Косметическое средство, улучшающее физиологическое состояние кожных покровов

 

Изобретение относится к области косметологии и касается средств, активизирующих обменные процессы в ткани кожи. Средство содержит приемлемый носитель и активное начало, в качестве которого содержит лизоцим в концентрации от 0,05 до 0,3 вес.%. При этом средство содержит лизоцим животного, растительного, человеческого или биоинженерного происхождения. Средство приготовлено в виде крема, маски или лосьона. Средство улучшает физиологическое состояние кожных покровов. 2 з. п. ф-лы, 4 ил.

Изобретение относится главным образом к области косметологии и касается соответствующих средств, активизирующих обменные процессы в ткани кожи и улучшающих физиологическое состояние кожных покровов.

В процессе старения и при неблагоприятном воздействии факторов внешней и внутренней среды обменные процессы в ткани кожи меняются и это приводит как к нарушениям функций кожи, так и к утрате кожей здорового внешнего вида.

Известные многочисленные косметические и дерматологические средства призваны нормализовывать нарушенные функции клеток тканей кожи, улучшать физиологическое состояние кожных покровов и способствовать приобретению кожей привлекательного и здорового вида.

Известны, например, дерматологические и косметические композиции, обладающие действием против старения кожи, которые содержат эмульгирующие агенты, моно- или дистеарат полиэтиленгликоля, сложные полигликолевые эфиры насыщенных или ненасыщенных жирных кислот, цетиловый спирт, версенат натрия и антиокисляющие агенты (витамины группы F, производные токоферила), бактериостатические агенты и агенты против плесени (метил или пропил п-оксибензоат), активные ингредиенты (коллагены, эзуросамин, эластин, аминокислоты, пептиды, мукополисахариды) и очищенную воду. Основа и вспомогательные вещества композиции обладают стабилизурующей активностью по отношению к активным ингредиентам, подвергающимся разложению в условиях внешней среды [Патент РФ 2.076.693, А 61 К 7/00,1994 г.].

Описана косметическая крем-маска, проявляющая омолаживающее действие и предотвращающая преждевременное увядание кожи, которая включает в свой состав в качестве активных начал масла арбузное, миндальное, авокадо, виноградных косточек, семян моркови, абрикосовое, персиковое, лавандовое, кунжутное, расторопши, розовое, шиповника, пихтовое, зародышей пшеницы, календулы, также мед и мумие [Патент РФ 2.180.837, А 61 К 7/48, 2002 г.].

Запатентован крем для кожи лица, повышающий возможности саморегенерации кожи, содержащий ланолин, воск, моноглицериды, масло парфюмерное, масло оливковое, биологически активную добавку из пиявок, триэтаноламин, токоферола ацетат, ретинола ацетат, спирт этиловый, метиловый и пропиловый эфиры р-оксибензойной кислоты [Патент РФ 2.134.569, А 61 К 7/48, 1999 г.].

Известно, что включение в состав косметических средств перфторуглеродов, являющихся переносчиками кислорода, приводит к биологическому омоложению кожи, что выражается в том, что под влиянием таких косметических средств соотношение белков в стареющей коже начинает приближаться к таковому, характерному для более молодой кожи [Патент РФ 2.119.790, А 61 К 7/48, 1996 г. ].

Цель настоящего изобретения состоит в создании косметических средств, более эффективно улучшающих физиологическое состояние кожных покровов и придающих коже более привлекательный и здоровый вид, а также защищающих кожные покровы от неблагоприятных воздействий повреждающих факторов.

Поставленная цель была достигнута в результате использования в качестве активного начала косметических средств препаратов лизоцима.

Технический эффект от использования настоящего изобретения заключается в расширении арсенала средств природного происхождения, улучшающих физиологическое состояние кожных покровов и защищающих их от неблагоприятного воздействия повреждающих факторов.

Существо настоящего изобретения заключается в следующем: для приготовления косметического средства, улучшающего физиологическое состояние кожных покровов и защищающего их от неблагоприятного воздействия повреждающих факторов, в качестве активного начала используют препараты лизоцима.

Лизоцим представляет собой фермент белковой природы, обладающий антибактериальными свойствами, способностью стимулировать неспецифическую реактивность организма, оказывать противовоспалительное и муколитическое действие. Его применяют при лечении хронических септических состояний и гнойных процессов, при ожогах, отморожениях, конъюнктивитах, эрозиях роговицы, афтозных стоматитах и других инфекционных заболеваниях [М.Д.Машковский. Лекарственные средства. М., Медицина, 1988 г., т.2, с. 422-423].

