Антиоксидантное и стимулирующее рост нервных клеток средство

 

Предложено применение производных 1-(аминоалкил)-3-хиноксалин-2-она, в частности производных 1-диэтиламиноэтил-3-хиноксалин-2-она формулы (I), где R₃ означает гидрокси, метокси, этокси или водород, или их фармацевтически совместимы солей в качестве активнодействующего вещества при получении композиций в качестве антиоксидантов для профилактики или лечения заболеваний, вызываемых свободными радикалами кислородно-клеточного метаболизма, стимуляции роста нервных клеток, возбуждения антагонизма глютаматрецепторов и/или стимуляции роста глютаматовых нервных клеток. Соединения могут назначаться в любой известной лекарственной форме. Ранее предложенные соединения были известны, в частности, как желудочно-кишечные спазмолитики, как средство для лечения заболеваний кровообращения (ЕР 0032564). 10 з.п. ф-лы, 6 ил.

Настоящее изобретение относится к применению производных 1-(аминоалкил)-3-хиноксалин-2-она, в частностик 1-диэтиламиноэтил-3-хиноксалин-2-она формулы где R₃ означает гидрокси, метокси, этокси или водород, или их фармацевтически совместимых солей для получения новых фармацевтических композиций.

Фармацевтическое действие производных 1-(аминоалкил)-3-хиноксалин-2-она известно на протяжении многих лет, в частности, 1-диэтиламиноэтил-3-(п-метоксибензил)-1,2-дигидрохиноксалин-2-он, не номенклатурное название которого Кароверин (Caroverin), уже использовался в качестве эффективного желудочно-кишечного спазмолитического средства. Эффективность данного вещества объясняют, в частности, его свойствами блокировать кальций, причем оно блокирует активацию миофибрильной АТФ (аденозинтрифосфорной кислоты) опосредственно через кальций.

В ЕР-А 0032564 описано применение Кароверина и его фармацевтически совместимых солей в многочисленных случаях заболеваний системы кровообращения сердца и в качестве препарата для предупреждения образования тромбоцитов в крови человека, в качестве препарата для повышения кровоснабжения, а также в качестве вещества для лечения стенокардии, инфаркта миокарда, гипертонических состояний и пр. Действие Кароверина в указанной заявке ЕР-А 0032564 объясняется тем, что он представляет собой специфичный Са-антагонист и что Кароверин обладает способностью снижать поток ионов Са²⁺ в клетках до 50%. В "Subsidia med.", 22, 3, стр.78-85, 1970 г., Меслингер () сообщает, что Кароверин способен подавлять приступы эпилепсии. Описаны также случаи применения Кароверина при лечении острых алкогольных проявлений, а также при лечении алкалоидной зависимости.

В ЕР-А 0542689 сообщается о применении производных 1-(аминоалкил)-3-хиноксалин-2-она в качестве нейрозащитных веществ, причем, в частности, описывается их применение при индуцированных глютаматом и опосредственных глютаматрецептором нейротоксичных дисфункциях и функциональных нарушениях центральной нервной системы, в частности внутреннего уха и сетчатой оболочки глаза. В этой же публикации сообщается и о применении указанных веществ при лечении дегенеративных процессов нейронов центральной нервной системы, как, например, при болезнях Альцгеймера (Alzheimer), Хантингтона (Huntington), Паркинсона, Верникке-Корзакова и при синдроме Якоба-Крейтцфельда (Jakob-Creutzfeld). Действие названных специальных производных хиноксалина приписывается селективному блокированию рецепторов NMDA и не-NMDA без воздействия на другие рецепторы, вследствие чего представляется, что описанные в указанной публикации фармацевтические средства применимы только при индуцированных глютаматом и опосредственных глютаматрецептором нейротоксичных дисфункциях, таких, как функциональные нарушения внутреннего уха и сетчатой оболочки глаза, а также при упомянутых дегенеративных процессах.

Из "Dervent Abstract", номер публикации AN 83-45789 К, известно о действии Кароверина, в частности вещества 1-(2-диалкиламиноалкил-3-(п-алкоксибензил)-1,2-дигидрохиноксалин-2-она, в качестве активного начала для управления притоком и оттоком противораковых лечебных средств, причем здесь противораковое действие достигается за счет того, что противораковые лечебные средства переносятся в клетки через клеточные мембраны. При использовании обычных противораковых лечебных средств их действие со временем ослабевает, поскольку, с одной стороны, раковые клетки приобретают устойчивость против них и, с другой стороны, противораковые лечебные средства вымываются из клеток или постепенно из них выходят, что предупреждается согласно этому уровню техники за счет назначения приема производных хиноксалина, так как эти производные хиноксалина задерживают вымывание противоракового лечебного средства из клеток и гарантируют сохранность его высокой концентрации в клетках.

