Производные пиперидина, фармацевтическая композиция на их основе и способ лечения инфекции вирусом hiv
Изобретение относится к новым производным пиперидина общей формулы (II) или их фармацевтически приемлемым солям, где Xa означает -C(R13)2-, -C(R13)(R19)-, -C(O)-, и др.,
Ra означает R6a-фенил или фенил, замещенный метилсульфонилом,
R1 означает водород или C1-C6-алкил,
R2 означает R7-, R8-, R9-фенил, R7-, R8-, R9-замещенный 6-членный гетероарил и др.,
R3 означает R10-фенил, пиридил и др.,
R4 означает водород, C1-С6-алкил, фтор-С1-С6-алкил и др.,
R5 и R11 означают водород и (С1-С6)-алкил,
R6a означает от 1 до 3 заместителей, выбранных из группы, включающей водород, галоген, -CF3 и CF3О-,
R7 и R8 означают (С1-С6)-алкил и др.,
R9 означает R7, водород, фенил и др.,
R10 означает (С1-С6)-алкил, -NH2 или R12-фенил,
R12 означает водород, (С1-С6)-алкил и др.,
R13, R14, R15 и R16 означают водород или (С1-С6)-алкил,
R17, R18 вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют спирановое кольцо, содержащее от 3 до 6 атомов углерода,
R19 означает R6-фенил, где R6 означает R6a или метилсульфонил,
R20, R21 и R22 означают водород или C1-С6-алкил,
R23 означает C1-С6-алкил,
при условии, что если Ra означает фенил, замещенный метилсульфонилом, то Xa может означать только группу
Соединения формулы (II) обладают свойствами антагониста CCR5 и могут быть использованы в медицине для лечения ВИЧ-инфекции. 4 н. и 11 з.п. ф-лы, 1 ил., 12 табл.
Предшествующий уровень техники
Настоящее изобретение относится к производным пиперидина, применимым в качестве селективных антагонистов CCR5, фармацевтическим композициям, содержащим эти соединения, и способам лечения с помощью этих соединений. Настоящее изобретение также относится к использованию комбинации антагониста CCR5, соответствующего настоящему изобретению, и одного или большего количества противовирусных или других агентов, используемых для лечения инфицирования вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ). Настоящее изобретение также относится к использованию антагониста CCR5, соответствующего настоящему изобретению, в чистом виде или в комбинации с другим агентом, при лечении отторжения трансплантанта цельного органа, болезни "трансплантант против хозяина", артрита, ревматоидного артрита, воспалительного заболевания кишечника, атопического дерматита, псориаза, астмы, аллергических заболеваний и рассеянного склероза.
Несомненным является глобальный кризис здравоохранения, вызванный ВИЧ, возбудителем синдрома приобретенного иммунодефицита (СПИД), и, хотя последние достижения лекарственной терапии привели к успеху в замедлении прогрессирования СПИД, все еще сохраняется необходимость в более безопасном, более эффективном, менее дорогостоящем способе борьбы с этим вирусом.
Сообщали, что ген CCR5 играет роль в сопротивлении инфицированию ВИЧ. Инфицирование ВИЧ начинается с присоединения вируса к мембране клетки-мишени путем взаимодействия с клеточным рецептором CD4 и молекулой корецептора хемокина и продолжается путем репликации и диссеминирования инфицированных клеток в крови и других тканях. Имеются различные хемокиновые рецепторы, но для макрофагового тропического ВИЧ, предположительно основного патогенного штамма, который реплицируется in vivo на ранних стадиях инфицирования, главным хемокиновым рецептором, необходимым для вхождения ВИЧ в клетку, является CCR5. Поэтому создание помех взаимодействию между вирусным рецептором CCR5 и ВИЧ может заблокировать вхождение ВИЧ в клетку. Настоящее изобретение относится к небольшим молекулам, которые являются антагонистами CCR5.
Сообщали, что рецепторы CCR5 опосредуют перенос клеток при воспалительных заболеваниях, таких как артрит, ревматоидный артрит, атопический дерматит, псориаз, астма и аллергические заболевания, и предполагается, что ингибиторы таких рецепторов применимы для использования при лечении таких заболеваний, а также при лечении других воспалительных заболеваний и патологических состояний, таких как воспалительное заболевание кишечника, рассеянный склероз, отторжение трансплантанта цельного органа и болезнь "трансплантант против хозяина".
Родственные производные пиперидина, являющиеся антагонистами мускарина, применимые для лечения нарушений познавательной способности, таких как болезнь Альцгеймера, раскрыты в патентах США 5883096, 6037352, 5889006, 5952349 и 5977138.
A-M. Vandamme et al., Antiviral Chemistry & Chemotherapy, 9: 187-203 (1998), раскрыли применяющиеся в настоящее время способы клинического лечения ВИЧ-1-инфекций у людей, включающие комбинации хотя бы трех лекарственных препаратов, или так называемую высокоактивную антиретровирусную терапию (ВААВТ); ВААВТ включает различные комбинации нуклеозидных ингибиторов обратной транскриптазы (НИОТ), ненуклеозидных ингибиторов обратной транскриптазы (ННИОТ) и ингибиторы протеазы ВИЧ (ИП). Для восприимчивых, не употребляющих наркотиков пациентов ВААВТ эффективно уменьшает смертность и перерастание ВИЧ-1 в СПИД. Однако эти полилекарственные способы лечения не приводят к уничтожению ВИЧ-1, а длительное лечение обычно приводит к возникновению полилекарственной резистентности. Поэтому приоритетной остается задача разработки новых способов лекарственного лечения, обеспечивающих более эффективное воздействие на ВИЧ-1.
Краткое описание изобретения
Настоящее изобретение относится к лечению ВИЧ-инфекции, включающему назначение млекопитающему, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества антагониста CCR5, описываемого структурной формулой I:
или его приемлемой с фармацевтической точки зрения соли,
где Х означает -C(R13)2, -C(R13)(R19)-, -C(O)-, -O-, -NH-, -N((С1-С6)-алкил)-,
или 
*alkyl - алкил
R означает R6-фенил, R6-пиридил, R6-тиофенил или R6-нафтил;
R1 означает водород, C1-С6-алкил или С2-С6-алкенил;
R2 означает R7-, R8-, R9-фенил; R7-, R8-, R9-замещенный 6-членный гетероарил;
R7-, R8-, R9-замещенный 6-членный гетероарил-N-оксид; R10-, R11-замещенный 5-членный гетероарил; нафтил; флуоренил; дифенилметил
или 
R3 означает R6-фенил, R6-гетероарил или R6-нафтил;
R4 означает водород, C1-С6-алкил, фтор-С1-С6-алкил, циклопропилметил, -СН2СН2OH, -СН2СН2-O-(С1-С6)-алкил, -СН2С(O)-O-(С1-С6)-алкил, -СН2С(O)NH2, -СН2С(O)-NH-(С1-С6)-алкил или -СН2С(O)-N-((С1-С6)-алкил)2;
R5 и R11 независимо выбраны из группы, включающей водород и (С1-С6)-алкил;
R6 означает от 1 до 3 заместителей, независимо выбранных из группы, включающей водород, галоген, С1-С6-алкил, С1-С6-алкоксил, -CF3, CF3О-, СН3С(О)-, -CN, СН3SO2-, CF3SO2-, R14-фенил, R14-бензил, СН3С(=NOCH3)-, СН3С(=NOCH2СН3)-,
-NH2, -NHCOCF3, -NHCONH-(C1-C6-алкил), -NHCO-(С1-С6-алкил), -NHSO2-(C1-С6-алкил), 5-членный гетероарил и
где Х означает -O-, -NH- или -N(СН3)-;
R7 и R8 независимо выбраны из группы, включающей (С1-С6)-алкил, галоген, -NR20R21, -ОН, -CF3, -ОСН3, -O-ацил и -OCF3;
R9 означает R7, водород, фенил, -NO2, -CN, -CH2F, -CHF2, -CHO, -CH=NOR20, пиридил, пиридил-N-оксид, пиримидинил, пиразинил, -N(R20)CONR21R22, -NHCONH-(хлор-(C1-C6)-алкил), -NHCONH-((С3-С10)-циклоалкил-(С1-С6)-алкил), -NHCO-(С1-С6)-алкил, -NHCOCF3, -NHSO2N-((С1-С6)-алкил)2, -NHSO2-(C1-C6)-алкил, -N(SO2CF3)2, -NHCO2-(С1-С6)-алкил, С3-С10-циклоалкил, -SR23, -SOR23, -SO2R23, -SO2NH-(C1-C6)-алкил, -OSO2(С1-С6)-алкил, -OSO2CF3, гидрокси-(С1-С6)-алкил), -CONR20R21, -CON(CH2CH2-O-CH3)2, -OCONH(С1-С6)-алкил, -CO2R20, -Si(СН3)3 или -В(ОС(СН3)2)2;
R10 означает (С1-С6)-алкил, -NH2 или R12-фенил;
R12 означает от 1 до 3 заместителей, независимо выбранных из группы, включающей водород, (С1-С6)-алкил, -CF3, -CO2R20, -CN, (С1-С6)-алкоксил и галоген;
R13, R14, R15 и R16 независимо выбраны из группы, включающей водород и C1-С6-алкил;
R17, R18 независимо выбраны из группы, включающей водород и C1-С6-алкил, или R17, R18 совместно представляют собой С2-С5-алкиленовую группу и вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют спирановое кольцо, содержащее от 3 до 6 атомов углерода;
R19 означает R6-фенил, R6-гетероарил, R6-нафтил, С3-С10-циклоалкил, (С3-С10)-циклоалкил-(С1-С6)-алкил или (С1-С6)-алкокси-(С1-С6)-алкил;
R20, R21 и R22 независимо выбраны из группы, включающей Н и С1-С6-алкил, и
R23 означает С1-С6-алкил или фенил.
Предпочтительными являются соединения формулы I, в которых R означает R6-фенил, в особенности, если R6 является единственным заместителем, и в особенности, если заместитель R6 находится в 4-положении. Также предпочтительными являются соединения формулы I, в которых R13, R14, R15 и R16 означают водород иди метил, в особенности водород. Также предпочтительными являются соединения формулы I, в которых Х означает -CHOR3, -C(R13)(R19)- или -C(=NOR4)-; предпочтительно, если R3 означает пиридил, в особенности 2-пиридил, предпочтительно, если R4 означает (С1-С6)-алкил, в особенности метил, этил или изопропил, предпочтительно, если R13 означает водород и предпочтительно, если R19 означает R6-фенил. Для соединений формулы I предпочтительно, если R1 означает (С1-С6)-алкил, в особенности метил.
Для соединений формулы I предпочтительно, если R2 означает R7-, R8-, R9-фенил, R7-, R8-, R9-пиридил или его N-оксид или R7-, R8-, R9-пиримидил. Если R2 означает пиридил, то предпочтительно, чтобы он представлял собой 3- или 4-пиридил, а если он означает пиримидил, то предпочтительно, чтобы он представлял собой 5-пиримидил. Предпочтительно, чтобы заместители R7 и R8 были присоединены к циклическим атомам углерода, соседним с атомом углерода, соединяющим цикл с остальной частью молекулы, а заместитель R9 может быть присоединен к любому из остальных незамещенных циклических атомов углерода, например, как это показано на следующих структурах:
и 
Предпочтительными заместителями R7 и R8 являются (С1-С6)-алкил, в особенности метил, галоген, в особенности хлор, и -NH2-. Предпочтительным заместителем R9 и R8 является водород.
Также заявлены в качестве новых соединения, являющиеся антагонистами CCR5, описываемые структурной формулой II:
или приемлемые с фармацевтической точки зрения соли,
где (1) Xa означает -C(R13)2-, -C(R13)(R19)-, -C(O)-, -O-, -NH-, -N((С1-С6)-алкил)-,
или
*alkyl - алкил
Ra означает R6a-фенил, R6a -пиридил, R6a-тиофенил или R6-нафтил;
R1 означает водород, C1-С6-алкил или С2-С6-алкенил;
R2 означает R7-, R8-, R9-фенил; R7-, R8-, R9-замещенный 6-членный гетероарил; R7-, R8-, R9-замещенный 6-членный гетероарил-N-оксид; R10-, R11-замещенный 5-членный гетероарил; нафтил; флуоренил; дифенилметил
или 
R3 означает R10-фенил, пиридил, пиримидил, пиразинил или тиазолил;
R4 означает водород, C1-С6-алкил, фтор-С1-С6-алкил, циклопропилметил, -СН2СН2OH, -СН2СН2-O-(С1-С6)-алкил, -СН2С(O)-O-(С1-С6)-алкил, -CH2C(O)NH2, -СН2С(O)-NH-(С1-С6)-алкил или -СН2С(O)-N((С1-С6)-алкил)2;
R5 и R11 независимо выбраны из группы, включающей водород и (С1-С6)-алкил;
R6a означает от 1 до 3 заместителей, независимо выбранных из группы, включающей водород, галоген, -CF3, CF3О-, СН3С(О)-, -CN, CF3SO2-, R12-фенил, -NHCOCF3, 5-членный гетероарил и
где X означает -O-, -NH- или -N(СН3)-;
R6 независимо выбран из группы, включающей R6a и СН3SO2-;
R7 и R8 независимо выбраны из группы, включающей (С1-С6)-алкил, галоген, -NR20R21, -ОН, -CF3, -ОСН3, -O-ацил и -OCF3;
R9 означает R7, водород, фенил, -NO2, -CN, -CH2F, -CHF2, -СНО, -CH=NOR20, пиридил, пиридил-N-оксид, пиримидинил, пиразинил, -N(R20)CONR21R22, -NHCONH-(хлор-(С1-C6)-алкил), -NHCONH-((C3-C10)-циклоалкил-(С1-С6)-алкил), -NHCO-(С1-C6)-алкил, -NHCOCF3, -NHSO2N-((С1-C6)-алкил)2, -NHSO2-(С1-С6)-алкил, -N(SO2CF3)2, -NHCO2-(С1-С6)-алкил, С3-С10-циклоалкил, -SR23, -SOR23, -SO2R23, -SO2NH-(С1-С6)-алкил, -OSO2-(С1-С6)-алкил, -OSO2CF3, гидрокси-(С1-С6)-алкил), -CONR20R21, -CON-(СН2СН2-O-СН3)2, -OCONH-(С1-С6)-алкил, -CO2R20, -Si(СН3)3 или -В(ОС(СН3)2)2;
R10 означает (С1-С6)-алкил, -NH2 или R12-фенил;
R12 означает от 1 до 3 заместителей, независимо выбранных из группы, включающей водород, (С1-С6)-алкил, -CF3, -CO2R20, -CN, (С1-С6)-алкоксил и галоген;
R13, R14, R15 и R16 независимо выбраны из группы, включающей водород и (С1-С6)-алкил;
R17, R18 независимо выбраны из группы, включающей водород и С1-С6-алкил, или R17, R18 совместно представляют собой С2-С5-алкиленовую группу и вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют спирановое кольцо, содержащее от 3 до 6 атомов углерода;
R19 означает R6-фенил, R6-гетероарил, R6-нафтил, C3-С10-циклоалкил, (C3-С10)-циклоалкил-(С1-С6)-алкил или (С1-С6)-алкокси-(С1-С6)-алкил;
R20, R21 и R22 независимо выбраны из группы, включающей Н и С1-С6-алкил, и
R23 означает С1-С6-алкил или фенил; или
(2) X2 означает -C(R13)(R19)-, -С(O)-, -O-, -NH-, -N((C1-C6)-алкил)-,
или
*alkyl - алкил
Rа означает R6b-фенил, R6b-пиридил или R6b-тиофенил;
R4a означает фтор-С1-С6-алкил, циклопропилметил, -СН2СН2ОН, -СН2СН2-O-(С1-С6)-алкил, -СН2С(O)-O-(С1-С6)-алкил, -CH2C(O)NH2, -CH2C(O)-NH-(C1-C6)-алкил или -CH2C(O)-N((C1-C6)-алкил)2;
R6b означает СН3SO2- и
R1, R2, R3, R5, R14, R15, R16 и R19 являются такими, как определено в (1).
Предпочтительными являются соединения формулы II(1), в которых Ra означает R6a-фенил в особенности, если R6a является единственным заместителем, и в особенности, если заместитель R6a находится в 4-положении. Также предпочтительными являются соединения формулы II(1), в которых Xa означает -CHOR3, -C(R13)(R19) или -C(=NOR4)-; предпочтительно, если R3 означает пиридил, в особенности 2-пиридил, предпочтительно, если R4 означает (С1-С6)-алкил, в особенности метил, этил или изопропил, предпочтительно, если R13 означает водород и предпочтительно, если R19 означает R6-фенил. Для соединений формулы II(1) предпочтительно, если R1 означает (С1-С6)-алкил, в особенности метил. Для соединений формулы II(1) также предпочтительно, если R14, R15 и R16 означают водород.
Предпочтительными являются соединения формулы II(2), в которых Ra означает R6b-фенил в особенности, если R6a является единственным заместителем, и в особенности, если заместитель R6b находится в 4-положении. Также предпочтительными являются соединения формулы II(2), в которых Xa означает -CHOR3, -С(R13)(R19) или -С(=NOR4a)-; предпочтительно, если R3 означает пиридил, в особенности 2-пиридил, предпочтительно, если R4a означает циклопропилметил или трифторэтил, предпочтительно, если R13 означает водород и предпочтительно, если R19 означает R6-фенил. Для соединений формулы II(2) предпочтительно, если R1 означает (С1-С6)-алкил, в особенности метил. Для соединений формулы II(2) также предпочтительно, если R14, R15 и R16 означают водород.
