Фармацевтические композиции, способ их получения и применения

Изобретение относится к фармацевтической композиции, обладающей ингибирующим действием в отношении сериновой протеазы (Каспазы-3), в форме таблеток, капсул или инъекций, помещенных в фармацевтически приемлемую упаковку, способу ее получения и способу лечения заболеваний, связанных с повышенной активацией апоптоза. Композиция содержит в качестве активной субстанции фармацевтически эффективное количество 2,3-дигидро-1Н-бензо[g]птеридин-4-она общей формулы 1 или его соли с фармакологически приемлемой кислотой

в которой: Х означает О или S; R¹ и R² независимо друг от друга представляют атом водорода, инертный заместитель, выбранный из группы, включающей низко- или нереакционоспособный необязательно замещенный радикал, такой как C₁-С₇алкил, С₂-С₇алкенил,С₂-С₇алкинил,C₁-С₇алкокси,С₇-С₁₂аралкил,С₇-С₁₂гетероциклилалкил,С₇-С₁₂алкарил,С₃-С₁₀циклоалкил,С₃-₁₀циклоалкенил, фенил, арил, гетероциклил; необязательно замещенную гидроксиС_1-5алкильную группу, необязательно замещенную аминоС_1-7алкильную группу;R³, R⁴, R⁵ и R⁶ независимо друг от друга представляют: атом водорода, атом галогена, CF₃, CN, инертный заместитель, выбираемый из группы, включающей низко- или нереакционоспособный необязательно замещенный радикал, необязательно замещенную гидроксильную группу, необязательно замещенную гидрокси-С_1-5алкильную группу, необязательно замещенную аминогруппу, необязательно замещенную амино-С_1-7алкильную группу, необязательно замещенную карбокси-С_1-7алкильную группу, необязательно замещенную С_1-6алкилкарбокси-С_1-6алкильную группу, необязательно замещенную карбамоильную группу, необязательно замещенную C_1-6алкилкарбамоильную группу, необязательно замещенную сульфамоильную группу. Изобретение также относится к применению соединений формулы 1 для получения фармацевтической композиции и экспериментального (in vitro, in vivo) исследования процессов апоптоза. 4 н. и 3 з.п. ф-лы, 3 ил., 2 табл., 2 пр.

 

Данное изобретение относится к новому хемотипу соединений, а именно 2,3-дигидро-1Н-бензо[g]птеридин-4-онов, обладающих физиологической активностью. Более конкретно, настоящее изобретение относится к новым фармацевтическим композициям, содержащим указанные соединения в виде активных субстанций; а также к способу получения этих композиций и способу применения этих композиций для лечения и предупреждения развития различных заболеваний, связанных с повышенной активацией апоптоза. (апоптоз -Apoptosis: Pharmacological Implications and Therapeutic Opportunities. Kaufmann, S.H., Ed.; Academic Press: San Diego, 1997). Этот широкий круг заболеваний включает, в частности, кардиоваскулярные (например, острые ишемические поражения - инсульт, инфаркт миокарда), нейродегенеративные, например, болезни Паркинсона и Альцгеймера (Ryan С.; Salvesen G. Caspases and neuronal development. Biol. Chem. 2003, 384 (6), 855-861), вирусные заболевания (например, гепатит-С и СПИД), и т.д. (Cryns, V.L.; Yuan, J. The cutting edge: Caspases in apoptosis and disease. In When Cells Die; Lockshin, R.A., Zakeri, Z., Tilly, J.L., Eds.; Wiley-Liss: New York, 1998, 177-210).

В основе фармакологического эффекта 2,3-дигидро-1Н-бензо[g]птеридин-4-онов лежит высокоэффективное подавление апоптоза, реализуемое посредством ингибирования цистеиновой протеазы -каспазы-3, играющей ключевую роль в развитии апоптоза.

В настоящее время известно, что жизнь многоклеточных организмов основана на балансе постоянно протекающих процессов - деление и рост клеток должны сопровождаться альтернативным процессом удаления старых, поврежденных, мутировавших и других нежелательных для организма клеток. Управляемую форму программированной смерти клетки с характерными морфологическими и биохимическими признаками определяют как апоптоз (греческое слово, соответствующее русскому "листопаду": аро - отделение, ptosis - падение) (Apoptosis: Pharmacological Implications and Therapeutic Opportunities. Kaufmann, S.H., Ed.; Academic Press: San Diego, 1997. When Cells Die; Lockshin, R.A.; Zakeri, Z.; Tilly, J.L.; Eds.; Wiley-Liss: New York, 1998). На сегодняшний день установлено, что нарушение контроля клеточной гибели ведет к сдвигам гомеостаза и развитию различных патологических состояний (Nicholson D.W. From bench to clinic with apoptosis-based therapeutic agents. Nature (London) 2000, 407, 810-816). В случае повышенной активации апоптоза возникают самые серьезные патологии, относящиеся к кардиоваскулярным, нейродегенеративным, инфекционным, метаболическим и т.п.заболеваниям (Cryns V.L.; Yuan J. The cutting edge: Caspases in apoptosis and disease. In When Cells Die; Lockshin, R.A.; Zakeri, Z.; Tilly, J.L.; Eds.; Wiley-Liss: New York, 1998, 177-210). Так показано, что протекание СПИДа и ряда тяжелых заболеваний нервной системы (паркинсонизм, болезнь Альцгеймера) характеризуется повышенной активацией апоптоза (Hartmann A.; Hunot S.; Michel P.; Muriel M.P.; Vyas S.; Faucheux В.; Mouatt-Prigent P.; Tunnel H.; Srinivasan A.; Ruberg M.; Evan G.; Agid Y.; Hirsch E. Caspase-3: A vulnerability factor and final effector in apoptotic death of dopaminergic neurons in Parkinson's disease. PNAS 2000, 97 (6), 2875-2880). При ишемии мозга и инсульте значительная часть клеток пораженной области умирает именно по механизму апоптоза. Применительно к клеткам животных и человека апоптоз в большинстве случаев связан с протеолитической активацией каскада каспаз - семейства эволюционно консервативных цистеиновых протеаз, которые специфически расщепляют белки после остатков аспарагиновой кислоты. На основе структурной гомологии каспазы подразделяются на подсемейства а) каспазы-1 (каспазы 1, 4, 5), б) каспазы-2 (каспаза-2) и в) каспазы-3 (каспазы 3, 6-10). (Nicholson, D.W.; Thomberry, N.A. Caspases: killer proteases. Trends Biochem. Sci. 1997, 22, 299-306); (Nicholson D.W. Caspase structure, proteolytic substrates and function during apoptotic cell death [Review]. Cell. Death. Diff. 1999, 6, 1028-1042).

