Способ получения иммуносорбента

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к получению иммуносорбентов. Сущность способа: при получении иммуносорбента с магнитными свойствами, предусматривающем ковалентное связывание лиганда белковой природы с модифицированным носителем, в качестве носителя используют аэросил, модифицированный 3-4% раствором хитозана в 3% растворе уксусной кислоты и активированный бензохиноном. Получение иммуносорбентов предлагаемым способом обеспечивает повышение специфической емкости и чувствительности. 1 табл.

 

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для выявления специфической реакции антиген-антитело в диагностике с помощью иммуноферментного анализа и реакции иммунофлуоресценции.

Известен способ получения иммуносорбента на основе полисахарида целлюлозы, который включает ковалентную иммобилизацию иммуноглобулинов. Недостатками способа являются: низкий уровень специфичности сорбента, нестабильность при хранении, подверженность воздействию микроорганизмов (Шаханина К.Л. Приготовление различных иммуносорбентов и их использование для выделения антигенов и антител. Ж. Вопросы медицинской химии, №6. 1976, с.127-136).

Наиболее близким к предлагаемому способу является способ получения иммуносорбента (Патент РФ №2102134, В 01 J 20/10. Способ получения иммуносорбента, Авторы: Брыкалов А.В., Жарникова И.В. Опубл. 20.01.98 г. Бюллетень №2).

Способ включает модифицирование аэросила 0,2-0,4% раствором декстрана и окисление продукта перхлоратом натрия.

Недостатком указанного способа является низкий уровень специфической емкости иммуносорбента, отсутствие магнитных свойств, длительность процесса получения.

Цель изобретения - повышение специфической емкости, чувствительности иммуносорбента, обладающего магнитными свойствами.

Цель достигается тем, что для увеличения специфической емкости, чувствительности иммуносорбента проводят модифицирование кремнеземного носителя - аэросила 3-4% раствором хитозана в 3% растворе уксусной кислоты с последующим модифицированием сорбента бензохиноном. Для придания сорбенту магнитных свойств в процессе синтеза вводят 10-12% от массы сорбента магнетита (Fe3O4).

Сущность предлагаемого способа заключается в том, что проводится активирование носителя органическим полимером хитозаном, представляющим собой полимер с неразветвленной цепью β-1,4-соединенных 2-амино-2-дезокси-2 глюкозных остатков. При последующем модифицировании сорбента раствором бензохинона получаемый продукт активирован функциональными группами, способными к взаимодействию с чумными и туляремийными иммуноглобулинами.

Возможность практического осуществления предлагаемого способа с использованием полной совокупности заявляемых признаков иллюстрируются примерами.

Пример 1. К 5 г аэросила А-380 добавляли 2,5% раствор хитозана в 3% растворе уксусной кислоты и далее магнетит (Fe3O4) в количестве 0,5 г. Полученную смесь выдерживали 1 час при температуре 25°С. Затем полученный продукт высушивали при 100-120°С в течение 15 мин. К сорбенту в последующем добавляли 40 мл фосфатного буфера с рН 8,0, содержащего 12 мг бензохинона, инкубировали смесь в течение 15 мин. Затем сорбент отмывали 100 мл дистиллированной воды. К 0,02 г магносорбента приливали 1 мл чумных иммуноглобулинов с концентрацией по белку 5 мг/мл. Смесь оставляли при 24°С в течение 1,5 часов, далее надосадочную жидкость удаляли, а носитель трижды промывали 0,9% раствором хлорида натрия. Длительность получения магноиммуносорбента составляет 3 часа.

Результаты определения специфической емкости и специфичности иммуносорбентов проводили методом иммунофлуоресценции, иммуноферментного анализа. Для этого к 5 мл 10% суспензии иммуносорбента приливали 1 мл чумного микроба в концентрации 103 микробных тел/мл и инкубировали смесь 1 час при 24°С. Сорбент отмывали 50 мл 0,9% раствора хлорида натрия. Вносили 0,5 мл иммуноглобулинов чумных люминесцирующих в рабочем разведении и инкубировали 30 мин. Отмывали сорбент 0,9% раствором хлорида натрия и проводили регистрацию результатов в люминесцирующем микроскопе Люмам Р-2 по общепринятой DASS - системе. Параллельно с опытной пробой измеряли люминесценцию контрольной пробы (иммуносорбент без контакта с чумным микробом).