Для соединений формулы II(1) и (2) предпочтительно, если R2 означает R7-, R8-, R9-фенил, R7-, R8-, R9-пиридил или его N-оксид или R7-, R8-, R9-пиримидил. Если R2 означает пиридил, то предпочтительно, чтобы он представлял собой 3- или 4-пиридил, а если он означает пиримидил, то предпочтительно, чтобы он представлял собой 5-пиримидил. Предпочтительно, чтобы заместители R7 и R8 были присоединены к циклическим атомам углерода, соседним с атомом углерода, соединяющим цикл с остальной частью молекулы, а заместитель R9 может быть присоединен к любому из остальных незамещенных циклических атомов углерода, как это показано выше для соединений формулы I. Предпочтительными заместителями R7 и R8 для соединений формулы II являются (С1-С6)-алкил, в особенности метил, галоген, в особенности хлор, и -NH2; предпочтительным заместителем R9 является водород.
Другим воплощением настоящего изобретения является фармацевтическая композиция для лечения ВИЧ-инфекции, включающая эффективное количество антагониста CCR5 формулы II в сочетании с приемлемым с фармацевтической точки зрения носителем. Другим воплощением настоящего изобретения является фармацевтическая композиция для лечения отторжения трансплантанта цельного органа, болезни "трансплантант против хозяина", артрита, ревматоидного артрита, воспалительного заболевания кишечника, атопического дерматита, псориаза, астмы, аллергических заболеваний и рассеянного склероза, содержащая эффективное количество антагониста CCR5 формулы II в сочетании с приемлемым с фармацевтической точки зрения носителем.
Еще одним воплощением настоящего изобретения является способ лечения ВИЧ-инфекции, включающий назначение человеку, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества антагониста CCR5 формулы II. Другим воплощением настоящего изобретения является способ лечения отторжения трансплантата цельного органа, болезни "трансплантант против хозяина", артрита, ревматоидного артрита, воспалительного заболевания кишечника, атопического дерматита, псориаза, астмы, аллергических заболеваний и рассеянного склероза, включающий назначение человеку, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества соединения-антагониста CCR5 формулы I или II.
Еще одним воплощением настоящего изобретения является использование антагониста CCR5 формулы I или II, соответствующего настоящему изобретению, в комбинации с одним или большим количеством противовирусных или других препаратов, применимых для лечения инфицирования вирусом иммунодефицита человека при лечении СПИД. Еще одним воплощением настоящего изобретения является использование антагониста CCR5 формулы I или II, соответствующего настоящему изобретению, в комбинации с одним или большим количеством агентов, применимых для лечения отторжения трансплантанта цельного органа, болезни "трансплантант против хозяина", воспалительного заболевания кишечника, ревматоидного артрита и рассеянного склероза. CCR5 и противовирусные и другие агенты, которые являются компонентами комбинации, можно назначать в единой дозировочной форме или их можно назначать по отдельности; предполагается возможность использования набора, включающего отдельные дозировочные формы активных веществ.
Подробное описание изобретения
Если не указано иного, то в настоящем изобретении следующие термины используются в соответствии с приведенными ниже описаниями.
Алкил (включая алкильные фрагменты алкоксильной, алкиламинной и диалкиламинной групп) представляет собой линейные и разветвленные углеродные цепи и содержит от одного до шести атомов углерода.
Алкенил представляет собой С2-С6-углеродные цепи, содержащие одну или две ненасыщенные связи, при условии, что две ненасыщенные связи не находятся рядом друг с другом.
Замещенный фенил означает, что фенильная группа может быть замещена в любом доступном положении фенильного кольца.
Ацил означает радикал карбоновой кислоты, обладающий формулой алкил-С(О)-, арил-С(О)-, арилалкил-С(О)-, (С3-С7)-циклоалкил-С(O)-, (С3-С7)-циклоалкил-(С1-С6)-алкил-С(О)- и гетероарил-С(О)-, где алкил и гетероарил являются такими, как это определено в настоящем изобретении; арил означает R12-фенил или R12-нафтил и арилалкил означает арил-(С1-С6)-алкил, где арил является таким, как это определено выше.
Гетероарил представляет собой циклические ароматические группы, содержащие 5 или 6 атомов, или бициклические группы, содержащие от 11 до 12 атомов, включающие 1 или 2 гетероатома, независимо выбранных из группы, включающей О, S и N, причем указанный гетероатом (гетероатомы) входят в структуру карбоциклического кольца и обладают количеством делокализованных пи-электродов, достаточным для придания ароматического характера, при условии, что кольца не содержат соседних атомов кислорода и/или серы. В случае 6-членных гетероарильных циклов атомы углерода могут содержать замещающие группы R7, R8 или R9. По атомам азота могут образовываться N-оксиды. Предполагается, что могут использоваться все региоизомеры, например 2-пиридил, 3-пиридил и 4-пиридил. Типичными 6-членными гетероарильными группами являются пиридильная, пиримидильная, пиразинильная, пиридазинильная и их N-оксиды. В случае 5-членных гетероарильных циклов атомы углерода могут содержать замещающие группы R10 и R11. Типичными 5-членными гетероарильными группами являются фурильная, тиенильная, пирролильная, тиазолильная, изотиазолильная, имидазолильная, пиразолильная и изоксазолильная. 5-Членные циклы с одним гетероатомом могут соединяться по 2- или 3-положениям; предпочтительно, чтобы 5-членные циклы с двумя гетероатомами соединялись по 4-положению. Типичные бициклические группы представляют собой сконденсированные с бензольным кольцом циклические системы, образовавшиеся из указанных выше гетероарильных групп, например хинолильная, фталазинильная, хиназолинильная, бензофуранильная, бензотиенильная и индолильная.
Предпочтительные положения замещения для 6-членных гетероарильных циклов, представляющих собой заместители R2, описаны выше. Если R2 представляет собой 5-членную гетероарильную группу, то предпочтительно, чтобы заместители R10 и R11 были присоединены к циклическим атомам углерода, соседним с атомом углерода, соединяющим цикл с остальной частью молекулы, и предпочтительно, чтобы заместитель R11 означал алкил; однако, если рядом с атомом углерода, соединяющим цикл с остальной частью молекулы (например, как в 2-пирролильном фрагменте), находится гетероатом, то предпочтительно, чтобы R10 был присоединен к атому углерода, соседнему с атомом углерода, соединяющему цикл с остальной частью молекулы.
Галогены означают фтор, хлор, бром и иод.
Фтор-(С1-С6)-алкил означает линейную или разветвленную алкильную цепь, содержащую в качестве заместителей от 1 до 5 атомов фтора, которые могут быть присоединены к одному и тому же или к разным атомам углерода, например -СН2F, -CHF2, -CF3, F3ССН2- и -CF2CF3.
Эффективным с терапевтической точки зрения количества антагониста CCR5 является количество, достаточное для понижения уровня ВИЧ-1-РНК в плазме.
Одно или большее количество, предпочтительно от одного до четырех, противовирусных агентов, пригодных для использования в анти-ВИЧ-1 терапии, можно использовать в комбинации с антагонистом CCR5, соответствующим настоящему изобретению. Противовирусный агент или агенты можно сочетать с антагонистом CCR5 в одной дозировочной форме или антагонист CCR5 и противовирусный препарат или препараты можно назначать одновременно или последовательно в виде отдельных дозировочных форм. Противовирусные агенты, которые предполагается использовать в комбинации с соединениями, соответствующими настоящему изобретению, включают нуклеозидные и нуклеотидные ингибиторы обратной транскриптазы, ненуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы, ингибиторы протеазы и другие противовирусные лекарственные препараты, перечисленные ниже и не относящиеся к этим классам. В частности, комбинации, известные под названием ВААВТ предполагается использовать в комбинации с антагонистами CCR5, соответствующими настоящему изобретению.
Термин "нуклеозидные и нуклеотидные ингибиторы обратной транскриптазы" (НИОТ) при использовании в настоящем изобретении означает нуклеозиды, нуклеотиды и их аналоги, которые ингибируют активность обратной транскриптазы ВИЧ-1, фермента, которые катализирует превращение вирусной геномной РНК ВИЧ-1 в провирусную ДНК ВИЧ-1.
Типичные подходящие НИОТ включают зидовудин (AZT), выпускаемый под торговым названием RETRO VTR компанией Glaxo-Wellcome Inc., Research Triangle, NC 27709; диданозин (ddl), выпускаемый под торговым названием VIDEX компанией Bristol-Myers Squibb Co., Princeton, NJ 08543; зальцитабин (ddC), выпускаемый под торговым названием HMD компанией Roche Pharmaceuticals, Nutley, NJ 07110; ставудин (d4T), выпускаемый под торговым названием ZERIT компанией Bristol-Myers Squibb Co., Princeton, NJ 08543; ламивудин (ЗТС), выпускаемый под торговым названием EPIVIR компанией Glaxo-Wellcome Research Triangle, NC 27709; абакавир (1592U89), раскрытый в WO 96/30025 и выпускаемый под торговым названием ZIAGEN компанией Glaxo-Wellcome Research Triangle, NC 27709; адефовир дипивоксил [bis(POM)-PMEA], выпускаемый под торговым названием PREVON компанией Gilead Sciences, Foster City, CA 94404; лобукавир (BMS-180194), нуклеозидный ингибитор обратной транскриптазы, раскрытый в ЕР-0358154 и ЕР-0736533 и находящийся в процессе разработки компанией Bristol-Myers Squibb, Princeton, NJ 08543; BCH-10652, ингибитор обратной транскриптазы (в виде рацемической смеси ВСН-10618 и ВСН-10619), находящийся в процессе разработки компанией Biochem Pharma, Laval, Quebec H7V, 4A7, Canada; эмит-рицитабин [(-)-FTC], выпускаемый по лицензии Emory University по выданному Emory Univ. патенту США №5814639 и находящийся в процессе разработки компанией Triangle Pharmaceuticals, Durham, NC 27707; beta-L-FD4 (также известный под названием beta-L-D4C и химическим названием бета-L-2',3'-дидезокси-5-фторцитеден), выпускаемый по лицензии Yale University, выданной компании Vion Pharmaceuticals, New Haven CT 06511; DAPD, пуриновый нуклеозид, (-)-бета-D-2,6,-диапинопуриндиоксолан, раскрытый в ЕР 0656778, выпускаемый по лицензии Emory University и the University of Georgia, выданной компании Triangle Pharmaceuticals, Durham, NC 27707; лоденосин (FddA), 9-(2,3-дидезокси-2-фтор-b-D-трео-пентофуранозил)-аденин, устойчивый к действию кислот ингибитор обратной транскриптазы на основе пурина, предложенный в NIH (Национальный институт здравоохранения США) и находящийся в процессе разработки компанией U.S. Bioscience Inc., West Conshohoken, PA 19428.
Термин "ненуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы" (ННИОТ) при использовании в настоящем изобретении означает ненуклеозиды, которые ингибируют активность обратной транскриптазы ВИЧ-1.
Типичные подходящие ННИОТ включают невирапин (BI-RG-587), выпускаемый под торговым названием VIRAMUNE компанией Boehringer Ingelheim, поставщиком для Roxane Laboratories, Columbus, ОН 43216; делавирадин (ВНАР, U-90152), выпускаемый под торговым названием RESCRIPTOR компанией Pharmacia & Upjohn Co., Bridgewater NJ 08807; эфавиренц (DMP-266), бензоксазин-2-он, раскрытый в WO 94/03440 и выпускаемый под торговым названием SUSTIVA, выпускаемый компанией DuPont Pharmaceutical Co., Wilmington, DE 19880-0723; PNU-142721, фуропиридин-тио-пиримид, находящийся в процессе разработки компанией Pharmacia and Upjohn, Bridgewater NJ 08807; AG-1549 (ранее Shionogi # S-1153); 5-(3,5-дихлорфенил)-тио-4-изопропил-1-(4-пиридил)-метил-1Н-имидазол-2-илметилкарбонат, раскрытый в WO 96/10019 и находящийся в процессе клинической разработки компанией Agouron Pharmaceuticals, inc., LaJolla CA 92037-1020; МКС-442 (1-(этоксиметил)-5-(1-метилэтил)-6-(фенилметил)-(2,4(1Н,3Н)-пиримидиндион), раскрытый компанией Mitsubishi Chemical Co. и находящийся в процессе разработки компанией Triangle Pharmaceuticals, Durham, NC 27707, и (+)-каланолид A (NSC-675451) и В, производные кумарина, раскрытые в выданном NIH патенте США №5489697, лицензия на который выдана компании Med. Chem. Research и который представляет собой назначаемый перорально препарат (+) каланолид А, разработанный совместно с компанией Vita-Invest.
Термин "ингибитор протеазы" (ИП) при использовании в настоящем изобретении означает ингибиторы протеазы ВИЧ-1, фермента, необходимого для протеолитического расщепления предшественников вирусного полипротеина (например, вирусных полипротеинов GAG и GAG Pol), на индивидуальные функциональные протеины, обнаруживаемые при ВИЧ-1-инфекции. К ингибиторам протеазы ВИЧ относятся соединения, обладающие пептидомиметической структурой, большой молекулярной массой (7600 Да) и значительным пептидным характером, например, CRIXIVAN (выпускаемый компанией Merck), а также непептидные ингибиторы протеазы, например VIRACEPT (выпускаемый компанией Agouron).
Типичные подходящие ИП включают саквинавир (Ro 31-8959), выпускаемый в твердых желатиновых капсулах под торговым названием INVIRASE и в мягких желатиновых капсулах под торговым названием FORTOUASE компанией Roche Pharmaceuticals, Nutley, NJ 07110-1199; ритонавир (АВТ-538), выпускаемый под торговым названием NORVIR компанией Abbott Laboratories, Abbott Park, IL 60064; индинавир (МК-639), выпускаемый под торговым названием CRIXIVAN компанией Merck & Co., inc., West Point, PA 19486-0004; нелфинавир (AG-1343), выпускаемый под торговым названием VIRACEPT компанией Agouron Pharmaceuticals, Inc., LaJolla CA 92037-1020; ампренавир (141W94), торговое название AGENERASE, непептидный ингибитор протеазы, находящийся в процессе разработки компанией Vertex Pharmaceuticals, Inc., Cambridge, MA 02139-4211 и выпускаемый компанией Glaxo-Wellcome, Research Triangle, NC в соответствии с программой расширенного распространения; ласинавир (BMS-234475) выпускаемый компанией Bristol-Myers Squibb, Princeton, NJ 08543 (первоначально разработанный компанией by Novartis, Basel, Switzerland (CGP-61755); DMP-450, циклическая мочевина, предложенная компанией Dupont и находящаяся в процессе разработки компанией Triangle Pharmaceuticals; BMS-2322623, азапептид, находящийся в процессе разработки компанией Bristol-Myers Squibb, Princeton, NJ 08543, в качестве ИП 2-го поколения для HIV-1; АВТ-378, находящийся в процессе разработки компанией Abbott, Abbott Park, IL 60064, и AG-1549, активный при пероральном приеме имидазолкарбамат, предложенный компанией Shionogi (Shionogi #S-1153) и находящийся в процессе разработки компанией Agouron Pharmaceuticals, Inc., LaJolla CA 92037-1020.
Другие противовирусные агенты включают гидроксимочевину, рибавирин, IL-2, IL-12, пентафусид и Yissum Project No.11607. Гидроксимочевина (Droxia), ингибитор рибонуклеозидтрифосфатредуктазы, фермента, участвующего в активации Т-клеток, предложенный компанией NCI, находится в процессе разработки компанией Bristol-Myers Squibb; при доклинических испытаниях обнаружено, что он оказывает синергетическое воздействие на активность диданосина и исследован совместно со ставудином. IL-2 раскрыт в ЕР-0142268, выданном Ajinomoto, ЕР-0176299, выданном Takeda, и патентах США №№ RE 33653, 4530787, 4569790, 4604377, 4748234, 4752585 и 4949314, выданных Chiron, и выпускается под торговым названием PROLEUKIN (алдеслейкин) компанией Chiron Corp., Emeryville, CA 94608-2997 в виде лиофилизированного порошка для внутривенного вливания и подкожного введения после восстановления влагосодержания и разбавления водой; при подкожном введении предпочтительна доза, равная от примерно 1 до примерно 20 миллионов МЕ/сутки; при подкожном введении более предпочтительна доза, равная примерно 15 миллионам МЕ/сутки. IL-12 раскрыт в WO 96/25171 и выпускается компанией Roche Pharmaceuticals, Nutley, NJ 07110-1199 и компанией American Home Products, Madison, NJ 07940; при подкожном введении предпочтительна доза, равная от примерно 0,5 мкг/кг/сут до примерно 10 мкг/кг/сут. Пентафусид (DP-178, Т-20), синтетический пептид, состоящий из 36 аминокислот, раскрытый в патенте США №5464933, выпускаемый по лицензии Duke University, выданной компании Trimeris, которая разрабатывает пентафусид совместно с Duke University; пентафусид действует путем ингибирования слияния HIV-1 с мембранами-мишенями. Пентафусид (3-100 мг/сут) назначают в виде продолженного подкожного вливания или инъекции совместно с эфавиренцем и двумя ИП пациентам-носителям HIV-1, которые не поддаются лечению с помощью трехкомпонентных комбинированных препаратов; предпочтительно назначать 100 мг/сут. Yissum Project No.11607, синтетический протеин на основе протеина HIV-1 Vif, находится в стадии доклинической разработки компанией Yissum Research Development Co., Jerusalem 91042, Israel. Рибавирин, 1-β-D-рибофуранозил-1Н-1,2,4-триазол-3-карбоксамид, выпускает компания ICN Pharmaceuticals, Inc., Costa Mesa, CA; его изготовление и рецептура описаны в патенте США №4211771.
