4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция



4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция
4-пиримидинил-n-ацил-l-фенилаланины и фармацевтическая композиция

Владельцы патента RU 2266901:

Ф.ХОФФМАНН-ЛЯ РОШ АГ (CH)

Изобретение относится к новым 4-пиримидинил-N-ацил-L-фенилаланинам формулы I, или их фармацевтически приемлемым солям, обладающим свойствами ингибировать связывание VCAM-1 с интегрином VLA-4 (α4β1), или с экспрессирующими VLA-4 клетками, и пригодным для получения лекарственных средств для лечения, например, ревматоидного артрита, рассеянного склероза, воспаления кишечника и астмы. В соединении формулы I

где R1 означает группу формулы Y-1

где R22 и R23 независимо означают водород, низший алкил, низший алкокси, галоген или перфтор-низший алкил, и по меньшей мере один из R22 и R23 не означает водород; a R24 означает водород, низший алкил, низший алкокси; или R1 означает группу формулы Y-3, которая означает 3-7-членный цикл формулы

где R25 означает группу формулы R26-(CH2)e-, где R26 означает низший алкокси; Q означает -(CH2)fN(R27)-, -(CH2)f-,R27 означает Н или низший алкоксикарбонил, и атомы углерода в цикле являются незамещенными, е означает целое число от 1 до 4, а f означает целое число от 1 до 3; R2 означает водород или низший алкил; R3 означает водород или низший алкил; R4 означает водород, низший алкил, галоидзамещенный низший алкил; R5 означает водород или низший алкил; R6 означает водород, низший алкил, низший алкилкарбонилокси-низший алкил, или R6 означает группу формулы Р-3

где R32 означает водород; R33 означает низший алкил; R34 означает низший алкил; где R32 означает водород; R33 означает низший алкил; R34 означает низший алкил; h означает целое число от 0 до 2; g означает целое число от 0 до 2; сумма h и g равна числу от 1 до 3; или R6 означает группу формулы Р-4

где R32, g и h, имеют значения, указанные выше; Q' означает О. Изобретение также относится к фармацевтическим композициям. 2 н. и 35 з.п. ф-лы, 3 табл.

 

Белок-1 адгезии клеток сосудов (VCAM-1), член суперсемейства иммуноглобулинов (Ig), экспрессируется активированным, но не покоящимся эндотелием. Главным рецептором VCAM-1 является интегрин VLA-4 (α4β1), который экспрессируется многими типами клеток, включая циркулирующие лимфоциты, эозинофилы, базофилы и моноциты, но не нейтрофилы. Антитела к VCAM-1 или VLA-4 могут блокировать адгезию этих одноядерных лейкоцитов, а также клеток меланомы на активированном эндотелии in vitro. На ряде моделей воспалительного процесса у животных антитела к любому из этих белков ингибировали инфильтрацию лейкоцитов и предотвращали повреждение тканей. Установлено, что моноклональные антитела к VLA-4 блокируют эмиграцию Т-клеток при артрите, индуцированном адъювантом, предотвращая накопление эозинофилов и сужение бронхов на модели астмы, снижают паралич и ингибируют инфильтрацию моноцитов и лимфоцитов при экспериментальном аутоиммунном энцефалите (ЭАЭ). Установлено, что моноклональные антитела к VCAM-1 пролонгируют время выживания сердечных аллотрансплантатов. Недавние исследования показали, что моноклональные антитела к VLA-4 могут предупреждать инсульт и диабет у мышей с моделью диабета без ожирения и значительно ослаблять воспаление на модели колита у одного из видов тамарина (cotton-top tamarin). Кроме того, установлено, что VCAM экспрессируется эндотелиальными клетками воспаленной толстой кишки на модели воспаления кишечника у крыс с генотипом TNB/этанол (Gastroenterology, 116, 874-883 (1999)).

Таким образом, соединения, ингибирующие взаимодействие α4-интегринов с VCAM-1, могут применяться в качестве терапевтических агентов для лечения хронических воспалительных заболеваний, таких как ревматоидный артрит (РА), рассеянный склероз (PC), астма, воспалительные заболевания кишечника (ВЗК). Этим действием обладают соединения по настоящему изобретению.

Если не указано иное, термин "галоген", используемый в описании изобретения, означает любой из четырех галогенов, бром, хлор, фтор и иод. Предпочтительными галогенами являются бром, фтор и хлор.

Термин "(низш.)алкил", применяемый отдельно или в различных сочетаниях, означает прямую или разветвленную алкильную группу, содержащую от одного до шести атомов углерода, такую как метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, втор-бутил, изобутил, трет-бутил, н-пентил, н-гексил и т.п.

Термин "замещенный (низш.)алкил" означает группу (низш.)алкил, имеющую значения, указанные выше, замещенную одной или более группами, независимо выбранными из группы, включающей циклоалкил, нитро, арилокси, арил, гидрокси, галоген, циано, (низш.)алкокси, (низш.)алканоил, (низш.)алкилтио, (низш.)алкилсульфинил, (низш.)алкилсульфонил, амино и моно- или ди(низш.)алкиламино. Примеры замещенных групп (низш.)алкил включают 2-гидроксиэтил, 3-оксобутил, цианометил и 2-нитропропил.

Термин "перфтор(низш.)алкил" в радикалах R4, R22 или R23 означает группу замещенный (низш.)алкил, имеющую значения, указанные выше, которая является метильной или этильной группой, в которой все атомы водорода замещены на атом фтора, т.е. трифторметил и пентафторэтил.

Термин "(низш.)алкенил" означает группу алкилен, содержащую от 2 до 10 атомов углерода и имеющую двойную связь между двумя соседними атомами углерода.

Термин "циклоалкил" означает незамещенный или замещенный 3-7-членный углеродный цикл. Заместителями, используемыми по настоящему изобретению, являются гидрокси, галоген, циано, (низш.)алкокси, (низш.)алканоил, (низш.)алкил, ароил, (низш.)алкилтио, (низш.)алкилсульфинил, (низш.)алкилсульфонил, арил, гетероарил и замещенный амино.

Термин "(низш.)алкокси" означает прямую или разветвленную алкоксигруппу, содержащую максимум до шести атомов углерода, такую как метокси, этокси, н-пропокси, изопропокси, н-бутокси, трет-бутокси и т.п.

Термин "(низш.)алкилтио" означает группу (низш.)алкил, связанную с остатком молекулы через двухвалентный атом серы, например метилмеркапто или изопропилмеркаптогруппу. Термин "(низш.)алкилсульфинил" означает группу (низш.)алкил, имеющую значения, указанные выше, связанную с остатком молекулы через атом серы сульфинильной группы. Термин "(низш.)алкилсульфонил" означает группу (низш.)алкил, имеющую значения, указанные выше, связанную с остатком молекулы через атом серы сульфонильной группы.

Термин "арил" означает моно- или бициклическую ароматическую группу, такую как фенил или нафтил, не замещенную или замещенную обычными заместителями. Предпочтительными заместителями являются (низш.)алкил, (низш.)алкокси, гидрокси(низш.)алкил, гидрокси, гидроксиалкокси, галоген, (низш.)алкилтио, (низш.)алкилсульфинил, (низш.)алкилсульфонил, циано, нитро, перфторалкил, алканоил, ароил, арил, алкинил, (низш.)алкинил и (низш.)алканоиламино. Примерами арильных групп, которые могут использоваться по изобретению, являются фенил, пара-толил, пара-метоксифенил, пара-хлорфенил, мета-гидроксифенил, мета-метилтиофенил, 2-метил-5-нитрофенил, 2,6-дихлорфенил, 1-нафтил и т.п.

Термин "арилалкил" означает группу (низш.)алкил, имеющую значения, указанные выше, в которой один или более атомов водорода замещены группой арил или гетероарил, имеющей значения, указанные выше. По изобретению может быть использована любая из обычных аралкильных групп, такая как бензил и т.п.

Термин "гетероарил" означает незамещенное или замещенное 5- или 6-членное моноциклическое гетероароматическое кольцо или 9- или 10-членное бициклическое гетероароматическое кольцо, содержащее 1, 2, 3 или 4 гетероатома, которые независимо означают N, S или О. Примерами гетероарильных циклов являются пиридин, бензимидазол, индол, имидазол, тиофен, изохинолин, хинолин и т.п. В определение гетероарила включены заместители, указанные выше в определении группы "арил".

Термин "(низш.)алкоксикарбонил" означает (низш.)алкоксигруппу, связанную с остатком молекулы через карбонильную группу. Примеры алкоксикарбонильной группы включают этоксикарбонил и т.п.

Термин "(низш.)алкилкарбонилокси" означает (низш.)алкилкарбонилоксигруппы, связанные с остатком молекулы через атом кислорода, например ацетоксигруппу. Аналогичное значение имеет термин "ацилокси".

Термин "(низш.)алканоил" означает группу (низш.)алкил, связанную с остатком молекулы через карбонильную группу, и включает такие из вышеуказанных групп, как ацетил, пропионил и т.п.

Термин "перфтор(низш.)алканоил" означает группу перфтор(низш.)алкил (замещенную группу (низш.)алкил, в которой все атомы водорода замещены на атом фтора, предпочтительно трифторметил или пентафторэтил), связанную с остатком молекулы через карбонильную группу.

Термин "перфтор(низш.)алканоиламино" означает группу перфтор(низш.)алканоил, связанную с остатком молекулы через аминогруппу.

Термин "(низш.)алкилкарбониламино" означает группу (низш.)алкилкарбонил, связанную с остатком молекулы через атом азота, такую как ацетиламино.

Термин "(низш.)алкиламинокарбонил" означает группу (низш.)алкиламино, связанную с остатком молекулы через карбонильную группу.

Термин "ариламинокарбонил" означает арильные группы, связанные с аминогруппой, присоединенной к остатку молекулы через карбонильную группу.

Термин "ароил" означает моно- или бициклическую арильную или гетероарильную группу, связанную с остатком молекулы через карбонильную группу. Примерами ароильных групп являются бензоил, 3-цианобензоил, 2-нафтоил, никотиноил и т.п.

