Способ прогнозирования отторжения роговичного трансплантата после кератопластики по поводу ожоговых бельм

 

Изобретение относится к области медицины, в частности к глазным болезням. Способ обеспечивает высокую степень достоверности прогнозирования отторжения роговичного трансплантанта у больных, перенесших кератопластику по поводу ожоговых бельм. Определяют в сыворотке крови и/или слезной жидкости содержание интерлейкина-1-бета (ИЛ-1β) и при его обнаружении в пред- или раннем послеоперационном периоде прогнозируют отторжение трансплантата. Причем ИЛ-1β определяют с помощью иммуноферментного анализа. 1 з.п. ф-лы.

Изобретение относится к области медицины - офтальмологии и предназначено для предоперационной и ранней послеоперационной (14-й 28-й день) диагностики развития отторжения трансплантата у больных, перенесших сквозную или послойную кератопластику по поводу ожоговых бельм, что позволяет корригировать консервативное лечение.

Известно, что решающую роль для достижения успеха при пересадке аллоген-ных органов и тканей (в том числе роговицы) играет совместимость по генам HLA II класса (особенно DR), а также HLA-B антигенам I класса и обязательная иммуносупрессия. Показано, что при полной совместимости по генам DR и В и применении после операции адекватной иммуносупрессивной терапии (оптимальным средством признан циклоспорин А) приживление кадаверной роговицы в течение года наблюдается в 90% случаев. Однако такой оптимальный подход к трансплантации роговицы не гарантирует полного успеха и, кроме того, оказывается возможным далеко не всегда (в том числе по экономическим причинам). Одной из наиболее трудных задач является хирургическое лечение грубых васкуляризированных бельм 3-5 категории, образующихся в результате ожогов. В 18-79% таких случаев кератопластика заканчивается помутнением или отторжением трансплантата. Поэтому особую актуальность приобретают методы предоперационного прогнозирования риска отторжения трансплантата и послеоперационного мониторинга.

Для прогнозирования исходов оптической и реконструктивной кератопластики, в том числе и развития реакции отторжения трансплантата, известен способ, основанный на динамическом исследовании относительных уровней общей популяции (CD3) и субпопуляций Т-лимфоцитов крови (CD4, CD8) (Тазетдинова Н. Р. и др. Тезисы докладов школы-симпозиума "Восстановительная хирургия при повреждениях органа зрения". Москва-Телави, 1986, с. 10-12.). Данный способ принят за ближайший аналог. Авторами установлено, что прогрессирующее увеличение уровня Т-хелперов и уменьшение Т-супрессоров с повышением иммунорегуляторного индекса CD4/CD8 до операции, на 14-е и 30-е сутки после нее является неблагоприятным прогностическим фактором приживления трансплантата, в том числе и развития реакции отторжения.

Однако этот способ весьма трудоемок и дорог. Исследования проводят лишь с использованием метода цитометрии или иммунофлюоресценции с применением моно-клональных антител к CD-маркерам и требует дорогостоящего оборудования, что затрудняет его применение.

В последние годы в зарубежной и отечественной литературе активно обсуждается роль интерлейкинов в патологических процессах. Доказано, что интерлейкины принимают непосредственное или опосредованное участие в подавляющем большинстве процессов организма, являясь при этом важнейшими медиаторами межклеточного взаимодействия. Ранее проведенные собственные исследования ИЛ-β при ожоговой болезни глаз, проникающих ранениях, контузионной травме, диабетической ретинопатии показали важнейшую роль этого цитокина в глазной патологии (Макаров П.В. "Метод местной иммунокоррекции аутолимфокинотерапия в комплексном лечении проникающих ранений глаза" дисс. к.м.н., Москва, 1995 г., Слепова О.С. и др. "Иммунодиагностика при свежих ожогах глаз и их осложнениях". Методические рекомендации. Москва, 1999 г.). По мнению многих авторов, ИЛ-1β является главным медиатором, определяющим иммуный ответ (Козлов А. А. и др. "Участие ИЛ-1β в развитии Тн-1 и Тн-2 зависимых вариантов хронической реакции трансплантат против хозяина". Бюлл. ЭБиМ, N8, стр. 18.).

Полученные результаты позволили нам предположить определяющее значение ИЛ-1β и в развитии реакции отторжения роговичного трансплантата.

Способов прогнозирования реакции отторжения аллогенного трансплантата в общей трансплантологии и в глазной хирургии по результатам исследования сыворотки крови на содержание интерлейкинов в специальной литературе нами не найдено.

Предлагаемый способ, основанный на исследовании цитокинов, проводится с помощью иммуноферментного анализа на многоканальном спектрофотометре типа "Мультискан". Он требует значительно меньших трудозатрат и времени. Для его осуществления достаточно коммерческих тест-систем. Следует также учитывать, что цитокины, в частности ИЛ-1β, являются первым звеном в запуске иммунного ответа, в том числе аутоиммунных реакций, косвенным показателем которых является повышение индекса иммунорегуляции.

