Способ определения утилизации глюкозы тканями

 

Изобретение относится к области медицины, в частности к лабораторной диагностике. Способ обеспечивает универсальность определения утилизации глюкозы в любой ткани. Проводят определение скорости убыли глюкозы, при этом на предварительно простерилизованный сухим жаром при 120-140^oС тест-носитель наносят 0,02 мл 8%-ного раствора глюкозы, помещают тест-носитель глюкозы (ТНГ) в верхнюю губо-десневую складку после 4-кратной очистки ее языком, после 10-минутной экспозиции бумажную часть ТНГ погружают в пробирку с 1,0 мл дистиллированной воды, постоянно встряхивая ее, в образовавшемся через 10 минут водном растворе глюкозы определяют ее концентрацию и по величине убыли глюкозы в сравнении с исходным количеством определяют коэффициент поглощения глюкозы тканями. 1 табл.

Изобретение относится к области медицины, а именно к выявлению предрасположенности к сахарному диабету, его скрытого течения, а также других нарушений углеводного обмена.

Известно, что нарушение способности тканей использовать глюкозу лежит в основе ряда заболеваний, в частности сахарного диабета. О способности тканей утилизировать глюкозу судят по косвенным показателям: по разнице содержания глюкозы в крови, притекающей к органу и оттекающей от него, по скорости снижения гликемии после углеводной нагрузки и после введения инсулина, по количеству глюкозы в моче с углеводной нагрузкой и без нее.

Указанные способы трудоемки, их сложно адаптировать для массовых обследований. Способов непосредственного измерения утилизации глюкозы тканями, пригодных для широкого внедрения в медицинскую практику, авторами не обнаружено.

Аналогом способа авторы предлагают экспериментальные исследования академика А.М.Уголева ("Физиология и патология пристеночного (контактного) пищеварения". Л. : Наука, 1973, стр.18-36), в которых изучали скорость перехода различных пищевых веществ, в том числе глюкозы, из растворов этих веществ, пропускаемых через отрезок кишки. Указанные исследования позволили конкретизировать механизмы усвоения отдельных пищевых веществ кишечной стенкой, однако они не пригодны для внедрения в медицинскую практику, поскольку слишком трудоемки в исполнении и требуют экстирпации исследуемых тканей.

В качестве прототипа авторами использован способ определения утилизации глюкозы клетками крови, помещенными в искусственно созданную среду, содержащую определенное количество глюкозы. О скорости утилизации авторы (В.Г.Куницын, М.Ф.Некрасов, В.И.Феденков. "Определение скорости утилизации глюкозы во взвеси эритроцитов". Лабораторное дело, 1990, N 9, стр.27-29) судили по скорости убыли глюкозы из инкубационной среды в течение определенного срока инкубации. Указанное исследование констатирует возможность непосредственного изучения способности клеток утилизировать глюкозу из искусственно созданного "депо", т.е. из среды инкубации эритроцитов.

Однако для широкого использования в диагностических целях способ мало пригоден вследствие трудностей, связанных с забором крови, приготовлением взвеси эритроцитов, проведением их инкубации вне организма.

Авторы предлагают способ определения утилизации глюкозы тканями в губо-десневой складке полости рта. Учитывая, что механизмы утилизации глюкозы универсальны для всех видов тканей (кроме почек и тонкой кишки), результаты способа могут быть экстраполированы на весь организм.

Предлагаемый авторами способ состоит из трех этапов.

1. Подготовка тест-носителей глюкозы (ТНГ). На листочки фильтровальной бумаги 1,0•1,5 см, приклеенные водостойким клеем к Г-образным держалкам и простерилизованные сухим жаром при 120-140^oС, наносится по 0,02 мл 8% раствора глюкозы (1,6 мг сухого вещества). (В.В.Школовой, С.В.Школовой "Тест-носитель для определения интенсивности поглощения глюкозы живой тканью". Свидетельство на полезную модель N 19469 от 10 сентября 2001 года). Количественные характеристики наносимого на ТНГ раствора глюкозы авторами определены опытным путем. После высыхания на воздухе ТНГ заворачивают небольшими партиями в целлофан с указанием на рукоятке держалки номера и серии ТНГ. Подготовленные таким образом ТНГ можно хранить неопределенно длительное время в сухих, желательно герметичных, пеналах, удобных для транспортировки.