Особенно важную роль, фактически определяющую жизненные перспективы клеток, играет каспаза-3 (Porter, A. G.; Janicke, R. U. Emerging roles of caspase-3 in apoptosis. Cell Death Differ. 1999, 6, 99-104). Поэтому поиск высокоэффективных ингибиторов каспазы-3, способных блокировать развитие апоптоза, является весьма перспективным подходом к созданию принципиально новых новых кардиопротекторов (Chapman J.; Magee W.; Stukenbrok H.; Beckius G.; Milici A.; Tracey W. A novel nonpeptidic caspase-3/7 inhibitor, (S)-(+)-5-[l-(2-methoxymethylpyrrolidinyl)-sulfonyl]isatin reduces myocardial ischemic injury. Eur. J. Pharmacol. 2002, 456{1-3), 59-68), нейропротекторов (Scott С.; Sobotka-Briner С.; Wilkins D.; Jacobs R.; Folmer J.; Frazee W.; Bhat R.; Ghanekar S.; Aharony D. Novel Small Molecule Inhibitors of Caspase-3 Block Cellular and Biochemical Features ofApoptosis. Pharmacol. Exp. Therap. 2003, 304 (1) 433-440), гепатопротекторов (Anseimo D.; Katori M.; Kaldas M.; Hoglen N.; Valentine K.; Busuttil R.; Kupiec-Weglinski W.; Farmer, D. Apoptosis targeted therapy with the caspase inhibitor IDN-6556, ameliorates ex-vivo liver ischemia reperfusion injury. Am. J. Transplant.

2002, 2 (Suppl.3), 920) для лечения и зашиты от широкого круга заболеваний, ключевым звеном которых является апоптоз.

Многочисленные исследования, проведенные в последнее время, привели к открытию высокоэффективных ингибиторов каспазы-3 в ряду пептидных (Garcia-Calvo M.; Peterson E.; Leiting В.; Ruel R.; Nicholson D.; Thomberry N. Inhibition of human caspases by peptide-based and macromolecular inhibitors. J. Biol. Chem. 1998, 273, 32608-32613) и пептидомиметических соединений (Karanewsky D.; Bai X.; Linton S.; Krebs J.; Wu J.; Pham В.; Tomaselli K. Conformationally constrained inhibitors ofcaspase-1 and of the human CED-3 homologue caspase-3. Bioorg. Med. Chem. Lett. 1998, 5, 2757-2762). Примером такого рода соединений могут служить, например, следующие пептидомиметические производные, разработанные фирмами Idun Pharmaceuticals, Inc. (Tomaselli K.J.; Gladstone P.L.; Temansky R.J. Pat. PCT WO 0179162, 2001) и Vertex Pharmaceuticals Inc. (Golec, J.; Lang, P.; Diu-Hercend, A.; Knegtel, R.; Weber, P.; Miller, K.; Hercend, Т.; Mortimore, M.; Miller, A. Pat. PCT WO 0285899, 2002).

Однако такого рода соединения имеют весьма ограниченную возможность клинического применения, что связано с их неудовлетворительными фармакокинетическими и физикохимическими свойствами (Scott С.; Sobotka-Briner С.; Wilkins D.; Jacobs R.; Folmer J.; Frazee W.; Bhat R.; Ghanekar S.; Aharony D. Novel Small Molecule Inhibitors of Caspase-3 Block Cellular and Biochemical Features of Apoptosis. Pharmacol. Exp. Therap. 2003, 304(1), 433-440). В этой связи продолжаются поиски непептидных низкомолекулярных каспазных ингибиторов. Так, были найдены достаточно эффективные ингибиторы (IC₅₀=5-40 nМ) каспазы-3 в ряду изатинов, например (Chapman J.; Magee W.; Stukenbrok H.; Beckius G.; Milici A.; Tracey W. Anovel nonpeptidic caspase-3/7 inhibitor, (S)-(+)-5-[l-(2-methoxymethylpyrrolidinyl) sulfonyl]isatin reduces myocardial ischemic injury. Eur. J. Pharmacol. 2002, 456(1-3), 59-68) и (Lee, D.; Long, S.A.; Murray, J.H. et al. Potent and selective nonpeptide inhibitors of caspases 3 and 7. J. Med. Chem. 2001, 44(12), 2015-2026)

Однако невысокая селективность соединений этого класса стимулирует дальнейшие поиски ингибиторов каспазы-3. Так, недавно были обнаружены каспазные ингибиторы в ряду хиназолинов, вещества обладают умеренной активностью и селективностью (Scott С.; Sobotka-Briner С.; Wilkins D.; Jacobs R.; Folmer J.; Frazee W.; Bhat R.; Ghanekar S.; Aharony D. Novel Small Molecule Inhibitors of Caspase-3 Block Cellular and Biochemical Features ofApoptosis. Pharmacol. Exp. Therap. 2003, 304(1), 433-440).

Следует отметить, что в научной и патентной литературе до настоящего времени отсутствовали сведения об антипротеазной активности 2,3-дигидро-1Н-бензо [g] птеридин-4-онов.

В результате проведенных исследований, направленных на поиск новых биологически активных соединений селективно подавляющих программируемую клеточную смерть (апоптоз), изобретатели обнаружили новый хемотип непептидных ингибиторов каспаз-3, а именно 12,3-дигидро-1Н-бензо[g]птеридин-4-оны.

Более конкретно данное изобретение относится к новой фармацевтической композиции, содержащей 2,3-дигидро-1Н-бензо[g]птеридин-4-оны в виде активных субстанций; а также к способу ее получения и способу ее применения для лечения и предупреждения развития различных заболеваний, связанных с повышенной активацией апоптоза, например, острые ишемические поражения (например, инсульт, инфаркт миокарда), нейродегенеративные (например, болезни Паркинсона и Альцгеймера), вирусные заболевания (например, гепатит-С и СПИД), и т.д.

Ниже приведены определения терминов, которые использованы в описании этого изобретения.

“Комбинаторная библиотека” означает коллекцию соединений, полученных параллельным синтезом, предназначенную для поиска лидера или оптимизации биологической активности лид-соединения, причем каждое соединение библиотеки соответствует общему скэффолду и библиотека является коллекцией родственных гомологов или аналогов.

“Фокусированная библиотека” означает комбинаторную библиотеку, или совокупность нескольких комбинаторных библиотек, или совокупность библиотек и веществ, специальным образом организованную с целью увеличения вероятности нахождения хитов и лидеров или с целью повышения эффективности их оптимизации. Дизайн фокусированных библиотек, как правило, связан с направленным поиском эффекторов (ингибиторов, активаторов, агонистов, антагонистов и т.п.) определенных биомишеней (ферментов, рецепторов, ионных каналов и т.п.).

“Лид-соединение” означает соединение с выдающейся активностью, относящейся к определенной болезни.

“Скэффолд” означает общую структурную формулу или молекулярный коркас или инвариантную область соединений, характерную для всех соединений, входящих в комбинаторную библиотеку.

“Хемотип” означает серию соединений, объединенную общей структурной формулой и обладающую определенным общим свойством, например, каким-то видом физиологичекой активности. Можно сказать, например, "новый хемотип активаторов калиевых каналов" или "известный хемотип киназных ингибиторов", и т.д. Как правило, наличие общего структурного фрагмента у соединений в рамках одного хемотипа является необходимым и достаточным условием для наличия у них общего свойства.