Обоснованием для предлагаемого способа служат результаты клинико-иммунологического мониторинга, которые выявили существенные различия между группами больных с отторжением роговичного трансплантата (наблюдалось 20 больных, 20 глаз) и с прозрачным его приживлением (наблюдалось 15 больных, 15 глаз) при исследовании ИЛ-1β в сыворотке крови и/или слезной жидкости.

Ретроспективный анализ показал, что подъем уровня ИЛ-1β в сыворотке (более 30 пкг/мл) и/или обнаружение его в слезной жидкости в пред- и особенно в послеоперационном периоде (с 14-го по 28-й день включительно) является высокоинформативным прогностическим признаком отторжения трансплантата, независимо от вида операции (послойная или сквозная кератопластика). Прозрачные трансплантаты у таких больных практически не наблюдались, тогда как при отсутствии ИЛ-1β в сыворотке и слезе (при чувствительности теста 20 пкг/мл) успешный исход кератопластики достигался у 51,3% пациентов (p<0,01).

в сыворотке крови и/или слезе повышало риск неблагоприятных исходов почти вдвое, в том числе отторжения трансплантата втрое (с 23,5% при отсутствии ИЛ-1β до 60% при его наличии). В послеоперационном периоде накопление ИЛ-1β в сыворотке крови и/или слезной жидкости в период с 14-го по 28-й день ассоциировалось со 100% отторжением трансплантата.

Способ осуществляют следующим образом.

Взятие слезной жидкости осуществляют общепринятым способом, без предварительной анестезии и без стимуляции. Пробы хранят при температуре -20^oС (или ниже).

Взятие крови из кубитальной вены осуществляют общепринятым способом.

Концентрацию ИЛ-1β исследуют с помощью иммуноферментного анализа, используют коммерческие тест-системы (согласно рекомендациям производителей). Учет реакции проводят на многоканальном спектрофотометре типа "Мультискан". При обнаружении в сыворотке крови и/или слезной жидкости ИЛ-1β в пред- или раннем послеоперационном периоде (с 14-го по 28-й день после операции) прогнозируют отторжение трансплантата.

Примеры выполнения способа.

Пример 1. Больной М., 24 года, перенес термохимичесикй ожог 3-4 степени конъюнктивы и роговицы правого глаза при взрыве кипятильника. Поступил через 2 года после ожога с васкуляризированным бельмом роговицы 4-й степени на операцию послойную кератопластику. При исследовании сыворотки крови на 14 сутки после операции уровень ИЛ-1β в сыворотке составил 100 пкг/мл. При выписке из стационара трансплантат прозрачный. Через 2 месяца после операции больной поступил вновь с отторжением трансплантата и перфорацией роговицы. Произведена повторная тотальная кератопластика. Таким образом, результаты исследования сыворотки крови, проведенные на 14-е сутки после операции, свидетельствовали о риске отторжения трансплантата за 1 месяц до его возникновения.

Пример 2. Больной О., 56 лет, перенес термохимический ожог 3-ей степени конъюнктивы и роговицы обоих глаз раствором цемента. Поступил через 3 года после ожога с васкуляризированным бельмом 3 категории, оперированным симблефароном на правом глазу и васкуляризированным бельмом 4 категории на левом. До операции в сыворотке крови и слезной жидкости выявлен ИЛ-1β в концентрации 98 и 30 пкг/мл соответственно. Произведена частичная сквозная кератопластика на OD. При выписке трансплантат полупрозрачный. Через 2,5 месяца после операции больной поступил с отторжением и расплавлением трансплантата, угрозой выпадения оболочек.

Пример 3. Больной К., 50 лет, перенес химический ожог 3 степени правого глаза. Поступил через 1.5 года после травмы для послойной кератопластики. В предоперационном и раннем послеоперационном периоде в сыворотке крови и слезной жидкости ИЛ-1β не обнаружено. Выписан через 10 дней с прозрачным приживлением роговичного трансплантата. При динамическом наблюдении в течение года транспланат остается прозрачным.

Всего предлагаемым методом обследовано 35 пациента (35 глаз).

Основным преимуществом предлагаемого метода является возможность по одному показателю сыворотки крови и/или слезной жидкости в предоперационном или в раннем послеоперационном периоде (14-28 сутки после операции) с высокой степенью достоверности прогнозировать отторжение роговичного трансплантата. Это позволяет своевременно определить тактику лечения, направленного на предупреждение тяжелого послеоперационного осложнения отторжения роговичного трансплантата.

Формула изобретения

1. Способ прогнозирования отторжения роговичного трансплантата у больных, перенесших кератопластику по поводу ожоговых бельм, отличающийся тем, что в сыворотке крови и/или слезной жидкости определяют содержание интерлейкина-1-бета (ИЛ-1β) и при его обнаружении в пред- или раннем послеоперационном периоде прогнозируют отторжение трансплантата.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что ИЛ-1β определяют с помощью иммуноферментного анализа.