Фармацевтически приемлемые соли известны в данной области техники и могут быть получены обычными способами с учетом химических свойств соединения. Примерами фармацевтически приемлемых солей кислотных соединений являются соли щелочных и щелочно-земельных металлов, таких как натрий, калий, кальций, магний, а также соли с основными аминами или основными аминокислотами, соли аммония или алкиламмония. Для соединений по изобретению, например для кислот, у которых R6, означает H, прежде всего предпочтительны соли натрия. Натриевую соль любой кислоты по настоящему изобретению получают при ее взаимодействии с гидроксидом натрия. Для основных соединений примерами солей являются соли неорганических или органических кислот, таких как хлористоводородная, бромистоводородная, серная, азотная, фосфорная, лимонная, муравьиная, фумаровая, малеиновая, уксусная, янтарная, винная, метансульфоновая и пара-толуолсульфоновая кислоты.

Первый вариант воплощения настоящего изобретения относится к соединению формулы I

и его фармацевтически приемлемым солям. По изобретению R1 означает группу Y-1, Y-2 или Y-3, имеющую значения, описанные ниже:

R1 означает Y-1, группу формулы

где

R22 и R23 независимо означают водород, (низш.)алкил, (низш.)алкокси, циклоалкил, арил, арилалкил, нитро, циано, (низш.)алкилтио, (низш.)алкилсульфинил, (низш.)алкилсульфонил, (низш.)алканоил, галоген или перфтор(низш.)алкил, и по меньшей мере один из R22 и R23 не означает водород; R24 означает водород, (низш.)алкил, (низш.)алкокси, арил, нитро, циано, (низш.)алкилсульфонил или галоген,

R1 означает Y-2, пяти- или шестичленный гетероароматический цикл, связанный через атом углерода с амидокарбонильной группой, причем вышеупомянутый цикл содержит один, два или три гетероатома, выбранные из группы, включающей N, О и S, и один или два атома вышеупомянутого цикла независимо замещены группами (низш.)алкил, циклоалкил, галоген, циано, перфторалкил или арил, и по меньшей мере, один из вышеупомянутых замещенных атомов является соседним с атомом углерода, связанным с амидокарбонилом,

R1 означает Y-3, 3-7-членный цикл формулы

где

R25 означает (низш.)алкил, незамещенный или фторзамещенный (низш.)алкенил, или группу формулы R26-(CH2)e-, где R26 означает арил, гетероарил, азидо, циано, гидрокси, (низш.)алкокси, (низш.)алкоксикарбонил, (низш.)алканоил, (низш.)алкилтио, (низш.)алкилсульфонил, (низш.)алкилсульфинил, перфтор(низш.)алканоил, нитро, или R26 означает группу формулы -NR28R29, где R28 означает водород или (низш.)алкил, R29 означает водород, (низш.)алкил, (низш.)алкоксикарбонил, (низш.)алканоил, ароил, перфтор(низш.)алканоиламино, (низш.)алкилсульфонил, (низш.)алкиламинокарбонил, ариламинокарбонил, или R28 и R29 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют 4, 5 или 6-членное насыщенное гетероциклическое кольцо, необязательно содержащее один дополнительный гетероатом, выбранный из О, S, и N-R40, Q означает -(CH2)fO-. -(CH2)fS-, -(CH2)fN(R27)-. -(CH2)f-, R27 означает H, (низш.)алкил, арил, (низш.)алканоил, ароил или (низш.)алкоксикарбонил, R40 означает H, (низш.)алкил, арил, (низш.)алканоил, ароил или (низш.)алкоксикарбонил, атомы углерода в цикле являются незамещенными или замещенными (низш.)алкилом или галогеном, е означает целое число от 0 до 4, a f означает целое число от 0 до 3;

R2 означает водород или (низш.)алкил, замещенный группой (низш.)алкил, арилалкил или арил;

R3 означает водород или (низш.)алкил, замещенный (низш.)алкил, арилалкил или арил;

R4 означает водород, галоген, (низш.)алкил, замещенный (низш.)алкил (такой как перфтор(низш.)алкил) или арил;

R5 означает водород, (низш.)алкил, хлор или (низш.)алкокси;

R6 означает водород, (низш.)алкил, (низш.)алкилкарбонилокси(низш.)алкил, замещенный(низш.)алкил, или R6 означает группу формулы Р-3

где R32 означает водород или (низш.)алкил, R33 означает водород, (низш.)алкил, арил, R34 означает водород или (низш.)алкил, h означает целое число от 0 до 2, g означает целое число от 0 до 2, сумма h и g равна от 1 до 3; или R6 означает группу формулы Р-4

где R32, g, и h имеют значения, указанные выше, Q' означает О, S, -(CH2)j-, или группу формулы N-R35, где R35 означает водород, (низш.)алкил, (низш.)алканоил, (низш.)алкоксикарбонил, j означает 0, 1 или 2.

Соединения по изобретению могут существовать в виде стереоизомеров и диастереомеров, каждый из которых включен в объем настоящего изобретения. Каждое из соединений, упомянутое в различных выше- и нижеописанных вариантах воплощения изобретения, также рассматривается в форме его фармацевтически приемлемой соли.

В первом конкретном варианте соединений формулы I

R2 означает водород, (низш.)алкил, замещенный (низш.)алкил, арилалкил или арил;

R3 означает водород, (низш.)алкил, замещенный (низш.)алкил, арилалкил или арил;

R4 означает водород, (низш.)алкил, перфтор(низш.)алкил или арил.

Во втором конкретном варианте соединений формулы I

R2 означает водород, (низш.)алкил, замещенный (низш.)алкил или арил;

R3 означает водород, (низш.)алкил, замещенный (низш.)алкил или арил;

R4 означает водород, галоген, (низш.)алкил, замещенный (низш.)алкил или арил.

В третьем конкретном варианте соединений формулы I и в первом и втором конкретных вариантах, описанных выше, предпочтительно в первом конкретном варианте,

R2 означает водород, (низш.)алкил, замещенный (низш.)алкил или арил;

R3 означает водород, (низш.)алкил, замещенный (низш.)алкил или арил;

R4 означает водород, (низш.)алкил, перфтор(низш.)алкил или арил.

В предпочтительном варианте соединений формулы I и его трех конкретных вариантах, описанных выше, предпочтительно в третьем варианте R4 означает водород, (низш.)алкил или перфтор(ннзш.)алкил.

В более предпочтительном варианте соединений формулы I и его трех конкретных вариантах, прежде всего в первом варианте, R1 означает группу формулы Y-1, имеющую значения, указанные для формулы I, R22 и R23 независимо означают (низш.)алкил или галоген, и R24 означает водород. В другом более предпочтительном варианте R1 означает группу формулы Y-1, имеющую значения, указанные для формулы I, R22 и R23 независимо означают водород или галоген, и R24 означает (низш.)алкокси, предпочтительно метокси.

В другом более предпочтительном варианте формулы I и его конкретных воплощениях R1 означает группу формулы Y-3, имеющую значения, указанные для формулы I, где R25 означает группу формулы Р26-(СН2)е-, где R26 означает (низш.)алкокси, Q означает -(CH2)f-, e означает целое число от 0 до 4, и f означает целое число от 0 до 3, предпочтительно 2.

Другим более предпочтительным вариантом формулы I и его конкретным воплощением является соединение формулы Ib

где R1 имеет значения, указанные для формулы I, R2 означает (низш.)алкил; R3 означает (низш.)алкил; R4 означает водород, перфтор(низш.)алкил или (низш.)алкил; R5 означает водород или (низш.)алкил; и R6 означает водород, (низш.)алкил, предпочтительно метил; (низш.)алкилкарбонилокси(низш.)алкил, предпочтительно 1-(ацетокси)этил, группу формулы Р-3, имеющую значения, указанные для формулы I, или группу формулы Р-4, имеющую значения, указанные для формулы I. В этом более предпочтительном варианте изобретения прежде всего предпочтительно, когда R1 означает группу формулы Y-1, имеющую значения, указанные для формулы I, где R22 и R23 независимо означают перфтор(низш.)алкил, предпочтительно трифторметил; (низш.)алкил, предпочтительно метил, этил, пропил или изопропил; или галоген, предпочтительно фтор, хлор или бром; и R24 означает водород.

Если R1 означает более предпочтительную группу формулы Y-1, имеющую значения, указанные выше, предпочтительно I) R2 и R3 означают (низш.)алкил; R4 означает водород или (низш.)алкил, а R5 и R6 означают водород, или II) R2 и R3 означают (низш.)алкил; R4 означает водород или (низш.)алкил, R5 означает водород, а R6 означает водород, (низш.)алкил или (низш.)алкилкарбонилокси(низш.)алкил, или R6 означает группу формулы Р-3, имеющую значения, указанные для формулы I, или R6 означает группу формулы Р-4, имеющую значения, указанные для формулы I (предпочтительно R35 означает водород), прежде всего, где R6 означает (низш.)алкил; или R6 означает (низш.)алкилкарбонилокси(низш.)алкил; или R6 означает группу формулы Р-3, где R32 означает водород; R33 и R34 означают (низш.)алкил; h равно 1; a g равно 0; или R6 означает группу формулы Р-4, где R32 означает водород; h равно 1; g равно 0; и Q' означает О, или III) R2 и R3 означают (низш.)алкил; R4 означает перфтор(низш.)алкил, а R5 и R6 означают водород, или IV) R2 и R3 означают (низш.)алкил; R4 означает водород; R5 означает (низш.)алкил, а R6 означает водород.

В вышеупомянутом предпочтительном варианте I) конкретные соединения выбирают из группы

N-[(2,6-дихлорфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланин,

N-[(2-бром-6-метилфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланин,

N-[(2-хлор-6-метилфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланин,

N-[(2-этил-6-метилфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-3-пиримидинил-L-фенилаланин,

N-[[2-(2-метилэтил)-6-метилфенил]карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланин,

N-[(2,6-дифторфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланин,

N-[[2-фтор-6-(трифторметил)фенил]карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланин,

N-[[2,6-ди(2-метилэтил)фенил]карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланин,

N-[(2-хлор-6-этилфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланин,

N-[(2-хлор-6-пропилфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланин,

N-[[2-хлор-6-(2-метилэтил)фенил]карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланин,

N-[(2,6-дихлорфенил)карбонил]-4-(1,3-диэтил-6-метил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланин,

N-[(2-хлор-6-метилфенил)карбонил]-4-(1,3-диэтил-6-метил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланин.

Прочие соединения выбирают из группы

N-[(2-хлор-6-метилфенил)карбонил]-4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланин,

N-[(2-бром-6-метилфенил)карбонил]-4-(l,3-диметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланин или

N-[(2-бром-5-метоксифенил)карбонил]-4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил-L-фенилаланин.