В DE-А 2521905 описывается лекарственное средство, содержащее 1-диэтиламиноэтил-3-(п-метоксибензил)-2,1,2-дигидрохиноксалин-2-он, которое оказывает воздействие на церебральные сосуды или на церебральное кровоснабжение.

Целью настоящего изобретения является обеспечить наряду с указанным выше применением специфичных производных 1-(аминоалкил)-3-хиноксалин-2-она новые фармацевтические сферы применения, и поэтому изобретение касается применения производных 1-(аминоалкил)-3-хиноксалин-2-она, в частности производных 1-диэтиламиноэтил-3-хиноксалин-2-она формулы где R₃ означает гидрокси, метокси, этокси, или водород, или их фармацевтически совместимых солей в качестве активнодействующих веществ для получения композиций в качестве антиоксидантов, предназначенных для предупреждения и лечения заболеваний, вызванных свободными радикалами кислородно-клеточного метаболизма, с целью стимуляции и роста нервных клеток, возбуждения антагонизма глютаматрецепторов и/или стимуляции роста, в частности, глютаматовых нервных клеток. При расширенных исследованиях строения молекул и их возможного способа воздействия заявителем было обнаружено, что применяемые согласно изобретению производные 1-диэтиламиноэтил-3-хиноксалин-2-она являются чрезвычайно выраженными антиоксидантами и что поэтому они характеризуются, в частности, чрезвычайно высокой способностью улавливать радикалы, прежде всего ответственные за многочисленные заболевания оксильные, пероксильные и пероксинитритные радикалы. Действие в качестве антиоксидантов и, следовательно, ловушки для радикалов объясняется структурными свойствами таких специальных веществ, которыми являются хиноксалины с богатыми электронами ароматическими циклическими системами, содержащими активные восстановительно-окислительные атомы кислорода и азота. Благодаря высокому количеству электронов в молекуле стало возможным доказать, что соединения в состоянии связывать свободные радикалы, в результате чего возможно лечение заболеваний, вызываемых свободными радикалами, в частности заболеваний, вызываемых свободными радикалами кислородно-клеточного метаболизма, с помощью специальных, применяемых согласно изобретению производных 1-диэтиламиноэтил-3-хиноксалин-2-она или предотвращение появления таких заболеваний. Кроме того, неожиданно была обнаружена способность специальных производных 1-(аминоалкил)-3-хиноксалин-2-она, в частности Кароверина, вызывать антагонизм метаботропных глютаматрецепторов. Поскольку глютаматрецепторы, в частности метаботропные глютаматрецепторы, могут рассматриваться как ускорители или стимуляторы внутриклеточного обмена веществ, то, в частности, такой внутриклеточный обмен веществ с помощью Кароверина и других производных 1-(аминоалкил)-3-хиноксалин-2-она может антагонизировать, т.е. значительно замедляться.

Поскольку о применяемых согласно изобретению производных хиноксилин-2-она известно, что они могут применяться в фармацевтическом назначении без заметных побочных действий, то в процессе проведения исследований была предпринята попытка разграничить или оптимизировать сферу действия вещества, применяемого в качестве антиоксиданта или ловушки радикалов, за счет повышения назначаемой к приему дозы. В ходе проведения этих исследований было неожиданным образом найдено, что применяемые согласно изобретению производные 1-(аминоалкил)-3-хиноксалин-2-она наряду с их известным действием в качестве нейрозащитных веществ и антиокислительным эффектом, обнаруженным в ходе исследований, приведших к созданию настоящего изобретения, обладают нейрорегенерирующим действием при приеме в повышенных дозах. Это происходит таким образом, что если используют ловушки радикалов, то радикалами блокируются внутренние нейротрофины, восстанавливается активность нейротрофинов и применяемые согласно изобретению вещества вызывают нейрорегенеративное действие. Поэтому в процессе изучения неожиданно стало возможным не только предохранять от последующего разрушения поврежденные нервы и, в частности, нервные пути, пострадавшие или нарушенные вследствие дегенерации нейронов в центральной нервной системе, как это утверждается в ЕР-В 0542689, но и восстановить поврежденные нервные пути настолько широко, что наряду с известным нейрозащитным действием подобных веществ неожиданно достигается и нейрорегенеративный эффект, ведущий к заметному снижению симптомов нейродегенеративных заболеваний и к улучшению состояния пациента.

Из применяемых согласно изобретению производных 1-(аминоалкил)-3-хиноксалин-2-она положительный эффект показали, в частности, оксипроизводный 1-диэтиламиноэтил-3-(п-оксибензил)-1,2-дигидрохиноксалин-2-он и метоксипроизводный 1-диэтиламиноэтил-3-(п-метоксибензил)-1,2-дигидрохиноксалин-2-он (Кароверин), которые могли быть использованы при исследовании in vitro в повышенных дозах без вредных побочных действий для исследованных клеток и при исследовании in vivo на подопытных животных и пациентах без вредных побочных действий.