При использовании в настоящем изобретении термин "анти-ВИЧ-1 терапия" означает любой анти-ВИЧ-1 лекарственный препарат, который оказался подходящим для лечения ВИЧ-1 инфекций у людей в чистом виде или в качестве части полилекарственных комбинированных препаратов, в особенности трехкомпонентных и четырехкомпонентных комбинированных препаратов ВААВТ. Обычно известные подходящие анти-ВИЧ-1 терапии включают (но не ограничиваются только ими) полилекарственные комбинированные препараты, такие как содержащие (i) хотя бы три анти-ВИЧ-1 препарата, выбранных из группы, включающей два НИОТ, один ИП, второй ИП и один ННИОТ, и (ii) не менее двух анти-ВИЧ-1 препаратов, выбранных из группы, включающей ННИОТ и ИП. Типичные подходящие ВААВТ - полилекарственные комбинированные препараты включают:
(а) трехкомпонентные комбинированные препараты, такие как два НИОТ и один ИП или (b) два НИОТ и один ННИОТ и (с) четырехкомпонентные комбинированные препараты, такие как два НИОТ, один ИП и второй ИП или один ННИОТ. При лечении пациентов, не употребляющих наркотиков, предпочтительно начинать анти-ВИЧ-1 лечение с назначения трехкомпонентных комбинированных препаратов; назначение двух НИОТ и одного ИП предпочтительно, если отсутствует непереносимость ИП. Необходимо согласие пациента на прием лекарственного препарата. Каждые 3-6 месяцев необходимо проверять уровни CD4+ и ВИЧ-1-РНК в плазме. При достижении плато вирусной нагрузки можно добавить четвертый лекарственный препарат, например один ИП или один ННИОТ. В приведенной ниже таблице дополнительно описаны типичные препараты.
АНТИ-ВИЧ-1 ПОЛИЛЕКАРСТВЕННЫЕ КОМБИНИРОВАННЫЕ ПРЕПАРАТЫ
А. Трехкомпонентные комбинированные препараты
1. Два НИОТ1 + один ИП2
2. Два НИОТ1 + один ННИОТ2
В. Четырехкомпонентные комбинированные препараты4
Два НИОТ + один ИП + второй ИП или один ННИОТ
С. АЛЬТЕРНАТИВЫ:
Два НИОТ1
Один НИОТ5 + один ИП2
Два ИП6 ± один НИОТ7 или ННИОТ3
Один ИП2 + один НИОТ7 + один ННИОТ3
ПРИМЕЧАНИЯ К ТАБЛИЦЕ
1. Один из следующих вариантов: зидовудин + ламивудин; зидовудин + диданосин; ставудин + ламивудин; ставудин + диданосин; зидовудин + зальцитабин.
2. Мягкие желатиновые капсулы индинавира, нелфинавира, ритонавира или саквинавира.
3. Невирапин или делавирдин.
4. См. А-М. Vandamme et al., Antiviral Chemistry & Chemotherapy, 9: 187, p.193-197 и рис. 1+2.
5. Альтернативные режимы для пациентов, которые не могут соблюдать рекомендованный режим из-за несогласия или токсичности, и для тех, для которых рекомендованный режим не привел к результатам или у которых наблюдается рецидив болезни. Комбинации, включающие два нуклеозида, для некоторых пациентов могут привести к резистентности ВИЧ и неблагоприятному исходу.
6. Большая часть данных получена при использовании саквинавира и ритонавира (по 400 мг два раза в день).
7. Зидовудин, ставудин или диданосин.
Препаратами, которые применяются для лечения ревматоидного артрита, отторжения трансплантанта, болезни "трансплантант против хозяина", воспалительного заболевания кишечника и рассеянного склероза и которые можно назначать в комбинации с антагонистами CCR5, соответствующими настоящему изобретению, являются следующие:
отторжение трансплантанта цельного органа и болезнь "трансплантант против хозяина: иммунодепрессанты, такие как циклоспорин и интерлейкин-10 (IL-10), такролимус, антилимфоцитарный глобулин, антитела ОКТ-3 и стероиды;
воспалительное заболевание кишечника: IL-10 (см. патент США 5368854) стероиды и азульдифин;
ревматоидный артрит: метотрексат, азатиоприн, циклофосфамид, стероиды и микофенолят мотефил;
рассеянный склероз: бета-интерферон, альфа-интерферон и стероиды.
Некоторые соединения, соответствующие настоящему изобретению, могут существовать в различных изомерных формах (например, энантиомерных, дистереоизомерных, атропоизомерных и ротамерных). Настоящее изобретение охватывает все такие изомеры как в чистом виде, так и в смесях, включая рацемические смеси.
Некоторые соединения по своей природе являются кислотными, например, соединения, в которых содержатся карбоксильная или фенольная гидроксильная группа. Эти соединения могут образовывать приемлемые с фармацевтической точки зрения соли. Примеры таких солей могут включать соли натрия, калия, кальция, алюминия, золота и серебра. Также предполагается, что настоящее изобретение охватывает соли, образованные с приемлемыми с фармацевтической точки зрения аминами, такими как аммиак, алкиламины, гидроксиалкиламины, N-метилглюкамин и т.п.
Некоторые основные соединения также образуют приемлемые с фармацевтической точки зрения соли, например молекулярные соли с кислотами. Например, атомы азота пиридинового типа могут образовывать соли с сильными кислотами, а соединения, в которых имеются основные заместители, такие как аминогруппы, также образуют соли и с более слабыми кислотами. Примерами кислот, подходящих для образования солей, являются хлористоводородная, серная, фосфорная, уксусная, лимонная, щавелевая, малоновая, салициловая, яблочная, фумаровая, янтарная, аскорбиновая, малеиновая, метансульфоновая и другие неорганические и карбоновые кислоты, хорошо известные специалистам в данной области техники. Соли получают путем взаимодействия соединения в виде свободного основания с достаточным количеством необходимой кислоты с образованием соли, происходящим обычным образом. Свободные основания можно выделить путем обработки соли подходящим разбавленным водным раствором основания, например разбавленным водным раствором NaOH, карбоната калия, аммиака и бикарбоната натрия. Свободные основания отличаются от соответствующих солей по некоторым физическим характеристикам, таким как растворимость в полярных растворителях, однако для целей настоящего изобретения по остальным характеристикам соли кислот и оснований эквивалентны соответствующим свободным основаниям.
Для задач настоящего изобретения все такие соли кислот и оснований считаются приемлемыми с фармацевтической точки зрения солями и для целей настоящего изобретения все такие соли кислот и оснований считаются эквивалентными свободным основаниям соответствующих соединений.
Соединения, соответствующие настоящему изобретению, можно получить способами, известными в данной области техники, например, с помощью методик, описанных на приведенных ниже схемах реакций, способами, описанными в приведенных ниже примерах, и путем использования способов, описанных в патентах США 5883096, 6037352, 5889006, 5952349 и 5977138.
Следующие растворители и реагенты в настоящем изобретении могут обозначаться указанными аббревиатурами: тетрагидрофуран (THF), этанол (EtOH), метанол (МеОН), уксусная кислота (НОАс или АсОН), этилацетат (EtOAc), N,N-диметилформамид (DMF), трифторуксусная кислота (TFA), трифторуксусный ангидрид (TFAA), 1-гидроксибензотриазол (НОВТ), м-хлорпербензойная кислота (МСРВА), триэтиламин (Et3N), диэтиловый эфир (Et2О), трет-бутоксикарбонил (ВОС), 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен (DBU), диметилсульфоксид (DMSO), п-толуолсульфоновая кислота (p-TSA), бис-(триметилсилил)-амид калия (KHMDA), 4-диметиламинопиридин (DMAP), N,N,N-диизопропилэтиламин (Dipea) и 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимидгидрохлорид (DEC). RT означает комнатную температуру.
Соединения формул I и II, в которых Х означает СНО(С=O)-(С1-С6)-алкил, СНО(С=O)-(С1-С6)-алкоксил, CHNR5(C=O)-NH-(С1-C6)-алкил, CHNR5(C=O)-(С1-С6)-алкил, CHNR5(C=O)-(C1-C6)-алкоксил, CHNR5(С=О)-NH-(С1-С6)-алкил или -CHOR3 (и в которых R14, R15 и R16 означают водород), получают по схемам 1-4.
Соединения формулы 3, в которой R, R7 и R8 являются такими, как определено для формулы I, Z означает СН или N и R1 означает алкильную группу, такую как метильная, получают так, как это показано на схеме 1. Кетон 1, синтез которого описан в WO 98/05292, подвергают стандартному амидированию с помощью ArCOOH, EDCI или DEC и НОВТ или ArCOCI, где Ar означает R7, R8-замещенный фенил или пиридил, с последующим восстановлением с помощью NaBH4 и получают 3. Получение производного свободного гидроксильного фрагмента с помощью алкилгалогенидов, ацилхлоридов (R3COCl), алкилхлорформиатов (ClCOOR3) и изоцианидов (O=C=NR3) дает сложные эфиры 4а, сложные эфиры 4b карбонаты 4с и карбаматы 4d соответственно, где R3 означает низшую алкильную группу. Арилоксисоединения 5, получают после конденсации гидроксильного соединения 3 с фенил- или пиридилгалогенидом в присутствии основания.
Альтернативно соединения формулы 5 можно получить восстановлением N-Boc-производного кетона 1а сначала в спирт 6 с последующим получением функционального производного по свободной гидроксильной группе с помощью галогензамещенного арила в присутствии основания, как показано на схеме 2, или с помощью гидроксизамещенного арила или гетероарила (где Z1 является таким, как определено на схеме 1) в присутствии PPh3 и азодикарбоксилата формулы R19O2C-N=N-CO2R20, где R20 означает низший С1-С6-алкил. Удаление защитной группы Boc и превращение в амид выполняют так, как это показано на схеме 1. Такой путь позволяет ввести в R3 различные арилоксильные и гетероарильные фрагменты путем проведения нуклеофильного замещения или реакции типа Мицунобу для промежуточного продукта 6.
Соединения формулы 8, где R, R1, R7, R8и Z являются такими, как показано на схеме 1, получают путем превращения кетона 2 в оксимную группу, проводимого с помощью СН3ONH2·HCl, и восстановления с помощью ВН3S(СН3)2 с образованием амина 8. Получение производного по свободному аминному фрагменту с помощью алкилхлорформиата (ClCOOR20, где R20 означает C1-С6-алкил) или изоцианида (O=C=NR3) дает карбаматное соединение 9 и мочевинное соединение 10 соответственно.
Получение хиральных аналогов проводят путем химического разделения. Спирт 6 вводят в реакцию сочетания с хиральной аминокислотой, защищенной группой Вос, и получают диастереоизомеры 11а и 11b, которые разделяют с помощью хроматографии. Затем хиральное вспомогательное вещество удаляют с помощью NaOH для каждого диастереоизомера и с помощью одной и той же последовательности реакций, описанной на схеме 2, обрабатывают каждый индивидуальный энантиомер с получением соединений 12а и 12b.
Оксимы формулы I или II, где Х означает C=NOR4, получают из соответствующих кетонов с помощью любой из нескольких методик, известных специалистам в данной области техники.
На схеме 5 кетон 1a, где и R1 и R2 являются такими, как определено для формулы I и II, растворяют в растворителе, таком как СН3ОН или этанол, и обрабатывают с помощью R4-замещенного гидроксиламина, такого как O-метилгидроксиламингидрохлорид, в присутствии основания, такого как ацетат натрия. Полученную смесь Z- и Е-O-замещенных оксимов 13 можно разделить или провести реакции со смесью до конца и после этого разделить. Защитную группу ВОС удаляют путем обработки кислотой, такой как водный раствор HCl или трифторуксусной кислоты, и полученный амин вводят в реакцию сочетания с кислотой при стандартных условиях и получают соединение формулы I или II.
Альтернативно кетон 1а можно обработать с помощью HONH2·HCl при аналогичных условиях и после разделения получить Е- и Z-оксимы. Затем каждый оксим обрабатывают основанием, таким как гексаметилдисилазид калия, в подходящем растворителе, таком как DMF, с последующей обработкой алкилирующим реагентом, например СН3I, диметилсульфатом, СН3СН2I, трифторэтилтрифторметилсульфонатом или аналогичным электрофилом с получением необходимого O-замещенного оксима.
Исходный кетон формулы 1а можно получить по известным методикам, как это показано на схемах 7 и 8.
На схеме 7 конденсация по Фриделю-Крафтсу N-трифторацетилизонипекотоилхлорида 17 и ароматической группы R-H в присутствии подходящего катализатора, такого как AlCl3, и необязательного растворителя, такого как СН2Cl2, дает кетон 18, который при стандартных условиях превращают в его этиленкеталь 19. N-Трифторацетильную группу удаляют и полученный свободный амин 20 обрабатывают с помощью N-ВОС-пиперидин-4-она в присутствии дегидратирующих реагентов, таких как изопропоксид титана, с последующей обработкой диэтилалюминийцианидом и получением аминонитрила 21. Аминонитрил обрабатывают реагентом Гриньяра (R1Mg-галогенидом), таким как CH3MgBr или винилмагнийбромид, и получают алкилированный продукт 22. Кеталь удаляют в стандартных условиях путем обработки водным раствором кислоты, а затем в стандартных условиях с помощью ангидрида ВОС вводят защитную группу и получают 1а.
Альтернативно 23, полученный путем олефинизации N-BOC-пиперидона по Виттигу (Chen et al., Tetrahedron Lett., 37, (1996), 5233-5234), превращают в промежуточный продукт 25 по методике, аналогичной описанной на схеме 7. 25 с помощью гидроборирования/окисления превращают в спирт 26. Спирт 26 обрабатывают подходящим окислителем, таким как смесь тетрапропиламмонийперрутената (ТРАР) с N-метилморфолин-N-оксидом (NMO), и получают альдегид 27. Альдегид обрабатывают алиллитиевым реагентом в подходящем растворителе, таком как эфир или THF, и полученный спирт 28 обрабатывают окислительным реагентом, таким как перйодинан Десса-Мартина или TPAP/NMO, и получают искомый кетон.
Соединения формулы I и II, где Х означает -С(R13)(R19)-, в котором R13 и R19 являются одинаковыми или в котором R13 и R19 являются разными, получают по схемам 9 и 10 соответственно. На этих схемах в качестве примера приведены процессы, в которых R13 и R19 означают фенил или R13 означает фенил, а R19 означает CF3-фенил соответственно, однако общие методики применимы к другим группам R13 и R19.
N-BOC-Пиперидон обрабатывают с помощью CBr4 и получают дибромсоединение формулы 44, которое затем обрабатывают фенилбороновой кислотой и получают защищенный группой ВОС дифенилметиленпиперидин формулы 45. Метиленовую связь восстанавливают в стандартных условиях, получают защищенный группой ВОС дифенилметилпиперидин формулы 46, группу ВОС удаляют и амин формулы 47 обрабатывают так, как это показано для соединений 20-22 на схеме 7, группу ВОС удаляют путем обработки с помощью TFA и полученный амин амидируют по стандартной методике, например, путем обработки реагентом R2COOH и реагентами, осуществляющими сочетание, такими как EDCI, НОВТ, и основанием и получают соединения формулы 48.
N-BOC-Пиперидон обрабатывают реагентом, таким как диэтилбензилфосфонат, и получают фенилметиленпиперидин формулы 49, который затем бромируют и получают бромфенилметиленпиперидин формулы 50. Группу ВОС удаляют в стандартных условиях, например, путем обработки с помощью TFA и получают амин 51, а амин 51 обрабатывают так, как это показано для соединений 20-22 на схеме 7, и получают аминонитрил 52, а затем - защищенный амин 53. Амин 53 обрабатывают реагентом, таким как 4-CF3-фенилбороновая кислота, получают соединение 54, метиленовую связь восстанавливают в стандартных условиях и получают рацемический 55. Группу ВОС удаляют путем обработки с помощью TFA и полученный амин амидируют по стандартной методике, например, путем обработки реагентом R2COOH и реагентами, осуществляющими сочетание, такими как EDCI, НОВТ, и основанием и получают рацемические соединения формулы 56.
Получение соединений, применимых в настоящем изобретении, пояснено с помощью последующих примеров получения, которые не следует считать ограничивающими объем настоящего изобретения. Для специалиста в данной области техники могут быть очевидны альтернативные пути и механизмы получения и аналогичные структуры, входящие в объем настоящего изобретения.
Обозначения в спектрах ЯМР в примерах: s - синглет, d - дублет, t - триплет, q -квадруплет, m - мультиплет, br - широкий.
Пример 1
Раствор свободного амина 29 (1,45 г, 3,97 ммоль) и 2,6-диметилбензоилхлорида (840 мг, 5,0 ммоль) в 1 н. водном растворе NaOH (20 мл) и СН2Cl2 (20 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь экстрагируют с помощью СН2Cl2, сушат над Na2SO4 и концентрируют в высоком вакууме, получая 30 (1,97 г, 97%) в виде светло-желтой пены.
К раствору кетона 30 (550 мг, 1,11 ммоль) в СН3ОН (6 мл) прибавляют NaBH4 (60 мг, 1,59 ммоль) и раствор перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Затем реакционную смесь выливают в 0,1 н. раствор NaOH, экстрагируют с помощью СН2Cl2, сушат над Na2SO4 и концентрируют с получением 31 (543 мг, 98%) в виде светло-желтой пены.