“Заместитель” означает химический радикал, который присоединяется к скэффолду или полупродукту синтеза в процессе их синтеза. В качестве заместителя могут служить атом галогена, гидроксильная группа, карбоксиалкильная группа, карбоксильная группа, карбамоильная группа или инертный заместитель.

“Инертный заместитель” ("Non-interfering substituent") означает низко- или нереакционоспособный радикал, включая, но не ограничивая C₁-С₇ алкил, С₂-С₇ алкенил, С₂-С₇ алкинил, C₁-С₇ алкокси, С₇-С₁₂ аралкил, замещенный аралкил, С₇-С₁₂ гетероциклилалкил, замещенный гетероциюшлалкил, С₇-С₁₂ алкарил, С₃-С₁₀ циклоалкил, С₃-С₁₀ циклоалкенил, фенил, замещенный фенил, толуил, ксиленил, бифенил, С₂-С₁₂ алкоксиалкил, С₂-С₁₀ алкилсульфинил, С₂-С₁₀ алкилсульфонил, (CH₂)_m-O-(C₁-С₇ алкил), -(CH₂)_m-N(C₁-С₇ алкил)_n, арил, замещенный арил, замещенный алкокси, фторалкил, арилоксиалкил, гетероциклил, замещенный гетероциклил и нитроалкил; где m and n имеют значение от 1 до 7. Предпочтительными “инертными заместителями” являются C₁-С₇ алкил, С₂-С₇ алкенил, С₁-С₇ алкинил, C₇-С₁₂ алкокси, С₇-С₁₂ аралкил, С₇-C₁₂ алкарил, С₃-С₁₀ циклоалкил, С₃-С₁₀ циклоалкенил, фенил, замещенный фенил, (СН₂)_m-O-(C₁-С₇ алкил), -(CH₂)_m-N(C₁-С₇ алкил)_n, арил, замещенный арил, гетероциклил и замещенный гетероциклил.

“Замещенная группа, замещенный радикал или скэффолд” означают соответственно группу, радикал или скэффолд, у которых имеется заместитель, включая но не ограничивая: инертный заместитель, атом галогена, нитро группа, циано группа, сульфо группа, гидроксильная группа, амино группа, карбоксиалкильная группа, карбоксильная группа, карбамоильная группа. Например: замещенный алкил означает алкил, у которого один или несколько заместителей, например гидроксиалкил или метилоксикарбонилалкил, амино-метоксикарбонил-метил, диметиламиноалкил, 2-гидрокси-2-метоксикарбонил-этил и др.; замещенная амино группа означает амино группу, у которой имеется один или двазаместителя, например, ациламино группа, N,N-диалкиламино группа, N-ацил-N-арил-амино группа, ацетил-метоксикарбонилметил-амино группа и др.; замещенный фенил означает фенил, у которого имеется один или несколько заместителей, например, 2-метоксикарбонилфенил, 4-амино-3-метоксикарбонилфенил, 3,4-диаминофенил и др.

“Необязательно замещенная группа, необязательно замещенный радикал или скэффолд” означают, соответственно группу, радикал или скэффолд, включающие группы, радикалы или скэффолды с заместителями и без заместителей. Например, понятие необязательно замещенная аминогруппа включает: незамещенную аминогруппу и аминогруппы, содержащие любые, не противоречащие химии заместители, включая но не ограничивая ациламино группы, N,N-диалкиламино группы, N-ацил-N-арил-амино группы, ацил-метоксикарбонилметил-амино группы и др.

“Арил” означает один или более ароматических циклов, каждой из которых включает 5 или 6 атомов углерода. “Арил” может быть конденсированным полициклом, например, как нафталин или неконденсированным, например, как бифенил. “Замещенный арил” имеет один или несколько “не мешающих” заместителей.

“Галоген” означает атом фтора, хлора, брома или йода.

“Гетероцикл” означает один или несколько насыщенных или ароматических циклов с 5, 6 или 7 атомами, по крайней мере, один из которых является гетероатомом. Преимущественными гетероатомами являются сера, кислород и азот. “Гетероцикл” может быть конденсированным полициклом, например, как бензимидазол, бензоксазол. бензтиазол, хинолин или неконденсированным, например, как бипиридил.

“Азогетероцикл” означает гетероцикл, включающий, по крайней мере, один атом азота, например, как бензимидазол, бензоксазол. бензтиазол, хинолин.

“Замещенный гетероцикл” означает гетероцикл, имеющий один или несколько “не мешающих” заместителей.

“Параллельный синтез” означает метод проведения химического синтеза комбинаторной библиотеки индивидуальных соединений.

Целью настоящего изобретения является создание новой фармацевтической композиции в форме таблеток, капсул или инъекций помещенных в фармацевтически приемлемую упаковку.

Поставленная цель достигается фармацевтической композицией, обладающей ингибирующим действием в отношении сериновой протеазы (Каспазы-3), в форме таблеток, капсул или инъекций, помещенных в фармацевтически приемлемую упаковку, содержащей в качестве активной субстанции фармацевтически эффективное количество 2,3-дигидро-1Н-бензо[g]птеридин-4-она общей формулы 1 или его соли с фармакалогически приемлемой кислотой

в которой: Х означает О или S;

R¹ и R² независимо друг от друга представляют атом водорода, инертный заместитель, выбранный из группы, включающей низко-или нереакционноспособный необязательно замещенный радикал, такой как C₁-C₇ алкил, С₂-С₇ алкенил, С₂-С₇ алкинил, C₁-C₇ алкокси, С₇-С₁₂ аралкил, C₇-C₁₂ гетероциклилалкил, C₇-C₁₂ алкарил, С₃-С₁₀ циклоалкил, С₃-С₁₀ циклоалкенил, фенил, арил, гетероциклил, необязательно замещенную гидрокси С_1-5 алкильную группу, необязательно замещенную амино С_1-7 алкильную группу;

R³, R⁴, R⁵ и R⁶ независимо друг от друга представляют: атом водорода, атом галогена, СF₃, CN, инертный заместитель, выбранный из группы, включающей низко- или нереакционноспособный необязательно замещенный радикал, такой как C₁-C₇ алкил, С₂-С₇ алкенил, С₂-С₇ алкинил, C₁-C₇ алкокси, C₇-C₁₂ аралкил, C₇-C₁₂ гетероциклилалкил, C₇-C₁₂ алкарил, С₃-С₁₀ циклоалкил, С₃-С₁₀ циклоалкенил, фенил, арил, гетероциклил, необязательно замещенную гидроксильную группу, необязательно замещенную гидрокси С_1-6 алкильную группу, необязательно замещенную амино группу, необязательно замещенную аминоС_1-6алкильную группу, необязательно замещенную карбоксиС_1-6алкильную группу, необязательно замещенную С_1-6-балкилкарбоксиС_1-6-алкильную группу, необязательно замещенную карбомаильную группу, необязательно замещенную C_1-6алкилкарбомаильную группу, необязательно замещенную сульфамоильную группу.