На основе своего сильного антиокислительного действия и, следовательно, способности улавливать радикалы используемые согласно изобретению производные 1-(аминоалкил)-3-хиноксалин-2-она эффективны, в частности, при профилактике или лечении изменений ДНК, вызванных наличием свободных радикалов ОН, в частности, рака. Такой механизм действия объясняется тем, что одним из основных биологических действий, в частности, радикалов ОН и радикалов ONОO является окисление ДНК, имеющее биологическим последствием мутацию последней и в итоге заболевание раком. Этот механизм действия, в частности, радикалов ОН был исследован и подтвержден в ходе многочисленных исследований. Из этих исследований следует, что вследствие канцерогенного действия радикалов ОН на ДНК пригодным в качестве средства для предупреждения и лечения раковых заболеваний является эффективная ловушка для радикалов, т.е. антиоксидант, способный замедлить окислительное действие радикала ОН на биологический материал, как это предлагается в соответствии с изобретением.

Другим предпочтительным вариантом действия используемых согласно изобретению производных 1-(аминоалкил)-3-хиноксалин-2-она является вариант для лечения заболеваний, базирующихся на вирусной репликации благодаря свободным радикалам кислородно-клеточного метаболизма, в частности, для подавления репликации ВИЧ. При изучении заболеваний, основанных на вирусной, вызванной свободными радикалами кислородно-клеточного метаболизма репликации, было установлено, что при приеме применяемых согласно изобретению производных хиноксалина, в частности Кароверина, заметно снижалась репликация ВИЧ в образованных моноцитами макрофагах на основе применения веществ согласно изобретению с сильно проявляющимися свойствами улавливать радикалы, в частности Кароверина.

На основе сильных антиоксидативных свойств применяемых согласно изобретению производных 1-(аминоалкил)-3-хиноксалин-2-она чрезвычайно эффективным и успешным оказалось, в частности, их применение при явлениях старения клеток, вызываемых свободными радикалами кислородно-клеточного метаболизма, и/или разрушения клеток, в частности старения кожи. Такое действие проявляется как при вызываемом химикатами окислительном воздействии на соматические клетки тела, так и на клетки кожи, которые подверглись сильному окислительному воздействию, например, факторов окружающей среды, в частности солнечному облучению.

Аллергические реакции, в частности аллергические заболевания типа I, вызываются, например, действием гистамина, цитокинов, липидных медиаторов и нейромедиаторов и в настоящее время лечатся назначением антигистаминов. Неожиданно было найдено, что под действием гистаминов, цитокинов, липидных медиаторов и нейромедиаторов выделяются пероксинитритные радикалы и радикалы ОН и что в результате применения согласно изобретению производных 1-(аминоалкил)-3-хиноксалин-2-она - на основе их антиокислительных свойств, в частности свойств улавливать радикалы - возможно предупредить проявление вторичных аллергических явлений, как, например, воспаление и пр., а также полностью устранить первичные явления, как, например, чихание, почти сразу же после приема применяемых согласно изобретению производных 1-(аминоалкил)-3-хиноксалин-2-она. Совершенно неожиданная и терапевтически особо интересная возможность применения производных 1-(аминоалкил)-3-хиноксалин-2-она согласно изобретению заключается в том, что они стимулируют рост нервных клеток, в частности восстанавливают функциональную способность, в частности, глютаматовых нервов после апоплексического удара, а также устраняют нарушения глотательной функции, нарушения артикуляции, в частности расстройства речи и поперечные параличи, лечат болезни Альцгеймера, шизофрению и боковой амиотрофический склероз, стимулируют рост нервов при наличии улиткового имплантата, а также при функциональных расстройствах слухового нерва, нерва равновесия, зрительного нерва, нерва обоняния или лицевого нерва.

В ходе исследований, в которых дозы применяемых согласно изобретению производных хиноксалина принимались пациентами без фармацевтически серьезных побочных явлений, было, как уже выше отмечалось, неожиданно установлено, что наряду с известными нейрозащитными действиями вещества обладают, в частности, нейрорегенеративными действиями, таким образом, что применение композиций согласно изобретению при лечении заболеваний, обусловленных дегенераций, в частности, глютаматовых нервных клеток, позволяет не только поддерживать в устойчивом положении картину болезни, как это было показано в уровне техники, но согласно изобретению в любом случае могут быть достигнуты заметное улучшение этой картины и обновленный рост нервных клеток.

Так, в частности, на примере пациентов, которые носят улитковый имплантат, служащий для стимуляции нервов во внутреннем ухе, было установлено, что при одновременном приеме применяемых согласно изобретению производных хиноксалин-2-она, в частности Кароверина, нерв, стимулируемый имплантатом, частично регенерировался, вследствие чего заметно улучшилось контактирование имплантата, что заметно улучшило слух у прошедшего лечение пациента.

