Способ прогнозирования течения миелодиспластического синдрома

 

Изобретение относится к области медицины, в частности к гематологии. Способ обеспечивает ускорение и повышение точности прогнозирования течения миелодиспластического синдрома до начала лечения заболевания. Проводят спектрофотометрическое исследование мочи, при этом до начала лечения в моче больного определяют содержание путресцина и при значении этого показателя менее 3,12 мкмоль/ммоль креатинина прогнозируют относительно благоприятное течение, а при значении более 4,84 мкмоль/ммоль креатинина - неблагоприятное течение заболевания.

Изобретение относится к медицине, в частности к гематологии, и может быть использовано для прогнозирования течения миелодиспластического синдрома.

Миелодиспластический синдром (МДС) представляет собой гетерогенную группу клональных прогрессирующих заболеваний системы крови с высоким риском трансформации в острый лейкоз (ОЛ). На основании клинико-морфологических критериев, согласно франко-американо-британской классификации (Bennet J.M. et al Proposals for the classification of myelodysplastic syndromes /Brit. J. Haemat. - 1982. - Vol. 51.- P. 189-199), диагностируют пять форм МДС - рефракторную анемию (РА), РА с кольцевидными сидеробластами (РАС), РА с избытком бластов (РАИБ), РА с избытком бластов в трансформации (РАИБТ) и хронический миеломоноцитарный лейкоз (ХММЛ).

В настоящее время для прогнозирования течения различных вариантов МДС применяются в основном клинические, морфо-гистологические и цитогенетические критерии (Bennet J.M. Meeting highlights: therapeutic strategies and supportiv care in myelodysplastic syndromes: yesterday, today and tomorrow /Leuk. Res. - 1998. - May;22 Suppl 1:S1-2), на основании которых выделяют относительно благоприятные (РА и РАС) и неблагоприятные (РАИБ и РАИБТ) формы МДС. Одним из недостатков данного способа является отсутствие информативных критериев прогнозирования течения каждой конкретной нозологической формы МДС и особенно РАИБ и РАИБТ.

Известно, что определение биохимических маркеров клеточной пролиферации полиаминов (ПА): спермина, спермидина и путресцина, позволяет использовать их для ранней оценки прогноза течения ОЛ (Минаков В.Н. и соавт. Биохимические и цитохимические критерии прогнозирования течения острого лимфобластного лейкоза у детей /Гематол. и трансфузиол.-1991- 10- С. 9-10).

Наиболее легкий из ПА - путресцин (м.м.-88,15) характеризует инициализацию пролиферативных процессов. Установлена взаимосвязь общего уровня ПА мочи и течения ОЛ, известная из АС СССР 1543997 от 03.08.87. кл. G 01 N 33/48. Недостатком способа по приведенному АС является использование для прогнозирования течения ОЛ общего уровня ПА мочи, а не отдельных фракций ПА.

Нами впервые изучено содержание путресцина в моче больных различными вариантами МДС. Полученные в результате исследования данные послужили основанием к подаче заявки на предполагаемое изобретение.

Цель изобретения - ускорение и повышение точности прогнозирования течения миелодиспластического синдрома до начала лечения заболевания.

