Способ получения нативной споровой суспензии для приготовления сибиреязвенных вакцин

 

Изобретение относится к медицине, в частности к производству сибиреязвенных вакцин. Получение нативной споровой суспензии при глубинном аэробном культивировании вакцинных штаммов B. acillus anthracis осуществляют в два этапа: на первом этапе культивирование проводят при непрерывном перемешивании и аэрации воздухом, поддерживая температуру 30-34^oС. Когда завершается созревание спор, осуществляют переход на второй этап, повышая температуру до 35-38^oС, и периодически кратковременно перемешивают культуральную жидкость. Способ позволяет почти до 100% повысить содержание полноценных зрелых спор в культуральной жидкости, более точно определять время завершения процесса культивирования и примерно на два часа сократить его продолжительность. 2 з.п. ф-лы, 2 табл.

Изобретение относится к лекарственным препаратам, содержащим живые бактерии, в частности к производству сибиреязвенных вакцин, и может быть использовано в медицине и ветеринарии.

Известны способы получения нативной споровой суспензии (НСС) для приготовления живой сибиреязвенной вакцины при аэробном культивировании B. anthracis на плотных и жидком питательных средах /1-4/. Наиболее производительным способом получения НСС является глубинное аэробное культивирование некапсулирующих, непротеолитических и авирулентных штаммов B. anthracis.

Недостатком этого способа являются значительные различия в выходах полноценных нормально окрашиваемых по Цилю-Нильсену спор, из-за гетерогенности в развитии популяции к концу процесса глубинного культивирования - одновременное нахождение в культуральной жидкости (КЖ) вегетативных клеток, проспор, незрелых спор, спор и проросших спор. Причем процентное соотношение клеток и спор, находящихся на различных стадиях развития, относительно быстро изменяется и точно определить момент завершения процесса, когда в КЖ находится максимальное процентное содержание полноценных спор, не всегда удается.

Прототипом изобретения служит способ получения НСС /3/ при глубинном аэробном культивировании штамма В. anthracis с введением добавки КУКа в период завершения накопления вегетативной биомассы.

Недостатком этого способа является относительно низкий процентный выход полноценных зрелых спор в КЖ.

Заявляемое изобретение направлено на повышение производительности стадии культивирования за счет синхронизации развития популяции на завершающем этапе процесса культивирования и, как следствие, к увеличению в КЖ процентного содержания полноценных спор.

Поставленная цель достигается тем, что предложен способ получения нативной споровой суспензии при глубинном аэробном культивировании вакцинных штаммов В. anthracis, отличающийся тем, что для получения полноценных спор процесс выращивания культур необходимо осуществлять в два этапа: на первом этапе, когда последовательно идет прорастание спор, накопление вегетативной биомассы и ее переход в стадию спорообразования, культивирование проводят при непрерывном перемешивании и аэрации воздухом, поддерживая температуру нативной жидкости 30-34^oС, а на втором этапе, когда завершается созревание спор - в статике, повышая температуру культуральной жидкости до 35-38^oС, с периодическим кратковременным перемешиванием нативной жидкости.

При этом переход с первого этапа культивирования на второй осуществляется при образовании в культуре суммарно не менее (70±10)% проспор и спор.

Для поддержания в статике заданной температуры культивирования осуществляется перемешивание КЖ за счет периодического включения мешалки каждые 10-15 минут на 2-3 минуты.

Указанный способ позволяет почти до 100% повысить содержание полноценных зрелых спор в КЖ и примерно на два часа сократить продолжительность процесса культивирования.

Пример 1. Получение НСС для приготовления живой сибиреязвенной вакцины (существующий способ).

В качестве исходной культуры для получения НСС используют эталонный вакцинный, некапсулирующий, непротеолитический сибиреязвенный штамм СТИ-1. В стерильную питательную среду на основе 1%-ного солянокислотного гидролизата рыбной муки, кукурузного экстракта с добавлением солей вводится посевной материал в количестве (3-5)•10⁵ спор на 1 мл (один из вариантов). Процесс культивирования вакцинного штамма СТИ-1 ведут при температуре 32^oС, осуществляя постоянное перемешивание и аэрацию КЖ воздухом.

Динамика изменения цитоморфологических показателей в процессе культивирования штамма СТИ-1 при температуре 32^oС и постоянном перемешивании и аэрации КЖ воздухом (без статики) приведена в табл. 1.

Пример 2. Получение НСС дня приготовления живой сибиреязвенной вакцины (предлагаемый способ).

Начальные условия проведения процесса культивирования те же, что и в примере 1. Отличие заключается в том, что процесс культивирования осуществляется в два этапа - на первом при температуре 32^oС и постоянном перемешивании и аэрации КЖ, а на втором - в статике при температуре 37^оС.

Динамика изменения цитоморфологических показателей в процессе культивирования штамма СТИ-1 в два этапа - на первом при температуре 32^oС и постоянном перемешивании и аэрации КЖ, а на втором - в статике при температуре 37^oС приведена в табл. 2.

Как видно из данных, приведенных в табл. 1 и 2, предлагаемый способ получения НСС позволяет почти до 100% повысить содержание полноценных зрелых спор в КЖ, более точно определять время завершения процесса культивирования и сократить его продолжительность.

Полученная при культивировании вакцинного штамма СТИ-1 по предлагаемой технологии НСС концентрировалась, и из нее готовилась живая сибиреязвенная вакцина.

Все серии полученной вакцины удовлетворяли требованиям ГИСК им. Л.А. Тарасевича /1/.

Источники информации 1. Межреспубликанские технические условия на сибиреязвенную живую сухую вакцину для скарификационного применения (МРТУ-42 10), 1964.

2. Регламент производства сибиреязвенной живой вакцины СТИ для людей. Тбилисский НИИВС, 1958.

3. Патент 2142010. Способ глубинного культивирования сибиреязвенного вакцинного штамма СТИ-1. Заявка 97115505/13(016405) от 23.09.97 г.

4. Шенцев И.В., Шумилов Г.П., Садовой Н.В. и др. Стабильность основных свойств живой сибиреязвенной вакцины, полученной в жидких и на плотных питательных средах - ЖМЭИ, 1981, 7. - С. 113-114.

Формула изобретения

1. Способ получения нативной споровой суспензии при глубинном аэробном культивировании вакцинных штаммов Bacillus anthracis, отличающийся тем, что процесс культивирования осуществляют в два этапа: на первом этапе культивирование проводят при непрерывном перемешивании и аэрации воздухом, поддерживая температуру 30-34^oС, а когда завершается созревание спор, осуществляют переход на второй этап, при этом повышают температуру культуральной жидкости до 35-38^oС и периодически кратковременно перемешивают культуральную жидкость.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что переход с первого этапа культивирования на второй осуществляется при образовании в культуре суммарно не менее (70±10)% проспор и спор.

3. Способ по п.1, отличающийся тем, что на втором этапе перемешивание культуральной жидкости осуществляется за счет периодического включения мешалки каждые 10-15 мин на 2-3 мин.

РИСУНКИ

Рисунок 1