В частности, выгодным оказалось, что производные 1-(аминоалкил)-3-хиноксалин-2-она или их фармацевтически совместимые соли при использовании в качестве антиоксидантов, в частности в качестве ловушки для радикалов, применяются при суточной дозе от 3 до 10 мг/кг, в частности от 5 до 10 мг/кг веса тела. После приема такой суточной дозы удается заметно снизить или смягчить симптомы болезни и это не сопровождается одновременными побочными действиями из-за дозировки медикамента.

При использовании производных 1-(аминоалкил)-3-хиноксалин-2-она согласно изобретению или их фармацевтически совместимых солей в качестве нейрорегенеративного вещества применяется предпочтительно суточная доза в количестве от 3 до 20 мг/кг веса тела, в частности от 5 до 15 мг/кг веса тела.

При более низких дозировках, в частности при известных из литературы дозировках веществ, в особенности Кароверина, используемого в качестве нейрорегенеративного вещества, или в качестве кальциевого антагониста, или также в качестве антиоксидативного вещества, как это предложено согласно изобретению, в ходе экспериментов, в частности экспериментов in vitro, выяснилось, что вещество не оказывает нейрорегенеративного воздействия, вследствие чего для достижения возможного согласно изобретению нейрорегенеративного действия должна применяться более высокая доза вещества. В ходе соответствующих опытов было установлено, что и предлагаемые согласно изобретению высокие дозы могут приниматься пациентами почти без побочных действий.

Применяемые согласно изобретению производные 1-(аминоалкил)-3-хиноксалин-2-она могут назначаться в виде любой известной лекарственной формы, в частности, орально, чрезкожно, локально и парентерально, причем за исключением применения в качестве средства для предупреждения преждевременного старения кожных клеток, предпочтительным является внутривенное введение.

Ниже изобретение более подробно поясняется на основе опытов, соответственно примеров выполнения со ссылкой на прилагаемые чертежи, на которых показаны: фиг.1 - тональная аудиограмма пациентки женского пола; фиг.2 - тональная аудиограмма пациента мужского пола; фиг.3 - тональная аудиограмма еще одного пациента мужского пола;
фиг.4 - диаграмма речи или артикуляции пациента мужского пола;
фиг.5 - ингибирование катионного радикала ABTS с помощью Кароверина;
фиг. 6 - сравнительное кинетическое изучение реактивности Кароверина по отношению к радикалам.

Примеры 1, 2 и 3.

С помощью клинических примеров тестировали эффективность Кароверина - (1-диэтиламиноэтил-3-(п-метоксибензил)-1,2-дигидрохиноксалин-2-она) - в качестве нейрорегенеративного вещества на двух пациентах, у которых произошло существенное резкое падение слуха.

На диаграмме в приложении, фиг.1, представлена тональная аудиограмма пациентки, при этом штрихпунктирной линией показана тональная аудиограмма после резкого падения слуха, штрихлинией показана тональная аудиограмма непосредственно после проведения лечения и сплошной линией - тональная аудиограмма пациентки через две недели после начала курса лечения, причем лечение пациентки в этот период проводилось путем приема повышенных доз Кароверина. Кароверин, растворенный в 250 мл физиологического раствора поваренной соли, вводился медленно внутривенно трижды в сутки по 240 мг.

Заметное улучшение слуха пациентки объясняется по меньшей мере частичным восстановлением слухового нерва.

На фиг. 2 приведен аналогичный пример, но касающийся пациента, при этом снова штрихпунктирной линией представлена тональная аудиограмма пациента после резкого падения слуха, до начала курса лечения и до применения улиткового имплантата, штриховой линией показана диаграмма слуха пациента после приема Кароверина в малых дозах, пунктирной линией показана диаграмма слуха пациента после прохождения двухнедельного курса лечения, сопровождавшегося приемом увеличенных доз Кароверина, и сплошной линией показана снова тональная аудиограмма пациента после приема больших доз Кароверина в течение двух недель и после применения улиткового имплантата. На фиг.2 четко прослеживается, что прием малых доз Кароверина, т.е. трижды по 160 мг Кароверина в сутки, способствовал улучшению слуховой способности пациента, причем, однако, такое улучшение было малозначительным. Когда пациент принимал четыре раза в сутки в количестве 240 мг/250 мл физиологического раствора поваренной соли Кароверина на протяжении двух недель и дополнительно ему был вставлен улитковый имплантат, то была достигнута устойчивая слуховая способность, в частности, в диапазоне от 0,15 до 2 кГц, что соответствует приблизительно слуху здорового человека.

На фиг. 3 приведен еще один пример для пациента, причем снова штрихпунктирной линией показана тональная аудиограмма пациента после резкого падения слуха и перед началом курса лечения и сплошной линией показана диаграмма пациента после лечения в течение двух недель с применением повышенных доз Кароверина. Улитковый имплантат не применялся. Из фиг.3 отчетливо явствует, что после приема повышенных доз Кароверина - причем в данном случае ежедневно принимались по 300 мг Кароверина в 500 мл физиологического раствора поваренной соли в течение двух недель - может наступить устойчивая слуховая способность в частотном диапазоне от 0,250 до 8 кГц, что существенно соответствует слуховой способности здорового человека.