Пример 1А
К раствору спирта 31 (50 мг, 0,10 ммоль) в безводном DMF (0,5 мл) прибавляют NaH (6,0 мг, 0,25 ммоль), а затем этилиодид (12 мкл, 0,15 ммоль) и реакционную смесь 4 ч перемешивают при 40°С. Реакционную смесь выливают в 0,1 н. раствор NaOH, экстрагируют с помощью СН3Cl2, сушат над Na2SO4 и концентрируют. Очистка с помощью препаративной хроматографии (элюирование с помощью CH2Cl2/СН3ОН, 9:1) дает 1А (31 мг, 59%) в виде бесцветного масла. 1Н ЯМР (300 МГц, CDCl3) δ 7,39 (br d, J=8,4 Гц, 2H), 7,02-7,12 (m, 3H), 6,95 (m, 2H), 3,94 (m, 1H), 3,79 (d, J=7,2 Гц, 1H), 3,10 - 3,35 (m, 4H), 2,60-3,00 (m, 3H), 2,19 (br s, 6H), 1,60-2,10 (m, 5H), 1,05-1,50 (m, 5H), 1,08 (br t, 3H), 0,94 (s, 3H). MCBP (масс-спектроскопия высокого разрешения) (МН+) 527,2271.
Пример 1В
К раствору спирта 31 (50 мг, 0,10 ммоль) и пиридина (16,2 мкл, 0,20 ммоль) в безводном СН2Cl2 (0,5 мл) прибавляют пропионилхлорид (30 мкл, 0,30 ммоль) и раствор перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь обрабатывают, как 1А, и после обработки посредством препаративной хроматографии (элюирование с помощью СН2Cl2/СН3ОН, 9:1) получают 1В (44,7 мг, 81%) в виде бесцветного масла. 1Н ЯМР (300 МГц, CDCl3) δ 7,42 (br d, J=8,2 Гц, 2H), 7,05-7,15 (m, 3H), 6,97 (m, 2H), 5,40 (d, J=7,8 Гц, 1H), 4,09 (m, 1H), 3,43 (m, 1H), 3,23 (m, 1H), 2,96 (m, 1H), 2,82 (m, 1H), 2,70 (m, 1H), 2,21 (d, 3H), 1,60-2,10 (m, 5H), 1,05-1,45 (m, 5H), 1,08 (m, 3H), 0,95 (s, 3H). MCBP (MH+) 555,2230.
Пример 1C
К раствору спирта 31 (29,4 мг, 0,059 ммоль) и пиридина (9,5 мкл, 0,118 ммоль) в безводном CH2Cl2 (0,3 мл) прибавляют метилхлорформиат (13,8 мкл, 0,18 ммоль) и раствор перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь обрабатывают, как 1А, и после обработки посредством препаративной хроматографии (элюирование с помощью СН2Cl2/СН3ОН, 9:1) получают 1C (15 мг, 46%) в виде бесцветного масла. 1H ЯМР (300 МГц, CDCl3) δ 7,46 (br d, J=8,4 Гц, 2H), 7,14 (d, J=8,4 Гц, 2H), 7,09 (m, 1H), 6,98 (m, 2H), 5,21 (d, J=7,2 Гц, 1H), 4,09 (m, 1H), 3,71 (m, 3H), 3,45 (m, 1H), 3,24 (m, 1H), 2,97 (m, 1H), 2,82 (m, 1H), 2,70 (m, 1H), 2,22 (br s, 3Н), 1,60-2,10 (m, 5H), 1,10-1,50 (m, 5H), 0,95 (s, 3H). MCBP (MH+) 557,2017.
Пример 1D
Раствор спирта 31 (30 мг, 0,060 ммоль), пиридина (9,7 мкл, 0,12 ммоль) и метили-зоцианата (40 мкл, 0,68 ммоль) в безводном THF (0,3 мл) перемешивают при 45°С в течение 5 ч. Реакционную смесь обрабатывают, как 1А, и после обработки посредством препаративной хроматографии (элюирование с помощью СН2Cl2/СН3ОН, 9:1) получают 1D (25 мг, 75%) в виде бесцветного масла. 1H ЯМР (300 МГц, CDCl3) δ 7,42 (br d, J=8,2 Гц, 2H), 7,05-7,15 (m, 3H), 6,98 (m, 2Н), 5,34 (m, 1H), 4,08 (m, 1H), 3,44 (m, 1H), 3,24 (m, 1H), 3,19 (s, 3H), 2,96 (m, 1H), 2,65-2,85 (m, 2H), 2,20 (br s, 3H), 1,55-2,10 (m, 5H), 1,10-1,50 (m, 5H), 0,95 (s, 3H). MCBP (MH+) 556,2169.
Пример 1Е
Раствор спирта 31 (50 мг, 0,10 ммоль), NaH 60% в минеральном масле (6 мг, 0,15 ммоль) и 2-хлорпиридина (28,2 мкл, 0,30 ммоль) в безводном DMF (0,5 мл) перемешивают при 90°С в течение 16 ч. Реакционную смесь обрабатывают, как 1А, и после обработки посредством препаративной хроматографии (элюирование с помощью СН2Cl2/СН3ОН, 9:1) получают 1Е (50 мг, 86%) в виде бесцветного масла. 1Н ЯМР (300 МГц, CDCl3) δ 7,98 (m, 1H), 7,47 (br t, J=7,2 Гц, 1H), 7,38 (d, J=8,0 Гц, 2H), 7,21 (d, J=8,0 Гц, 2H), 6,95-7,15 (m, 3H), 6,65-6,80 (m, 2H), 5,74 (br d, J=7,0 Гц, 1H), 4,09 (m, 1H), 3,44 (m, 1H), 3,24 (m, 1H), 2,65-3,05 (m, 3H), 2,22 и 2,23 (s, 3H), 1,60-2,15 (m, 5H), 1,10-1,50 (m, 5H), 0,87 (s, 3H). MCBP (MH+) 576,2230.
С использованием аналогичных методик получают соединения следующей структуры:
где R3, R6 и R2 являются такими, как указано в таблице 1.
Пример 2
Раствор кетона 32 (0,60 г, 1,29 ммоль) и NaBH4 (60 мг, 1,59 ммоль) в СН3ОН (5 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь выливают в 0,1 н. раствор NaOH, экстрагируют с помощью СН2Cl2, сушат над Na2SO4 и концентрируют, получая 33 (0,60 г, 100%) в виде белой пены.
К раствору спирта 33 (543 мг, 1,2 ммоль) в безводном толуоле (4 мл) прибавляют 0,5 н. раствор KHMDA в толуоле (2,6 мл, 1,30 ммоль) и через 15 мин прибавляют 2-бромпиридин (125 мкл, 1,30 ммоль). Реакционную смесь 5 ч нагревают при 60°С, охлаждают до комнатной температуры и выливают в 5% водный раствор NaHCO3 (25 мл). Экстракция с помощью CH2Cl2, сушка над Na2SO4 и концентрирование дает масло, которое очищают с помощью флэш-хроматографии на силикагеле (элюирование с помощью CH2Cl2/EtOAc/Et3N, от 50:50:1 до 40:60:1) и получают 34а (310 мг, 49%) в виде белой пены.
Раствор 34а (310 мг, 0,57 ммоль) в безводном СН2Cl2 (2 мл) и TFA (2 мл) 30 мин перемешивают при комнатной температуре. После концентрирования остаток смешивают с 1 н. водным раствором NaOH, экстрагируют с помощью СН2Cl2, сушат над Na2SO4 и концентрируют, получая 34b (220 мг, 87%) в виде белой пены.
Раствор свободного амина 34b (85 мг, 0,19 ммоль), 2,4-диметилникотиновой кислоты (50 мг, 1,45 ммоль), DEC (60 мг, 0,31 ммоль), НОВТ (50 мг, 0,37 ммоль) и N-метилморфолина (80 мл, 0,72 ммоль) в безводном DMF (1 мл) перемешивают при 45°С в течение ночи. После концентрирования остаток смешивают с 1 н. водным раствором NaOH, экстрагируют с помощью СН2Cl2 и сушат над Na2SO4. Остаток, полученный после концентрирования, очищают с помощью препаративной хроматографии на силикагеле (элюирование с помощью СН2Cl2/СН3ОН/NH4OH, 96:4:1) и получают 35 (95 мг, 85%) в виде бесцветного масла. 1Н ЯМР (300 МГц, CDCl3) δ 8,33 (d, J=5,1 Гц, 1Н), 7,99 (dd, J=4,8 и 1,8 Гц, 1Н), 7,86 (d, J=8,4 Гц, 2H), 7,56 (d, J=8,4 Гц, 2H), 7,53 (m, 1Н), 6,96 (d, J=5,1 Гц, 1Н), 6,75-6,85 (m, 2H), 4,15 (m, 1Н), 3,45 (m, 1Н), 3,30 (m, 1Н), 3,02 (s, 3H), 2,99 (m, 2H), 2,79 (m, 1Н), 2,47 и 2,48 (s, 3H), 2,45 (m, 1Н), 2,25 и 2,26 (s, 3H), 1,65-2,15 (m, 5H), 1,15-1,55 (m, 5H), 0,90 (s, 3H). МСВР (MH+) 577,2858.
С использованием аналогичных методик получают соединения следующей структуры:
где R3, R6 и R2 являются такими, как указано в таблице 2.
Пример 3
К раствору кетона 30 (1,5 г, 3,22 ммоль) в СН3ОН (50 мл) прибавляют ацетат натрия (5,0 г, 47 ммоль) и O-метилгидроксиламингидрохлорид (3,26 г, 47 ммоль) и раствор 24 ч перемешивают при комнатной температуре. Реакционную смесь выливают в 0,1 н. раствор NaOH и экстрагируют с помощью СН2Cl2. Объединенные экстракты сушат, концентрируют и хроматографируют, получая 1,50 г (94%) оксима 36 в виде смеси Е- и Z-изомеров.
К раствору оксима 36 (0,200 г, 0,380 ммоль) в THF (5 мл) при перемешивании при 0°С прибавляют BF3·THF (1,0 М раствор в THF), затем раствор нагревают до комнатной температуры и перемешивают в течение 1 ч. Затем реакционную смесь охлаждают до 0°С и прибавляют 1 н. раствор КОН в СН3ОН (5 мл). Реакционную смесь в течение 2 ч медленно нагревают до 60°С, охлаждают до комнатной температуры, реакцию останавливают водой и реакционную смесь экстрагируют с помощью СН2Cl2. Объединенные органические экстракты концентрируют и хроматографируют на силикагеле (элюируя с помощью 20% EtOH/EtOAc) и получают 0,100 г (50%) амина 37.
К раствору амина 37 (0,015 г, 0,030 ммоль) при перемешивании прибавляют пиридин (0,5 мл) и ClCOOCH3 (0,5 мл) и раствор перемешивают в течение ночи.
Раствор выливают в воду, экстрагируют с помощью СН2Cl2, очищают с помощью препаративной хроматографии и получают 0,010 г искомого продукта 38. 1Н ЯМР (300 МГц, CDCl3) δ 7,45 (d, 2H), 7,05-7,12 (m, 3H), 6,95 (d, 2H), 4,95 (m, 1H), 4,45 (m, 1H), 4,15 (m, 1H), 3,62 (s, 3H), 3,47 (m, 1H), 3,25 (m, 1H), 2,88-3,10 (m, 3H), 2,25 (s, 6H), 1,20-2,10 (m, 12H), 0,90 (3,3H). МСВР (MH+) 558,3013.
Пример 4
Раствор спирта 39ab (660 мг,1,41 ммоль), Boc-Thr(t-Bu)-OH (413 мг, 1,50 ммоль), DEC (290 мг, 1,50 ммоль) и DMAP (190 мг, 1,55 ммоль) в безводном СН2Cl2 (5 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь выливают в насыщенный водный раствор NaHCO3, экстрагируют с помощью СН2Cl2 и сушат над Na2SO4. Остаток, полученный после концентрирования растворителя, обрабатывают с помощью флэш-хроматографии на силикагеле (элюирование с помощью СН2Cl2/ацетон, 9: 1) и в порядке элюирования получают (i) сначала 40а (391 мг, 38%) в виде белой пены, а затем (ii) 40b (391 мг, 38%) в виде белой пены.
К раствору диастереоизомера 40а (391 мг, 0,54 ммоль) в СН3ОН (3 мл) прибавляют NaOH (110 мг, 2,75 ммоль; 5 экв.) и раствор 3 ч перемешивают при 65 °С. Конечную смесь после этого выливают в 0,1 н. раствор NaOH и экстрагируют с помощью СН2Cl2, получая 39а (энантиомер А) (246 мг, 98%) в виде белой пены. (По этой же методике из 40b получают 39b (энантиомер В). Из 40а получают 43а (энантиомер А), а из 40b получают 43b (энантиомер В).
Раствор спирта 39а (210 мг, 0,45 ммоль), NaH 60% в минеральном масле (23 мг, 0,96 ммоль) и 2-бромпиридина (60 мкл, 0,62 ммоль) в безводном DMF (1,5 мл) 2 ч перемешивают при 75°С. Реакционную смесь выливают в насыщенный водный раствор NaHCO3, экстрагируют с помощью CH2Cl2, сушат над Na2SO4 и очищают с помощью флэш-хроматографии на силикагеле (элюирование с помощью CH2Cl2/EtOAc/Et3N, от 60:40: 0,5 до 40:60: 0,5) и получают 41а (143 мг, 59%).
Удаление из 41а (93 мг, 0,17 ммоль) защитной группы Boc, проводимое так, как это делают для 34b, дает 42а (68 мг, 91%) в виде белой пены.
Амин 42а (50 мг, 0,11 ммоль) вводят в реакцию сочетания с 4,6-диметилпиримидин-5-карбоновой кислотой в условиях, описанных для синтеза 35, и получают 43а (28 мг, 44%). 1Н ЯМР (300 МГц, CDCl3) δ 8,92 (s, 1H), 8,02 (m, 1H), 7,51 (m, 1H), 7,51 (brt, J=8,4 Гц, 1H), 7,41 (d, J=8,4 Гц, 2Н), 7,24 (d, J=8,4 Гц, 2Н), 6,78 (m, 1H), 6,73 (m, 1H), 5,78 (m, 1H), 4,19 (m, 1H), 3,41 (m, 1H), 3,36 (m, 1H), 2,94 (m, 1H), 2,78 (m, 1H), 2,44 и 2,46 (s, 3Н), 1,65-2,15 (m, 5H), 1,15-1,50 (m, 5H), 0,90 (s, 3Н)). МСВР (MH+) 578,2140.
С использованием аналогичных методик получают следующие соединения:
где R3, R6 и R2 являются такими, как указано в таблице 3.
1) Трифторуксусный ангидрид (TFAA) (300 мл) при 0°С прибавляют к изонипекотовой кислоте (96 г) и реакционную смесь 4 ч кипятят с обратным холодильником. Избыток TFAA удаляют в вакууме, реакционную смесь смешивают с EtOAc, промывают водой и концентрируют, получая 160 г амида. 50 г этого амида обрабатывают с помощью SOCl2 (300 мл) и реакционную смесь кипятят с обратным холодильником в течение ночи. После этого избыток тионилхлорида удаляют в вакууме и получают 54 г хлорангидрида кислоты.
2) AlCl3 (11 г) при температуре окружающей среды медленно прибавляют к раствору продукта, полученного на стадии 1 (10 г), в бромбензоле (40 мл) и реакционную смесь 4 ч кипятят с обратным холодильником. Затем ее охлаждают, выливают в смесь концентрированной HCl со льдом и продукт экстрагируют с помощью EtOAc. Органический слой отделяют и промывают водой, разбавленным вдвое насыщенным раствором NaHCO3 и концентрируют, получая 16,21 г искомого кетона.
3) Продукт, полученный на стадии 2 (16,21 г), растворяют в толуоле (200 мл), содержащем этиленгликоль (25 мл) и п-толуолсульфоновую кислоту (0,5 г). Реакционную смесь кипятят с обратным холодильником с азеотропной отгонкой воды до тех пор, пока вода не перестанет собираться. Реакционную смесь концентрируют и получают 17,4 г искомого кеталя.
4) Неочищенный продукт, полученный на стадии 3 (17,4 г), растворяют в СН3ОН (100 мл) и к этому раствору прибавляют воду (25 мл) и К2СО3 (12 г) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь разбавляют водой и экстрагируют с помощью EtOAc. Органический слой отделяют, промывают водой и рассолом и концентрируют, получая 12,55 г искомого амина.
5) К раствору продукта, полученного на стадии 4 (7,2 г, 23 ммоль), и N-BOC-пиперидин-4-она (4,8 г, 24 ммоль) в 1,2-дихлорэтане (20 мл) при перемешивании прибавляют изопропоксид титана (6,7 мл, 32,3 ммоль) и смесь 12 ч перемешивают при комнатной температуре. Реакционную смесь концентрируют и при комнатной температуре прибавляют 1,0 М раствор диэтилалюминийцианида (35 мл) и перемешивают в течение 3 ч. Затем реакционную смесь разбавляют с помощью EtOAc, реакцию останавливают водой (5 мл) и реакционную смесь перемешивают в течение 2 ч. Затем смесь фильтруют через целит и полученный фильтрат концентрируют и хроматографируют с использованием 30% EtOAc/гексаны и получают 7,3 г (63%) искомого цианида.
