7.3-7,4 25%-ным раствором аммиака
11. Н-алканы (жидкий парафин) - 20 мл
Среда автоклавируется при давлении один атм в течение 15 мин.

Сопоставительный анализ с прототипом позволяет сделать вывод что заявляемый состав среды отличается от известной введением новых компонентов, а именно - аммония азотнокислого и жидкого парафина с содержанием атомов углерода от С.12 до С.17.

Таким образом, заявляемое техническое решение соответствует критерии "новизна". Анализы известных составов сред, используемых для выделения и выращивания микробактерий и родококков, известны, например н-алканы. Однако их применение в средах Мюнца или в нитритном агаре по Виноградскому в сочетании с другими компонентами не обеспечивает средам такие свойства, которые они проявляет в заявляемом решении, а именно значительное обогащение азотом и углеродом жидкой среды с одновременным покрытием поверхности слоем жидкого парафина и, как следствие, - длительное сохранение стабильности концентрации растворенных компонентов (слой жидкого парафина препятствует испарению воды) в процессе термостатирования. Таким образом, данный состав компонентов придает среде новые свойства, что позволяет сделать вывод о соответствии заявляемого решения критерию "существенные отличия".

Для экспериментальной проверки заявляемого состава среды были подготовлены 5 серий в различных вариантах, отличающихся количественным содержанием добавляемых компонентов. Для приготовления среды заявляемого варианта расчетное количество каждого компонента (кроме н-алканов) растворяли в дистиллированной воде. После доведения рН до 7,3-7,4 25%-ным раствором аммиака по 300 мл отфильтрованной среды разливали по колбам емкостью один литр. Затем в каждую из них добавляли по 6 мл жидкого парафина и автоклавировали при давлении один атм в течение 15 мин. Готовые серии сред засевали лабораторными штаммами родококков разных видов (одномоментно, из одного разведения взвеси бакмассы). В таблице 1 представлены результаты исследований по определению скорости роста и количества бакмассы на средах различных вариантов.

Из таблицы 1 следует, что на предлагаемой среде ( 5) родококки лабораторных штаммов растут значительно быстрее и дают 2-3 раза больше бакмассы, чем на всех остальных вариантах сред.

Аналогичные результаты были получены при посевах 291 пробы, взятых из объектов внешней среды и биоматериалов. Эти результаты отражены в таблице 2.

Как видно из таблицы 2, на среде предлагаемого варианта были выделены от 7,9 до 23,4% больше родококков, чем на остальных.

Использование заявляемой среды в микробиологии, ветеринарии и медицине позволит:
- за короткое время получить обильную бакмассу;
- ускорить постановку диагноза;
- повысить высеваемость родококков;
- ускорить сроки термостатирования высеянных культур.

Источники информации
1. Квасников Е.Л., Клюшникова Т.М. Микроорганизмы - деструкторы нефти в водных бассейнах. Киев: Наук. думка, 1981, 131 с.

2. Нестеренко О. А., Касумова С.А., Квасников Е.И. Микроорганизмы рода Nocardia и группы "rhodochrous" в почвах Украинской ССР//Микробиология, 1978, 47, 5. с.866-870.

3. Теппер Е. 3. Микроорганизмы рода Nocarolia и разложение гумуса. М.: Наука, 1976, 198 с.

4. Василев В.Н. Микобактериозы и микозы легких. - София: Медицина и физкультура, 1971, 362 с.

5. Евглевский А.А., Шевелева А.Я. Материалы по изысканиям и производственному испытанию синтетической среды для культивирования микробактерий туберкулеза//Микробиологическая промышленность, 1972, 2 (об), с. 45-46.

Формула изобретения

Питательная среда для выращивания родококков, содержащая L-аспарагин, лимонную кислоту, аммоний лимоннокислый двухзамещенный, калий фосфорнокислый двухзамещенный, магний сернокислый, железо сернокислое, цинк сернокислый, глицерин и дистиллированную воду, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит н-алканы (С. 12 - С. 17) и аммоний азотнокислый с количественным составом ингредиентов: г на 1 л среды:
L-аспарагин - 5,0
Лимонная кислота - 4,0
Аммоний лимоннокислый двухзамещенный - 2,0
Калий фосфорнокислый двухзамещенный - 5,0
Магний сернокислый - 0,5
Железо сернокислое - 0,05
Цинк сернокислый - 0,1
Глицерин - 50,0
Аммоний азотнокислый - 0,2
Н-алканы (С. 12 - С. 17) - 20,0
Вода дистиллированная - До 1л

РИСУНКИ

Рисунок 1