Полипептид антигена hcv (варианты), набор для иммуноанализа, способ иммуноанализа, полинуклеотид (варианты), полинуклеотидный зонд и содержащий его набор, способ обнаружения hсv, способ получения крови, не содержащей hcv (варианты)

 

Изобретение относится к области молекулярной биологии и иммунологии и может быть использовано в медицине, в частности, при диагностике гепатита С. Путем скрининга кДНК-библиотек выделены нуклеотидные последовательности, кодирующие полипептиды вируса гепатита С (HCV), которые обладают антигенными свойствами. Фрагменты изолированных последовательностей нуклеиновой кислоты, содержащие не менее 8 нуклеотидов, предложено использовать в качестве зондов для обнаружения полинуклеотидов HCV в биологическом материале, а также для получения образцов крови, не содержащих нуклеиновой кислоты вируса. Методом рекомбинантных ДНК получены антигенные полипептиды вируса гепатита С и их фрагменты, соответствующие антигенным детерминантам. Применение полученных антигенов HCV позволяет обнаруживать присутствие в биологических образцах антител против вируса гепатита С и отбирать образцы крови, не содержащие указанных антител. 13 с. и 11 з.п. ф-лы, 49 ил.

Текст описания в факсимильном виде (см. чертежи) Т

Формула изобретения

1. Существенно очищенный полипептид, представляющий собой антиген вируса гепатита С (HCV), причем указанный антиген содержит аминокислоты 1-450 последовательности, приведенной на фиг. 17, или фрагмент полипептида, который представляет собой эпитоп HCV, содержащий, по крайней мере, 10 последовательно расположенных аминокислот.

2. Полипептид по п. 1, содержащий аминокислоты, выбранные из группы: 1-50, 1-84, 9-177, 1-120, 35-45, 50-100, 40-90, 65-75, 80-90, 99-120, 95-110, 100-150, 150-200, 200-250, 220-240, 245-265, 250-300, 290-330, 290-305, 300-350, 310-330, 350-400 и 400-450.

3. Полипептид по п. 2, содержащий аминокислоты, выбранные из группы: 1-50, 1-84, 1-120, 35-45, 50-100, 40-90, 65-75, 80-90, 99-120, 95-110 и 100-150.

4. Полипептид по п. 1 или 2, отличающийся тем, что он дополнительно связан с твердым субстратом.

5. Существенно очищенный полипептид, представляющий собой антиген вируса гепатита С (HCV), причем указанный антиген содержит аминокислотную последовательность, приведенную на фиг. 11, или фрагмент полипептида, который представляет собой эпитоп HCV, содержащий, по крайней мере, 10 последовательно расположенных аминокислот.

6. Полипептид по п. 5, отличающийся тем, что он дополнительно связан с твердым субстратом.

7. Существенно очищенный полипептид, представляющий собой антиген вируса гепатита С (HCV), причем указанный антиген содержит аминокислоты 2887-2955 последовательности, приведенной на фиг. 17, или фрагмент полипептида, который представляет собой эпитоп HCV, содержащий, по крайней мере, 10 последовательно расположенных аминокислот.

8. Фрагмент полипептида по п. 7, содержащий аминокислоты, выбранные из группы: 2900-2950, 2910-2930 и 2925-2950.

9. Полипептид по п. 7 или 8, отличающийся тем, что он дополнительно связан с твердым субстратом.

