Питательная среда для производства бактериофагов и способ ее получения

Изобретение относится к биотехнологии, в частности касается способа получения питательной среды для производства бактериофагов, и может быть использовано в медицинской микробиологии. Питательная среда для производства бактериофагов содержит в качестве основы кислотный гидролизат казеина со степенью расщепления 0,6-0,7, витамины - никотиновую кислоту, фолиевую кислоту, пантотенат кальция, рибофлавин, тиамина бромид, биотин, дистиллированную воду. Способ получения питательной среды для производства бактериофагов, предусматривающий гидролиз нерасщепленного казеина, смешанного с водой с помощью соляной кислоты, при давлении 0,2±0,05 МПа до достижения степени расщепления 0,6-0,7, изоосаждение и обработку углем ведут одновременно. Изобретение позволяет повысить ростовые свойства среды, повысить качества получаемого бактериофага, снизить себестоимость. 2 н. и 1 з.п. ф-лы.

 

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к составу питательной среды для производства бактериофагов и способу ее получения. Известна мясная среда, используемая для получения бактериофагов (патент РФ №2036232, опубл. 27.05.95).

Однако эта среда нестандартна и дорогостояща. Наиболее близкой к предлагаемому изобретению является питательная среда, содержащая в качестве основы гидролизат казеина, витамины, дистиллированную воду (патент РФ №2086646 С1, опубл. 10.04.1997).

Недостатком ее является то, что фаголизаты, полученные на этих средах, обладают плохой фильтруемостью через микропористые мембраны, что усложняет технологию.

Наиболее близким к предлагаемому изобретению по способу получения питательной среды является известный способ (Руководство по микробиологии, клинике и эпидемиологии инфекционных болезней. М. Медгиз, 1962. - Т.1. - с.346). Известный способ осуществляется путем гидролиза казеина, изоосаждения и обработки углем.

Недостатком известного способа является низкая производительность.

Задачей настоящего изобретения является повышение производительности, упрощение способа, повышение качества продукта и снижение затрат.

Для достижения названного технического результата питательная среда для производства бактериофагов содержит в качестве основы гидролизат казеина, витамины, дистиллированную воду, при этом она содержит кислотный гидролизат казеина со степенью расщепления 0,6-0,7, а из витаминов - никотиновую кислоту, фолиевую кислоту, пантотенат кальция, рибофлавин, тиамина бромид, биотин при следующем соотношении компонентов:

кислотный гидролизат казеина 25-33 л

никотиновая кислота 0,1-0,2 г

фолиевая кислота 0,1-0,2 г

пантотенат кальция 0,1-0,2 г

рибофлавин 0,1-0,2 г

тиамина бромид 0,1-0,2 г

биотин 0,001-0,002 г

дистиллированная вода до 100 л

Отличительной особенностью предлагаемой питательной среды для производства бактериофагов является то, что она содержит кислотный гидролизат казеина со степенью расщепления 0,6-0,7, а из витаминов - никотиновую кислоту, фолиевую кислоту, пантотенат кальция, рибофлавин, тиамина бромид, биотин при следующем соотношении компонентов:

кислотный гидролизат казеина 25-33 л

никотиновая кислота 0,1-0,2 г

фолиевая кислота 0,1-0,2 г

пантотенат кальция 0,1-0,2 г

рибофлавин 0,1-0,2 г

тиамина бромид 0,1-0,2 г

биотин 0,001-0,002 г

дистиллированная вода до 100 л

Кроме того, для достижения указанного технического результата предлагается способ получения питательной среды для производства бактериофагов путем гидролиза казеина, смешанного с водой, с помощью соляной кислоты, изоосаждения и обработки гидролизата казеина углем, при этом гидролиз ведут при давлении 0,2±0, 05 МПа до достижения степени расщепления 0,6-0,7, а изоосаждение нерасщепленного казеина и обработку углем ведут одновременно.

Кроме того, гидролиз казеина осуществляют при следующем соотношении компонентов: вода дистиллированная 100±1 л, казеин 5±0,5 кг, кислота соляная 3±0,3 л.

Отличительной особенностью предлагаемого способа является то, что гидролиз ведут при давлении 0,2±0,05 МПа до достижения степени расщепления 0,6-0,7, а изоосаждение нерасщепленного казеина и обработку углем ведут одновременно. Кроме того, гидролиз казеина осуществляют при следующем соотношении компонентов: вода дистиллированная 100±1 л, казеин 5±0,5 кг, кислота соляная 3±0,3 л.

Сущность изобретения заключается в следующем. Расщепление казеина кислотой ведут при давлении 0,2±0,05 МПа и сниженной дозе казеина, что обеспечивает более глубокое расщепление белка. Для экономии времени и сокращения единиц оборудования, занятых в технологическом процессе, изоосаждение казеина и обработку гидролизата активированным углем совмещают в одну операцию. В качестве стимулирующей добавки используют набор витаминов. Использование витаминов намного упрощает приготовление среды, способствует ее стандартизации. Для приготовления гидролизата и питательной среды используют дистиллированную воду с целью обеспечения стандартности ее солевого состава. Установление в питательной среде рН (7,6±0,1) обеспечивает получение оптимальной слабощелочной среды в фаголизате (7,4±0,1), необходимой для сохранения активности бактериофагов.