В вышеупомянутом варианте II), если R6 означает (низш.)алкил, конкретные соединения выбирают из группы

этиловый эфир N-[(2,6-дихлорфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина,

этиловый эфир N-[(2-хлор-6-метилфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина или

этиловый эфир N-[(2,6-дифторфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина,

если R6 означает (низш.)алкилкарбонилокси(низш.)алкил, соединения выбирают из группы

1-(ацетокси)этиловый эфир N-[(2,6-дихлорфенил)карбонил]-4-(l,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина,

1-(ацетокси)этиловый эфир N-[(2-хлор-6-метилфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина или

1-(ацетокси)этиловый эфир N-[(2,6-дифторфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина,

если R6 означает группу формулы Р-3, соединения выбирают из группы

2-[(N,N-диэтил)амино]этиловый эфир N-[(2,6-дихлорфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина,

2-[(N,N-диэтил)амино]этиловый эфир N-[(2-хлор-6-метилфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина или

2-[(N,N-диэтил)амино]этиловый эфир N-[(2,6-дифторфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина,

если R6 означает группу формулы Р-4, соединения выбирают из группы

2-(4-морфолино)этиловый эфир N-[(2,6-дихлорфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина или

2-(4-морфолино)этиловый эфир N-[(2-хлор-6-метилфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина.

В вышеупомянутом варианте III) конкретные соединения выбирают из группы

N-[1-(2,6-дихлорфенил)карбонил]-4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-6-(трифторметил)-5-пиримидинил)-L-фенилаланин,

N-[(2-хлор-6-метилфенил)карбонил]-4-[1,3-диметил-2,4-диоксо-6-(трифторметил)-5-пиримидинил]-L-фенилаланин или

N-[[2-фтор-6-(трифторметил)фенил]карбонил]-4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-6-(трифторметил)-5-пиримидинил)-L-фенилаланин.

В вышеупомянутом варианте IV) конкретные соединения выбирают из группы

N-[(2-хлор-6-метилфенил)карбонил]-4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-3-метил-L-фенилаланин,

N-[(2,6-дихлорфенил)карбонил]-4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-3-метил-L-фенилаланин или

N-[(2,6-дихлорфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-3-метил-L-фенилаланин.

В соединениях по настоящему изобретению формулы Ib, указанной выше,

где R1 имеет значения, указанные для формулы I, R2 означает (низш.)алкил; R3 означает (низш.)алкил; R4 означает водород, перфтор(низш.)алкил или (низш.)алкил, R5 означает водород или (низш.)алкил; и R6 означает водород, (низш.)алкил, (низш.)алкилкарбонилокси(низш.)алкил, группу формулы Р-3, имеющую значения, указанные для формулы I, или группу формулы Р-4, имеющую значения, указанные для формулы I; кроме того, предпочтительно R1 означает группу формулы Y-3, имеющую значения, указанные для формулы I, где R25 означает группу формулы R26-(CH2)e-, где R26 означает (низш.)алкокси, Q означает -(CH2)f-, е означает целое число от 0 до 4, a f означает целое число от 0 до 3. В таких соединениях R2 и R3 предпочтительно означают (низш.)алкил, R4 означает водород или (низш.)алкил; а R5 и R6 означают водород.

В связи с этим конкретные соединения означают

4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)]-N-[[1-(2-метоксиэтил)циклопентил]карбонил]-L-фенилаланин,

N-[[1-(2-метоксиэтил)циклопентил]карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланин или

4-(1,3-диэтил-6-метил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-N-[[1-(2-метоксиэтил)циклопентил]карбонил]-L-фенилаланин.

В другой предпочтительной группе соединений по настоящему изобретению формулы Ib

где R1 имеет значения, указанные для формулы I, R2 означает (низш.)алкил; R3 означает (низш.)алкил; R4 означает водород, перфтор(низш.)алкил или (низш.)алкил, R5 означает водород или (низш.)алкил; и R6 означает водород, (низш.)алкил, (низш.)алкилкарбонилокси(низш.)алкил, группу формулы Р-3, имеющую значения, указанные для формулы I, или группу формулы Р-4, имеющую значения, указанные для формулы I, R2 и R3 предпочтительно означают (низш.)алкил; а R4, R5 и R6 означают водород, R1 прежде всего означает группу формулы Y-1, имеющую значения, указанные для формулы I, где R22 и R23 независимо предпочтительно означают (низш.)алкил или галоген; a R24 означает водород, или R22 и R23 независимо означают водород или галоген; и R24 означает (низш.)алкокси.

В соединении, упомянутом в предыдущем абзаце, где R2 и R3 означают (низш.)алкил; а R4, R5 и R6 означают водород, предпочтительно R1 также означает пяти- или шестичленный гетероароматический цикл, связанный через атом углерода с группой амидокарбонил, причем вышеупомянутый цикл содержит один, два или три гетероатома, выбранные из группы, включающей N, О и S, а один или два атома в вышеупомянутом цикле независимо замещены группой (низш.)алкил, циклоалкил, галоген, циано, перфторалкил или арил, и по меньшей мере один из вышеупомянутых замещенных атомов является соседним с атомом углерода, связанным с группой амидокарбонил.

В соединении, упомянутом в предпоследнем абзаце, где R2 и R3 означают (низш.)алкил; а R4, R5 и R6 означают водород, предпочтительно R1 также означает группу формулы Y-3, имеющую значения, указанные для формулы I, где R25 предпочтительно означает группу формулы R26-(CH2)e-, где R26 означает (низш.)алкокси, Q означает -(CH2)f-, e означает целое число от 0 до 4, a f означает целое число от 0 до 3, предпочтительно 2.

Другим вариантом воплощения изобретения являются соединения формулы I,

где R2 означает водород, (низш.)алкил, замещенный (низш.)алкил или арил;

R3 означает водород, (низш.)алкил, замещенный (низш.)алкил или арил;

и

R4 означает водород, галоген, (низш.)алкил, замещенный (низш.)алкил или арил;

т.е. согласно второму конкретному варианту воплощения изобретения

R1 означает Y-1, где R22 и R23 имеют значения, указанные для формулы I. Предпочтительно R22 и R23 независимо означают (низш.)алкил или галоген; a R24 означает водород, или R22 и R23 независимо означают водород или галоген; a R24 означает (низш.)алкокси.

В другом варианте второго конкретного варианта

R1 означает Y-2. В еще одном варианте второго конкретного варианта

R1 означает Y-3, прежде всего, где R25 означает группу формулы R26-(СН2)е-, R26 означает (низш.)алкокси, Q означает -(CH2)f-, e означает целое число от 0 до 4, а f означает целое число от 0 до 3, предпочтительно 2.

В более специальном варианте второго конкретного варианта

R2 означает (низш.)алкил;

R3 означает (низш.)алкил;

R4 означает водород, (низш.)алкил или галоген;

R5 означает водород и R6 означает водород.

В этом более специальном варианте изобретения предпочтительны те соединения, у которых R4 означает водород. В этом предпочтительном варианте R1 означает Y-1, имеющую значения, указанные для формулы I, прежде всего, где R22 и R23 независимо означают (низш.)алкил или галоген; а R24 означает водород, или где R22 и R23 независимо означают водород или галоген; a R24 означает (низш.)алкокси. В этом предпочтительном варианте R1 также необязательно означает группу Y-2, имеющую значения, указанные для формулы I, или R1 необязательно также означает Y-3, имеющую значения, указанные для формулы I, причем R25 в Y-3 означает группу формулы R26-(CH2)e-, где R26 означает (низш.)алкокси, Q означает -(СН2)f-, е равно целому числу от 0 до 4, a f означает целое число от 0 до 3, предпочтительно 2.

Кроме того, предпочтительным по настоящему изобретению является соединение формулы I

где R1 означает группу формулы Y-1

где R22 и R23 независимо означают водород, (низш.)алкил, (низш.)алкокси, циклоалкил, арил, арилалкил, нитро, циано, (низш.)алкилтио, (низш.)алкилсульфинил, (низш.)алкилсульфонил, (низш.)алканоил, галоген или перфтор(низш.)алкил, и по меньшей мере один из R22 и R23 не означает водород; a R24 означает водород, (низш.)алкил, (низш.)алкокси, арил, нитро, циано, (низш.)алкилсульфонил или галоген; R2 означает (низш.)алкил; R3 означает (низш.)алкил; R4 означает водород или (низш.)алкил; R5 означает водород; и R6 означает водород.

Среди вышеописанных соединений по настоящему изобретению более предпотичельно вышеописанное соединение формулы I, где R1 означает группу формулы Y-1,

где R22 и R23 независимо означают водород, (низш.)алкил или галоген, R24 означает водород или (низш.)алкокси; R2 означает (низш.)алкил; R3 означает (низш.)алкил; R4 означает водород или (низш.)алкил; R5 означает водород; и R6 означает (низш.)алкил, (низш.)алкилкарбонилокси(низш.)алкил или предпочтительно водород.

Другим предпочтительным вариантом воплощения настоящего изобретения является вышеописанное соединение формулы I, где R6 означает пяти- или шестичленный гетероароматический цикл, связанный через атом углерода с амидокарбонилом, причем вышеупомянутый цикл содержит один, два или три гетероатома, выбранные из группы, включающей N, О и S, а один или два атома в вышеупомянутом цикле независимо замещены группой (низш.)алкил, циклоалкил, галоген, циано, перфторалкил или арил, или по меньшей мере один из вышеупомянутых замещенных атомов является соседним с атомом углерода, связанным с амидокарбонилом; R2 означает (низш.)алкил; R3 означает (низш.)алкил; R4 означает водород, перфтор(низш.)алкил или (низш.)алкил; R5 означает водород; и R6 означает водород.