Из данных, приведенных на фиг. 1, 2 и 3, однозначно следует, что Кароверин в повышенных дозах способен оказывать - по сравнению с известными дозировками - нейрорегенеративное действие и что, в частности, пациенты, пользующиеся дополнительно улитковым имплантатом, обладают заметно лучшим слухом благодаря лучшему контактированию имплантата со слуховым нервом.

Пример 4.

На двух пациентах в возрасте от 70 до 75 лет, страдающих болезнью Альцгеймера, дополнительно исследовали действие Кароверина в качестве нейрорегенеративного средства. Средний вес пациентов составлял 75 кг, лечение проводилось стационарно. Пациентам вводили трижды в день по 400 мг Кароверина в физиологическом растворе поваренной соли в виде вливания в течение около 2 часов, причем к этим растворам вливания могли быть примешаны обычные добавки. В любом случае курс лечения составлял три недели.

Перед началом лечения с применением повышенных доз Кароверина пациенты страдали забывчивостью, не узнавали своих родственников и считались нуждающимися в постороннем уходе. В конце курса лечения длительностью три недели у двоих пациентов было отмечено явное улучшение состояния, они могли частично самостоятельно принимать пищу и узнавали своих близких и медицинский персонал. Принимая во внимание тот факт, что известные вещества, применяемые при лечении болезни Альцгеймера, способны лишь стабилизировать состояние, то действие Кароверина очевидно можно объяснить нейрорегенеративным эффектом вещества, в результате чего в течение относительно короткого периода приема этого вещества стало возможным относительное восстановление нейрологически управляемых функций.

Также в результате внутривенного введения Кароверина трижды в сутки по 160 мг в 250 мл физиологического раствора поваренной соли на протяжении трех недель стало возможным улучшение состояния пациентов, причем последние не наблюдались строго и продолжительно, из чего можно непосредственно заключить, что устойчивые терапевтические успехи могут быть достигнуты только в том случае, когда имеет место нейрорегенеративное действие Кароверина.

Пример 5.

Четыре пациента, из которых две женщины и двое мужчин в возрасте от 40 до 50 лет, страдавших периодической шизофренией, проходили лечение во время массивных приступов болезни с применением повышенных доз Кароверина. Им был предписан трехкратный прием в сутки в количестве 400 мг Кароверина в физиологическом растворе поваренной соли в виде вливания в течение 30 минут. Продолжительность лечения составляла 7 дней, 14 дней и 21 день.

Сразу после начала лечения с применением повышенных доз Кароверина поведение всех четверых пациентов заметно улучшилось. У них стало заметным просветление сознания, почти прекратились галлюцинации и они были в состоянии распознавать реальные события и поступать в соответствии с ними, способны были взаимодействовать, а также выполнять повседневные потребности без значительных напряжений и нарушений ориентации.

У всех четверых пациентов было установлено, что такие улучшения состояния сохранялись на протяжении курса лечения, однако успехи за пределами курса лечения были достигнуты только у того из пациентов, у которого продолжительность лечения составила 21 день.

По сравнению с применяемыми методами лечения у пациентов на протяжении лечения отмечено значительное улучшение их поведения, при этом массивные побочные явления, проявляющиеся обычно при приеме психотропных средств, такие, как отсутствие стимуляции, увеличение веса и пр., при приеме Кароверина было возможным предупредить.

В результате приема по 240 мг Кароверина в сутки или по 400 мг Кароверина в сочетании с 10 мг Галоперидола (Haloperidol) (нейролептическое средство из категории бутирофенона) стало возможным получать аналогичные результаты, что и при приеме повышенных доз Кароверина, причем улучшения состояния после отмены Кароверина не продолжились.

Пример 6.

Нейрорегенеративное действие Кароверина исследовали на двух пациентах, страдающих параличом лицевого нерва.

Две пациентки, страдающие массивным параличом тройничного нерва, проходили комбинированное лечение в течение четырех недель с применением Кароверина, при этом, с одной стороны, Кароверин вводился трижды в сутки внутривенно в количестве по 360 мг, кроме того, вводилось активное начало в виде депо-пластыря с содержанием 1000 мг Кароверина. Депо-пластырь меняли раз в неделю. Уже по прошествии двух недель можно было наблюдать у каждой из обеих пациенток снижение проявлений паралича настолько, что на парализованной половине лица снова появились зачатки мимики и пациентки снова владели, в частности, веками.

Дополнительное продление курса лечения с применением Кароверина привело к дальнейшему снижению проявлений паралича, при этом, однако, выяснялось, что полное восстановление функции лицевого нерва в результате применения одного лишь Кароверина без дополнительных мер не достигается.

Пример 7.