10. Выделенный полипептид, содержащий эпитоп полипротеина вируса гепатита С (HCV), характеризующийся тем, что он содержит, по крайней мере, 10 последовательно расположенных аминокислот из области от аминокислоты 450 до аминокислоты 2850 последовательности, приведенной на фиг. 17, и выбран из группы: 450-500, 475-495, 500-550, 511-690, 515-550, 550-600, 550-625, 575-605, 600-650, 600-625, 635-665, 650-700, 645-680, 700-750, 700-725, 725-775, 770-790, 750-800, 800-815, 850-875, 800-850, 920-990, 850-900, 920-945, 940-965, 950-1000, 1000-1060, 1000-1050, 1025-1040, 1075-1175, 1050-1200, 1070-1100, 1100-1130, 1195-1250, 1200-1225, 1225-1250, 1250-1300, 1260-1310, 1260-1280, 1300-1350, 1310-1340, 1345-1405, 1350-1400, 1365-1380, 1380-1405, 1400-1450, 1450-1500, 1475-1515, 1475-1500, 1500-1550, 1515-1550, 1550-1600, 1570-1590, 1595-1610, 1590-1650, 1610-1645, 1650-1690, 1685-1770, 1690-1720, 1720-1745, 1745-1770, 1750-1800, 1775-1810, 1795-1850, 1850-1900, 1900-1950, 1900-1920, 1920-1940, 1949-2124, 1950-2000, 1950-1985, 2000-2050, 2020-2045, 2045-2100, 2045-2070, 2070-2100, 2100-2150, 2150-2200, 2200-2325, 2250-2330, 2265-2280, 2280-2290, 2300-2350, 2350-2400, 2345-2415, 2345-2375, 2348-2464, 2370-2410, 2400-2450, 2400-2425, 2415-2450, 2445-2500, 2371-2502, 2500-2550, 2505-2540, 2550-2600, 2560-2580, 2600-2650, 2620-2650, 2650-2700, 2655-2670, 2670-2700, 2700-2750, 2750-2800, 2755-2780, 2780-2830, 2785-2810, 2810-2825 и 2800-2850, причем указанный полипептид не является 1266-2124, 1472-1930, 1192-1457, 1569-1805, 1950-2124, 1266-1428, 2054-2223, 1472-1630, 1678-1805, 1569-1703, 1689-1805, 1022-1136, 1916-2020, 1793-1930, 1122-1214, 1403-1483, 1688-1735, 451-2886, 626-2886, 717-2486, 451-904, 1560-1934, 819-987, 2691-2841, 2506-2658, 946-1079, 2622-2754, 626-766, 717-847, 2371-2486, 2211-2307, 2348-2464, 2796-2886 или 2287-2384.

11. Полипептид по п. 10, отличающийся тем, что дополнительно связан с твердым субстратом.

12. Набор для иммуноанализа для обнаружения антител против HCV, содержащий полипептид или фрагмент полипептида, охарактеризованные в любом из пп. 1-11, в подходящем контейнере.

13. Способ иммуноанализа для обнаружения антител против вируса гепатита С (HCV), предусматривающий стадии инкубирования биологического образца, предположительно содержащего антитела против HCV, с полипептидом или фрагментом полипептида, охарактеризованными в любом из пп. 1-11, в условиях, позволяющих образовываться комплексу полипептид-антитело, с последующим обнаружением комплекса, присутствие которого свидетельствует о присутствии антител против HCV в данном образце.

14. Иммуноанализ по п. 13, отличающийся тем, что биологический образец является кровью, сывороткой или плазмой человека.

15. Полинуклеотид, кодирующий антиген вируса гепатита С (HCV), имеющий нуклеотидную последовательность, соответствующую геномной последовательности HCV или последовательности кДНК, и содержащий нуклеотиды от -319 до 1348 последовательности, приведенной на фиг. 17, или фрагмент полинуклеотида, содержащий, по крайней мере, 8 последовательно расположенных нуклеотидов.

16. Полинуклеотид по п. 15, который представляет собой ДНК.

17. Полинуклеотид, кодирующий антиген вируса гепатита С (HCV), имеющий нуклеотидную последовательность, соответствующую геномной последовательности HCV или последовательности кДНК, содержащий нуклеотиды от 8659 до 8866 последовательности, приведенной на фиг. 17, или фрагмент полинуклеотида, содержащий, по крайней мере, 8 последовательно расположенных нуклеотидов.

18. Полинуклеотид по п. 17, который представляет собой ДНК.

19. Полинуклеотидный зонд для обнаружения нуклеиновой кислоты HCV в образце, включающий 8 или более последовательно расположенных нуклеотидов последовательности, которая происходит из кДНК HCV и состоит из нуклеотидов от -319 до 1348 или от 8659 до 8866 последовательности, приведенной на фиг. 17.

20. Полинуклеотидный зонд по п. 19, являющийся меченым.

21. Набор для анализа образцов на предмет присутствия полинуклеотидов HCV, содержащий полинуклеотидный зонд по п. 19 или 20 и подходящий носитель.

22. Способ обнаружения нуклеиновой кислоты HCV в образце, предусматривающий взаимодействие полинуклеотидного зонда, охарактеризованного в п. 19 или 20, с образцом, в котором предположительно содержится нуклеиновая кислота HCV, с последующим обнаружением образованного таким образом полинуклеотидного дуплекса, присутствие которого свидетельствует о присутствии нуклеиновой кислоты HCV в данном образце.