Другим предпочтительным вариантом воплощения настоящего изобретения является вышеописанное соединение формулы I, где R1 означает группу формулы Y-3, которая представляет собой 3-7-членный цикл формулы

где R25 означает (низш.)алкил, незамещенный или фторзамещенный (низш.)алкенил, или группу формулы R26-(CH2)e-, где R26 означает арил, гетероарил, азидо, циано, гидрокси, (низш.)алкокси, (низш.)алкоксикарбонил, (низш.)алканоил, (низш.)алкилтио, (низш.)алкилсульфонил, (низш.)алкилсульфинил, перфтор(низш.)алканоил, нитро, или R26 означает группу формулы -NR28R29, где R28 означает водород или (низш.)алкил, R29 означает водород, (низш.)алкил, (низш.)алкоксикарбонил, (низш.)алканоил, ароил, перфтор(низш.)алканоиламино, (низш.)алкилсульфонил, (низш.)алкиламинокарбонил, ариламинокарбонил; или R28 и R29 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют 4-, 5- или 6-членное насыщенное гетероциклическое кольцо, необязательно содержащее один дополнительный гетероатом, выбранный из О, S и N-R40, Q означает -(CH2)fО-, -(CH2)fS-, -(CH2)fN(R27)-, -(CH2)f-, R27 означает Н, (низш.)алкил, арил, (низш.)алканоил, ароил или (низш.)алкоксикарбонил, R40 означает Н, (низш.)алкил, арил, (низш.)алканоил, ароил или (низш.)алкоксикарбонил, атомы углерода в цикле являются незамещенными или замещенными (низш.)алкилом или галогеном, е означает целое число от 0 до 4, и f означает целое число от 0 до 3; R2 означает (низш.)алкил; R3 означает (низш.)алкил; R4 означает водород, перфтор(низш.)алкил или (низш.)алкил; R5 означает водород;и R6 означает водород.

Более предпочтительным вариантом воплощения настоящего изобретения является вышеописанное соединение формулы I, где R1 означает группу формулы Y-3, которая представляет собой 3-7-членный цикл формулы

где R25 означает группу формулы R26-(CH2)e-, где R26 означает (низш.)алкокси,

Q означает -(CH2)f-, е означает целое число от 0 до 4, и f означает целое число от 0 до 3; R2 означает (низш.)алкил; R3 означает (низш.)алкил; R4 означает водород, перфтор(низш.)алкил или (низш.)алкил; R5 означает водород; и R6 означает водород.

Другой аспект настоящего изобретения относится к соединениям формулы II

где R2-R5 имеют значения, указанные для формулы I, a P1 и Р2 каждый представляет собой защитную группу. Более конкретно, P1 означает обычную аминозащитную группу, такую как трет-бутилоксикарбонил (Boc) или карбобензилоксигруппу, а P2 означает обычную карбоксизащитную группу, такую как (низш.)алкил или замещенный (низш.)алкил. Эти соединения используются в качестве промежуточных продуктов при синтезе соединений формулы I.

Соединения по изобретению ингибируют связывание VCAM-1 и фибронектина с VLA-4 на циркулирующих лимфоцитах, эозинофилах, базофилах и моноцитах ("VLA-4-экспрессирующих клетках"). Известно, что связывание VCAM-1 и фибронектина с VLA-4 на таких клетках влечет за собой определенные патологические состояния, такие как ревматоидный артрит, рассеянный склероз, воспаление кишечника, и, в частности, вызывает связывание эозинофилов на эндотелии дыхательных путей, что является причиной воспаления легких, приводящего к астме. Таким образом, соединения по настоящему изобретению могут применяться для лечения астмы.

Благодаря способности ингибировать связывание VCAM-1 и фибронектина с VLA-4 на циркулирующих лимфоцитах, эозинофилах, базофилах и моноцитах, соединения по изобретению могут использоваться как лекарственное средство или фармацевтическая композиция, прежде всего для лечения нарушений, которые, как известно, опосредуются таким связыванием. Примерами таких нарушений являются ревматоидный артрит, рассеянный склероз, астма и воспаление кишечника. Соединения по изобретению предпочтительно используются для лечения заболеваний, которые включают воспаление легких, такое как астма. Воспаление легких при астме вызывается активацией и инфильтрацией в легкие эозинофилов, моноцитов и лимфоцитов, которые активированы определенным событием или вызывающим астму веществом.

Кроме того, соединения по изобретению также ингибируют связывание VCAM-1 и MadCAM с клеточным рецептором α4β7, известным также как LPAM, который экспрессируется лимфоцитами, эозинофилами и Т-клетками. В то время как точная роль связывания α4β7 с различными лигандами при воспалительных состояниях, таких как астма, полностью не установлена, соединения по изобретению, которые ингибируют связывание как рецептора α4β1, так и рецептора α4β7, прежде всего эффективны на модели астмы у животных. Кроме того, исследования с моноклональными антителами к α4β7 показывают, что соединения, ингибирующие связывание α4β7 с MadCAM или VCAM, могут использоваться для лечения воспаления кишечника. Кроме того, они могут использоваться при лечении других заболеваний, если такое связывание является причиной патологического нарушения или симптома.

Соединения по изобретению могут вводиться перорально, ректально или парентерально, например внутривенно, внутримышечно, подкожно, интратекально или чрескожно; или сублингвально (под язык), в форме офтальмологических препаратов, или в форме аэрозолей при воспалении легких. Примерами лекарственных форм являются капсулы, таблетки, суспензии или растворы для перорального применения, суппозитории, растворы для инъекций, глазные капли, мази или спреи.

Предпочтительными формами применения являются внутривенное, внутримышечное, пероральное введение или ингаляция. Дозировки для введения эффективного количества соединений по изобретению зависят от природы специфически активного ингредиента, возраста и потребностей пациента и от способа введения. Дозировки могут быть определены любым общепринятым способом, например клиническим испытанием допустимых доз. Таким образом, изобретение включает способ лечения пациентов, страдающих от заболевания, при котором связывание VCAM-1 или фибронектина с клетками, экспрессирующими VLA-4, является причиной патологических симптомов или нарушений. Причем способ включает введение пациенту соединения по изобретению в количестве, достаточном для ингибирования связывания VCAM-1 или фибронектина с клетками, экспрессирующими VLA-4, таким образом, чтобы ослабить вышеупомянутые симптомы и нарушения. В общем виде предпочтительны дозы, составляющие приблизительно 0,1-100 мг/кг массы тела в сутки, более предпочтительны дозы 1-25 мг/кг массы тела в сутки, и прежде всего предпочтительны дозы 1-10 мг/кг массы тела в сутки.

Другим аспектом изобретения являются лекарственные средства или фармацевтические композиции, содержащие фармацевтически эффективное количество соединения по изобретению и фармацевтически приемлемый носитель. Изобретение также относится к способу получения фармацевтической композиции, который включает переработку соединения по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли и фармацевтически приемлемого носителя в галеновую готовую форму. Такие композиции могут быть приготовлены любым общепринятым способом. Таблетки или гранулы могут содержать ряд связующих агентов, наполнителей, носителей или разбавителей. Например, жидкие композиции могут быть приготовлены в форме стерильного смешивающегося с водой раствора. Кроме активного ингредиента капсулы могут содержать наполнитель или загуститель. Кроме того, могут также присутствовать ароматизаторы, а также вещества, обычно используемые как консервирующие, стабилизирующие, удерживающие влагу и эмульгирующие агенты, а также соли для регуляции осмотического давления, буферные вещества и прочие добавки.

Вышеупомянутые носители и разбавители могут включать любые общепринятые фармацевтически приемлемые органические или неорганические вещества, например воду, желатин, лактозу, крахмал, стеарат магния, тальк, аравийскую камедь, полиалкиленгликоли и т.п.

Стандартная лекарственная форма для перорального применения, такая как таблетки и капсулы, предпочтительно содержит от 25 мг до 1000 мг соединения по изобретению.

Обычно соединения по настоящему изобретению могут быть получены из соответствующих производных фенилаланина по реакции с 5-галоген-2,4-диоксопирими-доном, катализируемой палладием.

Как показано на схеме 1, производное 4-иод- или 4-бромфенилаланина, такое как соединение 1, превращается в производное фенилаланина 2 с защитными группами, где R5' означает водород, хлор, (низш.)алкил или (низш.)алкокси, P1 означает обычную аминозащитную группу, такую как Вос или карбобензилоксигруппу, а Р2 означает (низш.)алкил или замещенный (низш.)алкил, выбранный соответственно в качестве защитной группы, или фрагмент пролекарства. Группа P2 может быть введена обычными способами, известными специалистам в области пептидного синтеза. Порядок присоединения P1 и Р2 не имеет решающего значения и будет определяться конкретным выбором реагентов. Обзор использования и введения защитных групп содержится в книге Theodora W.Greene и Peter G.M.Wuts. Protecting Groups in Organic Synthesis, Wiley Interscience, New York (1991). В другом варианте соединение формулы 1 может быть превращено в соединение формулы 4, где R1' представляет собой компонент ацильной группы по изобретению. Удобным методом является сначала введение сложноэфирной группы P2 с последующей конденсацией по свободной аминогруппе с использованием обычных конденсирующих агентов пептидной химии, например HBTU, в присутствии третичного амина, такого как диэтилизопропиламин. Как обычно, конкретный выбор реагентов может диктовать изменение очередности введения R1' и Р2. Превращение соединений формулы 2 или 4 в производные 3 или 5, где М представляет собой замещенный атом олова или бора, можно осуществлять при взаимодействии с соответствующими реагентами, например гексаметилдиоловом, гексабутилдиоловом или тетраалкоксидибором в присутствии источника палладия (0). Методология описана и снабжена библиографией в книге F.Diederich и P.J.Stang, ed. Metal Catalyzed Cross Coupling Reactions, Wiley-VCH, Weinheim, Germany (1998).

Схема реакций 1

Пиримидин-2,4-дионы (производные урацила) формулы 6, где R4' означает водород, (низш.)алкил, или перфтор(низш.)алкил, известны в литературе и могут быть получены известными способами. 1,3-Дизамещенные пиримидин-2,4-дионы формулы 7, где R2' и R3' означают (низш.)алкил, арил(низш.)алкил или арил, также являются известными соединениями или могут быть получены по стандартным методикам. Работы, в которых описываются синтетические методы получения этих соединений, включают Shigeo Senda, и др., Chem. Pharm. Bull., 22, 189-195 (1974), Chem. Pharm. Bull., 20, 1389-1396 (1972) и Yasuo Morita, и др., Chem. Comm., 359-360 (1997). В случае, если R2' и R3' означают (низш.)алкил или арил(низш.)алкил, соединения формулы 7 получают алкилированием соединений формулы 6 при взаимодействии с алкилирующими агентами, такими как иодметан, бензилбромид, аллилбромид, в присутствии основания, такого как карбонат калия, или необязательно межфазного катализатора. Для менее реакционноспособоных алкилирующих агентов может оказаться необходимым использование более сильного основания, такого как гидроксид щелочного металла, и нагревания реакционной смеси. Соединения формулы 6 или 7, имеющие значения, указанные выше, могут быть галогенированы по положению 5 взаимодействием с обычными галогенирующими реагентами, такими как бром, N-иодсукцинимид или N-бромсукцинимид в пригодном растворителе, таком как ледяная уксусная кислота или водная уксусная кислота, с получением галогенпиримидинов формулы 8, где Х=Br или I, R2' и R3' независимо означают водород, (низш.)алкил, арил(низш.)алкил или арил, R4'=водород, (низш.)алкил или перфтор(низш.)алкил.

