Актин-резистентный вариант днказы i (варианты), выделенная нуклеиновая кислота, способ снижения вязкоупругости или вязкой консистентности мокроты пациента

 

Изобретение относится к биотехнологии и медицине и может быть использовано для получения варианта ДНКазы I человека, имеющей уменьшенное сродство связывания в отношении актина. Аминокислотные замены по одному из положений: His44, Leu45, Val48, Gly49, Leu52, Asp53, Asn56, His64, Tyr65, Val66, Val67, Ser68, Glu69 или Ala114 в последовательности аминокислот, на 90% идентичной таковой ДНКазы I человека, обеспечивают получение ДНКазы I, обладающей гидролитической активностью, но связывающей актин с меньшим сродством, чем нативная ДНКаза человека; с помощью нуклеотидной последовательности, кодирующей актин-резистентный вариант, получают эти варианты в количестве, достаточном для терапевтического применения. Изобретение позволяет разрабатывать актин-резистентный вариант ДНКазы I и использовать его для снижения вязкоупругости или вязкой консистенции мокроты пациента. 4 с. и 9 з.п. ф-лы, 7 ил.

Текст описания в факсимильном виде (см. графическую часть).

Формула изобретения

1. Актин-резистентный вариант ДНКазы I, где указанный вариант обладает, по крайней мере, 90%-ной идентичностью с аминокислотной последовательностью, представленной на фигуре 1, и содержит, по крайней мере, одну аминокислотную замену по одному из следующих положений: His44, Leu45, Val48, Gly49, Leu52, Asp53, Asn56, His64, Tyr65, Val66, Val67, Ser68, Glu69 или Ala114.

2. Вариант по п. 1, обладающий, по крайней мере, 95%-ной идентичностью с аминокислотной последовательностью, представленной на фигуре 1, и содержащей, по крайней мере, одну аминокислотную замену по одному из следующих положений: His44, Leu45, Val48, Gly49, Leu52, Asp53, Asn56, His64, Tyr65, Val66, Val67, Ser68, Glu69 или Ala114.

3. Вариант по п. 1, обладающий аминокислотной последовательностью, представленной на фигуре 1, и содержащий, по крайней мере, одну аминокислотную замену по одному из следующих положений: His44, Leu45, Val48, Gly49, Leu52, Asp53, Asn56, His64, Tyr65, Val66, Val67, Ser68, Glu69 или Ala114.

4. Вариант по п. 3, обладающий аминокислотной последовательностью, представленной на фигуре 1, и содержащий только одну аминокислотную замену по одному из следующих положений: His44, Leu45, Val48, Gly49, Leu52, Asp53, Asn56, His64, Tyr65, Val66, Val67, Ser68, Glu69 или Ala114.

5. Вариант по п. 3, обладающий аминокислотной последовательностью, представленной на фигуре 1, и содержащий аминокислотные замены по двум или более следующим положениям: His44, Leu45, Val48, Gly49, Leu52, Asp53, Asn56, His64, Tyr65, Val66, Val67, Ser68, Glu69 или Ala114.

6. Вариант по п. 4, где аминокислотная замена создает сайт гликозилирования в указанном варианте, который отсутствует в нативной человеческой ДНКазе I.

7. Вариант по п. 5, где аминокислотная замена создает сайт гликозилирования в указанном варианте, который отсутствует в нативной человеческой ДНКазе I.

8. Вариант по п. 1, обладающий аминокислотной последовательностью, представленной на фигуре 1, и содержащий, по крайней мере, одну из следующих аминокислотных замен: D53R, D53K, D53Y, D53A, Y65A, Y65E, Y65R, V67E, V67K или E69R.

9. Вариант по п. 1, обладающий аминокислотной последовательностью, представленной на фигуре 1, и содержащий аминокислотные замены, выбранные из группы, состоящей из: D53R, Y65A, Н44А, E69R, H44A: D53R: Y65A, H44A: Y65A: E69R, D53R: Y65A, D53R: E69R и V67K.

10. Актин-резистентный вариант ДНКазы I человека, где указанный вариант обладает, по крайней мере, 90%-ной идентичностью с аминокислотной последовательностью, представленной на фигуре 1, и содержит, по крайней мере, одну из следующих аминокислотных замен, выбранных из группы, состоящей из Е13А, Е13Н, E13R, E13W, E13Y, Н44А, H44D, H44Y, H44W, Н44С, H44Q, H44N, Н44Е, L45C, L45K, L45R, V48C, V48K, V48R, G49C, G49I, G49K, G49R, G49Y, L52C, L52K, L52M, L52N, L52R, D53A, D53K, D53R, D53Y, D53C, D53L, D53M, N56C, N56F, N56K, N56R, N56W, D58T, H64N, Y65A, Y65R, Y65W, Y65C, Y65K, Y65M, Y65S, Y65N, Y65E, Y65P, V66T, V66N, V67A, V67E, V67K, V67C, V67D, V67H, V67M, V67P, V67R, V67S, V67T, V67N, S68K, S68R, S68M, S68N, Е69К, E69R, Е69А, Е69С, Е69М, Е69Т, Р70Т, S94N, Y96T, Al14C, Al14E, Al14G, Al14H, Al14K, Al14L, Al14M, Al14Q, A114R, A114W и A114Y.

11. Выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая актин-резистентный вариант человеческой ДНКазы I, имеющая нуклеотидную последовательность, соответствующую аминокислотной последовательности актин-резистентного варианта ДНКазы I по п. 1.

12. Способ снижения вязкоупругости или вязкой консистентности мокроты пациента, имеющего легочное заболевание или расстройство, включающий введение в его организм эффективного количества актин-резистентного варианта ДНКазы I по любому из пп. 1-9.

13. Способ по п. 12, в котором легочное заболевание или расстройство выбрано из группы, включающей муковисцидоз, хронический бронхит, пневмонию, бронхоэктаз и астматический бронхит.

Приоритет по пунктам: 24.02.1995 по пп. 8,9; 21.02.1996 по остальным пунктам.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6, Рисунок 7, Рисунок 8, Рисунок 9, Рисунок 10, Рисунок 11, Рисунок 12, Рисунок 13, Рисунок 14, Рисунок 15, Рисунок 16, Рисунок 17, Рисунок 18, Рисунок 19, Рисунок 20, Рисунок 21, Рисунок 22, Рисунок 23, Рисунок 24, Рисунок 25, Рисунок 26, Рисунок 27, Рисунок 28, Рисунок 29, Рисунок 30, Рисунок 31, Рисунок 32, Рисунок 33, Рисунок 34, Рисунок 35, Рисунок 36, Рисунок 37, Рисунок 38, Рисунок 39, Рисунок 40, Рисунок 41, Рисунок 42, Рисунок 43, Рисунок 44, Рисунок 45, Рисунок 46, Рисунок 47, Рисунок 48, Рисунок 49, Рисунок 50, Рисунок 51, Рисунок 52, Рисунок 53, Рисунок 54, Рисунок 55, Рисунок 56, Рисунок 57, Рисунок 58, Рисунок 59, Рисунок 60, Рисунок 61, Рисунок 62, Рисунок 63, Рисунок 64, Рисунок 65, Рисунок 66, Рисунок 67, Рисунок 68, Рисунок 69, Рисунок 70, Рисунок 71, Рисунок 72, Рисунок 73, Рисунок 74, Рисунок 75, Рисунок 76, Рисунок 77, Рисунок 78, Рисунок 79, Рисунок 80, Рисунок 81, Рисунок 82, Рисунок 83, Рисунок 84, Рисунок 85, Рисунок 86, Рисунок 87, Рисунок 88, Рисунок 89, Рисунок 90, Рисунок 91, Рисунок 92, Рисунок 93, Рисунок 94, Рисунок 95, Рисунок 96, Рисунок 97, Рисунок 98, Рисунок 99, Рисунок 100, Рисунок 101, Рисунок 102, Рисунок 103, Рисунок 104, Рисунок 105, Рисунок 106, Рисунок 107, Рисунок 108, Рисунок 109, Рисунок 110, Рисунок 111, Рисунок 112, Рисунок 113, Рисунок 114, Рисунок 115, Рисунок 116, Рисунок 117, Рисунок 118, Рисунок 119, Рисунок 120, Рисунок 121, Рисунок 122, Рисунок 123, Рисунок 124, Рисунок 125, Рисунок 126, Рисунок 127, Рисунок 128, Рисунок 129, Рисунок 130, Рисунок 131, Рисунок 132, Рисунок 133, Рисунок 134, Рисунок 135, Рисунок 136, Рисунок 137, Рисунок 138, Рисунок 139, Рисунок 140, Рисунок 141, Рисунок 142, Рисунок 143, Рисунок 144, Рисунок 145, Рисунок 146, Рисунок 147, Рисунок 148, Рисунок 149, Рисунок 150, Рисунок 151, Рисунок 152, Рисунок 153, Рисунок 154, Рисунок 155, Рисунок 156, Рисунок 157, Рисунок 158, Рисунок 159, Рисунок 160, Рисунок 161, Рисунок 162, Рисунок 163, Рисунок 164, Рисунок 165, Рисунок 166, Рисунок 167