Лизоцим (эндогенный и алиментарный) является одним из древнейших факторов неспецифической защиты организма, находящимся в тесной функциональной связи с иммунной и многими другими системами. Он обладает чрезвычайно широким спектром биологического действия и такими ценнейшими для клиники свойствами, как иммунокоррекция, антибактериальное, противовоспалительное, антианемическое действие, стимуляция репаративной регенерации и антитоксической резистентности и другие. Лизоцим обеспечивает естественную толерантность организма к генетически чужеродным агентам путем участия в метаболических процессах, клеточных и гуморальных механизмах регуляции гомеостаза.

Кератиноциты, подобно всем клеткам эпителтального роста, способны синтезировать вещества, являющимися компонентами врожденной иммунной защиты. Лизоцим является одним из таких компонентов. Индукция его синтеза может происходить в культуре кератиноцитов под воздействием, например, лизоцима. Смысл всего этого - увеличение резистентности к неблагоприятным внешним воздействиям.

С возрастом количество лизоцима снижается, следствие этого - повышенная чувствительность к неблагоприятным внешним и внутренним агентам.

Лизоцим находит применение в составе лекарственных препаратов для внутреннего и наружного применения, в составе косметических средств, в составе средств ухода за полостью рта, его применяют в качестве консерванта пищевых продуктов и косметических средств.

Известно, например, использование лизоцима в составе зубных паст [Авт. св. СССР 623.555, А 61 К 7/28, 1978 г., авт св. СССР 715.086, А 61 К 7/28, 1980 г.] и зубных эликсиров [Авт. св. СССР 540.637, А 61 К 7/16, 1977 г.].

Установлено, что лизоцим эффективен против вызывающих кариес бактерий [Патент США 4.355.022, А 61 К 7/28, 1982 г.] и оказывает профилактический и лечебный эффект при парадонтозах и гингивитах [WO 8 802 600, А 61 К 7/28, 1988 г.].

Предложено использовать лизоцим в растворах, предназначенных для снятия макияжа с ресниц и век [Пат США 6239088, C 11 D 1/66, 2001 г.].

Лизоцим входит в состав искусственной слюны, эффективно предотвращающей отеки полости рта [Европейский патент 0 596 675, А 61 К 37/54,1993 г.].

Известно использование лизоцима для создания косметических средств, обладающих антибактериальной активностью [Авт. св. СССР 1.090.400, А 61 К 7/00, 1984 г., Патент Германии 43 05 460, А 61 К 7/48,1994 г.].

Описан содержащий димерную форму лизоцима лекарственный состав, предназначенный для наружного или внутреннего применения и обладающий антивирусной или антибактериальной активностью [Патент РФ 2.092.183, А 61 К 38/57,1997 г. ].

Лизоцим используют в составе бактериостатических, бактерицидных и противогрибковых составов, предназначенных для консервирования пищевых и косметических средств [Европейский патент 0 366 869, А 61 К 37/56, 1989 г., Европейский патент 0 466 244, А 23 L 3/3571, 1991 г.].

Во всех упомянутых направлениях, в том числе в косметологии использование лизоцима было основано на его известных антибактериальных свойствах.

Дальнейшие исследования показали, что лизоцим обладает и иммуномодулирующими свойствами, в частности стимулирует синтез гамма-глобулинов, опсонинов и других антител.

Однако доказанное участие лизоцима в иммунологических процессах рассматривалось в основном с точки зрения его воздействий на организменном уровне.

Заявитель впервые изучил проявления иммунологической активности лизоцима на тканевом (органном) уровне, т.е. исследовал его влияние на морфологические, физиологические и функциональные характеристики тканей кожи.

В частности, экспериментальным путем было установлено, что лизоцим увеличивает синтез белка и пролиферативную активность фибробластов, находящихся в культуральных условиях.