Схема реакций 2

Как показано на схеме 3, соединение формулы 8 может быть использовано в реакции конденсации с производным фенилаланина формулы 3 или 5, катализируемой палладием. Например, если М означает замещенное олово, взаимодействие соединения 8 и фенилаланина формулы 3 или 5 с источником палладия (0), таким как дихлорид тетракис(трифенилфосфин)палладия или дихлорид бис(трифенилфосфин)палладия, в присутствии инертного растворителя, такого как ДМФ, при температуре от комнатной температуры до 100°С, приводит к образованию соединения формулы 9 или 10. Из соединений формулы 9 при удалении защитной группы P1 можно получить соединения формулы 10. Реакцию проводят общепринятым способом в зависимости от группы P1. Например, если P1 означает группу Boc, ее удаляют обработкой сильной кислотой, такой как трифторуксусная кислота, необязательно в присутствии растворителя, такого как хлористый метилен, и соединения-акцептора. Затем полученный свободный амин может быть ацилирован кислотой формулы R1'CO2H с использованием обычных методов пептидной конденсации. Например, при взаимодействии с HBTU в присутствии третичного амина, такого как диэтилизопропиламин, в апротонном растворителе, таком как ДМФ, получают соединения формулы 10.

Если требуемым конечным продуктом является свободная кислота 11, сложноэфирную группу P2 удаляют обычными методами. Например, если Р2 означает (низш.)алкил, например метил, то ее удаляют обработкой гидроксидом щелочного металла, например гидроксидом лития, в приемлемом растворителе, например водном ТГФ, необязательно содержащем метанол для повышения растворимости. Если Р2 означает бензил или замещенную бензильную группу, то ее удаляют каталитическим гидрированием в присутствии металла платиновой группы, например палладия на угле.

Схема реакций 3

В другом варианте, показанном на схеме 4, из соединения формулы 8, где Х означает бром или иод, можно получить соединения формулы 12, где М' представляет собой замещенный атом олова, бора или цинка. В случае соединений олова или бора, когда М' является замещенным атомом олова или бора, реакцию проводят с использованием соответствующих реагентов, например,

Схема реакций 4

гексаметилдиолова, гексабутилдиолова или тетраалкоксидибора, в присутствии источника палладия (0). Для получения производного цинка формулы 12, где М' означает Zn (галоген), реакцию проводят взаимодействием соединения формулы 8, где Х означает I, с источником активированного цинка в приемлемом инертном растворителе, например диметилацетамиде, при температуре от комнатной температуры до 100°С до полного завершения реакции с получением соединения формулы 12, где М' означает Zn (галоген). Эти соединения формулы 12 могут быть введены в реакцию производным фенилаланина, замещенным в положении 4, формулы 4', где X' означает иод, бром или трифторметилсульфонилокси, в присутствии источника палладия (0) с получением соединения формулы 10'. В случае, если сложноэфирная группа Р2 не должна входить в состав целевого соединения, ее можно удалить с использованием методов гидролиза эфиров, приемлемых для конкретной P3. Например, если P2 означает (низш.)алкил, например метил, такая группа может быть удалена стандартным гидролизом в основной среде, например с использованием гидроксида щелочного металла, например гидроксида лития. В варианте этого метода может оказаться необходимым проводить реакцию конденсации и присоединения защитной группы на более поздних стадиях синтеза. В этом случае соединение формулы 2', где P1' означает (низш.)алкоксикарбонил или бензилоксикарбонил, а X' имеет значения, указанные выше, может быть конденсировано с пиримидиндионом формулы 12 с получением соединения формулы 9', которое в свою очередь может быть превращено в соединение по изобретению с использованием общих методов, описанных выше на схеме 3.

Как показано на схеме 5, другим подходом к соединениям по изобретению, в которых R5' не означает водород, является получение альдегида формулы 14. Для этого соединение формулы 12 вводят в реакцию с соединением формулы 13, в котором R5' означает (низш.)алкил или (низш.)алкокси, Х'' означает иод, бром, остаток трифторметилсульфонилокси, a R8 означает защищенный спирт или альдегид. Пригодные защитные группы для спиртов включают силильные и бензильные эфиры. Альдегиды могут быть защищены в виде ацеталей. Соединение формулы 12 может быть превращено в альдегид формулы 15 с использованием обычной последовательности реакций, которая в случае, если R8 означает спирт, включает удаление защитной группы и, если необходимо, последующее окисление. Для избирательного окисления первичных бензиловых спиртов в альдегиды могут быть использованы любые общепринятые реагенты, например активированный диоксид марганца в инертном растворителе. В случае, если R8 означает защищенный альдегид, получение альдегида формулы 15 можно проводить удалением соответствующей защитной группы, например гидролизом ацеталя разбавленной кислотой. Реакцию соединения 15 с получением дегидроаминокислоты формулы 16 проводят взаимодействием с реагентом Виттига формулы 17, в котором P1' означает (низш.)алкоксикарбонил или бензилоксикарбонил, а Р2 имеет значения, указанные выше. Например, взаимодействие соединения 15 с триметиловым эфиром (±)-N-(бензилоксикарбонил)-α-фосфоноглицина в присутствии приемлемого основания, например тетраметилгуанидина, приводит непосредственно к образованию дегидроаминокислоты формулы 16, где P2 означает метил, а P1' означает бензилоксикарбонил. Энантиоселективное восстановление соединения 16 с получением L-аминокислоты 18 может быть проведено с использованием ряда приемлемых для этого восстанавливающих агентов, например описанного недавно родиевого реагента этил-DuPHOS (см. статью Burk M.J., Feaster J.E., Nugent W.A., Harlow R.L., J. Am. Chem. Soc., 115, 10125 (1993)) в условиях, подробно описанных в литературе. Последующее превращение соединения 18 в соединения по изобретению проводят с использованием общих методов, описанных выше.

Схема реакций 5

В еще одном варианте N-ацильную группу R1' в формуле 11 получают из бензойной кислоты, замещенной в положении 2. Соответствующие замещенные в положении 2 бензойные кислоты являются коммерческими препаратами или могут быть получены общепринятым способом. Например, орто-замещенные арилиодиды или трифлаты могут быть карбонилированы в присутствии монооксида углерода и соответствующего палладиевого катализатора. Получение промежуточных иодида или трифлата зависит от конкретного необходимого замещения, и такие соединения могут быть получены прямым кодированием или диазотированием анилина с последующим взаимодействием с источником иода, например с иодидом калия. Трифлаты могут быть получены из соответствующих фенолов общепринятыми методами, например, такими как взаимодействие с ангидридом трифторметансульфоновой кислоты в присутствии основания, такого как триэтиламин или диизопропилэтиламин, в инертном растворителе. Как показано на схеме 6, еще один способ получения орто-замещенной бензойной кислоты включает взаимодействие производного 2-метоксифенилоксазолина, такого как соединение 19, где Z1 и Z2 означают водород, алкил, хлор, перфторалкил, (низш.)алкокси, с алкильным реактивом Гриньяра, с последующим гидролизом оксазолинового цикла по известному методу, описанному в статье Meyers A.I., Gabel R., Mihelick E.D., J. Org. Chem., 43, 1372-1379 (1978), с получением кислоты формулы 20. Удобными предшественниками соответствующих бензойных кислот являются также 2- или 2,6-дизамещенные бензонитрилы. В случае нитрилов с заторможенной конфигурацией, например 2-хлор-6-метилбензонитрила, обычный гидролиз в кислотных или основных условиях затруднен и хорошие результаты дает восстановление в соответствующий бензальдегид с использованием DIBAL с последующим окислением оксилителями на основе хрома. Другие способы представлены в патенте Chen и др., WO 99/10312.

Схема реакций 6

Что касается схемы реакций 7, циклические кислоты формулы 23 являются известными соединениями или могут быть получены с использованием стандартных методов. Для получения замещенных алкил- или циклоалкилкарбоновых кислот могут использоваться реакции алкилирования с использованием щелочного металла дианиона кислоты или моноаниона соответствующего сложного эфира. Например, эфир циклоалкилкарбоновой кислоты формулы 21 может быть обработан сильным основанием, например диизопропиламидом лития, в инертном растворителе, например ТГФ, с последующим присоединением группы R41-Lv, где R41 означает требуемую боковую цепь, такую как замещенный бензил, (низш.)алкил, (низш.)алкоксиалкил, азидо(низш.)алкил и т.п., a Lv означает уходящую группу, такую как бром, иод, мезилат или подобную группу, принимающую участие в реакциях алкилирования енолята сложного эфира. Сложный эфир 22 может быть гидролизован в кислоту 23 с использованим гидроксида щелочного металла в приемлемом растворителе, например водном спирте. В зависимости от природы группы R41 и целевого соединения соединение 23 может быть конденсировано с амином, таким как соединение 1, и непосредственно превращено в целевое соединение, или группа R41 может быть подвергнута последующей обработке на соответствующей стадии синтеза. Например, если R41 означает остаток азидо(низш.)алкил, азид может быть восстановлен с использованием, например, триалкилфосфинового реагента с последующей введением функциональных групп в полученный амин алкилированием, ацилированием, сульфонилированием и подобными методами, известными специалистам в данной области техники. Если R41 включает уходящую группу, например концевой атом брома, такая группа может быть замещена соответствующим нуклеофилом, например метилмеркаптидом натрия, с образованием в данном случае тиоэфира, который может быть требуемым продуктом, или этот тиоэфир, в свою очередь, может быть превращен, например, окислением в сульфоксид или сульфон в известных условиях реакции. Прочие нуклеофилы, которые могут использоваться для получения промежуточных соединений и приводить к соединениям по изобретению, включают цианид натрия, метоксид натрия, азид натрия, морфолин и др. Если R41 включает группу кеталя, эта группа может быть гидролизована на соответствующей стадии синтеза с получением кетогруппы. Эта группа, в свою очередь, может быть превращена, например, восстановлением в спирт, или в производное, такое как оксим.

Примеры применения этих методов в синтезе соединений формулы 23 приводятся в патенте Chen и др., WO 99/10313.

Схема реакций 7

В общем случае орто-замещенные ароматические кислоты, необходимые для синтеза соединений, где R1 означает Y-1, могут быть получены, как описано в патенте Chen и др., WO 99/10312.