Согласно изобретению более предпочтительной фармацевтической композицией для лечения и предупреждения развития различных заболеваний теплокровных животных и людей, связанных с повышенной активацией апоптоза является композиция, содержащая в качестве активной субстанции фармацевтически эффективное количество замещенных 8-амино-2-тиоксо-2,3-дигидро-1Н-бензо[g]птеридин-4-она общей формулы 1.1 и/или замещенных 8-амино-2,3-дигидро-1Н-бензо[g]птеридин-2,4-диона общей формулы 1.2 или их соли с фармакалогически приемлемой кислотой

в которых:

R¹, R², R³, R⁵ R⁶ имеют вышеуказанное значение;

R⁷ и R⁸ независимо друг от друга представляют атом водорода, инертный заместитель, необязательно замещенную гидроксиС_1-6алкильную группу, необязательно замещенную аминоС_1-6алкильную группу, необязательно замещенную C_1-6алкил-карбоксиС_1-6алкильную группу, необязательно замещенную C_1-6алкилкарбамоильную группу, необязательно замещенную формильную группу, замещенную сульфонильную группу; или R⁷ и R⁸ вместе с атомом азота, к которому они присоединены, представляют, необязательно замещенный и необязательно дополнительно включающий гетероатом, выбранный из группы: кислород, азот или сера, 3-10-членный цикл; или R⁷ и R⁸ вместе с атомом азота, к которому они присоединены, представляют конденсированный гетероцикл, необязательно замещенный и необязательно дополнительно включающий гетероатом, выбранный из группы: кислород, азот или сера.

Согласно изобретению более предпочтительной фармацевтической композицией для лечения и предупреждения развития различных заболеваний теплокровных животных и людей, связанных с повышенной активацией апоптоза, является композиция, содержащая в качестве активной субстанции фармацевтически эффективное количество замещенных N-(4-оксо-2-тиоксо-1,2,3,4-тетрагидро-(бензо[g]птеридин-8-ил)-формамидина общей формулы 1.3 и/или замещенных N-(2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-(бензо[g]птеридин-8-ил)-формамидина общей формулы 1.4 или их соли с фармакологически приемлемой кислотой

в которых: R¹, R², R³, R⁵ и R⁶ имеют вышеуказанное значение; R⁹ и R¹⁰ независимо друг от друга представляют атом водорода или инертный заместитель.

Согласно изобретению более предпочтительной фармацевтической композицией для лечения и предупреждения развития различных заболеваний теплокровных животных и людей, связанных с повышенной активацией апоптоза, является композиция, содержащая в качестве активной субстанции фармацевтически эффективное количество замещенных 5-[(4-оксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-иламино)-метилен]-дигидро-пиримидин-4,6-диона общей формулы 1.5 или его соли с фармакологически приемлемой кислотой в которой:

X, R¹, R², R³, R⁵ и R⁶ имеют вышеуказанное значение;

R¹¹ и R¹² независимо друг от друга представляют атом водорода, инертный заместитель, необязательно замещенный гидроксиС_1-5алкильную группу, необязательно замещенный аминоС_1-7алкильную группу.

Целью настоящего изобретения также является способ получения фармацевтической композиции.

Поставленная цель достигается способом получения фармацевтической композиции, заключающимся в смешении активной субстанции с инертным наполнителем и/или растворителем, отличительная особенность которого состоит в том, что в качестве активной субстанции используется фармакологически эффективное количество вещества общей формулы 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4 или 1.5 или его соль с фармакологически приемлемой кислотой.

Целью настоящего изобретения также является способ лечения и предупреждения развития различных заболеваний теплокровных животных и людей, связанных с повышенной активацией апоптоза.

Поставленная цель достигается способом лечения и предупреждения развития различных заболеваний теплокровных животных и людей, связанных с повышенной активацией апоптоза, путем введения теплокровному животному или человеку фармацевтической композиции, содержащей в качестве активной субстанции фармацевтически эффективное количество 2,3-дигидро-1Н-бензо[g]птеридин-4-она общей формулы 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4 или 1.5 или его соль с фармакологически приемлемой кислотой.

Целью настоящего изобретения также является создание новых “фармакологических инструментов” для экспериментальных исследований процессов апоптоза.

Поставленная цель достигается применением физиологически активных соединений общей формулы 1 или их соли с фармакологически приемлемьми кислотами, обладающих свойствами ингибиторов каспазы-3, для получения лекарственных средств или для экспериментальных (in vitro или in vivo) исследований процессов апоптоза в качестве “фармакологических инструментов”.

2,3-Дигидро-1Н-бензо[g]птеридин-4-оны общей формулы 1 получают взаимодействием пиримидин-2,4,5,6-тетраон 5-оксимов 2 или 2-тиоксо-дигидро-пиримидин-4,5,6-трион 5-оксимов 3 с мета-фенилендиаминами 4 по приведенной ниже схеме:

Другой способ получения замещенных 2,3-дигидро-1Н-бензо[g]птеридин-4-онов [Краснов, К.А. Ж. Орг. Хим. 1998, 34 (1), 129-133] предоставлен на нижеследующей схеме:

В таблице приведены некоторые 2,3-дигидро-1Н-бензо[g]птеридин-4-оны общей формулы 1, полученные по приведенной выше схеме.

При синтезе 2,3-дигидро-1Н-бензо[g]птеридин-4-онов общей формулы 1 были использованы коммерчески доступные исходные реагеты.

Ниже изобретение описывается с помощью конкретных примеров получения конкретных соединений и комбинаторной библиотеки. Структуры полученных соединений подтверждались данными химического, хроматографического и спектрального анализа. Жидко-фазный паралельный ситез новых соединений и комбинаторной библиотеки осуществлялись с использованием специальных синтезаторов "CombiSyn-012-3000" [М.Бару, А.Иващенко, Патент России 2180609, 2002; РСТ WO 02/087740 A1, 2002] и оборудования [Technology Platform. In Custom Chemistry; Chemical Diversity Labs, Inc.; San Diego, CA, 2002; p.5].

Биологическую (антипротеазную) активность соединений определялась на сериновой протеазе (Каспаза 3), которая вовлечена в регуляцию програмированной клеточной смерти (апоптозис). Активность Каспазы 3 определялась по скорости расщепления пептидного субстрата, содержащего флуоресцентную молекулу (метилкумарин) в соответствии с протоколом, описанным в Техническом Бюллетене фирмы Sigma-Aldrich [www.sigmaaldrich.com/sigma/bulletin/casp3fbul.pdf].

Все растворители и реагенты, которые были использованы при синтезе соединений общей формулы 1, были получены из коммерческих источников, таких как Акрос (Acros) (Бельгия), Сигма-Олдрич (Sigma-Aldrich) (США), Ланкастер (Lancaster) (Великобритания) и КемДив (ChemDiv) (США). Точки плавления (т.пл.) были получены на приборе фирмы Бюхи (Buchi) (Швейцария) модель В-520. ¹Н и ¹³С ЯМР спектры были получены на спектрометре Gemini-300 (300 и 75 МГц соответственно) фирмы Вариан (Varian) (США) в CDCl₃ или диметилсульфоксиде-d₆. Химические сдвиги приведены в шкале ((ррт). Внутренний стандарт тетраметилсилан.