Предлагаемая среда является универсальной для всех используемых в производстве бактериофагов культур: стафилококка, стрептококка, энтерококка, клебсиелл, синегнойной палочки, кишечной палочки, протея, дизентерии, сальмонелл и позволяет получать бактериофаги по активности не ниже, чем при использовании мясных сред. Активность по Аппельману фаголизатов стафилококка, стрептококков, энтерококков, синегнойной палочки, кишечной палочки, клебсиелл, протея, сальмонелл не ниже 10^-5, активность дизентерийных бактериофагов, полученных на данной среде, не ниже 10^-8. Фаголизаты хорошо фильтруются через капроновые микропористые мембраны и могут быть сконцентрированы в 100 раз и более при использовании мембранных методов разделения.

Приготовленные на данной среде бактериофаги сохраняют активность без изменения до 5 лет (срок наблюдения) при температуре (6±4)°С в защищенном от света месте.

Пример получения казеиновой питательной среды.

1. Гидролизат казеина.

Состав:

Вода(дистиллированная) 700 л

Казеин технический 35 кг

Кислота соляная (уд. вес 1,19) 21 л

Уголь активированный 14 кг

Натрия гидроксид 7,0-7,5 кг

В эмалированный реактор вместимостью 1000 л закачивают под вакуумом воду и соляную кислоту, перемешивают. Через люк загружают казеин, люк закрывают, перемешивают и оставляют при комнатной температуре на (1,0±0,5) ч. Вентиля закрывают и постепенно в течение (1,5±0,5) ч поднимают давление в реакторе до 0,2 МПа. Гидролиз ведут 2 ч под давлением 0,2 МПа. Обработку гидролизата проводят через (18±2) ч.

К гидролизату при перемешивании добавляют 40% раствор гидроксида натрия до рН 4,7. Всыпают уголь, перемешивают, люк закрывают, нагревают до кипения при открытых вентилях и кипятят 15 мин. Содержимое реактора фильтруют через миткалевое полотно в бутыли. Полученный гидролизат хранят при температуре (6±4)°С.

2. Приготовление питательной среды.

Состав:

кислотный гидролизат казеина 25-33 л

никотиновая кислота 0,1-0,2 г

фолиевая кислота 0,1-0,2 г

пантотенат кальция 0,1-0,2 г

рибофлавин 0,1-0,2 г

тиамина бромид 0,1-0,2 г

биотин 0,001-0,002 г

дистиллированная вода до 100 л

В реактор закачивают гидролизат, затем разводят дистиллированной водой до содержания аминного азота 1,1-1,2 мг/мл, добавляют гидроксид натрия до рН 7,6 и всыпают смесь витаминов. Кипятят 15 минут, фильтруют через миткалевое полотно, разливают в бутыли и стерилизуют в автоклаве при давлении 0,05 МПа в течение 30-45 мин.

1. Питательная среда для производства бактериофагов, содержащая в качестве основы гидролизат казеина, витамины, дистиллированную воду, отличающаяся тем, что она содержит кислотный гидролизат казеина со степенью расщепления 0,6-0,7, а из витаминов - никотиновую кислоту, фолиевую кислоту, пантотенат кальция, рибофлавин, тиамина бромид, биотин при следующем содержании компонентов:

Кислотный гидролизат казеина 25-33 л

Никотиновая кислота 0,1-0,2 г

Фолиевая кислота 0,1-0,2 г

Пантотенат кальция 0,1-0,2 г

Рибофлавин 0,1-0,2 г

Тиамина бромид 0,1-0,2 г

Биотин 0,001-0,002 г

Дистиллированная вода До 100 л

2. Способ получения питательной среды для производства бактериофагов путем гидролиза казеина, смешанного с водой с помощью соляной кислоты, изоосаждения и обработки гидролизата казеина углем, разведения полученного гидролизата дистиллированной водой и введения витаминов, отличающийся тем, что гидролиз нерасщепленного казеина и обработку углем ведут при давлении (0,2±0,05) МПа до достижения степени расщепления 0,6-0,7, изоосаждение нерасщепленного казеина и обработку углем ведут одновременно, а в качестве витаминов используют никотиновую кислоту, фолиевую кислоту, пантотенат кальция, рибофлавин, тиамина бромид, биотин.

3. Способ получения питательной среды для производства бактериофагов по п.2, отличающийся тем, что гидролиз казеина осуществляют при следующем соотношении компонентов: вода дистиллированная (100±1) л, казеин (5±0,5) кг, кислота соляная (3±0,3) л.