Для синтеза 2-хлор-6-алкилбензойных кислот формулы 28, где R43 означает (низш.)алкил, более приемлемым является метод, описанный для схемы 8. Таким образом, альдегид формулы 24, представляющий собой коммерческий препарат, превращается в имин 25, где R42 означает (низш.)алкил, предпочтительно бутил, при взаимодействии с бутиламином в инертном гидрофобном органическом растворителе, например гептане. Полученное соединение формулы 25 вводят в реакцию с избытком реактива Гриньяра 26 в инертном растворителе, например ТГФ, с последующей обработкой кислотой на заключительной стадии с получением альдегида формулы 27. Окисление соединения 27 в кислоту формулы 28 может быть проведено обычными способами, например обработкой раствора соединения 27 в приемлемом растворителе, таком как водный ацетонитрил, хлоритом натрия и 30%-ным пероксидом водорода при комнатной или пониженной температуре.

Схема реакций 8

Может возникнуть необходимость готовить пролекарства в виде сложных эфиров соединений по изобретению, причем сложноэфирную группу окажется удобным вводить при завершении синтеза. Для этой цели может быть использован ряд общепринятых методов получения сложных эфиров карбоновых кислот. Типичные методы включают присоединение спирта к карбоновой кислоте в присутствии кислоты, например хлористоводородной кислоты, по методике, известной как этерификация по Фишеру, В другом варианте может использоваться конденсация карбоновой кислоты со спиртом, опосредованная диимидом, с необязательным использованием активатора, такого как 4,4-диметиламинопиридин. Типичным диимидом является дициклогексилкарбодиимид. Другим альтернативным методом является взаимодействие карбоновой кислоты с реакционноспособным алкилгалогенидом, например алкилиодидом или ацилоксиметилхлоридом, в присутствии основания, например бикарбоната натрия, в инертном растворителе, например ДМФ. Конкретный выбор метода зависит от данной комбинации карбоновой кислоты и требуемого остатка сложного эфира и является очевидным для специалиста в данной области. Сложноэфирные группы, которые могут входить в состав пролекарства, могут быть введены на любой удобной стадии синтеза. Например, группа P2 в формуле 1 может представлять собой требуемый сложный эфир и будет устойчивой в конечном продукте.

ПРИМЕРЫ

Нижеописанные примеры приведены с целью иллюстрации изобретения и не должны рассматриваться как ограничивающие его объем.

Общие методы: Температуры плавления определены на приборе Thomas-Hoover и приведены без поправки на показания термометра. Оптическое вращение (угол вращения плоскости поляризации) определяли на поляриметре Perkin-EImer (модель 241).1Н-ЯМР-спектры снимали на спектрометрах Varian XL-200, Mecury-300 или Unityplus 400 MHz с использованием в качестве внутреннего стандарта тетраметилсилана (ТМС). Масс-спектры с ионизацией электронным ударом (EI, 70 ev) и ионизацией быстрыми атомами (FAB) снимали на масс-спектрометрах VG Autospec или VG 70E-HF. Для колоночной хроматографии использовали силикагель марки Mallinkrodt SiliCar, фракция 230-400 меш для экспресс-хроматографии; хроматографию проводили под давлением азота 0-5 фунт/кв. дюйм. Тонкослойную хроматографию проводили на стеклянных пластинках, покрытых силикагелем фирмы Е. Merck (E. Merck # 1.05719), и просматривали в боксе в УФ-свете при 254 нм, пластинки проявляли парами иода или раствором фосфорномолибденовой кислоты (ФМК) в водном этаноле, или после обработки Cl2 опрыскивали реагентом, содержащим 4,4'-тетраметилдиаминодифенилметан, приготовленным, как описано в работе E.Von Arx, M.FaupEI, M.Brugger, J. Chromatography, 120, 224-228 (1976).

Обращенно-фазовую хроматографию высокого давления (ОФ-ЖХВР) проводили на хроматографе Rainin HPLC на колонке 41,4×300 мм, заполненной сорбентом Dynamax™ С-18 с диаметром частиц 8 мкм, при скорости элюции 49 мл/мин в градиенте ацетонитрил/вода (каждый из растворителей содержал 0,75% ТФУК), обычно от 5 до 95% ацетонитрила, время элюции составляло 35-40 мин. Условия ЖХВР обычно приводятся в формате 5-95-35-214, что означает линейный градиент от 5% до 95% ацетонитрила в воде, продожительность элюции 35 мин, регистрация элюата на УФ-детекторе при длине волны 214 нм.

Хлористый метилен (дихлорметан), 2-пропанол, ДМФ, ТГФ, толуол, гексан, эфир и метанол фирмы Fisher или Baker имели квалификацию "reagent grade" и использовались, если не указано иное, без дополнительной очистки, ацетонитрил фирмы Fisher или Baker имел квалификацию "hplc grade" (для ЖХВР).

В примерах использовались следующие сокращения:

ТГФтетрагидрофуран,
ДМФN,N-диметилформамид,
ДМАN,N-диметилацетамид,
НОВТ1-гидроксибензотриазол,
ВОРгексафторфосфат [(бензотриазол-1-
 ил)окси]трис(диметиламино)фосфония,
HATUгексафторфосфат O-(7-азабензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-
 тетраметилурония,
HBTUгексафторфосфат O-бензотриазол-N,N,N',N'-
 тетраметилурония,
DIPEAдиизопропилэтиламин,
DMAP4-(N,N-диметиламино)пиридин,
DPPAдифенилфосфорилазид,
DPPP1,3-бис(дифенилфосфино)пропан,
DBU1,8-диазабицикло[5,4,0]ундец-7-ен,
NaHгидрид натрия,
солевой раствор насыщенный водный раствор
 хлорида натрия,
ТСХтонкослойная хроматография,
LDAдиизопропиламид лития,
ВОР-Clбис(2-оксо-3-оксазолидинил)фосфинхлорид,
NMPN-метилпирролидинон,
реактив Лавессона (Lawesson's reagent)[2,4-бис(4-метоксифенил)-
 1,3-дитиа-2,4-дифосфетан-2,4-дисульфид],
NISN-иодсукцинимид.

Хроматография на силикагеле на колонках Biotage относится к использованию системы для экспресс-хроматографии, поставляемой отделом Biotage фирмы Dyax Corporation, причем используются предварительно заполненные колонки 40g (40s колонки), 90g (40m колонки) или 800g (75m колонки). Элюцию проводят смесью гексан/этилацетат под давлением азота 10-15 фунт/кв.дюйм.

Пример 1

Метиловый эфир N-[(1,1-диметилэтокси)карбонил]-4-[(трибутил)станнил]-L-фенилаланина.

Раствор метилового эфира N-[(1,1-диметилэтокси)карбонил]-4-иод-L-фенилаланина (5,3 г, 13 ммолей) и гексабутилдиолова (27,5 мл, 54 ммоля) в толуоле (50 мл) деоксигенировали, поочередно (3х) замораживая смесь в вакууме на бане с жидким азотом и оттаивая в атмосфере аргона. Затем добавляли тетракис(трифенилфосфин)палладий (280 мг, 0,22 ммоля) и реакционную смесь кипятили с обратным холодильником в течение 45 мин до изменения окраски с желтой на черную. После того, как данные ТСХ (этилацетат/гексан, 1:6) указали на присутствие некоторого количества исходного соединения иода, добавляли дополнительную порцию (140 мг, 0,11 ммоля) катализатора и кипячение с обратным холодильником продолжали в течение 1 ч. Затем смесь охлаждали и концентрировали. Остаток переносили в гексане (200 мл) и триэтиламине (30 мл), перемешивали в течение 30 мин и фильтровали. Фильтрат концентрировали и хроматографировали на колонке с сухим силикагелем (150 г) при элюировании гексаном, а затем этилацетатом/гексаном (1:6), при этом получали метиловый эфир N-[(1,1-диметилэтокси)карбонил]-4-[(трибутил)станнил]-L-фенилаланина (5,7 г, 77%) в виде прозрачного масла. МС-НР(+)(LSI) (C27H47NO4Sn): m/z 1081 (2М-С4Н9), 570 (М+Н).

Пример 2

N-[(2-хлор-6-метилфенил)карбонил]-4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланин

а) Получение 5-иодурацила

Смесь урацила (28,6 ммоля, 3,2 г) и монохлорида иода (49,2 ммоля, 7,988 г) в метаноле (120 мл) кипятили с обратным холодильником в течение 40 ч. Растворитель удаляли в вакууме, остаток кристаллизовали из этанола/воды (1:1, 150 мл) и выдерживали в холодильнике в течение 3 ч. Выпавший осадок в виде иголок отделяли фильтрованием и промывали смесью этанол/вода (1:1, 50 мл), водой (30 мл), гексаном (30 мл), а затем высушивали на воздухе, при этом получали 5,47 г (80%) 5-иодурацила в виде иголок белого цвета, tпл.278-282°С (лит. tпл.274-276°C. Synthetic communication, 18, 855-867 (1988)). МС-BP (EI): m/e рассч. для С4Н3IN2O2(М+) 237,9239, найд, 237.9244.

б) Получение 1,3-диметил-5-иодурацила

Смесь 5-иодурацила (22,2 ммоля, 5,28 г) и порошкообразного карбоната калия (60 ммолей, 10,3 г) в ДМФ (188 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 24 ч, а затем добавляли йодистый метил (53,5 ммоля, 3,33 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре еще в течение 72 ч и выливали в воду (150 мл) и этилацетат (150 мл). Слои разделяли и водный слой экстрагировали этилацетатом (2×100 мл). Объединенные экстракты промывали солевым раствором и сушили над безводным сульфатом магния. После отделения осушителя фильтрованием и концентрирования фильтрата получали неочищенное твердое вещество, которое кристаллизовали из этанола/воды (3:1, 150:50 мл) и оставляли в холодильнике на ночь. Твердое вещество отделяли фильтрованием, промывали смесью этанол/вода (3:1, 120 мл), водой (30 мл), гексаном (30 мл) и высушивали в вакууме, при этом получали 4,61 г (78%) 1,3-диметил-5-иодурацила в виде иголок белого цвета, tпл.226-228°С (лит. tпл.225-227°С, Synthetic communication, 18, 855-867 (1988)). MC-BP (EI): m/e рассч. для С6Н7IN2O2 (М+) 266,0021, найд. 266,0023.