Содержание основного вещества контролировали с помощью HPLC на приборе Шимадзу (Shimadzu) 10-AV (колонка Luna-CIS, Phenomenex, 25 см (4.6 мм, UV детектирование на 215 и 254 нм) и LC-MS (ВЖХ-МС) на приборе Applied Biosystems (Shimadzu 10-AV LC, автоматическая подача образца Gilson-215, масс-спектрометр API 150ЕХ, UV (215 и 254 нм) и ELS детекторы, колонка Luna-C18, Phenomenex, 5 см·2 мм).

Аналитическую ТСХ проводили на силикагеле на алюминевых пластинках Silufol UV₂₅₄ (5 см (15 см) (K-avalier, Czech Republic) или на стеклянных пластинках с 0.25-мм слоем силикагеля 60 F₂₅₄ (Merck, Germany). Визуализация осуществлялась с помощью УФ света на длине волны 254 нм. Для хроматографической очистки использовали силикагель 5-40 μm (Chemapol, Czech Republic) и 63 μm (ЕМ Science, USA). В соответствии с данными LC/MS все синтезированные соединения имели содержание основного вещества выше 95% (если не указано иначе).

Изобретение иллюстрируется, но не ограничивается следующими примерами.

Пример 1. Параллельный синтез комбинаторной библиотеки 2,3-дигидро-1Н-бензо[g]птеридин-4-онна общей формулы 1. Нагревали в атмосфере азота 0,01 моль анилина 7 и 0,01 моль 6-хлорурацила (тиоурацила) при 100-170°С в течение 1-3 ч. Реакционную массу охлаждали до комнатной температуры, прибавляли 30 мл 10% соляной кислоты и перемешивали. Осадок отфильтровывыли, промывали 3% соляной кислотой, затем 1% раствором бикарбоната натрия и водой. В случае необходимости перекристаллизовывали из спирта. Получали соединения 8 с выходом 30-80%. Растворяли 0,01 мол соединения 8 при нагревании в 20 мл уксусной кислоты, затем охлаждали до 10°С и прибавляли при перемешивании раствор 0.015 моль нитрита натрия в 5 мл воды. Реакционную смесь перемешивали 1 ч при команатной температуре, а затем нагревали до полного растворения осадка, представляющего собой смесь веществ 1 и 9, и прибавляли при перемешивании 0,05 моль цинковой пыли. Перемешивали 0,5 ч при 100°С, после чего декантировали раствор с осадка металла, разбавляли его водой и охлождали до 5-10°С в течение 1 ч. Осадок отфильтровывали, промывали водой затем спиртом и сушили. Получали 2,3-дигидро-1Н-бензо[g]птеридин-4-оны 1 с выходом 40-90%, в том числе:

8-Амино-3-бензил-7-метил-1Н-бензо[g]птеридин-2,4-дион 1 {1};

8-Амино-1Н-бензо[g]птеридин-2,4-дион 1 {2};

8-Диметиламино-1Н-бензо[g]птеридин-N-(2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-ацетамид-2,4-дион 1 {3};

N-(2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-пропиоамид 1 {4};

Гептановой кислоты (2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-амид 1 {5};

8-Амино-7-метил-1Н-бензо[g]птеридин-2,4-дион 1 {6};

N-(7-Метил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-ацетамид 1 {7};

N-(7-Метил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-пропиоамид 1 {8};

Гептановой кислоты (7-methyl-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-амид 1 {9};

Нонановой кислоты (7-methyl-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-амид 1 {10}

N-(7-Метил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-сукцинаминовая кислота 1 {11};

2,2,2-Трифтор-N-(7-метил-2,4-Диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-ацетамид 1 {12};

1-Бензил-5-[(7-метил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-иламино)-метилен]-пиримидин-2,4,6-трион 1 {13};

8-Амино-9-метил-1 Н-бензо[g]птеридин-2,4-дион 1 {14};

2,2,2-Tpифтop-N-(9-methyl-2,4-Диoкco-1,2,3,4-тeтpaгидpo-бeнзo[g]птepидин-8-ил)-ацетамид 1 {15};

8-Амино-1,3-диметил-1 Н-бензо[g]птеридин-2,4-дион 1 {16};

8-Диметиламино-1,3-диметил-1Н-бензо[g]птеридин-2,4-дион 1 {17};

8-Диэтиламино-1,3-диметил-1 Н-бензо[g]птеридин-2,4-дион 1 {18};

N-(1,3-Диметил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тeтpaгидpo-бeнзo[g]птepидин-8-ил)-aцeтaмид 1 {19};

N-(1,3-Диметил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-пропиоамид 1 {20};

Гептановой кислоты (1,3-диметил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тeтpaгидpo-бeнзo[g]птepидин-8-ил)-амид 1 {21};

Нонановой кислоты (1,3-dimethyl-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-амид 1 {22};

N-(1,3-Диметил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тeтpaгидpo-бeнзo[g]птepидин-8-ил)-бeнзaмид 1 {23};

N-(1,3-Димeтил-2,4-диoкco-l,2,3,4-тeтpaгидpo-бeнзo[g]птepидин-8-ил)-N,N-димeтил-формамидин 1 {24};

N-(1,3-Диметил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тeтpaгидpo-бeнзo[g]птepидин-8-ил)-сукцинаминовая кислота 1 {25};

3-(1,3-Диметил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-илкарбамоил)-акриловая кислота 1 {26};

N-(1,3-Диметил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тeтpaгидpo-бeнзo[g]птepидин-8-ил)-2,2,2-тpифтop-ацетамид 1 {27};

5-[(1,3-Диметил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-иламино)-метилен]-пиримидин-2,4,6-трион 1 {28};

5-[(1,3-Диметил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо [g] птеридин-8-иламино)-метилен]-1,3-диметил-пиримидин-2,4,6-трион 1 {29};

1-Бензил-5-[(1,3-диметил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-иламино)-метилен]-пиримидин-2,4,6-трион 1 {30};

1-(1,3-Диметил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-3-фенил-мочевина 1 {31};

8-Амино-1,3,7-триметил-1Н-бензо[g]птеридин-2,4-дион 1 {32};

N-(1,3,7-Триметил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-ацетамид 1 {33};

N-(1,3,7-Tpимeтил-2,4-диoкco-1,2,3,4-тeтparидpo-бeнзo[g]птepидин-8-ил)-пpoпиoaмид 1 {34};

Гептановой кислоты (1,3,7-триметил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-амид 1 {35};

Нонановой кислоты (1,3,7-триметил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-амид 1 {36};

N-(1,3,7-Tpимeтил-2,4-диoкco-1,2,3,4-тeтpaгидpo-бeнзo[g]птepидин-8-ил)-бeнзaмид 1 {37};

N,N-Димeтил-N’-(l,3,7-тpимeтил-2,4-диoкco-1,2,3,4-тeтpaгидpo-бeнзo[g]птepидин-8-ил)-формамидин 1 {38};

2,2,2-Tpифтop-N-(1,3,7-trimethyl-2,4-диoкco-1,2,3,4-тeтpaгидpo-бeнзo[g]птepидин-8-ил)-acetamide 1 {39};

5-[(1,3,7-Триметил1-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-иламино)-метилен]-пиримидин-2,4,6-трион 1 {40};