Поставленная цель достигается следующим образом: в моче больного до начала лечения определяют уровень путресцина. Для этого 3 мл мочи пациента, профильтрованной через бумажный фильтр, помещают в ампулу с равным объемом 6 н. НСl, запаивают и выдерживают в сушильном шкафу при постоянной температуре 110^oС в течение 3 ч. Затем остывшую ампулу вскрывают, содержимое переливают в стеклянный бюкс, доводят рН мочи до 9.8 раствором едкого натра, добавляют 2 г солевой смеси (62,5 г Na₂SO₄ и 9 г Na₃PO₄) и 5 мл н-бутилового спирта. Бюкс закрывают и ставят на шюттель-аппарат для встряхивания в течение 2 ч, после чего содержимое бюкса переливают в пробирку и центрифугируют 20 мин при 3000 об/мин. Бутаноловую фракцию отсасывают с помощью шприца и переносят в фарфоровую чашку, добавляют 2 капли 6 н. НСl и выпаривают на водяной бане. Сухой остаток растворяют в 0,2 мл 0,1 н. НСl, 20 мкл этого раствора наносят на полоску хроматогрофической бумаги, помещенной в прибор для электрофореза. Электрофорез проводят в лимоннокислом буфере (рН 3,6) при напряжении 480 В и силе тока 50 мА в течение 45 мин. Высушенные в течение 30 мин при 70^oС фореграммы орошают нингидриновым красителем (100 мг ацетата кадмия растворяют в 10 мл дистиллированной воды, добавляют 100 мл ацетона, 1 г нингидрина, 5 мг концентрированной уксусной кислоты), вновь высушивают. Полиамины (в том числе и путресцин) обнаруживают в виде розовато-фиолетовых пятен, которые вырезают и помещают в химические пробирки, которые заливаются 5 мл элюирующего раствора (500 мг ацетата кадмия растворяют в 25 мл дистиллированной воды, добавляют 100 мл этилового спирта и 125 мл концентрированной уксусной кислоты). После выдерживания в течение 45 мин в темноте измеряют величину поглощения растворов на спектрофотометре при длине волны 505 нм или ФЭКе при зеленом фильтре. Содержание путресцина рассчитывают по калибровочной кривой, построенной с использованием стандартного путресцина. Расчеты производят по формулам: где Кр - количество кретинина в ммоль; Eoп - экстинция опытной пробы; Ест - экстинция стандарта креатинина; 113 - молекулярная масса креатинина где а - количество путресцина в моче, определенное по калибровочной кривой; V - объем мочи; Кр - содержание креатинина;
11,3 - коэффициент путресцина.

На основании проведенных исследований установлено, что уровень путресцина в моче пациента с МДС является критерием для определения прогноза течения миелодиспластического синдрома: при содержании путресцина в моче менее 3,12 мкмоль/ммоль креатинина определяют относительно благоприятное течение заболевания, а при значении более 4,84 мкмоль/ммоль креатинина - неблагоприятное.

Пример 1. Больной М., 67 лет, наблюдался в гематологической клинике с 26.04.95. На основании комплексного обследования установлен диагноз: миелодиспластический синдром, рефракторная анемия с избытком бластов.

При поступлении состояние больного средней степени тяжести. Умеренная бледность кожи и слизистых. Субфебрильная гипертермия, слабость, утомляемость. В анализе крови: Нb - 67 г/л, Эр. - 2,2 х 10¹²/л, Лек. - 5,8 x 10⁹/л, мбл - 1%, м - 1%, м/м - 1%, п/я - 5%, с/я - 61%, лф - 30%, мон - 1%, тромб. - 200 х 10⁹/л, СОЭ - 60 мм/ч. В миелограмме повышено содержание миелобластов до 7,6%. Уровень путресцина в моче составил 2,76 мкмоль/ммоль креатинина, что позволяет прогнозировать относительно благоприятное течение заболевания. Проведена монохимиотерапия 6-меркаптопурином, после которой получена полная клинико-гематологическая ремиссия. На длительной поддерживающей терапии тем же препаратом продолжительность жизни больного составила 42 месяца.

Пример 2. Больная Е., 73 лет, наблюдалась в гематологической клинике с 15.03.99. На основании комплексного обследования установлен диагноз: миелодиспластические синдром, рефракторная анемия с избытком бластов.

При поступлении состояние больной средней степени тяжести Бледность кожи и слизистых. Субфебрильная гипертермия, слабость, утомляемость. В анализе крови: Нb - 68 г/л, Эр. - 2,5 х 10¹²/л, Лек. - 6,0 х 10⁹/л, м - 3%, м/м - 2%, п/я - 4%, с/я - 38%, лф - 28%, мон - 15%, тромб. - 120 x 10⁹/л, СОЭ - 80 мм/ч. В миелограмме повышено содержание миелобластов до 15,8%. Уровень путресцина в моче составил - 13,2 мкмоль/ммоль креатинина, что позволило прогнозировать неблагоприятное течение заболевания. На фоне монохимиотерапии 6-меркаптопурином заболевание продолжало прогрессировать - нарастал процент миелобластов в периферической крови и костном мозге и увеличивалась зависимость от гемотрансфузий. Несмотря на последующую смену химиотерапии больная умерла через 4,5 месяца после дебюта заболевания.

Формула изобретения

Способ прогнозирования течения миелодиспластического синдрома, включающий спектрофотометрическое исследование мочи, отличающийся тем, что до начала лечения в моче больного определяют содержание путресцина и при значении этого показателя менее 3,12 мкмоль/ммоль креатинина прогнозируют относительно благоприятное течение, а при значении более 4,84 мкмоль/ммоль креатинина - неблагоприятное течение заболевания.