Для исследования пролиферативной активности суспензию фибробластов в среде Игла MEM с 10% эмбриональной телячьей сывороткой вносили в лунки 24-луночного плоскодонного планшета из расчета 2•10⁵ кл/мл. Клетки культивировали 72 ч при температуре 37^oС в атмосфере 3-5% CO₂, после чего производили смену среды на среду Игла MEM, не содержащую эмбриональную сыворотку. Еще через 48 ч инкубации вносили свежую обедненную питательную среду, содержащую лизоцим в концентрации 10 мкг/мл. Контролем служили среда Игла MEM с 10% эмбриональной телячьей сывороткой и обедненная среда без препарата. В каждую из проб вносили ³Н тимидин (1мкКи/мл), инкубировали 48 ч, после чего монослой тщательно промывали PBS. Клетки фиксировали в 5% охлажденной до 4^oС трихлоруксусной кислоте и лизировали добавлением в лунки 0,1 н. NaOH и инкубировали при 37^oС в течение 30 мин. После окончания инкубации лизат в объеме 500 мкл вносили в 3 мл сцинтилляционной жидкости, выдерживали в холодильнике 30 мин и определяли радиоактивность включившегося в ДНК тимидина на жидкостно-сцинтилляционном счетчике.

На фиг.1 показано влияние препарата лизоцима на пролиферативную активность фибробластов, оцененную по включению ³Н тимидина в ДНК клеток. Концентрация лизоцима - 10 мкг/мл. Наблюдаемый прирост пролиферативной активности фибробластов в присутствии лизоцима (столбик 2) составил 10% по сравнению с контролем (столбик 1). Следует отметить, что при увеличении концентрации лизоцима существенного прироста включения ³Н тимидина не наблюдалось (данные не приведены).

Для исследования влияния лизоцима на синтез суммарного белка культурой фибробластов суспензию фибробластов в среде Игла MEM с 10% эмбриональной телячьей сывороткой вносили в лунки 24-луночного плоскодонного планшета из расчета 2•10⁵ кл/мл. Клетки культивировали 72 ч при температуре 37^oС в атмосфере 3-5% СО₂ до образования сплошного монослоя. После этого производили смену среды на среду Игла MEM, не содержащую сыворотки (обедненная среда). Еще через 24 ч вносили лизоцим, растворенный в свежей питательной среде без сыворотки. Контролем служила обедненная среда Игла MEM и среда Игла MEM с 10% ЭТС, не содержащие лизоцима.

Клетки инкубировали 48 ч при температуре 37^oС в атмосфере 3-5% CO₂, после чего монослой тщательно промывали PBS и лизировали клетки добавлением в лунки 0,1 н. NaOH. Лизат инкубировали при 37^oС в течение 30 мин, после чего в лизате определяли содержание суммарного белка методом Лоури.

На фиг.2 показано влияние препарата лизоцима на белок-синтезирующую активность фибробластов, находящихся в культуральных условиях. Концентрация лизоцима - 10 мкг/мл. Прирост концентрации белка в культуре фибробластов в присутствии лизоцима (столбик 2) составил 9-10% по сравнению с контролем (столбик 1). Как и в случае исследования пролиферативной активности фибробластов, увеличение концентрации лизоцима в культуральной среде не вызывает дополнительного существенного увеличения белок-синтезирующей активности фибробластов.

Дополнительными исследованиями, проведенными в Научно-исследовательсуом институте эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи, было показано, что при нанесении на кожу старых животных препаратов лизоцима проявлялась четкая тенденция к восстановлению эпидермиса, базального слоя клеток и к восстановлению структуры эластических волокон.

Так, на фиг. 3 показан типичный срез кожи старого животного (мыши, 12 месяцев), где видны разрывы эпидермиса (1), малое количество базальных клеток (2), малое количество эластиновых волокон (3), крупнозернистая подкожно-жировая клетчатка (4).

После ежедневного в течение 10 дней нанесения на кожу старым животным препарата лизоцима (фиг.4) видно восстановление эпидермиса и базального слоя клеток (5) и восстановление структуры эластиновых волокон (6).

Каких-либо патологических изменений в структурных элементах кожи выявлено не было, что свидетельствует об отсутствии токсических проявлений препарата.

Полученные результаты однозначно свидетельствуют о благотворном влиянии препаратов лизоцима на физиологическое состояние клеток ткани кожи. Эти результаты определяют целесообразность использования косметических средств, включающих препараты лизоцима, для стареющей, увядающей, дряблой кожи.

Эти же результаты свидетельствуют и о нормализации обменных процессов в ткани кожи, способствующих улучшению ее морфологических свойств.

По этой же причине оправдано использовать косметические средства, содержащие препараты лизоцима, в случаях, связанных с нарушениями трофики тканей кожи.