Пациенту с массивными нарушениями речи вследствие кровоизлияния в мозг вводился внутривенно Кароверин на протяжении трех месяцев в повышенной дозе по 160 мг четыре раза в день в физиологическом растворе поваренной соли. Как показано на фиг.4 в приложении, в начале курса лечения, что отмечено на диаграмме штрихпунктирной линией, пациент владел приблизительно 50% артикуляционной способности, причем по окончании лечения артикуляционная способность восстановилась на 100% (показано сплошной линией на фиг.4) и расстройства речи более не отмечались. В отношении восстановления речи было доказано, что соответствующие, ответственные за артикуляцию нервы восстановились благодаря нейрорегенеративному эффекту Кароверина, и в результате стало возможным полное восстановление речевой способности.

Пример 8.

В отношении антиоксидативного действия производных 1-(аминоалкил)-3-хиноксалин-2-она, а также их свойств служить в качестве ловушки для радикалов проводили опыты in vitro с применением Кароверина и специфичного, улавливающего радикалы реагента - 2,2'-азино-бис(3-этилбенз)тиазолин-6-сульфокислоты (ABTS) - с целью сравнения способностей Кароверина и ABTS улавливать радикалы. В присутствии высокореактивных радикалов ABTS окисляется с образованием устойчивого тиазолин-катионного радикала ABTS⁺. Интенсивный зеленый цвет этого радикала был замерен фотометрически при полосе основного поглощения 420 нм. Кароверин оказался способным подавлять образование ABTS-катионного радикала благодаря образованию оксильного и пероксильного радикала как при отсутствии, так и в присутствии гомогената мозга (фиг.5). При этом Кароверин быстро реагировал со свободными оксильными, пероксильными и ABTS-катионными радикалами, как это отмечалось при сравнительных исследованиях с применением ABTS как в отсутствие, так и в присутствии гомогената мозга. Константа скорости реакции с оксильными радикалами составила 0,4•10¹⁰ М/л•с, та же константа для пероксильных радикалов составила 0,5•1^-10 М/л•с, как это наблюдалось в ходе проведения сравнительных исследований с применением ABTS при отсутствии и в присутствии гомогената мозга (фиг.6). Эти результаты свидетельствуют о том, что Кароверин подавляет образование ABTS-катионных радикалов и катализирует восстановление ABTS-катионных радикалов в присутствии и при отсутствии гомогената мозга, выступает в качестве очень эффективного донора электронов при низкой микромолярной концентрации. При этом уже упоминалось использование образования и восстановления ABTS-катионных радикалов с целью исследования реакций передачи электронов, поскольку это вещество благодаря своей окраске позволяло проводить непосредственный замер образования и восстановления радикалов.

В ходе сравнительного изучения было установлено, что эффективность Кароверина по меньшей мере в три раза выше эффективности известных антиоксидантов Аскорбат, Тролокс и Глютатион (Ascorbat, Trolox, Glutathion). В отношении способности Кароверина улавливать радикалы было установлено, что она достигает способности Мелатонина (Melatonin), который до настоящего времени считается наиболее эффективным донором электронов и, как было установлено, ловушкой для радикалов. Вследствие этого считают, что Кароверин способен облегчить восстановление долгоживущих органических радикалов и поврежденных биомолекул.

Пример 9.

Пять пациентов, из которых две женщины и трое мужчин, страдающих аллергией типа I, в частности сенным насморком, при проявлении первичных аллергических реакций, а именно при чиханье, перхоте в горле и выделениях из носа, проходили лечение с применением Кароверина. Ими принималась трижды в день таблетка с содержанием 150 мг Кароверина.

У всех пяти пациентов стало возможным устранение проявления вторичных явлений аллергической реакции, а именно покраснения в горле и пр. Также и первичные реакции, такие, как чиханье, выделения из носа и пр., полностью исчезли после двухдневного приема Кароверина, после исчезновения первичных реакций - с целью поддержания достигнутого эффекта - был продолжен прием Кароверина дважды в день в небольших дозах в течение недели.

В целях сравнения проводилось лечение двух пациентов с применением обычных противогистаминных средств, при этом как первичные проявления аллергии, так и в особенности вторичные проявления не были немедленно и полностью подавлены, вследствие чего пациенты страдали сенным насморком в течение всего того времени, пока они оставались подверженными действию причины, а именно действию пыльцы травы. Отменить прием медикамента в течение времени, пока летела пыльца, также было нельзя.

Действие Кароверина основано в данном случае на его чрезвычайно высоком антиоксидативном эффекте, в частности на его способности улавливать радикалы, вступать выборочно во взаимодействие с образованными гистамином и цитокином радикалами ОН или ONOO и таким образом обезвреживать их. Благодаря приему Кароверина аллергический цикл прерывается и дальнейшие реакции не проявляются.

Пример 10.