6) К раствору продукта, полученного на стадии 5 (7,3 г, 14,03 ммоль), в THF (100 мл) при перемешивании при комнатной температуре прибавляют 3,0 М раствор CH3MgBr в Et2O (14,0 мл, 42 ммоль) и смесь перемешивают в течение 2 ч. Затем реакцию останавливают с помощью насыщенного водного раствора NH4Cl и реакционную смесь экстрагируют с помощью СН2Cl2. Экстракты концентрируют и получают 7,0 г искомого метилированного соединения.
7) Неочищенный кеталь, полученный на стадии 6, растворяют в EtOAc (100 мл) и прибавляют 6 н. HCl (40 мл) и концентрированную HCl (10 мл) и смесь 24 ч перемешивают при комнатной температуре. Затем реакционную смесь нейтрализуют с помощью 20% раствора NaOH, экстрагируют с помощью EtOAc, сушат и концентрируют, получая 5,0 г (98%) амина.
8) К раствору продукта, полученного на стадии 7 (5,0 г, 13,6 ммоль), в Et2O (200 мл) при перемешивании прибавляют 10% раствор NaOH (50 мл) и ВОС2O и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Слои разделяют и органический слой промывают рассолом, сушат, концентрируют и хроматографируют с использованием 20% EtOAc/гексаны и получают 5,1 г (79%) искомого продукта.
9) К раствору продукта, полученного на стадии 8 (1,5 г, 3,22 ммоль), в СН3ОН (50 мл) при перемешивании прибавляют ацетат натрия (5,0 г, 47 ммоль) и O-метилгидроксиламингидрохлорид и смесь 24 ч перемешивают при комнатной температуре. Затем полученную смесь выливают в водный раствор NaOH и экстрагируют с помощью СН2Cl2. Объединенные экстракты сушат, концентрируют и хроматографируют, получая 1,5 г (94%) оксима в виде смеси Е- и Z-изомеров.
10) К раствору продукта, полученного на стадии 9 (1,5 г, 3,0 ммоль), в СН2Cl2 (10 мл) при перемешивании прибавляют TFA (3 мл) и смесь 2 ч перемешивают при комнатной температуре. Реакционную смесь концентрируют, выливают в 10% раствор NaOH и экстрагируют с помощью СН2Cl2. Объединенные экстракты сушат, концентрируют и получают 1,2 г (100%) амина.
11) К раствору продукта, полученного на стадии 10 (1,3 г, 3,2 ммоль), в СН2Cl2 при перемешивании прибавляют 2,6-диметилбензойную кислоту (0,74 г, 4,96 ммоль), EDCI (0,94 г, 4,94 ммоль), DIPEA (0,84 г, 6,58 ммоль) и НОВТ (0,66 г, 4,94 ммоль) и смесь 12 ч перемешивают при комнатной температуре. Реакцию останавливают с помощью NaHCO3 и реакционную смесь экстрагируют с помощью СН2Cl2. Объединенные экстракты сушат, концентрируют и получают 1,6 г оксима в виде смеси Е- и Z-изомеров. Изомеры разделяют с помощью хроматографии, элюируя смесью СН2Cl2: Et2O (4: 1), и получают 0,77 г Е-изомера и 0,49 г Z-изомера.
Е-изомер: 1Н ЯМР (300 МГц, CDCl3) δ 7,5 (d, 2H), 7,23 (m, 2H), 7,10 (m, 1H), 6,90 (d, 2H), 4,03 (m, 1H), 3,90 (s, 3H), 3,55 (m, 1H), 3,20 (m, 3H), 3,00 (m, 3H), 2,82 (m, 1H), 2,24 (s, 3H), 2,23 (s, 3H), 2,15 (m, 3H), 1,80-1,20 (m, 5H), 0,92 (s, 3H). MC ББА + (масс-спектроскопия с бомбардировкой быстрыми атомами) найдено 526,2070; рассчитано 526,2069.
Z-изомер: 1Н ЯМР (300 МГц,CDCl3) δ 7,50 (d, 2H), 7,15-6,95 (m, 5H), 4,15 (m, 1H), 3,80 (s, 3H), 3,45 (s, 3), 3,25 (s, 3H), 3,00 (m, 2H), 2,24 (s, 3H), 2,25 (s, 3H), 2,10 (m, 2H), 1,80-1,50 (m, 7H), 0,92 (s, 3H). MC ББА + найдено 526,2072; рассчитано 526,2069.
С использованием аналогичных методик получают следующие соединения:
где X, R6 и R2 являются такими, как указано в таблице 4.
А) Получение промежуточного продукта 27 (схема 8 (R1=СН3)).
1) 23 (40,0 г, 0,203 моль) в течение 1,5 ч энергично перемешивают с EtOAc (200 мл) и концентрированным водным раствором HCl (80 мл). Раствор концентрируют, разбавляют с помощью Et2O (300 мл) и Н2O (150 мл), водный слой отделяют и органический слой один раз экстрагируют с помощью Н2O (20 мл). Объединенные водные слои концентрируют и остаток 24 ч сушат в высоком вакууме, получая 26,7 г (84%) белого твердого вещества. К этому гидрохлориду и N-трет-бутоксикарбонил-4-пиперидону (43,8 г, 0,22 моль) в безводном ClCH2СН2Cl (80 мл) с молекулярными ситами 4 Å при 0°С последовательно прибавляют DBU (33,2 мл, 0,22 моль) и изопропоксид титана(IV) (65,5 мл, 0,22 моль), реакционной смеси дают нагреться до комнатной температуры и ее перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Затем смесь охлаждают до 0°С и при энергичном перемешивании прибавляют 1 н. раствор диэтилалюминийцианида в толуоле (260 мл, 0,26 моль). Реакционной смеси дают нагреться до комнатной температуры и ее перемешивают еще 3 ч, а затем прибавляют CH2Cl2 (300 мл), EtOAc (300 мл) и целит (50 г). Реакционную смесь охлаждают до 0°С и при энергичном перемешивании медленно прибавляют воду (40 мл) и еще через 5 мин перемешивания при комнатной температуре избыток воды поглощают с помощью Na2SO4. Затем полученную смесь фильтруют через целит, выпаривают и обрабатывают с помощью флэш-хроматографии на силикагеле (элюирование с помощью смеси гексаны/EtOAc, 8: 2) и получают 50,3 г (83%) 24 в виде бесцветного масла, которое при стоянии затвердевает.
2) К раствору 24 (27,7 г, 90,6 ммоль) в безводном THF (200 мл) при 0°С и энергичном перемешивании медленно прибавляют 3 М раствор CH3MgBr в Et2O (91 мл, 3 экв.). После прибавления реакционной смеси дают нагреться до комнатной температуры и перемешивают 3 ч. Затем реакционную смесь выливают в насыщенный водный раствор NH4Cl, экстрагируют с помощью Et2O (4 раза), промывают рассолом, сушат над Na2SO4 и концентрируют, получая 27,1 г (100%) 25 в виде бесцветного масла.
3) К раствору 25 (11,6 г, 39,3 ммоль) в безводном THF (50 мл) при 0°С медленно прибавляют 2 н. раствор ВН3·S(СН3)2 в THF (14 мл, 28 ммоль) и раствор 2 дня перемешивают при комнатной температуре. Конечную смесь концентрируют примерно до 50 мл и медленно выливают в охлаждаемую льдом смесь EtO/THF, 1:1 (50 мл). Через 15 мин при 0°С прибавляют 50 мл буферного раствора с рН=7, а затем медленно прибавляют водный раствор H2O2 (50 мл). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи, разбавляют 1 н. раствором NaOH и экстрагируют с помощью CH2Cl2. Объединенные органические слои сушат над Na2SO4, концентрируют и затем обрабатывают с помощью флэш-хроматографии на силикагеле (элюируя с помощью 20% EtOAc/EtOH, 8: 2) и получают 9,69 г (79%) 26 в виде бесцветного масла.
4) Раствор 26 (11,2 г, 35,8 ммоль) и N-метилморфолин-N-оксида (4,67 г, 39,4 ммоль) в безводном СН2Cl2 (100 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч, охлаждают до 0°С и порциями прибавляют ТРАР (885 мг). Реакционной смеси дают нагреться до комнатной температуры и перемешивают 1 ч. Затем для завершения реакции через 1 ч прибавляют дополнительное количество N-метилморфолин-N-оксида (1,30 г, 11 ммоль) и ТРАР (300 мг). Реакционную смесь фильтруют через целит, концентрируют и затем обрабатывают с помощью флэш-хроматографии на силикагеле (элюируя с помощью СН2Cl2/ацетон, от 8:2 до 7:3) и получают 5,91 г (53%) 27 в виде желтого масла.
В) Получение искомого соединения Примера 6.
1) Раствор 1-бром-4-(трифторметокси)-бензола (4,20 мл, 28,0 ммоль) в безводном THF (100 мл) охлаждают до -78°С и с помощью шприца прибавляют 2,5 н. раствор n-BuLi в гексанах (11,2 мл, 28,0 ммоль). Реакционной смеси в течение 10 мин дают нагреться до -50°С, охлаждают до -78°С и по каплям прибавляют раствор альдегида 27 (6,20 г, 20,0 ммоль) в безводном THF (15 мл). После перемешивания в течение 30 мин при -78°С, а затем в течение 30 мин при -20°С раствор выливают в разбавленный вдвое рассол и экстрагируют с помощью СН2Cl2 (3×100 мл). Объединенные органические слои сушат над Na2SO4 и концентрируют, получая 8,85 г (94%) спирта в виде желтого масла.
2) К раствору продукта, полученного на стадии 1 (8,85 г, 39,3 ммоль) в CH2Cl2 (100 мл) при 0°С прибавляют перйодинан Десса-Мартина (19,70 г, 2,5 экв.) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч. Прибавляют еще 8,0 г перйодинана Десса-Мартина и реакционную смесь перемешивают еще 4 ч. Раствор выливают в смесь насыщенного водного раствора NaHCO3 и насыщенного водного раствора Na2S2O3 состава 1:1 (200 мл), перемешивают 10 мин, экстрагируют с помощью СН2Cl2 и сушат над Na2SO4. Остаток, полученный после концентрирования растворителя, очищают с помощью флэш-хроматографии на силикагеле (элюирование с помощью смеси гексаны/EtOAc, 7:3) и получают 5,48 г (63%) кетона в виде желтого масла.
3) Раствор продукта, полученного на стадии 2 (2,85 г, 6,05 ммоль), HONH2·HCl (2,08 г, 30 ммоль) и AcONa (2,46 г, 30 ммоль) в EtOH (50 мл) 4 ч кипятят с обратным холодильником в атмосфере N2. После выпаривания растворителя остаток смешивают с 0,1 н. водным раствором NaOH и экстрагируют с помощью СН2Cl2. Остаток, полученный после выпаривания растворителя, очищают с помощью флэш-хроматографии на силикагеле и получают сначала Е-гидроксим (элюирование с помощью смеси CH2Cl2/EtOAc, 7:3; 0,84 г; 29%), а затем Z-гидроксим (элюирование с помощью смеси CH2Cl2/EtOAc, 1:1; 1,10 г; 37%); оба продукта представляют собой белые твердые вещества.
4) К суспензии Z-гидроксима (0,89 г, 1,84 ммоль) в безводном DMF (5 мл) при 0°С медленно прибавляют 0,5 н. раствор KHMDA в толуоле (4,0 мл, 2,02 ммоль), что приводит к образованию желтого раствора. При этой температуре через 2 мин к раствору медленно прибавляют диметилсульфат (350 мкл, 3,7 ммоль), раствору дают нагреться до комнатной температуры и перемешивают 1 ч. Смесь выливают в 0,1 н. раствор NaOH, экстрагируют с помощью CH2Cl2 и сушат над Na2SO4. Остаток, полученный после концентрирования растворителей, очищают с помощью флэш-хроматографии на силикагеле (элюирование с помощью смеси гексаны/EtOAc, 75:25) и получают 0,55 г (62%) Z-метоксима в виде светло-желтого масла.
5) Раствор Z-метоксима (0,59 г, 1,18 ммоль) в безводном CH2Cl2 (6 мл) и TFA (3 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч. После концентрирования остаток смешивают с 1 н. водным раствором NaOH, экстрагируют с помощью CH2Cl2, сушат над Na2SO4 и концентрируют, получая 0,47 г (100%) свободного амина в виде белой пены.
6) Раствор продукта, полученного на стадии 5 (470 мг, 1,18 ммоль), 2,4-диметилникотиновой кислоты (220 мг, 1,45 ммоль), DEC (280 мг, 1,45 ммоль), НОВТ (243 мг, 1,80 ммоль) и N-метилморфолина (0,33 мл, 3,0 ммоль) в безводном DMF перемешивают в течение 14 ч. После концентрирования остаток смешивают с 1 н. водным раствором NaOH, экстрагируют с помощью CH2Cl2 и сушат над Na2SO4. Остаток, полученный после концентрирования растворителя, очищают с помощью флэш-хроматографии на силикагеле (элюирование с помощью смеси СН2Cl2/ацетон, от 7:3 до 1:1) и получают 640 мг (100%) бесцветного масла. 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 8,35 (d, J=7,8 Гц, 1H), 7,25 (система АВ, 4Н), 6,98 (d, J=7,8 Гц, 1H), 4,22 (m, 1H), 3,82 (s, 3Н), 3,43 (m, 1H), 3,33 (m, 1H), 2,99 (m, 2H), 2,85 (m, 1H), 2,49 (s, 3Н, атропоизомер а) и 2,51 (s, 3H, атропоизомер b), 2,26 (s, 3Н, атропоизомер а) и 2,28 (s, 3Н, атропоизомер b), 1,95-2,21 (m, 3Н), 1,20-1,90 (m, 7H), 0,92 (s, 3Н). МСВР (М+H+) 533,2747.
Проведение стадий В-4, В-5 и В-6 с использованием Е-оксима дает соответствующий Е-метоксим.
С использованием аналогичных методик получают следующие соединения:
где R4, R6 и R2 являются такими, как указано в таблице 5.
Пример 7
Альтернативный синтез соединений Примера 6
1) Продукт, полученный в Примере 6, стадия В-2 (655 мг, 1,20 ммоль), обрабатывают с помощью CH2ONH2·HCl при условиях, сходных с указанными в Примере 6, стадия В-3. Полученную неочищенную смесь Z- и Е-метоксимов разделяют на пластине с силикагелем для препаративной ТСХ (тонкослойная хроматография) (элюирование с помощью смеси гексаны/EtOAc, 80:20) и в порядке элюирования получают сначала Е-метоксим (175 мг, 29%), а затем Z-метоксим (175 мг, 29%); оба продукта представляют собой масло.
2) У Z-метоксима (75 мг, 0,15 ммоль), полученного на стадии 1, удаляют защитную группу при условиях, аналогичных приведенным в Примере 6, стадия В-5, и полученный свободный амин (46 мг) непосредственно подвергают амидированию с помощью 2,4-диметилникотиновой кислоты при условиях, аналогичных приведенным в Примере 6, стадия В-6, и получают 50 мг (82%) бесцветного масла.
С использованием аналогичных методик получают следующие соединения:
где R4, R6 и R2 являются такими, как указано в таблице 6.
1) К раствору, полученному в Примере 5, стадия 8 (0,500 г, 1,07 ммоль), в DMF (25 мл) при перемешивании прибавляют метилмеркаптид натрия (0,113 г, 1,62 ммоль) и смесь 12 ч нагревают при 70°С. Затем реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры, разбавляют с помощью Et2O, промывают рассолом, сушат и концентрируют, получая 0,437 г (97%) сульфида.
2) Раствор продукта, полученного на стадии 1 (1,00 г, 2,31 ммоль), CH3ONH2·HCl (3,80 г, 46,2 ммоль) и AcONa (3,79 г, 46,2 ммоль) в EtOH (30 мл) 4 ч кипятят с обратным холодильником в атмосфере N2. После выпаривания растворителя остаток смешивают с 1 н. водным раствором NaOH и экстрагируют с помощью CH2Cl2. Остаток, полученный после концентрирования растворителя, очищают с помощью флэш-хроматографии на силикагеле и получают Е-оксим (элюирование с помощью смеси Et2O/CH2Cl2, 1: 4; 0,45 г; 24%), а затем Z-оксим (0,25 г, 15%).
3) К раствору Z-оксима (0,250 г, 0,543 ммоль), полученного на стадии 2, в СН3ОН (5 мл) при перемешивании при 0°С прибавляют оксон (1,00 г, 1,627 ммоль в 5 мл СН3ОН) и смесь 4 ч перемешивают при 0°С. Затем реакцию останавливают с помощью 10% раствора NaOH, реакционную смесь концентрируют, выливают в воду (10 мл) и экстрагируют с помощью СН2Cl2, сушат и концентрируют, получая 0,220 г (82%) сульфона.
4) К раствору продукта, полученного на стадии 3 (0,300 г, 0,608 ммоль), в CH2Cl2 (5 мл) при перемешивании прибавляют TFA (1 мл) и смесь 2 ч перемешивают при комнатной температуре. Смесь концентрируют, выливают в 10% раствор NaOH и экстрагируют с помощью СН2Cl2. Объединенные экстракты сушат и концентрируют, получая 0,240 г (100%) амина.