1-Метил-5-[(1,3,7-триметил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-иламино)-метилен]-пиримидин-2,4,6-трион 1 {41};

N-(1,3,9-Триметил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-ацетамид 1 {42};

N-(1,3,9-Tpимeтил-2,4-диoкco-1,2,3,4-тeтpaгидpo-бeнзo[g]птepидин-8-ил)-пpoпиoaмид 1 {43};

Гептановой кислоты (1,3,9-триметил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бeнзo[g]птepидин-8-ил)-амин 1 {44}

Нонановой кислоты (1,3,9-триметил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-амид 1 {45};

2,2,2-Трифтор-N-(1,3,9-триметил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-ацетамид 1 {46};

8-Амино-1,3-диметил-9-nitro-1Н-бензо[g]птеридин-2,4-дион 1 {47};

8-Аmmino-3,7-dimethyl-1Н-бензо[g]птеридин-2,4-дион 1 {48};

N-(3,7-Диметил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тeтpaгидpo-бeнзo[g]птepидин-8-ил)-aцeтaмид 1 {49};

N-(3,7-Димeтил-2,4-диoкco-1,2,3,4-тeтpaгидpo-бeнзo[g]птepидин-8-ил)-пpoпиoaмид 1 {50};

Гептановой кислоты (3,7-диметил -2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-амид 1 {51};

N’-(3,7-Диметил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-N,N-диметил-формамидин 1 {52};

N-(3,7-Диметил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-2,2,2-трифтор-ацетамид 1 {53};

3-Аллил-8-амино-1 Н-бензо[g]птеридин-2,4-дион 1 {54};

N-(3-Аллил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-ацетамид 1 {55};

N-(3-аллил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-пропиоамид 1 {56};

Гептановой кислоты (3-аллил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бeнзo[g]птepидин-8-ил)-амид 1 {57};

N’-(3-Аллил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-N,N-диметил-формамидин 1 {58};

N-(3-Аллил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-2,2,2-трифтор-ацетамид 1 {59};

N-(3-Aллил-7-methyl-2,4-диoкco-1,2,3,4-тeтpaгидpo-бeнзo[g]птepидин-8-ил)-aцeтaмид 1 {60};

N-(3-Аллил-7-methyl-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-пропиоамид 1 {61};

Гептановой кислоты (3-аллил-7-methyl-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g] птеридин-8-ил)-амид 1 {62};

N-(3-аллил-7-methyl-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-2,2,2-трифтор-ацетамид 1 {63};

8-Амино-3-бутил-1Н-бензо[g]птеридин-2,4-дион 1 {64};

3 -Бутил-8-диметиламино-1Н-бензо [g] птеридин-2,4-дион 1 {65};

N-(3-бутил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-ацетамид 1 {66};

N-(3-Бутил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-пропиоамид 1 {67};

Гептановой кислоты (3-бутил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-амид 1 {68};

Нонановой кислоты (3-бутил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-амид 1 {69};

N’-(3-Бутил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-N,N-диметил-формамидин 1 {70};

N-(3-Бутил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-2,2,2-трифтор-ацетамид 1 {71};

5-[(3-Бутил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-метилен]-1,3-диметил-пиримидин-2,4,6-трион 1 {72};

8-Аminо-3-бутил-7-methyl-1Н-бензо[g]птepидин-2,4-диoн 1 {73};

N-(3-Бyтил-7-methyl-2,4-диoкco-1,2,3,4-тeтpaгидpo-бeнзo[g]птepидин-8-ил)-aцeтaмид 1 {74};

N-(3-Бутил-7-methyl-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-пропиоамид 1 {75};

Гептановой кислоты (3-бутил-7-methyl-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-амид 1 {76};

N’-(3-Бутил-7-methyl-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бeнзo[g]птepидин-8-ил)-N,N-диметил-формамид 1 {77};

N-(3-Бутил-7-methyl-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-2,2,2-трифтор-ацетамид 1 {78};

8-Амино-3-бутил-9-нитро-1Н-бензо[g]птеридин-2,4-дион 1 {79};

8-Амино-3-гексил-1Н-бензо [g] птеридин-2,4-дион 1 {80};

N-(3-Гексил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-ацетамид 1 {81};

N-(3-Гексил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бeнзo[g]птepидин-8-ил)-пpoпиoaмид 1 {82};

Гептановой кислоты (3-гексил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-амид 1 {83};

Нонановой кислоты (2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-амид 1 {84};

N-(3-Гексил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-бензамид 1 {85};

2,2,2-Трифтор-Н-(3-гексил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-ацетамид 1 {86};

5-[(3-Гексил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-иламино)-метилен]-пиримидин-2,4,6-трион 1 {87};

5-[(3-Гексил-2,4-Диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-иламино)-метилен]-1,3-диметил-пиримидин-2,4,6-трион 1 {88};

1-Бензил-5-[(3-гексил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-иламино)-mеthylene]-пиримидин-2,4,6-трион 1 {89};

8-Амино-3-гексил-7-methyl-1Н-бензо[g]птеридин-2,4-дион 1 {90};

N-(3-Гексил-7-methyl-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-ацетамид 1 {91};

Гептановой кислоты (3-гексил-7-methyl-1-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-амиде 1 {92};

2,2,2-Трифтор-N-(3-гексил-7-methyl-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бeнзo[g]птepидин-8-ил)-ацетамид 1 {93};

5-[(3-Гексил-7-метил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-иламино)-метилен]-1-метилпиримидин-2,4,6-трион 1 {94};

8-Амино-3-циклогексил-1Н-бензо [g] птеридин-2,4-дион 1 {95};

N-(3-Циклогексил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бeнзo[g]птepидин-8-ил)-aцeтaмид 1 {96};

Гептановой кислоты (3-циклогексил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бeнзo[g]птepидин-8-ил)-амид 1 {97};

Нонановой кислоты (3-циклогексил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-амид 1 {98};

N-(3-Циклoгeкcил-2,4-диoкco-1,2,3,4-тeтpaгидpo-бeнзo[g]птepидин-8-ил)-бeнзaмид 1 {99};

N-(3-Циклoгeкcил-2,4-диoкco-1,2,3,4-тeтpaгидpo-бeнзo[g]птepидин-8-ил)-сукцинаминовая кислота 1 {100};

N-(3-Циклогексил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-2,2,2-трифтор-ацетамид 1 {101};

5-[(3-Циклогексил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-methylene]-1,3-диметил-пиримидин-2,4,6-трион 1 {102};

N-(3-Циклoгeкcил-7-мeтил-2,4-диoкco-l,2,3,4-тeтpaгидpo-бензо[g]птеридин-8-ил)-ацетамид 1 {103};

N-(3-Циклогексил-7-метил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бeнзo[g]птepидин-8-ил)-пропиоамид 1 {104};

Гептановой кислоты (3-циклогексил-7-метил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бeнзo[g]птepидин-8-ил)-aмид 1 {105};

Нонановой кислоты (3-циклогексил-7-метил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-амид 1 {106};

N-(3-Циклогексил-7-метил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-бензамид 1 {]07};

