Модифицированная среда кесслер для обнаружения бактерий группы кишечной палочки

 

Изобретение относится к санитарной микробиологии. Среда для обнаружения бактерий группы кишечной палочки имеет следующий состав, г/л водопроводной воды: пептон ферментативный сухой 3,0-5,0, желчь крупного рогатого скота стерильная 50,0-55,0, лактоза 4,0-5,0, генцианвиолет 0,036-0,04, рН 7,5±1. Изобретение позволяет снизить стоимость питательной среды. 3 табл.

Изобретение относится к санитарной микробиологии и может быть использовано при санитарно-микробиологических исследованиях пищевых продуктов и смывов с объектов внешней среды для обнаружения бактерий группы кишечной палочки.

Известна жидкая селективная среда Кесслер для определения сбраживающей способности колиформных бактерий по образованию кислоты и газа (Методы Микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов. Методические указания МУК 4.2.577-96. Минзрав России. Москва, 1998 г., с.20, содержащая, г/л: Пептон ферментативный сухой - 10,0 Желчь крупного рогатого скота стерильная - 50,0 см³ Лактоза - 2,5 Вода водопроводная - 950,0 см³ 1% Водный раствор генцианвиолета (кристаллического фиолетового) - 4 см³ рН 7,5±1 В специальной литературе имеются сведения о том, что микроорганизмы, способные к персистенции во внешней среде, эффективно растут на средах со сниженным количеством пептона.

Библ. 15 США Univ. Maryland et Baltim. 666.

04 Биология Сводный Том 1995г.

Аналогичные данные получены авторами (см. табл. 1, 2, 3).

Нецелесообразность использования увеличенного до 1% количества дорогостоящего пептона в известной среде усугубляется посевом в среду исследуемых пищевых продуктов в соотношении 1:10, которые сами по себе являются дополнительным питательным субстратом для бактерий.

Целью изобретения является снижение стоимости питательной среды в 2-3 раза при равноценных ростовых качествах предложенной и известной среды.

Цель достигается при использовании среды, содержащей, г/л водопроводной воды: Пептон ферментативный сухой - 3,0-5,0 Желчь крупного рогатого скота стерильная - 50,0-55,0
Лактоза - 4,0-5,0
Генцианвиолет - 0,036-0,044
pН 7,5±1
Пример 1. Приготовление среды.

К 1 дм³ водопроводной воды добавляют пептон, желчь крупного рогатого скота. Смесь кипятят при помешивании на водяной бане 20-30 мин. Затем фильтруют через ватно-марлевый фильтр, добавляют лактозу, доводят объем водой до 1 дм³, устанавливают активную кислотность 7,5±1 ед pН, используя 1Н растворы NaOH или HCL и проверяя значение pН на потенциометре. Добавляют 4 см³ 1%-ного водного раствора генцианвиолета и разливают в требуемых объемах в пробирки или колбочки, закладывают поплавки, стерилизуют в течение (15±1) мин при (121±1)^oС.

Пример 2. Среда с минимальными значениями ингредиентов.

Среда имеет следующий состав, г/л водопроводной воды:
Пептон ферментативный сухой - 3,0
Желчь крупного рогатого скота стерильная - 50,0
Лактоза - 4,0
Генцианвиолет - 0,036
рН 7,5±1
Ростовые качества среды представлены в табл. 1, 2, 3.

Пример 3. Среда с оптимальными значениями ингредиентов, г/л водопроводной воды:
Пептон ферментативный сухой - 4,0
Желчь крупного рогатого скота стерильная - 52,5
Лактоза - 4,5
Генцианвиолет - 0,038 см³
рН 7,5±1
Ростовые качества среды представлены в табл. 1.

Пример 4. Среда с максимальными значениями ингредиентов.

Среда имеет следующий состав, г/л водопроводной воды:
Пептон ферментативный сухой - 5,0
Желчь крупного рогатого скота стерильная - 55,0
Лактоза - 5,0
Генцианвиолет - 0,04
рН 7,5±1
Ростовые качества среды представлены в табл. 1, 3.

Пример 5. Определение ростовых качеств среды методом серийных разведений.

Культуру E. coli 221 засевают в пробирку с 5 мл мясопептонного бульона. Через 4 ч инкубирования культуры при 37^oС по одной микробиологической петле бульонной культуры засеяли в пробирки с 10 мл среды Кесслер с лактозой, приготовленной из сухой коммерческой среды (ТОО "Квадра" ТУ 10.02.875-90) и предлагаемой средой с различными концентрациями пептона 1%; 0,5%; 0,4%; 0,3%; 0,2%.

Из каждой пробирки после инкубации посевов при 37^oС в течение суток производят ряд серийных разведений, начиная с 10^-1 до 10^-12. Для разведения используется среда Кесслер, приготовленная в соответствии с инструкцией из сухой среды. Все пробирки с разведениями инкубируют в течение суток при 37^oС и отмечают в конце срока помутнение и газообразование.

Из всех пробирок, включая оставшиеся прозрачными, производят высев на сектора чашек со средой Эндо.

На следующий день после инкубирования посевов при 37^oС производят учет наличия роста красных характерных колоний с металлическим блеском в соответствующих разведениях, определяя таким образом ростовые качества среды с определенным содержанием пептона.

Пример 6. Определение ростовых качеств среды методом дозированного посева.

Культуру Citrobacter freundii 227 засевают на скошенный мясопептонный агар, культивируют при 37^oС 18 ч. Используя стандарт мутности, готовят 1 млр. взвесь культуры в физиологическом растворе и производят ряд последовательных разведений в физиологическом растворе до концентрации 1000 микр. тел в 1 мл, 500 м.т.; 100 м.т.; 10 м.т. в 1 мл.

В пробирки с 10 мл предлагаемой среды с концентрацией пептона 1%; 0,5%; 0,4%; 0,3%; 0,2% и в 10 мл среды Кесслер с лактозой, приготовленной из сухой коммерческой среды, засевают по 1 мл каждого из приготовленных разведений бактериальной взвеси.

Посевы инкубируют при 37^oС в течение суток при 37^oС и учитывают рост в соответствующих секторах характерных темно-розовых колоний (см. табл. 3).

Формула изобретения

Модифицированная среда Кесслер для обнаружения бактерий группы кишечной палочки, содержащая пептон ферментативный сухой, желчь крупного рогатого скота стерильную, лактозу, генцианвиолет, водопроводную воду, отличающаяся тем, что она содержит вышеобозначенные компоненты при следующем соотношении, г/л водопроводной воды:
Пептон ферментативный сухой - 3,0 - 5,0
Желчь крупного рогатого скота стерильная - 50,0 - 55,0
Лактоза - 4,0 - 5,0
Генцианвиолет - 0,036 - 0,04
рН 7,5±1.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3