5) К раствору продукта, полученного на стадии 4 (0,45 г, 0,114 ммоль), в СН2Cl2 при перемешивании прибавляют 2,4-диметилникотиновую кислоту (0,26 г, 0,172 ммоль)), DEC (0,33 г, 0,172 ммоль), N,N,N-диизопропилэтиламин (DIPEA) (0,2 мл) и НОВТ (0,24 г, 0,172 ммоль) и смесь 12 ч перемешивают при комнатной температуре. Реакцию останавливают с помощью NaHCO3, смесь экстрагируют с помощью СН2Cl2, сушат, концентрируют и очищают с помощью препаративной хроматографии (20% EtOH/EtOAc) и получают 0,046 г (76%) Z-оксимамида. 1Н ЯМР (300 МГц, CDCl3) δ 8,32 (d, 1Н), 7,95 (d, 2H), 7,40 (d, 2H), 6,95 (d, 1H), 4,20 (m, 1H), 3,82 (s, 3H), 3,30-3,45 (m, 3Н), 3,10 (s, 3H), 2,80-3,00 (m, 3H), 2,50 (d, 2H), 2,25 (d, 2H), 1,30-2,20 (m, 12H), 0,92 (s, 3H).
С использованием аналогичных методик получают следующие соединения:
где X, R6 и R2 являются такими, как указано в таблице 7.
Исходный амин (2,0 г, 5,7 ммоль) растворяют в CHCl3 (57 мл; = основной раствор А˜0,1 М). Прибавляют 430 мкл основного раствора А (0,043 ммоль) к взвеси 0,25 г (˜0,22 ммоль) карбодиимида, связанного со смолой (полученного по реакции смолы Argopore-Cl с 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида в DMF при 100°С), находящейся в полиэтиленовом патроне SPE. К этой смеси прибавляют 0,12 мл 1 М раствора 5-метил-3-[2-хлорфенил]-изоксазол-4-карбоновой кислоты в DMF (0,12 ммоль), НОВТ (86 мкл 0,05 М раствора в DMF) и DMAP (25 мкл 0,05 М раствора в DMF). Эту смесь встряхивают 14 ч, фильтруют и к фильтрату прибавляют 0,3 г смолы Amberlyst-15 (˜1,5 ммоль). Встряхивают 1-2 ч, фильтруют и смолу дважды промывают каждым из следующих растворителей: THF, СН3Cl2 и СН3ОН, а затем промывают с помощью THF и СН2Cl2. Смолу обрабатывают с помощью 2 М раствора NH3 в СН3ОН (1 раз в течение 30 мин и 1 раз в течение 5 мин). Фильтраты объединяют и концентрируют при пониженном давлении, получая искомое соединение. ЖХМС (жидкостная хроматография - масс-спектрометрия), найдено MH+=570,572 (рассчитанная молекулярная масса, 571); ТСХ, Rf=0,45 (СН2Cl2/СН3ОН/NH4ОН (95/5/0,5)).
С использованием аналогичной методики получают следующие соединения:
где R2 являются такими, как указано в таблице 8.
Стадия 1. К раствору спирта 39аb (406 мг, 0,87 ммоль), 3-гидроксипиридина (95,1 мг, 1 ммоль) и PPh3 (262 мг, 1 ммоль) в безводном THF (2 мл) при 0°С прибавляют диэтилазодикарбоксилат (160 мкл, 1 ммоль) и смеси дают нагреваться до комнатной температуры в течение ночи. Реакционную смесь выливают в 5% водный раствор NaHCO3, экстрагируют с помощью СН2Cl2 и сушат над Na2SO4. После концентрирования растворителей оставшееся масло очищают с помощью флэш-хроматографии на силикагеле (элюирование с помощью СН2Cl2/СН3ОН, от 97:3 до 95:5) и получают искомое соединение (290 мг, 61%) в виде масла.
Стадия 2. У продукта, полученного на стадии 1 (290 мг, 0,53 ммоль), удаление защитной группы Boc проводят, как в Примере 2, и получают искомый амин (210 мг, 89%) в виде белой пены.
Стадия 3. Амин, полученный на стадии 2 (50 мг, 0,11 ммоль), вводят в реакцию сочетания с 4,6-диметилпиридин-5-карбоновой кислотой в условиях, описанных в Примере 2, и получают искомое соединение (32 мг, 49%) в виде бесцветного масла. 1Н ЯМР (300 МГц, CDCl3) δ 8,91 (s. 1H), 8,20 (br s, 1H), 8,10 (d, J=4,5 Гц, 1H), 7,43 (br d, J=8,4 Гц, 2H), 7,14 (br d, J=8,4 Гц, 2Н), 6,95-7,10 (m, 2H), 4,75 (br d,J=6,8 Гц, 1H), 4,15 (m, 1H), 3,44 (m, 1H), 3,33 (m, 1H), 2,95 (m, 2H), 2,79 (m, 1H), 2,42 и 2,44 (s, 3H), 1,85-2,15 (m, 3H), 1,65-1,85 (m, 2H), 1,15-1,50 (m, 5H), 0,90 (s, 3H). МСВР (MH+) 578,2115.
С использованием аналогичных методик получают соединения следующей структуры:
где R3, R6 и R2 являются такими, как указано в таблице 9.
1) N-Boc-4-пиперидон (10 г, 50 ммоль) и PPh3 (53 г, 200 ммоль) смешивают с СН3CN (100 мл). Раствор охлаждают до 0°С и к раствору при 0°С прибавляют CBr4 (33 г, 100 ммоль). Раствор перемешивают 15 мин при 0°С и 2 ч при 25°С. Прибавляют Et2O (200 мл) и полученную смесь фильтруют через слой SiO2. Концентрирование дает желтое твердое вещество. Очистка с помощью флэш-хроматографии (9/1 гексаны/Et2О, SiO2) дает 10 г (56%) дибромированного продукта в виде белого твердого вещества.
2) Раствор продукта, полученного на стадии 1 (1 г, 2,8 ммоль), PhB(OH)2 (1,2 г, 9,9 ммоль), PdCl2(PPh3)2 (197 мг, 0,28 ммоль) и Na2СО3 (897 мг, 8,5 ммоль) смешивают с THF/H2O (4/1,20 мл) и 24 ч перемешивают при 65°С в атмосфере N2. Раствор подвергают распределению между EtOAc и Н2О, водный слой экстрагируют с помощью EtOAc и объединенные органические слои промывают рассолом и сушат над Na2SO4. Фильтрование и концентрирование дает темно-коричневое масло. Очистка с помощью флэш-хроматографии (9/1 гексаны/Et2O, SiO2) дает 941 мг (96%) искомого продукта в виде белого твердого вещества. Т.пл.=152-153°С.
3) Раствор продукта, полученного на стадии 2 (500 мг, 1,4 ммоль), и Pd(OH)2 на углероде (100 мг, 20 мас.% Pd (в расчете на сухое вещество), 50 мас.% Н2О) смешивают с СН3ОН (20 мл) и 15 ч встряхивают в приборе Парра при давлении Н2 50 фунтов/дюйм2. Смесь фильтруют и концентрируют, получая 501 мг (99%) дифенилметилпиперидина в виде бесцветного масла.
4) К раствору продукта, полученного на стадии 3 (500 мг, 1,4 ммоль), в СН2Cl2 (15 мл) прибавляют TFA (1,4 мл). Раствор 23 ч перемешивают при 25°С. Раствор концентрируют и остаток подвергают распределению между CH2Cl2 и 1 н. раствором NaOH. Водный слой экстрагируют с помощью СН2Cl2 и объединенные органические слои сушат над Na2SO4, фильтруют и концентрируют, получая 349 мг (99%) свободного амина в виде желтого масла, т.пл. (HCl соль) = разлагается выше 220-230°С. МСВР: рассчитано для C18H22N (MH+) 252,1752; найдено 252,1751.
5) Раствор продукта, полученного на стадии 4 (349 мг, 1,4 ммоль), N-Boc-4-пиперидон (280 мг, 1,4 ммоль) и Ti(OiPr)4 (0,42 мл, 1,4 ммоль) смешивают с CH2Cl2 (15 мл) в атмосфере N2. После перемешивания при 25°С в течение 17 ч прибавляют Et2AlCN (2,8 ммоль, 2,8 мл 1,0 М раствора в толуоле) и раствор перемешивают при 25°С еще 18 ч. Реакцию останавливают с помощью насыщенного раствора NaHCO3, реакционную смесь разбавляют с помощью EtOAc и объединенные слои, содержащие EtOAc, сушат над Na2SO4. Фильтрование и концентрированно дает желтое масло. Очистка с помощью препаративной тонкослойной хроматографии (9/1, гексаны/EtOAc, SiO2) дает 430 мг (67%) искомого продукта в виде масла.
6) Раствор продукта, полученного на стадии 5 (530 мг, 0,94 ммоль), в THF (20 мл) охлаждают до 0°С в атмосфере N2. При 0°С прибавляют CH3MgBr (1,6 мл 3,0 М раствора в Et2O,4,7 ммоль) и раствор 19 ч перемешивают при 25°С. Реакцию останавливают с помощью насыщенного раствора NH4Cl, реакционную смесь разбавляют с помощью СН2Cl2 и 1 н. NaOH (с использованием индикаторной бумаги для водного слоя устанавливают рН=8-10). Слои разделяют и водный слой экстрагируют с помощью СН2Cl2. Объединенные органические слои сушат над Na2SO4, фильтруют и концентрируют, получая желтое масло. Очистка с помощью флэш-хроматографии (3/1 гексаны/EtOAc, SiO2) дает 275 мг (65%) продукта в виде желтого масла.
7) К раствору продукта, полученного на стадии 6 (275 мг, 0,61 ммоль), в СН2Cl2 (15 мл) прибавляют TFA (0,60 мл) и раствор 18 ч перемешивают при 25°С. Раствор концентрируют и остаток подвергают распределению между СН2Cl2 и 1 н. раствором NaOH. Водный слой экстрагируют с помощью СН2Cl2 и объединенные органические слои сушат над Na2SO4, фильтруют и концентрируют, получая 209 мг (99%) амина в виде желтого масла. МСВР: рассчитано для С24Н33N2 (MH+) 349,2644; найдено 349,2638.
8) Раствор продукта, полученного на стадии 7 (50 мг, 0,14 ммоль), 2,6-диметилбензойной кислоты (63 мг, 0,42 ммоль), EDCI (54 мг, 0,28 ммоль), НОВТ (38 мг, 0,28 ммоль) и iPr2NEt (0,10 мл) смешивают с CH2Cl2 (3 мл). Раствор 18ч перемешивают при 25°С, затем разбавляют с помощью CH2Cl2 и промывают с помощью 1 н. раствора NaOH. Водный слой экстрагируют с помощью СН2Cl2, объединенные органические слои сушат над Na2SO4, фильтруют и концентрируют, получая желтое масло. Очистка с помощью препаративной тонкослойной хроматографии (3/1 гексаны/EtOAc, SiO2) дает 47 мг (70%) искомого продукта в виде бесцветного масла, т.пл. (HCl соль) = 195-201°С. МСВР: рассчитано для C33H41N2O (MH+) 481,3219; найдено 481,3225.
С использованием аналогичных методик получают соединения следующей структуры:
где R6 и R2 являются такими, как указано в таблице 10.
1) N-Boc-4-пиперидон (10 г, 50 ммоль) и диэтилбензилфосфонат (12,6 г, 55 ммоль) смешивают в сухом THF (50 мл) в атмосфере N2. К этому раствору при 25°С прибавляют NaH (2,4 г, 60 ммоль, дисперсия в масле концентрации 60 мас.%). Полученную смесь 3,5 ч кипятят с обратным холодильником. Раствор подвергают распределению между EtOAc и насыщенным раствором NH4Cl, водный слой экстрагируют с помощью EtOAc и объединенные слои, содержащие EtOAc, промывают рассолом и сушат над MgSO4. Фильтрование и концентрированно дает желтое масло. Очистка с помощью флэш-хроматографии (10/1 гексаны/Et2O, SiO2) дает 9,85 г (72%) искомого продукта в виде твердого вещества, т.пл. 63-65°С.
2) К раствору продукта, полученного на стадии 1 (5,0 г, 18 ммоль), в СН3Cl2 (100 мл) при 0°С по каплям прибавляют бром (1 мл, 20 ммоль; раствор в 10 мл CH2Cl2). Раствор 15 мин перемешивают при 0°С, а затем концентрируют при пониженном давлении. Неочищенный продукт растворяют в смеси трет-бутанол/THF (4/1, 100 мл) и к раствору порциями прибавляют KOtBu (4,1 г, 36 ммоль). Желтую смесь 5 ч перемешивают при 25°С, а затем концентрируют при пониженном давлении. Остаток подвергают распределению между EtOAc и насыщенным раствором NH4Cl, водный слой экстрагируют с помощью EtOAc и объединенные слои, содержащие EtOAc, промывают рассолом и сушат над MgSO4. Фильтрование и концентрирование дает желтое твердое вещество. Очистка с помощью флэш-хроматографии (7/1 гексаны/Et2O, SiO2) дает 5,2 г (81%) искомого продукта в виде желтого твердого вещества, т.пл. 80-83°С.
3) К раствору продукта, полученного на стадии 2 (2,1 г, 5,9 ммоль), в CH2CL2 (25 мл) прибавляют TFA (5,9 мл). Раствор 5 ч перемешивают при 25°С, концентрируют и остаток подвергают распределению между СН2Cl2 и 1 н. раствором NaOH. Водный слой экстрагируют с помощью СН2Cl2 и объединенные органические слои сушат над Na2SO4, фильтруют и концентрируют, получая 1,46 г (98%) амина в виде оранжевого масла, т.пл. (HCl соль) = разлагается выше 185-195°С. МСВР: рассчитано для C12H15BrN (MH+) 254,0367; найдено 254,0374.
4) Раствор продукта, полученного на стадии 3 (1,4 г, 5,6 ммоль), N-Boc-4-пиперидон (1,1 г, 5,6 ммоль) и Ti(OiPr)4 (1,7 мл, 5,6 ммоль) смешивают с СН2Cl2 (30 мл) в атмосфере N2. После перемешивания при 25°С в течение 18 ч прибавляют Et2AlCN (6,7 ммоль, 6,7 мл 1,0 М раствора в толуоле) и раствор перемешивают при 25°С еще 18 ч. Реакцию останавливают с помощью насыщенного раствора NaHCO3, реакционную смесь разбавляют с помощью EtOAc и фильтруют через целит. Водный слой экстрагируют с помощью EtOAc и объединенные слои, содержащие EtOAc, сушат над Na2SO4. Фильтрование и концентрированно дает желтое масло. Очистка с помощью препаративной тонкослойной хроматографии (3/1 гексаны/EtOAc, SiO2) дает 2,0 г (78%) искомого продукта в виде почти белого твердого вещества.
5) Раствор продукта, полученного на стадии 4 (2,0 г, 4,3 ммоль), в THF (30 мл) охлаждают до 0°С в атмосфере N2. При 0°С прибавляют CH3MgBr (7,2 мл 3,0 М раствора в Et2O, 21 ммоль). Раствор нагревают до 25°С и 16 ч перемешивают при этой температуре. Реакцию останавливают с помощью насыщенного раствора NH4Cl, реакционную смесь разбавляют с помощью СН2Cl2 и 1 н. раствора NaOH (с использованием индикаторной бумаги для водного слоя устанавливают рН 8-10). Слои разделяют, водный слой экстрагируют с помощью СН2Cl2 и объединенные органические слои сушат над Na2SO4. Фильтрование и концентрированно дает желтое масло. Очистка с помощью флэш-хроматографии (3/1 гексаны/EtOAc, SiO2) дает 1,56 г (82%) искомого продукта в виде желтого масла.
6) Раствор продукта, полученного на стадии 5 (300 мг, 0,67 ммоль), 4-CF3С6Н4В(ОН)2 (380 мг, 2 ммоль), PdCl2(PPh3)2 (50 мг, 0,067 ммоль) и Na2СО3 (210 мг, 2 ммоль) смешивают с THF/H2O (4/1,15 мл) и 18 ч перемешивают при 65°С в атмосфере N2. Раствор подвергают распределению между EtOAc и Н2О и водный слой экстрагируют с помощью EtOAc. Объединенные органические слои промывают рассолом и сушат над Na2SO4. Фильтрование и концентрирование дает темно-коричневое масло. Очистка с помощью флэш-хроматографии (4/1 гексаны/EtOAc, SiO2) дает 229 мг (67%) искомого продукта в виде бесцветного масла.
7) Раствор продукта, полученного на стадии 6 (229 мг, 0,45 ммоль), и Pd(OH)2 на углероде (200 мг, 20 мас.% Pd (в расчете на сухое вещество), 50 мас.% H2O) смешивают с СН3ОН (35 мл) и 20 ч встряхивают в приборе Парра при давлении Н2 50 фунтов/дюйм2. Смесь фильтруют и концентрируют, получая 232 мг (100%) (±)-продукта в виде бесцветной пены. МСВР: рассчитано для С30H40O2N3 (MH+) 517,3042; найдено 517,3050.
8) К раствору продукта, полученного на стадии 7 (235 мг, 0,45 ммоль) в СН2Cl2 (15 мл) прибавляют TFA (0,45 мл). Раствор 24 ч перемешивают при 25°С, затем концентрируют и остаток подвергают распределению между СН2Cl2 и 1 н. раствором NaOH. Водный слой экстрагируют с помощью CH2Cl2, объединенные органические слои сушат над Na2SO4, фильтруют и концентрируют, получая 146 мг (78%) (±)-амина в виде желтого масла.