Антиоксидативное действие, в частности предупреждение преждевременного старения клеток кожи, исследовали с помощью мази, приготовленной с содержанием 150 мг Кароверина на 100 г крема. В качестве основы крема применяли глицерин, причем другие фармацевтически активные добавки в мази отсутствовали.

Пять пациенток в возрасте от 35 до 45 лет, кожа которых в среднем характеризовалась сухостью и частично наличием уже четко прослеживающихся проявлений старения, пользовались кремом на основе Кароверина в течение четырех недель дважды в день как в виде основы для наложения макияжа, так и в виде только ночного крема.

Уже по прошествии двух недель были отмечены, в частности, у более молодых тестируемых лиц заметные улучшения состояния кожи, причем заметно уменьшились, в частности, повреждения кожи от солнца и вызванные окислением кожные покраснения. Кроме того, через четыре недели кожа стала более натянутой и более гладкой.

У более пожилых испытуемых лиц после четырех недель кожа лица имела более чистую картину, при которой, в частности, покраснения и повреждения от солнца исчезли почти полностью.

Пример 11.

Применение производных 1-(аминоалкил)-3-хиноксалин-2-она в качестве антагониста метаботропных глютаматрецепторов группы I в ухе морской свинки.

Группе из шести морских свинок инъецировали в ухо оксифенилглицерин в качестве рецепторного агониста, при этом рецептор реагирует таким образом, что происходит резкое увеличение слуховой способности морской свинки. Морские свинки, которым впрыскивали оксифенилглицерин, проявляли признаки страха уже при чрезвычайно тихих шумах и нервно бегали по клетке, а при шумах, не превышавших их нормальный уровень в фармакохимической лаборатории, у некоторых морских свинок наблюдалось поведение, которое позволяло делать вывод о болях, испытываемых животными. Четверым из шести морских свинок впрыскивали затем в ушную вену дозу по 8 мг/кг веса тела морской свинки и наблюдали за поведением. Неожиданно было отмечено, что сразу после введения Кароверина морские свинки успокоились и больше не реагировали со страхом на громкие шумы, такие как хлопанье, в непосредственной близости от них. Так, если хлопали непосредственно перед клеткой, то они не убегали и не прятались в своей норе. Напротив, две другие морские свинки, не получавшие Кароверин, были чрезвычайно возбужденными, и, например, хлопанье перед их клеткой приводило к тому, что они начинали быстро бегать туда и обратно и отчетливо обнаруживали признаки боли и нервозности. Такие отличия в поведении морских свинок наблюдались также после размещения электродов на их ушах, данные измерений которых позволяли легко определить, возбуждали или не возбуждали животных неожиданные шумы. Также и данные измерений электродами четко показывали, что после введения Кароверина морским свинкам возбуждение либо отсутствовало, либо присутствовало в чрезвычайно малой степени.

Затем исследовали подавляющее действие Кароверина на метаботропные глютаматрецепторы группы I на наркотизированном животном путем размещения микроэлектродов на его слуховом нерве. Из результатов измерений, проведенных на подопытных животных после введения им Кароверина и на сравнительных подопытных животных, которым Кароверин не вводился, можно было заключить, что возбудимость глютаматрецепторов группы I оказалась массивно подавленной введенным Кароверином.

На основе этих результатов сравнений можно сделать вывод относительно того, что Кароверин и, следовательно, производные 1-(аминоалкил)-3-хиноксалин-2-она способны вызывать антагонизм метаботропных глютаматрецепторов в ухе морской свинки.

Пример 12.

Применение производных 1-(аминоалкил)-3-хиноксалин-2-она для профилактики рака кожи морских свинок.

Морским свинкам, составлявшим группу в количестве шести штук, выбривали участок в затылочной части головы и подвергали их интенсивному ультрафиолетовому облучению в течение не менее двух часов ежедневно. Ультрафиолетовое излучение содержало при этом определенные доли ультрафиолетовых лучей как А-части, так и В- и С-частей. Четырем из шести морских свинок наносили кисточкой высококонцентрированный раствор из Кароверина и гидрохлорида на выбритый участок затылка, при этом следили за тем, чтобы распределение было по возможности равномерным и по всему облучаемому участку.

После двух недель интенсивного облучения на коже морских свинок из сравнительной группы появились отчетливые признаки ее повреждения, такие как ожоги, покраснения и нарушения кожного покрова, причем в отобранных пробах ткани уже обнаруживались раковые клетки. Четыре морские свинки, подвергнутые обработке раствором "Кароверин-гидрохлорида", после облучения той же продолжительности хотя и имели некоторое покраснение кожи, однако в отобранных пробах ткани раковых клеток обнаружено не было.

Аналогичный опыт проводили с применением 1-диэтиламиноэтил-3-(п-оксибензил)-1,2-дигидрохиноксалин-2-она и получали идентичный результат.