2. Экспозиция ТНГ в верхней губо-десневой складке. После 4-кратной "очистки" складки языком (два движения по часовой стрелке и два против) ТНГ вставляют на 10 минут в складку до упора. Пациента необходимо предупредить, что нельзя допускать даже небольшою смещения ТНГ, так как это значительно влияет на конечный результат тестирования. Ровно через 10 минут ТНГ извлекают, бумажную часть пинцетом отделяют от держалки и помещают ее в пробирку, содержащую 1,0 мл дистиллированной воды. Перевод глюкозы из бумажной части в раствор продолжается 10 минут при постоянном встряхивании пробирки, после чего бумажную часть выбрасывают, а полученный раствор глюкозы готов для следующего этапа, т. е. для определения в нем глюкозы. При необходимости (например, при массовом тестировании) ТНГ после экспозиции можно высушить на воздухе и исследовать даже спустя несколько суток.

3. Определение содержания глюкозы в ТНГ после перевода ее из бумажной части в воду (непосредственно после экспозиции или спустя некоторое время) можно производить любым методом изучения концентрации глюкозы в водных растворах. Например, при необходимости быстрого тестирования авторы использовали портативный гпюкометр "Уан тач бэйсик" компании "Джонсон и Джонсон". (Сертифицировано МЗ и МП РФ, регистрационное удостоверение N 95/160). О степени утилизации глюкозы тканями судили по разнице содержания ее в ТНГ после экспозиции в сравнении с неэкспонированными. Эту разницу выражали в виде коэффициента поглощения глюкозы (КПГ), представляющего собою процент убыли глюкозы из ТНГ.

С целью оценки возможностей способа было проведено тестирование двух групп людей.

1. Девять практически здоровых молодых людей (студентов) в возрасте 19-25 лет, из них 3 мужчин и 6 женщин (контрольная группа).

2. Одиннадцать женщин в возрасте 40-70 лет, поступавших в разное время в эндокринологическое отделение городской больницы 6 г. Твери на лечение инсулиннезависимого сахарного диабета. В контрольной группе величина КПГ колебалась от 12,8 до 65,8. Указанные крайние значения КПГ были отброшены, а, исходя из остальных семи наблюдений, была получена предварительная "норма", равная 45,5±02,3. В группе больных ИНСД величина КПГ колебалась от 3,8 до 47,4, среднее значение составило 24,2±05,6. Из приведенных данных следует, что степень (скорость) утилизации глюкозы тканями в обеих группах значительно варьировала, однако общая направленность изменений достоверно (Р<0,05) указывает на ослабление утилизации глюкозы тканями больных ИНСД.

Авторы считают, что предлагаемый ими способ ускоряет, удешевляет и упрощает процедуру диагностики сахарного диабета и нарушений углеводного обмена, предрасполагающих к развитию этой болезни, поскольку исключает необходимость взятия и обработки крови, мочи, проведения нагрузочных тестов, позволяет проводить массовые обследования с целью организации профилактической работы, а также облегчает оперативный контроль эффективности лечения.

Клинический пример N 1 Больная М. , 59 лет, обратилась в поликлинику с жалобами на боли в эпигастральной области и диспептические явления. Диагностировано обострение язвенной болезни желудка. В анамнезе у отца пациентки сахарный диабет. При проведении тестирования предлагаемым способом отмечено уменьшение КПГ на 57,6% в сравнении с указанной выше временной "нормой", что расценивается как указание на возможность регистрации предлагаемым способом наследственных особенностей углеводного обмена, снижающих устойчивость тканей к повреждающим факторам без манифестации диабетических признаков.

Клинический пример N 2 Больная Д., 63 года, находилась на лечении в эндокринологическом отделении городской больницы N 6 г. Твери по поводу инсулиннезависимого сахарного диабета с 24.09.01 по 12.10.01 (история болезни N 5784). При почасовом определении гликемии на фоне приема антидиабетических пищевых добавок проводилось параллельное тестирование предлагаемым способом. Были получены следующие результаты (см. таблицу).

Полученные данные расцениваются как свидетельство того, что усиление поглощения глюкозы тканями (увеличение КПГ) снижает гликемию, а ослабление поглощения ведет к повышению уровня глюкозы в крови.

Формула изобретения

Способ определения утилизации глюкозы тканями, включающий определение скорости убыли глюкозы, отличающийся тем, что на предварительно простерилизованный сухим жаром при 120-140°С тест-носитель наносят 0,02 мл 8% раствора глюкозы, помещают тест-носитель глюкозы (ТНГ) в верхнюю губо-десневую складку после 4-кратной очистки ее языком, после 10-митнутной экспозиции бумажную часть ТНГ погружают в пробирку с 1,0 мл дистиллированой воды, постоянно встряхивая ее, в образовавшемся через 10 мин водном растворе глюкозы определяют ее концентрацию и по величине убыли глюкозы, в сравнении с исходным количеством, определяют коэффициент поглощения глюкозы тканями.

РИСУНКИ

Рисунок 1