9) Раствор продукта, полученного на стадии 8 (102 мг, 0,25 ммоль), 4,6-диметилпиридин-5-карбоновой кислоты (110 мг, 0,75 ммоль), EDCI (96 мг, 0,50 ммоль), НОВТ (70 мг, 0,50 ммоль) и iPr2NEt (0,17 мл) смешивают с СН2Cl2 (3 мл). Раствор 18 ч перемешивают при 25°С, затем разбавляют с помощью СН2Cl2 и промывают с помощью 1 н. раствора NaOH. Водный слой экстрагируют с помощью СН2Cl2, объединенные органические слои сушат над Na2SO4, фильтруют и концентрируют, получая желтое масло. Очистка с помощью препаративной тонкослойной хроматографии (1/1 ацетон/гексаны, SiO2) дает 121 мг (88%) искомого соединения в виде бесцветного масла, т.пл. (HCl соль) = 186-191°С. МСВР: рассчитано для C32H38N4OF3 (MH+) 551,2998; найдено 551,3012.
4,6-Диметилпиридин-5-карбоновую кислоту, использованную на стадии 9, получают по следующей методике:
Стадия 1. Этилдиацетоацетат (93,4 г), Cs2СО3 (185 г) и СН3CN (550 мл) смешивают друг с другом с помощью верхней механической мешалки. Прибавляют СН3CN (50 мл) и полученную смесь охлаждают до 0°С. По каплям прибавляют метилтрифторметансульфонат (88,6 г) и после завершения прибавления охлаждающую баню удаляют. Смесь 1 ч перемешивают при комнатной температуре, фильтруют и соли промывают с помощью Et2O (2×50 мл). Органические экстракты объединяют и прибавляют Et2O (300 мл). Полученную смесь фильтруют, осадок на фильтре промывают с помощью Et2O (2×100 мл), экстракты, содержащие Et2O, объединяют и упаривают до половинного объема. Раствор охлаждают на бане со льдом и один раз промывают охлажденным (0°С) 2 н. раствором NaOH (рН=11). Слой, содержащий Et2O, сушат над MgSO4, фильтруют и выпаривают, получая искомый продукт с выходом 65% в виде желтой жидкости (64,7 г), которую используют на следующей стадии без дополнительной обработки.
Стадия 2. Продукт, полученный на стадии 1 (64,2 г), раствор этоксида натрия в этаноле (продажный раствор; 21 мас.%; 113 г), этанол (587 мл) и формамидинацетат (36,2 г) смешивают при комнатной температуре. После кипячения с обратным холодильником в течение 4 ч смесь охлаждают до комнатной температуры, образующийся осадок отфильтровывают и этанол удаляют в вакууме. Полученную жидкость подвергают распределению между водой и СН2Cl2 и водный слой экстрагируют с помощью СН2Cl2 (3×150 мл). Экстракты в СН2Cl2 сушат над MgSO4, фильтруют, выпаривают и получают темную неочищенную жидкость (50,7 г), которую очищают с помощью хроматографии на силикагеле (980 г, 4:1, гексаны: EtOAc в качестве элюента). После выпаривания соответствующих фракций искомый продукт (28,5 г) выделяют с выходом 46% и используют на следующей стадии без дополнительной обработки.
Стадия 3. Продукт, полученный на стадии 2 (28,1 г), NaOH (6,72 г), воду (65 мл) и EtOH (130 мл) смешивают друг с другом при комнатной температуре и 1 ч кипятят с обратным холодильником. Полученный раствор охлаждают до комнатной температуры и летучие вещества удаляют в вакууме до образования густой пасты. Прибавляют воду (20 мл), смесь охлаждают до 0°С и при перемешивании по каплям прибавляют концентрированную HCl (14,3 мл). Образовавшийся белый осадок собирают с помощью фильтрования, промывают ледяной водой (2×10 мл) и 30 мин сушат на воздухе с отсасыванием. Полученное белое твердое вещество обрабатывают толуолом (2×20 мл), растворитель удаляют в вакууме при 50°С и затем 18 ч сушат в вакууме (1 мм рт.ст.). Искомый продукт выделяют в виде белого твердого вещества с выходом 63%. Т.пл. 176-178°С. Элементный анализ C7H8N2O2: рассчитано С 55,26%; Н 5,30%; N 18,41%; найдено С 55,13%; Н 5,44%; N 18,18%.
Вторую порцию продукта выделяют, выпаривая досуха полученный выше водный фильтрат и прибавляя воду (20 мл). Полученную смесь 5 мин перемешивают при комнатной температуре, охлаждают на бане со льдом и образовавшийся осадок собирают путем фильтрования. Полученное твердое вещество промывают ледяной водой (2×5 мл) и сушат, как описано выше, получая продукт (4,68 г) в виде твердого вещества кремового цвета с суммарным выходом, равным 83%.
Стадия 1. К суспензии метилтрифенилфосфонийбромида (1,89 г; 4,80 ммоль) в безводном THF (15 мл) при -40°С с помощью шприца прибавляют 2,5 н. раствор n-BuLi в гексанах (2,12 мл; 5,3 ммоль). Реакционной смеси дают нагреться до 0°С и прибавляют раствор продукта, полученного в Примере 6, стадия В-2 (2,24 г; 4,8 ммоль). Затем раствору дают нагреваться до комнатной температуры в течение ночи, выливают его в СН2Cl2 и промывают насыщенным раствором NaHCO3, a затем рассолом. Остаток, полученный после концентрирования органического слоя, очищают с помощью флэш-хроматографии на силикагеле (элюирование с помощью CH2Cl2/EtOAc, 9:1) и получают 0,56 г (25%) масла.
Стадия 2. Раствор продукта, полученного на стадии 1 (0,56 г; 1,2 ммоль), и 0,5 н. раствор 9-BBN в THF (3 мл; 1,5 ммоль) кипятят с обратным холодильником в инертной атмосфере в течение 2 ч. Часть этого раствора (1,5 мл; 0,59 ммоль теоретического промежуточного продукта) прибавляют к смеси 1-хлор-3-иодбензола (88 мкл; 0,71 ммоль), PdCl2dppf·СН2Cl2 (19,8 мг), трифениларсина (24,1 мг) и Cs2СО3 (250 мг) в DMF (0,40 мл) и воде (80 мкл). Реакционную смесь перемешивают в течение 2 ч при 60°С и в течение ночи при комнатной температуре, выливают в 5% водный раствор NaHCO3 и экстрагируют с помощью CH2Cl2. Объединенные органические слои сушат над Na2SO4, концентрируют и очищают с помощью хроматографии на силикагеле (элюируя с помощью EtOAc/гексаны, 8:2) и получают 100 мг (29%) масла.
Стадия 3. У продукта, полученного на стадии 2 (100 мг; 0,17 ммоль), защитную группу Boc удаляют, как в Примере 2, и получают искомый амин (70 мг; 86%). Этот амин (45 мг; 0,09 ммоль) вводят в реакцию сочетания с 4,6-диметилпиримидин-5-карбоновой кислотой в условиях, описанных в Примере 2, и получают искомое соединение в виде бесцветного масла (32 мг). 1Н ЯМР (300 МГц, CDCl3) δ 8,93 (d, J=3,8 Гц, 1H), 6,90-7,10 (m, 5H), 6,88 (br s, 1H), 6,71 (d, J=7 Гц, 1H), 4,20 (m, 1H), 3,25-3,55 (m, 2H), 3,19 (m, 2H), 2,50-3,10 (m, 5H), 2,47 и 2,48 (s, 3Н), 2,42 и 2,43 (s, 3H), 1,70-2,20 (m, 5H), 1,20-1,65 (m, 5H), 0,92 (s, 3Н). МСВР (MH+) 615,2722.
С использованием аналогичной методики также получают следующее соединение:
Для получения соединения, в котором R2 означает 2,6-диметилфенил
1) Раствор продукта, полученного на стадии 5 в Примере 12 (300 мг, 0,67 ммоль), 4-CF3ОС6Н4В(ОН)2 (410 мг, 2 ммоль), PdCl2(PPh3)2 (50 мг, 0,067 ммоль) и Na2CO3 (210 мг, 2 ммоль) смешивают с THF/H2O (4/1, 15 мл) и 19 ч перемешивают при 65°С в атмосфере N2. Раствор подвергают распределению между EtOAc и Н2O и водный слой экстрагируют с помощью EtOAc. Объединенные органические слои промывают рассолом и сушат над Na2SO4. Фильтрование и концентрирование дают темно-коричневое масло. Очистка с помощью флэш-хроматографии (4/1 гексаны/EtOAc, SiO2) дает 356 мг (100%) искомого продукта в виде желтого масла.
2) Раствор продукта, полученного на стадии 1 (340 мг, 0,64 ммоль), и Pd(OH)2 на углероде (300 мг, 20 мас.% Pd (в расчете на сухое вещество), 50 мас.% H2О) смешивают с СН3ОН (35 мл) и 18 ч встряхивают в приборе Парра при давлении Н2 50 фунтов/дюйм2. Смесь фильтруют и концентрируют, получая 341 мг (100%) продукта (±)-1 в виде бесцветной пены.
3) Амин (±)-1 разделяют с помощью хиральной ВЭЖХ (высокоэффективная жидкостная хроматография). Использованы следующие условия: CHIRALCEL® OD™ (5 см × 30 см; гексан/изопропиловый спирт/диэтиламин, 75/25/0,05) при 25°С; детектирование при 254 нм. Времена удерживания для пика 1, (+)-энантиомера, и пика 2, (-)-энантиомера, составляют 3,8 и 4,9 мин соответственно [CHIRALCEL® OD™ (гексан/изопропиловый спирт/диэтиламин, 90/10/0,1) 25°С, детектирование при 254 нм]. Пик 1 и пик 2 являются соответственно первым и вторым пиками элюирования из колонки. У энантиомеров (I и II) удаляют защитные группы (CH2Cl2/TFA) и свободный амин вводят в реакцию сочетания с 2,6-диметилбензойной кислотой с использованием условий, описанных в Примере 11, стадии 7 и 8. Гидрохлориды получают смешиванием свободного основания с EtOAc и растиранием с 1 М раствором HCl в Et2O.
В приведенной ниже таблице 11 представлены данные для указанных выше соединений, 14А и 14В, и для дополнительных соединений, полученных сходным образом. Во всех случаях обозначение I для энантиомера означает (+)-1, а обозначение II для энантиомера означает (-)-1.
1) Дибромолефин (3,55 г, 10 ммоль) и TFA (10 мл) смешивают в CH2Cl2 и 20 ч перемешивают при 25°С. Раствор концентрируют. Раствор подвергают распределению между СН2Cl2 и 1 н. раствором NaOH. Водный слой экстрагируют с помощью СН2Cl2 Объединенные органические слои сушат (Na2SO4). Фильтрование и концентрирование дает 2,4 г (94%) свободного пиперидина в виде бесцветного масла. Свободный пиперидин (2,41 г, 9,45 ммоль) последовательно обрабатывают с помощью (а) N-Вос-4-пиперидон/Ti(OiPr)4 и (b) Et2AlCN и получают цианамид, как это описано на стадии 5 Примера 11.
2) Продукт, полученный на стадии 1, и MeMgBr (16 мл, 3,0 М раствор в Et2O) смешивают с THF (30 мл) и 19 ч перемешивают при 25°С. Реакцию останавливают с помощью 1 н. раствора NaOH и EtOAc. Смесь фильтруют (через целит). Водный слой экстрагируют с помощью EtOAc и объединенные слои, содержащие EtOAc, промывают рассолом и сушат (Na2SO4). Фильтрование и концентрирование дают желтое масло. Очистка с помощью флэш-хроматографии (6/1 гексаны/EtOAc, SiO2) дает 2,54 г (69% в расчете на свободный пиперидин) винилбромида в виде твердого вещества. Т. пл. (свободное основание) 85-90°С. МСВР (MH+): рассчитано для C18H32O2N2Br 387,1647; найдено 387,1638.
3) Продукт, полученный на стадии 2 (200 мг, 0,52 ммоль), 4-CF3С6Н4В(ОН)2 (344 мг, 1,8 ммоль), PdCl2(PPh3)2 (36 мг, 0,052 ммоль) и Na2СО3 (165 мг, 1,56 ммоль) смешивают с THF/H2O (4/1,10 мл) и 21 ч нагревают при 75°С (на масляной бане). Раствор подвергают распределению между EtOAc и Н2O. Водный слой экстрагируют с помощью EtOAc, объединенные органические слои промывают рассолом и сушат (Na2SO4). Фильтрование и концентрирование дают желтое масло. Очистка с помощью флэш-хроматографии (от 3/1 до 1/1 гексаны/EtOAc, SiO2) дает 210 мг (89%) фенилзамещенного олефина в виде масла. МСВР (MH+): рассчитано для С25Н36O2N2F 453,2729; найдено 453,2728.
4) Продукт, полученный на стадии 3, гидрируют так, как это описано на стадии 3 Примера 11. У восстановленного продукта удаляют защитные группы и его вводят в реакцию сочетания с 2,6-диметилбензойной кислотой, как это описано в Примере 11, стадии 7-8, и получают искомое соединение в виде желтого масла (37 мг, 55%). Т.пл. (HCl соль) 130-140°С. МСВР (MH+): рассчитано для C29H38ON2F3 487,2936; найдено 487,2928.
С использованием аналогичной методики получают следующее соединение:
Т.пл. (HCl соль) 135-145°С. МСВР (MH+): рассчитано для С29Н38ON2F3 503,2885; найдено 503,2896.
Для определения антагонистической активности соединений, соответствующих настоящему изобретению, по отношению к CCR5, можно использовать следующие методики анализа.
Анализ связывания с CCR5 мембраны
При высокопроизводительном скрининге, в котором используется анализ связывания с CCR5 мембраны, определяются ингибиторы связывания RANTES. В этом анализе используют мембраны, приготовленные из клеток NIH 3Т3, экспрессирующих хемокиновый рецептор CCR5 человека, который обладает способностью связываться с RANTES, природным лигандом этого рецептора. С использованием планшета с 96 лунками препараты мембран 1 ч инкубируют с помощью 125I-RANTES в присутствии или в отсутствие соединения. Соединения последовательно разбавляют в диапазоне от 0,001 до 1 мкг/мл и исследуют трижды. Реакционные смеси фильтруют через фильтры из стекловолокна и тщательно промывают. Результаты подсчетов для групп анализов усредняют и данные приводят в виде концентраций, необходимых для ингибирования 50% полного связывания 125I-RANTES. Соединения, для которых при анализе связывания с мембраной обнаружена высокая активность, дополнительно характеризуют путем анализа вторичного проникновения ВИЧ-1 в клетки и анализа репликации.
Анализ проникновения ВИЧ-1
Вирионы-репортеры с нарушенной репликацией получают путем трансфекции плазмиды, кодирующей штамм NL4-3 ВИЧ-1 (который модифицирован путем мутации гена оболочки и введения плазмиды-репортера люциферазы), и плазмиды, кодирующей один из нескольких генов оболочки ВИЧ-1, в соответствии с описанием в работе Connor et al., Virology. 206 (1995), p.935-944. После трансфекции этих двух плазмид с помощью осаждения фосфатом кальция на 3-й день собирают вирусную надосадочную жидкость и определяют функциональный вирусный титр. Эти основные растворы затем используют для инфицирования клеток U87, стабильно экспрессирующих CD4 и хемокиновый рецептор CCR5, которые предварительно инкубируют в присутствии или в отсутствие исследуемого соединения. Инфицирование проводят в течение 3 ч при 37°С, клетки промывают и среду заменяют на свежую среду, содержащую соединение. Клетки инкубируют в течение 3 суток, лизируют и определяют люциферазную активность. Результаты приводят в виде концентраций, необходимых для ингибирования 50% люциферазной активности в контрольных культурах.
Анализ репликации ВИЧ-1
В этом анализе с целью определения эффективности анти-ССR5 соединений для блокирования инфицирования первичными штаммами ВИЧ-1 используют первичные моноядерные клетки периферической крови или стабильные клетки линии U87-CCR5. Первичные лимфоциты берут у нормальных здоровых доноров, очищают и стимулируют in vitro с помощью РНА и IL-2 за трое суток до инфицирования. С использованием планшета с 96 лунками клетки подвергают предварительной обработке лекарственным препаратом в течение 1 ч при 37°С и затем инфицируют культурами макрофагового тропического ВИЧ-1. После инфицирования клетки промывают для удаления остаточного инокулята и в течение 4 суток культивируют в присутствии соединений. Собирают надосадочную жидкость культур и вирусную репликацию измеряют путем определения концентрации вирусного антигена р24.
Анализ потока кальция
Клетки, экспрессирующие корецептор CCR5 ВИЧ обрабатывают красителем, чувствительным по отношению к кальцию, а затем добавляют соединение или природный лиганд CCR5. Соединения, обладающие антагонистической способностью, будут индуцировать в клетке сигнал кальциевого потока, а антагонисты CCR5 определяются, как соединения, которые сами по себе не индуцируют сигнала, но могут блокировать сигнал природных лигандов CCR5.
Анализ связывания GTPγS:
При анализе связывания GTPγS определяется активация рецептора лигандами CCR5. В этом анализе измеряют связывание GTP, меченного 35S, с G-белками, связанными с рецептором, которое происходит вследствие активации рецептора соответствующим лигандом. В этом анализе лиганд CCR5, RANTES, инкубируют с мембранами клеток, экспрессирующих CCR5, и связь с активацией рецептора (или связывание) устанавливают путем количественного определения связанной метки 35S. Обладает ли соединение агонистической способностью, в этом анализе количественно определяют по индуцированию активации рецептора, или, альтернативно, обладает ли оно антагонистической способностью, - путем измерения ингибирования связывания RANTES по конкурентному или не конкурентному механизму.