Специфическая емкость иммуносорбента, измеренная методом иммунофлуоресценции, составляет 103 м.т./мл чумного микроба.

Пример 2. Способ получения магноиммуносорбента осуществляли по методике примера 1, но для модифицирования аэросила использовали 3% раствор хитозана в 3% растворе уксусной кислоты. Специфическая емкость составляет 14 у.е./мг. Чувствительность метода составляет 102 м.т./мл чумного микроба.

Пример 3. Способ получения магноиммуносорбента осуществляли по методике примера 1, но для модифицирования аэросила использули 4% раствор хитозана в 3% уксусной кислоты. Специфическая емкость составляет 14 у.е./мг. Чувствительность метода составляет 102 м.т./мл (мл чумного микроба).

Пример 4. Способ получения магноиммуносорбента осуществляет по методике примера 1, но для модифицирования аэросила использовали 4,5% раствор хитозана в 3% растворе уксусной кислоты. Специфическая емкость составляет 14 у.е./мг. Чувствительность метода составляет 102 м.т/мл чумного микроба.

Пример 5. Способ получения магноиммуносорбента осуществляли по методике примера 1, но на последнем этапе синтеза к 0,02 г активированного носителя приливали 1 мл туляремийных иммуноглобулинов с концентрацией по белку 4 мг/мл. Специфическая емкость иммуносорбента составляет 14 у.е., чувствительность метода составляет 10 м.т./мл.

Сопоставление предлагаемого способа и прототипа представлено в таблице 1.

В отличие от прототипа предлагаемый способ получения иммуносорбента повышает специфическую емкость препарата в 1,4 раза, увеличивает чувствительность на порядок и сокращается длительность получения иммуносорбента в 1,5 раза.

Как показали экспериментальные испытания, для модифицирования аэросила оптимален раствор хитозана с концентрацией 3-4%. При увеличении концентрации полисахарида до 4,5% не наблюдается увеличения специфической емкости магносорбента, тогда как уменьшение концентрации модификатора до 2,5% снижает специфическую емкость иммуносорбента.

Преимущество и положительный эффект способа получения магноиммуносорбента объясняется тем, что в процессе получения органокремнеземного сорбента осуществляется активирование его поверхности хитозаном, При последующем модифицировании поверхности сорбента бензохиноном образуются активные функциональные группы, которые взаимодействуют с молекулами лиганда белковой природы: иммуноглобулинами чумными и туляремийными. Магноиммуносорбенты, полученные по предлагаемому способу, обеспечивают повышения специфической емкости, чувствительности. Кроме того, в отличие от прототипа сорбенты имеют в составе магнитосоставляющий компонент. Это повышает эффективность их использования для концентрирования и идентификации патогенных микроорганизмов. Применение для этих целей магносорбентов исключает необходимость предварительного концентрирования микроорганизмов на мембранных фильтрах, ускоряет манипуляции на всех этапах исследования.

Таблица 1
Способ получения иммуносорбента
Способ получения иммуносорбента (лиганд - иммуноглобулин чумной)Модификатор - хитозан, %, растворСпецифическая емкость по флуоресценции в у.е./мгЧувствительность, м.т./млДлительность синтеза им-та, час
Известный способ-10104-1034,5
Предлагаемый способ2,5

3,0

4,0

4,5
10

14

14

14
103

102

102

102
-

-

3

-

Способ получения иммуносорбента с магнитными свойствами, предусматривающий ковалентное связывание лиганда белковой природы с модифицированным носителем, отличающийся тем, что в качестве носителя используют аэросил, модифицированный 3-4% раствором хитозана в 3% растворе уксусной кислоты и активированный бензохиноном.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано при проведении микробиологического мониторинга стоячих водоемов. .

