Способ получения шикимовой кислоты (варианты), штамм бактерий bacillus subtilis - продуцент шикимовой кислоты (варианты)

 

Изобретение относится к биотехнологии. Выращивают штамм бактерии Bacillus subtilis, в которой снижена активность шикиматкиназы или в которой имеет место недостаток активности 5-енолпирувоилшикимат-3-фосфат синтазы. При этом указанная бактерия обладает продуктивностью по выработке шикимовой кислоты. Накапливают шикимовую кислоту в среде и выделяют шикимовую кислоту из среды. Штамм бактерии Bacillus subtilis IDЗ (ВКПМ В-7755) - продуцент шикимовой кислоты. Рекомбинантный штамм получают трансформацией данного штамма плазмидой, содержащей ген, кодирующий ((3-дезокси-D-арабино-гептулозоновая кислота)-7-фосфат)-синтазу, или снижением активности 5-енолпирувоилшикимат-3-фосфатсинтазы за счет мутации в гене aroE. Изобретение позволяет повысить продукцию шикимовой кислоты. 5 с. и 7 з.п. ф-лы, 11 ил., 9 табл.

Текст описания в факсимильном виде. Тм

Формула изобретения

1. Способ получения шикимовой кислоты, включающий в себя стадии выращивания бактерии Bacillus subtilis, в которой снижена активность шикиматкиназы и которая обладает способностью к продукции шикимовой кислоты, в питательной среде и выделения шикимовой кислоты из культуральной жидкости.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в клетке указанной бактерии увеличена активность шикиматдегидрогеназы.

3. Способ по п.2, отличающийся тем, что активность шикиматдегидрогеназы увеличена за счет увеличения числа копий гена, кодирующего шикиматдегидрогеназу, усовершенствования регулирующей экспрессию последовательности указанного гена или включения указанного гена в состав хромосомной ДНК бактерии.

4. Способ по п.3, отличающийся тем, что в состав хромосомной ДНК включен ген шикиматдегидрогеназы, в котором его нативный промотор замещен сильным промотором или к которому добавлен сильный промотор.

5. Способ по п.4, отличающийся тем, что в клетке указанного штамма бактерии также увеличена активность ((3-дезокси-D-арабино-гептулозоновая кислота)-7 фосфат)-синтазы.

6. Способ по п.5, отличающийся тем, что активность ((3-дезокси-D-арабино-гептулозоновая кислота)-7-фосфат)-синтазы увеличена за счет увеличения числа копий гена, кодирующего ((3-дезокси-D-арабино-гептулозоновая кислота)-7-фосфат)-синтазу, усовершенствования регулирующей экспрессию последовательности в составе указанного гена или включения указанного гена в состав хромосомной ДНК указанной бактерии.

7. Штамм бактерии Bacillus subtilis 1DЗ (ВКПМ В-7755) - продуцент шикимовой кислоты.

8. Штамм бактерии Bacillus subtilis ID3/pAAP6, трансформированный плазмидой, содержащей ген, кодирующий ((3-дезокси-D-арабино-гептулозоновая кислота)-7-фосфат)-синтазу, - продуцент шикимовой кислоты.

9. Способ получения шикимовой кислоты, включающий в себя стадии выращивания бактерии Bacillus subtilis, в которой снижена активность 5-енолпирувоилшикимат-3-фосфатсинтазы и который обладает способностью к продукции шикимовой кислоты, в питательной среде и выделения шикимовой кислоты из культуральной жидкости.

10. Способ по п. 9, отличающийся тем, что в клетке указанного штамма увеличена активность шикиматдегидрогеназы.

11. Способ по п.10, отличающийся тем, что активность шикиматдегидрогеназы увеличена за счет увеличения числа копий гена, кодирующего шикиматдегидрогеназу, усовершенствования регулирующей экспрессию последовательности указанного гена или включения указанного гена в состав хромосомной ДНК указанной бактерии.

12. Штамм бактерии, Bacillus subtilis DE 1, в котором активность 5-енолпирувоилшикимат-3-фосфатсинтазы снижена за счет мутации в гене aroE, - продуцент шикимовой кислоты.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6, Рисунок 7, Рисунок 8, Рисунок 9, Рисунок 10, Рисунок 11, Рисунок 12, Рисунок 13, Рисунок 14, Рисунок 15, Рисунок 16, Рисунок 17, Рисунок 18, Рисунок 19, Рисунок 20, Рисунок 21, Рисунок 22, Рисунок 23, Рисунок 24, Рисунок 25, Рисунок 26, Рисунок 27, Рисунок 28, Рисунок 29, Рисунок 30, Рисунок 31, Рисунок 32, Рисунок 33, Рисунок 34, Рисунок 35, Рисунок 36, Рисунок 37, Рисунок 38, Рисунок 39, Рисунок 40, Рисунок 41, Рисунок 42, Рисунок 43, Рисунок 44, Рисунок 45, Рисунок 46, Рисунок 47, Рисунок 48