Из приведенного выше следует, что применяемые согласно изобретению производные 1-диэтиламиноэтил-3-хиноксалин-2-она являются чрезвычайно эффективными антиоксидантами и ловушками для радикалов кислородно-клеточного метаболизма и что благодаря этому свойству они способны предупредить вызываемые свободными радикалами изменения ДНК, в частности рак, и в результате пригодны для профилактики, в частности профилактики рака кожи.

Пример 13.

Три пациента в возрасте от 19 до 75 лет, страдающих раком толстой кишки, наряду с обычной химиотерапией с применением Иринотекама и Оксалиплатины (Irinothekam, Oxaliplatin) при четырехнедельном курсе химиотерапии дополнительно принимали Кароверин, причем в первый день была введена внутривенно повышенная доза в физиологическом растворе поваренной соли, в последующие дни принимали по 3 х 3 таблетки ежедневно.

Благодаря чрезвычайно высокому антиоксидативному действию Кароверина при проведении этого исследования было отмечено полное исчезновение рака толстой кишки. Два сравнительных пациента, которых лечили без применения Кароверина, в результате химиотерапии имели известное уменьшение карциномы, однако полностью она не исчезла.

Последующие опыты, проведенные с пациентами, страдающими далеко зашедшими опухолями головы и горла, показали аналогичные результаты, причем эти пациенты наряду с текущей химиотерапией принимали также Кароверин. Наряду с успешным снижением болей стало возможным также уменьшение размера опухолей. Полного исчезновения опухолей достигнуто не было.

Подводя итоги, отметим, что благодаря чрезвычайно большому антиоксидативному действию Кароверина из системы выводятся свободные радикалы кислородно-клеточного метаболизма, и, следовательно, может быть задержано дополнительное устойчивое изменение ДНК, вызывающее заболевание раком. Таким образом представляется, что Кароверин может применяться не только при профилактике рака, но и является высоко эффективным при его лечении, в частности, некоторых специфичных видов опухолей.

Формула изобретения

1. Применение производных 1-(аминоалкил)-3-хиноксалин-2-она, в частности, производных 1-диэтиламиноэтил-3-хиноксалин 2-она формулы

где R₃ означает гидрокси, метокси, этокси или водород,

их фармацевтически совместимых солей в качестве антиоксидантного средства в композициях для профилактики и лечения заболеваний, вызванных свободными радикалами кислородно-клеточного метаболизма, и в качестве стимулятора нервных клеток, в частности глютаматовых нервных клеток.

2. Применение по п.1, где в качестве производного 1-(аминоалки)-3-хиноксалин-2-она используют метоксипроизводное 1-диэтиламиноэтил-3-(п-метоксибензил)-1,2-дигидрохиноксилин-2-она или его фармацевтически совместимые соли.

3. Применение по п.1, где в качестве производного 1-(аминоалкил)-3-хиноксалин-2-она используют гидроксипроизводное 1-диэтиламиноэтил-3-(п-гидроксибензил)-1,2-дигидрохиноксалин-2-она или его фармацевтически совместимые соли.

4. Применение по одному из пп.1-3 для профилактики или лечения изменений ДНК, вызванных свободными радикалами ОН, в частности, рака.

5. Применение по одному из пп.1-3 для лечения заболеваний, основанных на вирусной репликации, вызванной свободными радикалами кислородно-клеточного метаболизма, в частности, для подавления репликации ВИЧ.

6. Применение по одному из пп.1-3 для лечения явлений старения клеток и/или разрушений клеток, вызванных свободными радикалами кислородно-клеточного метаболизма, в частности, явлений старения кожи.

7. Применение по одному из пп.1-3 для лечения аллергических заболеваний типа 1, вызванных свободными радикалами ОН и/или свободными радикалами ONOO.

8. Применение по одному из пп.1-3 для стимуляции роста нервных клеток, в частности, для восстановления функциональной способности нервов после апоплексического удара, а также для улучшения нарушений глотательной функции и артикуляции, в частности, расстройства речи и поперечных параличей, для лечения шизофрении и амиотрофного латерального склероза, для стимуляции, в частности, роста глютаматовых нервов при наличии улиткового имплантата, а также при функциональных нарушениях слухового нерва, нерва равновесия, зрительного нерва, нерва обоняния и лицевого нерва.

9. Применение по одному из пп.1-8, отличающееся тем, что производное 1-(аминоалкил)-3-хиноксалин-2-она или его фармацевтически совместимые соли используют при суточной дозе от 3 до 20 мг/кг веса тела, в частности, от 5 до 15 мг/кг веса тела.

10. Применение по одному из пп.1-7, отличающееся тем, что производное 1-(аминоалкил)-3-хиноксалин-2-она или его фармацевтически совместимые соли используют при суточной дозе от 3 до 10 мг/кг, в частности, от 5 до 10 мг/кг веса тела.

11. Применение по одному из пп.1-10, отличающееся тем, что производное 1-(аминоалкил)-3-хиноксалин-2-она предназначено для орального, чрескожного, локального, парентерального, в частности, внутривенного введения.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6