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для выделения желаемой и нежелаемой субпопуляций из образца исследуемой жидкости или получения обогащенной субпопуляции с одной или более удаленными из нее нежелаемыми субпопуляциями.
Изобретение относится к медицине и может быть использовано для определения противомозговых антител в сыворотке крови больных с глиальными опухолями, менингиомами и невриномами головного мозга.
Изобретение относится к иммунохимическим или гибридизационным методам анализа биологических материалов и может быть использовано при выявлении в исследуемых образцах специфических антигенов (АГ), антител (АТ) или специфических последовательностей нуклеиновых кислот в медицине, ветеринарии, биотехнологии, экологических исследованиях и научных экспериментах.
Изобретение относится к медицине, ветеринарии, биотехнологии и экспериментальной иммунохимии. .

Изобретение относится к медицине, а именно к выявлению экспрессии цитокинов в клетках. .

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной гематологии, токсикологии, и касается способов морфологической оценки гибели клеток при апоптозе. .
Изобретение относится к медицине, а именно, аллергологии и может быть использовано для выявления пищевой аллергии у взрослых и детей. .

Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике инфекционных заболеваний. .

Изобретение относится к биохимии. Описан способ количественной оценки и характеризации агрегатов А-бета, включающий следующие стадии, на которых: а) осуществляют иммобилизацию захватывающих молекул на субстрате, б) наносят предназначенный для тестирования образец и внутренний стандарт на субстрат, в) добавляют меченые с целью детекции зонды, которые метят агрегаты А-бета посредством специфического связывания с ними, и г) определяют количество и размер маркированных агрегатов А-бета с пространственным разрешением в каждом случае по сравнению с соответствующим фоном, при этом стадию б) можно осуществлять до осуществления стадии в). Также представлен набор для осуществления описанного способа, содержащий стандарт и один или несколько из следующих компонентов: стеклянный субстрат с нанесенным покрытием из гидрофобной субстанции; захватывающую молекулу; зонд; субстрат с захватывающей молекулой; растворы; и буфер. Также представлен способ определения эффективности действующих веществ и/или терапий, предназначенных для лечения болезни Альцгеймера, отличающийся тем, что а) осуществляют иммобилизацию захватывающих молекул на субстрате, б) наносят предназначенный для тестирования образец и внутренний стандарт на субстрат, в) добавляют меченые с целью детекции зонды, которые метят агрегаты А-бета посредством специфического связывания с ними, и г) определяют количество и размер маркированных агрегатов А-бета с пространственным разрешением в каждом случае по сравнению с соответствующим фоном, при этом стадию б) можно осуществлять до осуществления стадии в), д) сравнивают результаты, полученные на образцах, которые представляют собой образцы биологической жидкости организма, взятые до или в различные моменты времени после введения действующих веществ и/или применения терапии, с результатами, полученными для контроля, который не обрабатывали действующим веществом и/или не подвергали терапии, и на основе полученных результатов отбирают действующие вещества и/или терапии, после применения которых наблюдалось снижение количества агрегатов А-бета. Изобретение расширяет арсенал средств, предназначенный для определения эффективности лечения болезни Альцгеймера. 3 н. и 40 з.п. ф-лы, 7 ил., 3 пр.

Изобретение относится к медицинской технике, а именно биодатчикам, и представляет собой сенсорное устройство для обнаружения магнитных частиц
Заявленное изобретение относится к способу функционализации поверхности магнитных частиц. Согласно заявленному способу к полимеру в фосфатном буфере добавляют магнитные наночастицы и глутаровый альдегид в условиях переменного магнитного поля, затем пептизированные и активированные частицы трижды отмывают фосфатным буферным раствором, осаждая их под действием постоянного магнита, смешивают активированные частицы с раствором анти-аналита для конъюгирования в условиях переменного магнитного поля, после чего трижды отмывают конъюгат осаждением-ресуспендированием в фосфатном буферном растворе, чередуя действие постоянного и переменного магнитных полей. Заявленный способ обеспечивает получение прочных функциональных конъюгатов, которые могут служить основой создания эффективных безынструментальных систем для упрощенного диагностического тестирования. 4 пр.
Наверх