Следует учитывать и то обстоятельство, что косметические средства, содержащие лизоцим, сохраняют и такие известные свойства лизоцима, как антибактериальную и противовоспалительную активность.

Установление местного иммуномодулирующего эффекта лизоцима при воздействии на ткань кожи и его благотворного влияния на ее морфологические характеристики позволяет существенно расширить круг показаний, при которых могут эффективно использоваться косметические средства, содержащие препараты лизоцима.

Для осуществления настоящего изобретения могут быть использованы препараты лизоцима животного, растительного, человеческого или биоинженерного происхождения.

Абсолютное содержание в косметическом средстве препаратов лизоцима может находиться в очень широких пределах, но в оптимальном случае составляет от 0,05 до 0,3 вес.%.

Косметические средства, содержащие препараты лизоцима, могут быть приготовлены в виде таких традиционных косметических форм, как кремы, маски, лосьоны и подобные. Для их приготовления могут быть использованы традиционно применяемые для таких целей основы и вспомогательные вещества.

В состав косметических средств, содержащих препараты лизоцима, могут быть включены и другие биологически активные вещества, совместимые с лизоцимом.

Апробация косметических средств, содержащих препараты лизоцима, показала их высокую эффективность. Приводимые далее примеры лишь иллюстрируют существо предложения и не могут носить ограничивающего характера.

ПРИМЕР 1. Для приготовления 200 кг косметического крема для стареющей увядающей кожи на поверхность 60 кг воды с температурой 30^oС засыпают 1,2 кг карбопола Ультрез 10 и оставляют на несколько часов до получения однородной массы, т.е. до отсутствия частиц ненабухшего карбопола. Одновременно готовят эмульсию, для чего смешивают 8,6 кг изопропилмиристата, 8 кг вазелинового масла, 7 кг Полавакс GP 200, 8 кг глицирилмоностеарата SE и 10 кг глицерокса НЕ. Смесь нагревают в плавильном котле до температуры 70^oС и перемешивают до получения однородной массы. В реактор помещают массу карбопола, последовательно добавляют 6 кг готовой эмульсии, 101 кг воды и 0,2 кг бисаболола, включают циркуляцию воды и гомогенизатор. В реактор вносят 4 кг глицерина, 4,3 кг сорбитола, 1 кг экстракта бодяги, раствор аллантоина и лизоцима (0,4 кг аллантоина и 0,2 кг лизоцима в 5 кг воды), 7 кг пропиленгликоля, 0,2 кг пантенола, 2 кг Гермабена II, раствор проксанола (0,45 кг проксанола в 5 кг воды), 0,15 кг отдушки Конкомбре, раствор красителя зеленого (0,6 г красителя в 300 г воды), 0,2 кг Аквафтэма, 1,3 кг триэтаноламина. Содержимое перемешивают до получения однородной массы. Доводят значение рН до величины 6,8 с помощью триэтаноламина.

ПРИМЕР 2. Для приготовления 600 кг гелевой маски для жирной кожи на поверхность 150 кг воды засыпают 6 кг карбопола Ультрез 10 и оставляют до получения однородной массы. Параллельно расплавляют 3 кг Кремофора RH 40, добавляют к расплаву 10 кг нагретой воды и перемешивают до получения однородной массы. В реактор переносят набухший карбопол, добавляют 374,86 кг воды, 3,6 кг нипакварда МРА, 6 кг лизоцима, раствор 1,2 кг аллантоина в 10 кг воды, 30 кг сорбитола, 1,08 кг раствора красителя желтого (1:500), 2,7 кг раствора красителя красного (1:500), 0,72 кг отдушки Оранж, 0,18 кг отдушки Эвкалипт, 3 кг триэтаноламина и включают тихоходную мешалку. Добавляют Кремофор и перемешивают до получения однородного геля, имеющего значение рН, равное 4,5.

Формула изобретения

1. Средство, защищающее кожные покровы от неблагоприятных воздействий повреждающих факторов, содержащее приемлемый носитель и активное начало, отличающееся тем, что в качестве активного начала содержит лизоцим в концентрации от 0,05 до 0,5 вес.%.

2. Средство по п.1, отличающееся тем, что содержит лизоцим животного, растительного, человеческого или биоинженерного происхождения.

3. Средство по любому из пп.1 и 2, отличающееся тем, что приготовлено в виде крема, маски, лосьона.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4