в) Получение метилового эфира N-[(1,1-диметилэтокси)карбонил]-4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина

К суспензии цинковой пыли (30 ммолей, 2,0 г) в ТГФ (3,0 мл) при комнатной температуре добавляли 1,2-дибромэтан (2,0 ммоля, 0,174 мл). Полученную суспензию нагревали при 60-55°С феном до прекращения выделения газообразного этилена (наблюдаемого визуально). Процесс повторяли трижды. Затем суспензию охлаждали до комнатной температуры, добавляли триметилхлорсилан (1,0 ммоль, 0,15 мл) и полученную смесь перемешивали в течение 10 мин. Поскольку иодпроизводное плохо растворимо в любом растворителе и выпадает в осадок при охлаждении до комнатной температуры к суспензии цинка добавляли горячий раствор 5-иод-1,3-диметилурацила (11,0 ммоля, 2,92 г) в ТГФ (3,0 мл) и ДМА (10 мл) и смесь нагревали до 73°С. Температура реакционной смеси повышалась до 77-78°C за счет экзотермической реакции. Реакционную смесь перемешивали на бане при температуре 73°С в течение 1,5 ч, охлаждали до комнатной температуры и перемешивали еще в течение 1,5 ч. 1Н-ЯМР-спектр гидролизата аликвотной части смеси объемом 0,25 мл указал на присутствие следов исходного материала, а при иодолизе аликвотной части смеси объемом 0,25 мл выделился иод. Реакционную смесь нагревали до 70°С и перемешивали еще в течение 30 мин. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь разбавляли ТГФ (5 мл) и выдерживали в течение 30-60 мин до осаждения избытка цинковой пыли.

Полученный, как описано выше, раствор соединения цинка (5,5 ммоля) добавляли при комнатной температуре к суспензии Pd(dba)2 (0,07 ммоля, 40 мг), трифурилфосфина (ТФФ) (0,26 ммоля, 66,6 мг) и метилового эфира Вос-4-иод-L-фенилаланина (4,5 ммоля, 1,823 г) в ТГФ (10 мл), и смесь светло-желтого цвета перемешивали в течение 15 ч. Затем смесь выливали в насыщенный раствор хлорида аммония и экстрагировали этилацетатом (3×50 мл). Объединенные экстракты промывали солевым раствором и сушили над безводным сульфатом магния. После отделения осушителя фильтрованием и концентрирования раствора получали неочищенный продукт, который очищали хроматографией на колонке, при этом получали 0,80 г (43%) метилового эфира N-[(1,1-диметилэтокси)карбонил]-4-[1,3-диметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)]-L-фенилаланина в виде твердого вещества белого цвета, tпл.65-69°С. МС-ВР (EI): m/e рассч. для C21H27N3O6 (М+) 418,1978, найд. 418,1965.

г) Получение метилового эфира 4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина.

Раствор метилового эфира N-[(1,1-диметилэтокси)карбонил]-4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина (1,94 ммоля, 0,811 г) в диоксане (5 мл) при комнатной температуре обрабатывали 4,0н. (5 мл, 20 ммолей) хлористоводородной кислотой в диоксане и раствор перемешивали в течение 0,5 ч. К этому времени медленно выпадал осадок желтого цвета. Осадок отделяли фильтрованием и промывали гексаном, при этом получали 412 мг продукта (выход 60%), tпл.187-193°C. Маточный раствор концентрировали в вакууме, остаток растирали с дихлорметаном. Объединенное твердое вещество, которое содержало некоторое количество исходного материала, растворяли в метаноле. Выпаривали большую часть метанола и твердое вещество осаждали добавлением дихлорметана. Твердое вещество отделяли фильтрованием и высушивали, при этом получали 330 мг (48%) гидрохлорида метилового эфира 4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина, tпл.l87-193°C. МС-ВР (EI): m/e рассч. для С16Н19N3O4 (М+Н) 318,1454, найд. 318,1447.

д) Получение метилового эфира N-[(2-хлор-6-метилфенил)карбонил]-4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина

К суспензии гидрохлорида метилового эфира 4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина (0,5 ммоля, 0,180 г), 2-хлор-6-метилбензойной кислоты (0,55 ммоля, 0,084 г) и HBTU (0,6 ммоля, 0,227 г) в ДМФ (4 мл) при комнатной температуре добавляли диизопропилэтиламин (3,0 ммоля, 0,52 мл). Через 1 мин все компоненты растворялись, и полученный прозрачный раствор желтого цвета перемешивали при комнатной температуре в течение 15 ч. Полученный раствор темно-коричневого цвета разбавляли этилацетатом (25 мл). Слой этилацетата последовательно промывали водой (2×20 мл), насыщенным раствором бикарбоната натрия (25 мл), солевым раствором (25 мл) и сушили над безводным сульфатом магния. После отделения осушителя фильтрованием и концентрирования растворителя получали неочищенный продукт, который очищали хроматографией на колонке с силикагелем, при этом получали 151,5 мг (выход 72%) метилового эфира N-[(2-хлор-6-метилфенил)карбонил]-4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина в виде твердого вещества белого цвета, tпл.155-157°C. MC-BP (EI): m/e рассч. для C24H24N3O5Cl (М+) 470,1483, найд. 470,1484.

е) Получение N-[(2-хлор-6-метилфенил)карбонил]-4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина

К суспензии метилового эфира N-[(2-хлор-6-метилфенил)карбонил]-4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина (0,278 ммоля, 131 мг) в этаноле (4 мл) при комнатной температуре добавляли 1,0н. водный раствор гидроксида натрия (3 мл). Смесь нагревали до 40-45°С и полученный прозрачный раствор перемешивали в течение 2-3 ч. Этанол удаляли при пониженном давлении, остаток разбавляли водой (20 мл) и NaOH (3 мл, 1,0н.) для растворения натриевой соли. Водный раствор промывали эфиром (50 мл) для удаления нейтральных примесей. Водный слой подкисляли 1,0н. HCl и полученный продукт экстрагировали этилацетатом (2×50 мл). Объединенные органические экстракты промывали солевым раствором и сушили над безводным сульфатом магния. После отделения осушителя фильтрованием и концентрирования фильтрата получали 107 мг (85%) N-[(2-хлор-6-метилфенил)карбонил]-4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина в виде твердого вещества белого цвета, tпл.234-236°С. МС-ВР (EI): m/e рассч. для C23H22N3O5Cl (M+H) 456,1326, найд. 456,1326.

Пример 3

Получение 4-(1,-диметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)]-N-[[1-(2-метоксиэтил)циклопентил]карбонил]-L-фенилаланина

4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)]-N-[[1-(2-метоксиэтил)циклопентил]карбонил]-L-фенилаланин получали из метилового эфира 4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина и 1-(2-метоксиэтил)циклопентанкарбоновой кислоты (см. WO 99/10312) с использованием общих методов, описанных в примере 2. МС-ВР (EI): m/e рассч. для С24Н31N3O5 (М+Н) 458,2292, найд. 458,2279.

Пример 4

Получение N-[(2-бром-6-метилфенил)карбонил]-4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина

N-[(2-Бром-6-метилфенил)карбонил]-4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланин получали из 4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)]-L-фенилаланина и 2-бром-6-метилбензойной кислоты с использованием общих методов, описанных в примере 2. МС-ВР (EI): m/e рассч. для C23H22N3O5Br (М+Н) 500,0822, найд. 500,0825.

Пример 5

Получение N-[(2-бром-5-метоксифенил)карбонил]-4-[1,3-диметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил]-L-фенилаланина

N-[(2-Бром-5-метоксифенил)карбонил]-4-[1,3-диметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил]-L-фенилаланин получали из метилового эфира 4-[1,3-диметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил]-L-фенилаланина и 2-бром-5-метоксибензойной кислоты с использованием общих методов, описанных в примере 2. МС-ВР (EI): m/e рассч. для С23H22N3O6Br (М+Н) 516,0770, найд. 516,0780.

Пример 6

N-[(2,6-Дихлорфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланин

а) Получение 5-иод-1,3,6-триметилурацила

Смесь 5-иод-6-метилурацила (22,18 ммоля, 5,58 г) и порошкообразного карбоната калия (60 ммолей, 8,29 г) в ДМФ (188 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 24 ч, а затем добавляли йодистый метил (90,6 ммоля, 3,33 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре еще в течение 76 ч и выливали в воду (150 мл) и этилацетат (150 мл). Слои разделяли и водный слой экстрагировали этилацетатом (2×100 мл). Объединенные экстракты промывали солевым раствором (150 мл) и сушили над безводным сульфатом магния. После отделения осушителя фильтрованием и концентрирования растворителя получали неочищенное твердое вещество, которое кристаллизовали из этанола/воды (3:1, 150:50 мл) и оставляли в холодильнике на ночь. Твердое вещество отделяли фильтрованием, промывали этанолом/водой (3:1, 120 мл), водой (30 мл), гексаном (30 мл) и высушивали в высоком вакууме, при этом получали 5,8 г (выход 93%) 5-иод-1,3,6-триметилурацила в виде твердого вещества белого цвета, tпл.155-157°C. MC-BP (EI): m/e рассч. для C7H9IN2O2 (M+) 279,9709, найд. 279,9709.

б) Получение метилового эфира N-[(1,1-диметилэтокси)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина

К суспензии цинковой пыли (800 ммолей, 52,29 г) в ТГФ (26,0 мл) при комнатной температуре добавляли 1,2-дибромэтан (53,2 ммоля, 4,58 мл). Полученную суспензию нагревали при 60-65°С феном до прекращения выделения газообразного этилена (наблюдаемого визуально). Суспензию охлаждали до комнатной температуры, добавляли триметилхлорсилан (26,6 ммоля, 3,38 мл) и полученную смесь перемешивали в течение 15 мин. Суспензию 5-иод-1,3,6-триметилурацила (266 ммолей, 74,6 г) в ДМА (225 мл) нагревали до получения прозрачного раствора и добавляли одной порцией к реакционной смеси. После добавления реагента смесь нагревали до 70°С. За счет экзотермической реакции температура реакционной смеси повышалась до 80-85°С. Реакционную смесь перемешивали при температуре 70°С в течение 3-4 ч, после чего данные ТСХ аликвотной части смеси, в которой реакцию останавливали добавлением насыщенного раствора хлорида аммония, указывали на отсутствие исходного материала. Реакционную смесь разбавляли ТГФ (140 мл), охлаждали до комнатной температуры и выдерживали в течение 2-3 ч до осаждения избытка цинковой пыли.