N’-(3-Циклогексил-7-метил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-N,N-диметил-формамид 1 {108};

N-(3-Циклогексил-7-метил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-2,2,2-трифтор-ацетамид 1 {109};

8-Амино-3-бензил-1Н-бензо[g]птеридин-2,4-дион 1 {110};

3-Бензил-8-диметиламино-1 Н-бензо[g]птеридин-2,4-дион 1 {111};

N-(3-Бензил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-ацетамид 1 {112};

N-(3-Бензил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-пропиоамид 1 {113};

Гептановой кислоты (3-бензил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бeнзo[g]птepидин-8-ил)-амид 1 {114};

N-(3-Бензил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бeнзo[g]птepидин-8-ил)-сукцинаминовая кислота 1 {115};

N-(3-Бeнзил-7-мeтил-2,4-диoкco-1,2,3,4-тeтpaгидpo-бeнзo[g]птepидин-8-ил)-aцeтaмид 1 {116};

Гептановой кислоты (3-бензил-7-метил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бeнзo[g]птepидин-8-ил)-aмид 1 {117};

Нонановой кислоты (3-бензил-7-метил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-амид 1 {118};

N-(3-Бензил-7-метил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-2,2,2-трифтор-ацетамид 1 {119}

N-(3-Бензил-9-метил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бeнзo[g]птepидин-8-ил)-2,2,2-трифтор-ацетамид 1 {120};

8-Амино-3-фенетил-1 Н-бензо[g]птеридин-2,4-дион 1 {121};

8-Диметиламино-3-фенетил-1Н-бензо[g]птеридин-2,4-дион 1 {122};

N-(2,4-Диоксо-1,2,3,4-тeтpaгидpo-бeнзo[g]птepидин-8-ил)-aцeтaмид 1 {123};

N-(2,4-Диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-пропиоамид 1 {124};

Гептановой кислоты (2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бeнзo[g]птepидин-8-ил)-aмид 1 {125};

Нонановой кислоты (2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-амид 1 {126};

N’-(2,4-Диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-N,N-диметил-формамид 1 {127};

N-(2,4-Диoкco-1,2,3,4-тeтpaгидpo-бeнзo[g]птepидин-8-ил)-2,2,2-тpифтop-aцeтaмид 1 {128};

8-Аmino-7-метил-3-фенетил-1Н-бензо[g]птеридин-2,4-дион 1 {129};

N-(7-Метил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-ацетамид 1 {130};

Гептановой кислоты (7-метил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-амид 1 {131};

Нонановой кислоты (7-метил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-амид 1 {132};

N,N-Диметил-N’-(7-метил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бeнзo[g]птepидин-8-ил)-формамидин 1 {133};

2,2,2-Трифтор-N-(7-метил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бeнзo[g]птepидин-8-ил)-ацетамид 1 {134};

8-Амино-9-метил-3-фенетил-1H-бензо[g]птеридин-2,4-дион 1 {135};

8-Амино-2-тиоксо-2,3-дигидро-1Н-бензо[g]птеридин-4-он 1 {136};

8-Диметиламино-2-тиоксо-2,3-дигидро-1H-бeнзo[g]птepидин-4-он 1 {137};

N-(4-Оксо-2-тиоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-ацетамид 1 {138};

N-(4-Оксо-2-тиоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-пропиоамид 1 {139};

Гептановой кислоты (4-оксо-2-тиоксо-1,2,3,4-тeтpaгидpo-бeнзo[g]птepидин-8-ил)-aмид 1 {140};

8-Амино-7-метил-2-тиоксо-2,3-дигидро-1Н-бензо[g]птеридин-4-он 1 {141};

N-(7-Метил-4-оксо-2-тиоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-ацетамид 1 {142};

2,2,2-Tpифтop-N-(7-мeтил-4-oкco-2-тиoкco-1,2,3,4-тeтpaгидpo-бeнзo[g]птepидин-8-ил)-ацетамид 1 {143}.

Пример 2. Составили фокусированную библиотеку, включающую 10240 соединений, в том числе 143 2,3-дигидро-1Н-бензо[g]птеридин-4-онна 1 {1-143} и испытали ее на антипротеазную активность. Антипротеазная активность определялась на сериновой протеазе (Каспаза 3), которая вовлечена в регуляцию программированной клеточной смерти (апоптозис). Активность Каспазы 3 определялась по скорости расщепления пептидного субстрата, содержащего флуоресцентную молекулу (метилкумарин). Отщепление метилкумарина от пептидной молекулы в результате протеолитической реакции фермента сопровождается усилением интенсивности флуоресценции, измерения которой производились с помощью флуоресцентного параллельного считывателя VICTOR²V (PerkinElmer, USA) при длине волны возбуждения 355 nm и длине волны эмиссии 460 nm. Для проведения реакций использовались оптические 96-луночные микроплаты. В экспериментах использовались каспаза 3 и флуоресцентный субстрат фирмы Sigma (USA). Реакционные условия и состав среды использовались в соответствии с рекомендацией фирмы производителя. Исходные растворы тестируемых соединений готовились их растворением в ДМСО (диметилсульфоксид) до концентрации 10 мМ. Исходные растворы соединений добавлялись к раствору фермента в таком объеме, что бы получить окончательную концентрацию соединения 10 мкМ. После 10 минутной инкубации фермента с тестируемым соединением к раствору добавлялся энзимный субстрат и измерения флуоресценции проводились спустя 1 час после добавления субстрата (F

e

i

). Для коррекции на собственную флуоресценцию тестируемых соединений флуоресцентные измерения (F

0

i

) проводили в отдельных платах, не содержащих энзимные реагенты (фермент плюс субстрат). Полная активность фермента измерялась по флуоресценции в реакционных лунках, содержащих все реакционные компоненты, кроме тестируемых, соединений (F₁₀₀) а нулевая активность определялась по флуоресценции лунок содержащих соответствующие тестируемые соединения и все реакционные реагенты, за исключением фермента (F₀). Расчет ингибирования производился по следующей формуле:

где , подстрочный индекс соответствует тестируемому соединению, в присутствии которого измеряется флуоресценция, а надстрочные индексы (е) и (0) означают присутствие или отсутствие энзимных реагентов, соответственно, 2,3-дигидро-1Н-бензо[g]птеридин-4-онна.

Ниже в таблице 2 приведена активность одного из испытанных соединений общей формулы 1, а именно 2,2,2-трифтор-N-(7-метил-4-оксо-2-тиоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-ацетамида 1 {15}, а на чертеже приведена концентрационная зависимость ингибирования коспазы 3 этим соединеним 1 {15}.