23. Способ получения крови, не содержащей антитела против HCV, предусматривающий следующие стадии: получение образца крови, в которой предполагается присутствие антител против HCV; инкубирование указанного образца с полипептидами или фрагментами полипептидов, охарактеризованными в любом из пп. 1-11, в условиях, позволяющих образовываться комплексу полипептид/фрагмент полипептида-антитело против HCV; обнаружение образованных таким образом комплексов, присутствие которых свидетельствует о содержании антител против HCV в указанном образце; консервирование крови, в образце которой не был обнаружен комплекс полипептид/фрагмент полипептида-антитело против HCV.

24. Способ получения крови, не содержащей полинуклеотиды HCV, предусматривающий следующие стадии: получение образца крови, в которой предполагается присутствие полинуклеотидов HCV; инкубирование указанного образца с полинуклеотидным зондом, охарактеризованным в п. 19 или 20, в условиях, позволяющих образовываться полинуклеотидному дуплексу между указанным зондом и любыми полинуклеотидами HCV, присутствие которых предполагается в образце; обнаружение любого образованного таким образом полинуклеотидного дуплекса, присутствие которого свидетельствует о присутствии в указанном образце полинуклеотидов HCV; и консервирование крови, в образце которой не был обнаружен полинуклеотидный дуплекс между зондом и полинуклеотидами HCV, присутствие которых предполагалось в указанном образце.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6, Рисунок 7, Рисунок 8, Рисунок 9, Рисунок 10, Рисунок 11, Рисунок 12, Рисунок 13, Рисунок 14, Рисунок 15, Рисунок 16, Рисунок 17, Рисунок 18, Рисунок 19, Рисунок 20, Рисунок 21, Рисунок 22, Рисунок 23, Рисунок 24, Рисунок 25, Рисунок 26, Рисунок 27, Рисунок 28, Рисунок 29, Рисунок 30, Рисунок 31, Рисунок 32, Рисунок 33, Рисунок 34, Рисунок 35, Рисунок 36, Рисунок 37, Рисунок 38, Рисунок 39, Рисунок 40, Рисунок 41, Рисунок 42, Рисунок 43, Рисунок 44, Рисунок 45, Рисунок 46, Рисунок 47, Рисунок 48, Рисунок 49, Рисунок 50, Рисунок 51, Рисунок 52, Рисунок 53, Рисунок 54, Рисунок 55, Рисунок 56, Рисунок 57, Рисунок 58, Рисунок 59, Рисунок 60, Рисунок 61, Рисунок 62, Рисунок 63, Рисунок 64, Рисунок 65, Рисунок 66, Рисунок 67, Рисунок 68, Рисунок 69, Рисунок 70, Рисунок 71, Рисунок 72, Рисунок 73, Рисунок 74, Рисунок 75, Рисунок 76, Рисунок 77, Рисунок 78, Рисунок 79, Рисунок 80, Рисунок 81, Рисунок 82, Рисунок 83, Рисунок 84, Рисунок 85, Рисунок 86, Рисунок 87, Рисунок 88, Рисунок 89, Рисунок 90, Рисунок 91, Рисунок 92, Рисунок 93, Рисунок 94, Рисунок 95, Рисунок 96, Рисунок 97, Рисунок 98, Рисунок 99, Рисунок 100, Рисунок 101, Рисунок 102, Рисунок 103, Рисунок 104, Рисунок 105, Рисунок 106, Рисунок 107, Рисунок 108, Рисунок 109, Рисунок 110, Рисунок 111, Рисунок 112, Рисунок 113, Рисунок 114, Рисунок 115, Рисунок 116, Рисунок 117, Рисунок 118, Рисунок 119, Рисунок 120, Рисунок 121, Рисунок 122, Рисунок 123, Рисунок 124, Рисунок 125, Рисунок 126, Рисунок 127, Рисунок 128, Рисунок 129, Рисунок 130, Рисунок 131, Рисунок 132, Рисунок 133, Рисунок 134, Рисунок 135, Рисунок 136, Рисунок 137, Рисунок 138, Рисунок 139, Рисунок 140, Рисунок 141, Рисунок 142, Рисунок 143, Рисунок 144, Рисунок 145, Рисунок 146, Рисунок 147, Рисунок 148, Рисунок 149, Рисунок 150, Рисунок 151, Рисунок 152, Рисунок 153, Рисунок 154, Рисунок 155, Рисунок 156, Рисунок 157