Анализ хемотаксиса
Анализ хемотаксиса - это функциональный анализ, который сравнительным образом характеризует агонистические и антагонистические характеристики исследуемого соединения. В анализе измеряется способность неприлипающей линии клеток мышей, экспрессирующих CCR5 человека (BaF-550), мигрировать через мембрану под влиянием исследуемых соединений и природных лигандов (т.е. RANTES, MIP-1β). Клетки мигрируют через проницаемую мембрану по направлению к соединениям, обладающим агонистической активностью. Соединения, являющиеся антагонистами, не только не могут вызывать хемотаксис, но и способны ингибировать миграцию клеток под влиянием известных лигандов CCR5.
Роль рецепторов хемокинов СС, таких как рецепторы CCR5, при воспалительных заболеваниях рассмотрена в таких публикациях, как Immunology Letters, 57 (1997), 117-120 (артрит); Clinical & Experimental Rheumatology, 17 (4) (1999), p.419-425 (ревматоидный артрит); Clinical & Experimental Immunology, 117 (2) (1999), p.237-243 (атопический дерматит); International Journal of Immunopharmacology, 20 (11) (1998), p.661-7 (псориаз); Journal of Allergy & Clinical Immunology, 100 (6, Pt 2) (1997), p.S52-5 (астма), и Journal of Immunology, 159 (6) (1997), p.2962-72 (аллергические заболевания).
При анализах по определению ингибирования связывания RANTES соединения, соответствующие настоящему изобретению, обладают активностью в диапазоне значений Ki от 0,1 до 2000 нМ, а предпочтительные соединения обладают активностью в диапазоне от 0,1 до 1000, более предпочтительные от 0,1 до 500 нМ, а наиболее предпочтительные от 0,1 до 100 нМ. Результаты для предпочтительных и репрезентативных соединений формул I и II, полученные при исследованиях по определению ингибирования связывания RANTES, представлены в приведенной ниже таблице 12.
Таблица 12
| Пример № | Ki (нМ), ингибирование связывания RANTES |
| 1В | 14 |
| 1J | 1 |
| 2 | 9,6 |
| 2G | 1,8 |
| 2S | 17,9 |
| 2JJ | 0,58 |
| 4В | 0,5 |
| 4С | 0,5 |
| 5L | 7,9 |
| 5N | 1,7 |
| 5O | 0,4 |
| 5Z | 0,3 |
| 5АВ | 0,1 |
| 6V | 0,8 |
| 7U | 62,5 |
| 9D | 588 |
Для приготовления фармацевтических композиций, включающих соединения-антагонисты CCR5, соответствующие настоящему изобретению, используемые инертные, приемлемые с фармацевтической точки зрения носители могут быть твердыми или жидкими. К твердым формам препаратов относятся порошки, таблетки, диспергируемые гранулы, капсулы, облатки и суппозитории. Порошки и таблетки могут включать от примерно 5 до примерно 95% активного компонента. Подходящими твердыми носителями, известными в данной области техники, являются, например, карбонат магния, стеарат магния, тальк, сахар и лактоза. Таблетки, порошки, облатки и капсулы можно использовать в виде твердых дозировочных форм, пригодных для перорального приема. Примеры фармацевтически приемлемых носителей и способов изготовления различных композиций приведены в работе A. Gennaro (ed.), Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Edition (1990), Mack Publishing Co., Easton, Pennsylvania.
К жидким формам препаратов относятся растворы, суспензии и эмульсии. В качестве примеров можно привести водные и водно-пропиленгликолевые растворы для парентеральных инъекций или прибавление подсластителей и замутнителей в растворы, суспензии и эмульсии, предназначенные для перорального приема. К жидким формам препаратов также могут относиться растворы для интраназального введения.
Аэрозольные препараты, пригодные для ингаляции, могут представлять собой растворы и твердые вещества в порошкообразной форме, которые могут сочетаться с фармацевтически приемлемыми носителями, такими как сжатый инертный газ, например азот.
Также включены твердые формы препаратов, которые предназначены для проводимого непосредственно перед употреблением превращения в жидкие формы препаратов, предназначенные для перорального или парентерального введения. К таким жидким формам относятся растворы, суспензии и эмульсии.
Соединения-антагонисты CCR5, соответствующие настоящему изобретению, также могут вводиться трансдермально. Трансдермальные композиции могут представлять собой кремы, лосьоны, аэрозоли и/или эмульсии и могут включаться в предназначенные для трансдермального введения пластыри матричного и резервуарного типа, которые принято использовать для этой цели в данной области техники.
Предпочтительно вводить соединения перорально.
Предпочтительно, чтобы фармацевтический препарат представлял собой разовую дозировочную форму. В такой форме препарат можно разделить на подходящие разовые дозы, содержащие соответствующие количества активного компонента, например, в количестве, эффективном для достижения необходимой цели.
Количество активного компонента в разовой дозе препарата может меняться или подбираться в диапазоне от примерно 10 до примерно 500 мг, предпочтительно от примерно 25 до примерно 300 мг, более предпочтительно от примерно 50 до примерно 250 мг, а наиболее предпочтительно от примерно 55 до примерно 200 мг в соответствии с конкретным случаем применения.
Реальная применяющаяся дозировка соединений-антагонистов CCR5 может меняться в зависимости от потребности пациента и тяжести патологического состояния, подвергающегося лечению. Определение необходимого дозировочного режима в конкретном случае делает специалист в данной области техники. Для удобства полную суточную дозу можно разделить и в соответствии с необходимостью принимать отдельными порциями в течение суток.
Количество и частота приема соединений-антагонистов CCR5, соответствующих настоящему изобретению, и/или их приемлемых с фармацевтической точки зрения солей определяется решением лечащего врача, учитывающего такие факторы, как возраст, состояние и массу пациента, а также тяжесть подвергающегося лечению патологического состояния. Типичный рекомендованный суточный дозировочный режим при пероральном приеме может меняться от примерно 100 до примерно 300 мг/сут, предпочтительно от примерно 150 до примерно 250 мг/сут, а более предпочтительно примерно 200 мг/сут, назначаемых в виде двух - четырех разделенных доз.
Дозы и дозировочные режимы приема НИОТ, ННИОТ, ИП и других препаратов, используемых в комбинациях с антагонистами CCR5, должен определять лечащий врач с учетом доз и дозировочных режимов, указанных на листке-вкладыше или в соответствии с указаниями в описании препаратов с учетом возраста, пола и состояния пациента и тяжести инфицирования с помощью ВИЧ-1.
Задачей ВИЧ-1-терапии, соответствующей настоящему изобретению, является снижение вирусной нагрузки ВИЧ-1-РНК ниже предела обнаружения. В настоящем изобретении "предел обнаружения ВИЧ-1-РНК" означает, что имеется от менее примерно 200 до менее примерно 50 копий ВИЧ-1-РНК в 1 мл плазмы пациента при количественном определении с использованием реакции синтеза цепи с помощью полициклической обратной транскриптазы. В настоящем изобретении предпочтительно определять ВИЧ-1-РНК с помощью методики Amplicor-1 Monitor 1.5 (компании Roche Diagnostics) или Nuclisens HIV-1 QT-1.
Хотя настоящее изобретение описано с помощью представленных выше конкретных вариантов, специалисту в данной области техники должны быть понятны их многочисленные альтернативы, модификации и вариации. Предполагается, что все такие альтернативы, модификации и вариации соответствуют объему и сущности настоящего изобретения.
Исследования in vivo
Антивирусная активность соединения примера 5К исследовалась на мышах, страдающих серьезным комбинированным иммунодефицитом. За 20 дней до инокуляции вирусом HIV-1 мышам прививали в оболочку левой почки человеческий тимус плода и печень одного и того же донора. Каждый имплантат включает 2000 TCID50 (доза, вызывающая инфекцию у 50% препаратов ткани) изолята R5 HIV-1 Ba-L. За день до непосредственной инокуляции каждого имплантата начинали давать исследуемое соединение в дозах 3, 10 и 30 мг/кг два раза в день с помощью желудочного зонда. Через 28 дней после инокуляции имплантаты собирали для определения связанного с клеткой антигена р24, вирусной РНК и уровня экспрессии МНС класса I на незрелых тимоцитах (CD4+, CD8+). Результаты опыта представлены на чертеже, на котором звездочка * означает р<0,050 по сравнению с контрольными мышами (при помощи u-теста по Манн-Витней (Mann-Whitney)). Сравнение представленных данных свидетельствует о том, что исследуемое соединение проявляет зависящую от дозы антивирусную активность. Так, например, при дозе 30 мг/кг в день в имплантатах семи мышей не обнаруживалось антигена р24 и уровень вирусной РНК был уменьшен на 3,6 log10 по сравнению с контрольными животными. Так как инфекция вирусом HIV может привести к увеличению экспрессии класса I на незрелых тимоцитах, определялся еще уровень HLA-ABC в обработанных и контрольных имплантатах с помощью моноклонального антитела W6/32 с применением клеточного сортера с возбуждением флуоресценции. Как показано на чертеже, экспрессия МНС класса I на имплантатах мышей, которым давали исследуемое соединение, снижалась в зависимости от его дозы по сравнению с контрольными мышами, что свидетельствует о ингибировании исследуемым соединением вирусной репликации.
Если применять соединение примера 5К в комбинации с известными антивирусными агентами: сидовудин, ламивудин, эфавиренц, индинавир, АОП-Рантес и Т-20, то антивирусная активность комбинации превышает сумму антивирусной активности двух отдельно применяемых активных веществ по меньшей мере на 15%.
1. Производные пиперидина общей формулы (II)
или их фармацевтически приемлемые соли, где Xa означает -C(R13)2-, -C(R13)(R19)-, -C(O)-,
Ra означает R6a-фенил или фенил, замещенный метилсульфонилом, R1 означает водород или C1-С6-алкил,
R2 означает R7-, R8-, R9-фенил; R7-, R8-, R9-замещенный 6-членный гетероарил; R7-, R8-, R9-замещенный 6-членный гетероарил-N-оксид; R10-, R11-замещенный 5-членный гетероарил; нафтил или группу
R3 означает R10- фенил, пиридил, пиримидил, пиразинил или тиазолил,
R4 означает водород, C1-С6-алкил, фтор-С1-С6-алкил, циклопропилметил или -СН2СН2-O-(С1-С6)-алкил,
R5 и R11 означает водород и (С1-С6)-алкил,
R6a означает от 1 до 3 заместителей, выбранных из группы, включающей водород, галоген, -CF3 и CF3О-,
R7 и R8 означают (С1-С6)-алкил, галоген, -NR20R21, -ОН или -O-ацил, R9 означает R7, водород, фенил, -CH2F, -CHF2, пиридил, пиридил-N-оксид,
-N(R20)CONR21R22, -NHCO2-(С1-С6)-алкил, С3-С10-циклоалкил, -SR23
или -CO2R20,
R10 означает (С1-С6)-алкил, -NH2 или R12-фенил,
R12 означает водород, (С1-С6)-алкил или 3 атома галогена,
R13, R14, R15 и R16 означают водород или (С1-С6)-алкил,
R17, R18 вместе с атомом углерода, к которому они присоединены,
образуют спирановое кольцо, содержащее от 3 до 6 атомов углерода,
R19 означает R6-фенил, где R6 означает R6a или метилсульфонил,
R20, R21 и R22 означают водород или C1-С6-алкил,
R23 означает С1-С6-алкил,
при условии, что если Rа означает фенил, замещенный метилсульфонилом, то Xa может означать только группу
2. Производные пиперидина по п.1, у которых Ra означает
3. Производные пиперидина по п.1, у которых Xa означает -CHOR3, -C(R13)(R19) или -C(=NOR4)-.
4. Производные пиперидина по п.3, у которых R3 означает пиридил, R4 означает (С1-С6)-алкил, R13 означает водород и R19 означает R6a-фенил или фенил, замещенный метилсульфонилом.
5. Производные пиперидина по п.1, у которых R2 означает R7-, R8-, R9-фенил; R7-, R8-, R9-пиридил или его N-оксид, или R7-, R8-, R9-пиримидил.
6. Производные пиперидина по п.5, у которых R2 выбран из группы, включающей
где R7 и R8 означают (С1-С6)-алкил, галоген или -NH2 и R9 означает водород.
7. Производные пиперидина по п.1, выбранные из группы, включающей соединения формулы
где R6a, Xa и R2 имеют указанные в следующей таблице значения:
| F |  |  |
| F |  |  |
| Cl |  |  |
| F | | |
| Br |  |  |
| Br | | |
| Br | | |
| Br |  | |
| F3C- | | |
| F3C- |  |  |
| F3C- | |  |
| F | |  |
| Br |  |  |
| Br |  | |
| Br |  | |
| Br |  | |
| Br | | |
| F3CO- | | |
| F3CO- |  | |
| F3CO- |  | |
| F3CO- |  |  |
| F3CO- | |  |
| F3CO- |  | |
| Cl | | |
| Cl | | |
| Cl | | |
| Cl | | |
| F3CO- | |  |
| Br |  |  |
| Br |  | |
| Br |  |  |
| Br | |  |
| Br |  |  |
| Br |  | |
| Br | | |
| Br |  |  |
| Br | | |
| Br | | |
| Br | | |
| Br | | |
| Br | |  |
| Br | | |
| Br |  | |
| Br | | |
| Br | |  |
| Br |  | |
| Br | | |
| Br | | |
| Br | |  |
| Br |  | |
| Br |  | |
| Br | | |
| Br | |  |
| Br | |  |
| Br |  |  |
| Br | |  |
| Br |  | |
| Br |  | |
| Br |  |  |
| Br | |  |
| Br | |  |
| Br | |  |
| F3C- | | |
| Br | |  |
| Br | |  |
| Br | |  |
| Br | |  |
| Br | |  |
| Br | |  |
| Br | |  |
| Br |  |  |
| Br | |  |
| F3CO- |  |  |
| F3CO- |  | |
| Br |  |  |
| Br | |  |
| Br | |  |
| Br |  | |
| Br | |  |
| Br |  | |
| F3CO- |  | |
| F3CO- | |  |
| F3CO |  |  |
| F3CO | |  |
| F3CO | |  |
| F3CO | |  |
| Cl | |  |
| Cl |  | |
| F3C- | |  |
| Cl | | |
| Cl | | |
| Cl | | |
| F3C- | | |
| Cl | |  |
| F3C- | | |
| F3C- | | |
| Cl | |  |
| Cl | |  |
| F3CO- | |  |
| F3CO- | |  |
| F3CO- | |  |
| F3CO | | |
| F3C- | | |
| F3CO- | | |
| F3C- |  | |
| F3C- |  | |
| F3C- | | |
| F3CO- | | |
| F3C | |  |
| F3C | | |
| F3CO | | |
| F3CO | | |
| F3CO | | |
| F3C- | | |
| F3CO | |  |
| F3CO | |  |
| F3C | | |
| F3C | | |
| F3CO | | |
| F3CO |  | |
| F3CO | | |
| F3CO | | |
| F3CO | | |
| F3CO | | |
| F3CO | | |
| F3CO | | |
| F3CO | | |
| F3CO | |  |
| F3CO | | |
| F3CO |  | |
| F3CO | | |
| F3CO | | |
| Br | | |
| F3C- | | |
| Br | -CH2- |  |
| Br | -CH2- |  |
| Br | -CH2- |  |
| Br | -CH2- |  |
| Br | -CH2- |  |
| Br | -CH2- |  |
| Br |  | |
| CH3SO2- | |  |
| Br |  | |
| Br |  | |
| F |  | |
| F | | |
| F | | |
| Br |  | |
| Cl |  | |
| F3C- | |  |
| CH3SO2- | | |
| CH3SO2- |  | |
| F3CO- | | |
| F3CO- | | |
| CH3SO2- |  | |
| CH3SO2- |  | |
| F3C- | | |
| F3CO- |  | |
| F3CO- | | |
| F3C- |  | |
| H |  | | |
| F3CO- | | | |
| F3CO- |  | | |
| F3CO- | | | Энантиомер II |
| F3CO- | |  | Энантиомер II |
| F3CO- | |  | Энантиомер II |
8. Производные пиперидина по п.1, выбранные из группы, включающей соединения формул
9. Производное пиперидина по п.1, представляющее собой
10. Фармацевтическая композиция, обладающая свойствами антагониста CCR5 и содержащая в качестве активного вещества эффективное количество соединения по п.1 или его фармацевтически приемлемую соль в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем.
11. Фармацевтическая композиция по п.10, отличающаяся тем, что в качестве активного вещества содержит соединение формулы
12. Фармацевтическая композиция по п.10, представляющая собой мазь.
13. Фармацевтическая композиция по п.11, представляющая собой мазь.
14. Набор, содержащий в отдельных контейнерах в разовых упаковках фармацевтические композиции, предназначенные для совместного использования при лечении ВИЧ-инфекции, который в одном контейнере содержит фармацевтическую композицию, включающую эффективное количество антагониста CCR5 по п.1 в фармацевтически приемлемом носителе, а в других контейнерах одну или более фармацевтических композиций, включающих эффективное количество антивирусного или другого агента, используемого для лечения ВИЧ-инфекции, в фармацевтически приемлемом носителе.
15. Способ лечения инфекции вирусом HIV путем введения млекопитающему, нуждающемуся в таком лечении, соединения по п.1 или его фармацевтически приемлемой соли в эффективном количестве.