Таблица 2 Протеазная активность 2,2,2-трифтор-N-(7-метил-4-оксо-2-тиоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-ацетамида 1 {15}
ID	Структура соединения	IC50, nM	Активность
1 {15}		265	Ингибирование

На чертеже представлены концентрационные зависимости ингибирования каспазы 3 2,2,2-трифтор-N-(7-метил-4-оксо-2-тиоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-ацетамидом 1 {15}

Пример 3. Пример иллюстрирующий приготовление таблеток, содержащих 100 мг активного инградиента. Смешивают 1600 мг крахмала, 1600 мг измельченной лактозы 400 мг талька и 1000 мг 2,2,2-трифтор-N-(7-метил-4-оксо-2-тиоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-ацетамидом 1 {15} и спресовывают в брусок. Полученный брусок измельчают в гранулы и просеивают через сита, собирая гранулы размером 14-16 меш. Полученные гранулы таблетируют в подходящую форму таблетки весом 560 мг каждая. Согласно изобретению аналогичным образом получают фармацевтические композиции в виде таблеток, содержащие в качестве активного инградиента другие соединения общей формулы 1.

Пример 4. Капсулы, содержащие 200 мг соединения 1 {15}, согласно изобретению могут быть получены тщательньм смешиванием соединения 1 {15} с порошком лактозы в соотношении 2:1. Полученную порошкообразную смесь упаковывают по 300 мг в желатиновые капсулы подходящего размера.

Пример 5. Инъекционные композиции для внутримышечных, внутрибрюшинных или подкожных инъекций могут быть приготовлены смешиванием 500 мг активного ингредиента с подходящей растворимостью, например, гидрохлорида соединения 1 {15}, с 300 мг хлорбутанола, 2 мл пропиленгликоля и 100 мл инъекционной воды. Полученный раствор фильтруют и помещают по 1 мл в ампулы, которые запаивают и стерилизуют в автоклаве.

1. Фармацевтическая композиция, обладающая ингибирующим действием в отношении сериновой протеазы(Каспазы-3), в форме таблеток, капсул или инъекций, помещенных в фармацевтически приемлемую упаковку, содержащая в качестве активной субстанции фармацевтически эффективное количество 2,3-дигидро-1Н-бензо[g]птеридин-4-она общей формулы 1 или его соли с фармакологически приемлемой кислотой

в которой

Х означает О или S;

R¹ и R² независимо друг от друга представляют атом водорода, инертный заместитель, выбранный из группы, включающей низко- или нереакционноспособный необязательно замещенный радикал, такой как C₁-С₇алкил,С₂-С₇алкенил,С₂-С₇алкинил,C₁-С₇алкокси,С₇-С₁₂аралкил,С₇-С₁₂гетероциклилалкил,С₇-С₁₂алкарил,С₃-С₁₀циклоалкил,С₃-₁₀циклоалкенил, фенил, арил, гетероциклил, необязательно замещенную гидроксиС_1-5алкильную группу, необязательно замещенную аминоС_1-7алкильную группу;

R³, R⁴, R⁵ и R⁶ независимо друг от друга представляют: атом водорода, атом галогена, СF₃, CN, инертный заместитель, выбранный из группы, включающей низко- или нереакционноспособный необязательно замещенный радикал, такой как C₁-С₇алкил, С₂-С₇алкенил, С₂-С₇алкинил, C₁-С₇алкокси, С₇-С₁₂аралкил,

С₇-С₁₂гетероциклилалкил,С₇-С₁₂алкарил,

С₃-С₁₀циклоалкил, С₃-С₁₀циклоалкенил, фенил,арил, гетероциклил, необязательно замещенную гидроксильную группу, необязательно замещенную гидрокси-С_1-6алкильную группу, необязательно замещенную аминогруппу, необязательно замещенную аминоС_1-6алкильную группу, необязательно замещенную карбоксиС_1-7алкильную группу, необязательно замещенную С_1-6алкилкарбоксиС_1-6алкильную группу, необязательно замещенную карбамоильную группу, необязательно замещенную C_1-6алкилкарбамоильную группу, необязательно замещенную сульфамоильную группу.

2. Фармацевтическая композиция по п.1, содержащая в качестве активной субстанции фармацевтически эффективное количество замещенных 8-амино-2-тиоксо-2,3-дигидро-1Н-бензо[g]птеридин-4-она общей формулы 1.1 и/или замещенных 8-амино-2,3-дигидро-1Н-бензо[g]птеридин-2,4-диона общей формулы 1.2 или их соли с фармакологически приемлемой кислотой

в которых

R¹, R², R³, R⁵ и R⁶ имеют вышеуказанное значение;

R⁷ и R⁸ независимо друг от друга представляют атом водорода, инертный заместитель, необязательно замещенную гидрокси-С_1-6алкильную группу, необязательно замещенную амино-С_1-6алкильную группу, необязательно замещенную С_1-6алкилкарбокси-С_1-6алкильную группу, необязательно замещенную C_1-6алкилкарбамоильную группу, необязательно замещенную формильную группу, замещенную сульфонильную группу;

или

R⁷ и R⁸ вместе с атомом азота, к которому они присоединены, представляют, необязательно замещенный и необязательно дополнительно включающий гетероатом, выбранный из группы: кислород, азот или сера, 3-10-членный цикл;

или

R⁷ и R⁸ вместе с атомом азота, к которому они присоединены, представляют конденсированный гетероцикл, необязательно замещенный и необязательно дополнительно включающий гетероатом, выбранный из группы: кислород, азот или сера.

3. Фармацевтическая композиция по п.1, содержащая в качестве активной субстанции фармацевтически эффективное количество замещенных N-(4-оксо-2-тиоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-формамидина общей формулы 1.3 и/или замещенных N-(2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-ил)-формамидина общей формулы 1.4 или их соли с фармакологически приемлемой кислотой

в которых

R¹, R², R³, R⁵ и R⁶ имеют вышеуказанное значение;

R⁹ и R¹⁰ независимо друг от друга представляют атом водорода или инертный заместитель.

4. Фармацевтическая композиция по п.1, содержащая в качестве активной субстанции фармацевтически эффективное количество 5-[(4-оксо-1,2,3,4-тетрагидро-бензо[g]птеридин-8-иламино)-метилен]-дигидропиримидин-4,6-диона общей формулы 1.5 или его соли с фармакологически приемлемой кислотой

в которой

X, R¹, R², R³,R⁵ и R⁶ имеют вышеуказанное значение;

R¹¹ и R¹² независимо друг от друга представляют атом водорода, инертный заместитель, необязательно замещенную гидрокси-С_1-5алкильную группу, необязательно замещенную амино-С_1-7алкильную группу.

5. Способ получения фармацевтической композиции по любому из пп.1, 2, 3 или 4 смешением активной субстанции с инертным наполнителем и/или растворителем, отличающийся тем, что в качестве активной субстанции используется фармакологически эффективное количество вещества общей формулы 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4 и/или 1.5 указанных в любом из пп.1-4 или его соль с фармакологически приемлемой кислотой.

6. Способ лечения и предупреждения развития различных заболеваний теплокровных животных и людей, связанных с повышенной активацией апоптоза, путем введения теплокровному животному или человеку фармацевтической композиции по любому из пп.1, 2, З, 4.

7. Применение физиологически активных соединений общей формулы 1 или их соли с фармакологически приемлемыми кислотами, указанных в п.1 , обладающих свойствами ингибиторов каспазы-3, для получения лекарственных средств или для экспериментального (in vitro или in vivo) исследования процессов апоптоза в качестве “фармакологических инструментов”.