Полученный, как описано выше, раствор соединения цинка (266 ммолей) добавляли при комнатной температуре к раствору Pd(dba)2 (8 ммолей, 4,6 г), три-орто-толилфосфина [Р(tol)3] (29,6 ммоля, 9,0 г) и метилового эфира N-[(1,1-диметил-этокси)карбонил]-4-иод-L-фенилаланина (186 ммолей, 75,56 г) в ТГФ (280 мл) и полученную смесь светло-желтого цвета перемешивали при 50-55°С в течение 48 ч. Затем реакционную смесь выливали в насыщенный раствор хлорида аммония и экстрагировали этилацетатом (3×750 мл). Объединенные экстракты промывали солевым раствором (1,5 л) и сушили над безводным сульфатом магния. После отделения осушителя фильтрованием и концентрирования получали неочищенный продукт, который очищали хроматографией на силикагеле с использованием колонки Biotage (75m), при этом получали 57,88 г (выход 72%) метилового эфира N-[(1,1-диметилэтокси)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина в виде аморфного твердого вещества белого цвета. МС-ВР (EI): m/е рассч. для С22Н29N3О6 (М+) 431,2056, найд. 431,2054.

в) Получение гидрохлорида метилового эфира 4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина

Порцию метилового эфира N-[(1,1-диметилэтокси)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина (17,1 5 ммоля, 7,4 г), полученного, как описано выше, в виде твердого вещества обрабатывали при комнатной температуре 4н. хлористоводородной кислотой в диоксане (68 ммолей, 17 мл) и полученный раствор перемешивали в течение 1 ч до появления осадка белого цвета. Смесь разбавляли диэтиловым эфиром, маточный раствор отделяли декантацией, остаток сушили на роторном испарителе и в высоком вакууме, при этом получали 6,28 г (выход 99%) гидрохлорида метилового эфира 4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина в виде аморфного твердого вещества желтого цвета. МС-ВР (FAB): m/e рассч. для C17H21N3O4 (M+H) 332,1610, найд. 332,1617.

г) Получение метилового эфира N-[(2,6-дихлорфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина

К суспензии гидрохлорида метилового эфира 4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина (3,12 ммоля, 1,15 г) и 2,6-дихлорбензоилхлорида (3,51 ммоля, 0,735 г) в дихлорметане (40 мл) при комнатной температуре добавляли диизопропилэтиламин (9,36 ммоля, 1,63 мл). Через 1 мин все компоненты растворялись, и прозрачный раствор желтого цвета перемешивали при комнатной температуре в течение 20 ч. Полученный раствор коричневого цвета разбавляли дихлорметаном (50 мл). Слой дихлорметана последовательно промывали 1н. хлористоводородной кислотой (2×50 мл), насыщенным раствором бикарбоната натрия (50 мл), солевым раствором (50 мл) и сушили над безводным сульфатом магния. После отделения осушителя фильтрованием и концентрирования растворителя получали неочищенный продукт, который очищали хроматографией на силикагеле с использованием колонки Biotage (40m), при этом получали 1,46 г (выход 93%) метилового эфира N-[(2,6-дихлорфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина в виде аморфного твердого вещества белого цвета. МС-ВР (FAB): m/e рассч. для С24Н23Cl2N3O5 (M+H) 504,1093, найд. 504,1083.

д) Получение N-[(2,6-дихлорфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина

К суспензии метилового эфира N-[(2,6-дихлорфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина (2,2 ммоля, 1,11 г) в этаноле (12 мл) при комнатной температуре добавляли 1,0н. водный раствор гидроксида натрия (8,8 мл). Смесь нагревали до 45-50°С и полученный прозрачный раствор перемешивали в течение приблизительно 2 ч. Этанол удаляли при пониженном давлении, остаток разбавляли водой (50 мл) и NaOH (5 мл, 1,0н.) для растворения соли натрия. Водный раствор промывали диэтиловым эфиром (50 мл) для удаления нейтральных примесей, подкисляли 1,0н. HCl и продукт экстрагировали этилацетатом (2×75 мл). Объединенные органические экстракты промывали солевым раствором (100 мл) и сушили над безводным сульфатом магния. После отделения осушителя фильтрованием и концентрирования фильтрата получали 970 мг (выход 90%) N-[(2,6-дихлорфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина в виде твердого вещества белого цвета, tпл.225-227°С. МС-ВР (FAB): m/e рассч. для С23Н21Cl2N3O5 (М+Н) 490,0937, найд. 490,0940.

Пример 7

Получение N-[[1-(2-метоксиэтил)циклопентил]карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина

а) Получение метилового эфира N-[[1-(2-метоксиэтил)циклопентил]карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина

К суспензии гидрохлорида метилового эфира 4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина (0,4 ммоля, 173 мг), HBTU (0,5 ммоля, 189 мг) и 1-(2-метоксиэтил)циклопентанкарбоновой кислоты (0,5 ммоля, 86 мг) в ДМФ (2 мл) при комнатной температуре добавляли диизопропилэтиламин (1,2 ммоля, 0,29 мл). Через 5 мин все компоненты растворялись, и прозрачный раствор желтого цвета перемешивали при комнатной температуре в течение 24 ч. Полученный раствор темно-коричневого цвета разбавляли этилацетатом (30 мл). Слой этилацетата последовательно промывали 1н. хлористоводородной кислотой (2×30 мл), насыщенным раствором бикарбоната натрия (30 мл), солевым раствором (30 мл) и сушили над безводным сульфатом магния. После отделения осушителя фильтрованием и концентрирования растворителя получали неочищенный продукт, который очищали хроматографией на силикагеле с использованием колонки Biotage (40m), при этом получали 139 мг (выход 72%) метилового эфира N-[[1-(2-метоксиэтил)циклопентил]карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина в виде аморфного твердого вещества белого цвета. МС-ВР (FAB): m/e рассч. для C26H35N3O6 (М+Н) 486,2604, найд. 486,2602.

б) Получение N-[[1-(2-метоксиэтил)циклопентил]карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина

К суспензии метилового эфира N-[[1-(2-метоксиэтил)циклопентил]карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина (0,273 ммоля, 133 мг) в этаноле (3 мл) при комнатной температуре добавляли 1,0н, водный раствор гидроксида натрия (1,5 мл). Смесь нагревали до 40-45°С и полученный прозрачный раствор перемешивали в течение 15 ч. Этанол удаляли при пониженном давлении, остаток разбавляли водой (25 мл) и NaOH (3 мл, 1,0н.) для растворения соли натрия. Водный раствор промывали диэтиловым эфиром (50 мл) для удаления нейтральных примесей, подкисляли 1,0н. HCl и полученный продукт экстрагировали этилацетатом (2×25 мл). Объединенные органические экстракты промывали солевым раствором (50 мл) и сушили над безводным сульфатом магния. После отделения осушителя фильтрованием и концентрирования фильтрата получали 121 мг (выход 94%) N-[[1-(2-метоксиэтил)циклопентил]карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина в виде аморфного твердого веществ белого цвета. МС-ВР (FAB): m/e рассч. для С25Н33N3O6 (М+Н) 472,2448, найд. 472,2467.

Пример 8

Получение N-[(2-бром-6-метилфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина

N-[(2-бром-6-метилфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланин получали из метилового эфира 4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина и 2-бром-6-метилбензойной кислоты с использованием общих методов, описанных в примере 7, в виде твердого вещества белого цвета, tпл.240-242°С. МС-ВР (FAB): m/e рассч. для С24Н24BrN3O5 (М+Н) 514,0978, найд. 514,0965.

Пример 9

Получение N-[(2-хлор-6-метилфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина

N-[(2-хлор-6-метилфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланин получали из метилового эфира 4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина и 2-хлор-6-метилбензойной кислоты с использованием общих методов, описанных в примере 7, в виде твердого вещества белого цвета, tпл. 238-240°C. MC-BP (FAB): m/e рассч. для С24Н24ClN3O5 (М+Н) 470,1483, найд. 470,1489.

Пример 10

Получение N-[(2-этил-6-метилфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина

N-[(2-этил-6-метилфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланин получали из метилового эфира 4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина и 2-этил-6-метилбензойной кислоты с использованием общих методов, описанных в примере 7, в виде твердого вещества белого цвета, tпл.127-133°C. MC-BP (ES): m/e рассч. для C26H29N3O5 (M+Na) 494,1498, найд. 494,1501.

Пример 11

Получение N-[[(2-(2-метилэтил)-6-метилфенил]карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина

N-[[(2-(2-метилэтил)-6-метилфенил]карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланин получали из метилового эфира 4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина и 2-(2-метилэтил)-6-метилбензойной кислоты с использованием общих методов, описанных в примере 7, в виде аморфного твердого вещества белого цвета. МС-ВР (ES): m/e рассч. для С27Н31N3O5 (M+Na) 500,2156, найд. 500,2160.

Пример 12

Получение N-[(2,6-дифторфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина

N-[(2,6-дифторфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланин получали из метилового эфира 4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина и 2,6-дифторбензойной кислоты с использованием общих методов, описанных в примере 7, в виде аморфного твердого вещества белого цвета. МС-ВР (ES): m/e рассч. для С23H21F2N3O5(M+Na) 480,1483, найд. 480, 1489.

Пример 13

Получение N-[[2-фтор-6-(трифторметил)фенил]карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина

N-[[2-фтор-6-(трифторметил)фенил]карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланин получали из метилового эфира 4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина и 2-фтор-6-(трифторметил)бензойной кислоты с использованием общих методов, описанных в примере 7, в виде твердого вещества белого цвета, tпл.218-220°С. МС-ВР (ES): m/e рассч. для C25H23F4N3O5 (M+Na) 530,1310, найд. 530,1317.

Пример 14

Получение N-[[2,6-ди(2-метилэтил)фенил]карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина

N-[[2,6-ди(2-метилэтил)фенил]карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланин получали из метилового эфира 4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина и 2,6-ди(2-метилэтил)бензойной кислоты с использованием общих методов, описанных в примере 7, в виде аморфного твердого вещества белого цвета. МС-ВР (ES): m/е рассч. для С29Н35Н3O5 (M+Na) 530,1310, найд. 530,1317.

Пример 15

Получение N-[(2-хлор-6-этилфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина

а) Получение N-(2-хлор-6-фторбензилидин)бутиламина (Ro 50-5007/000,30935-229)

К суспензии 2-хлор-6-фторбензальдегида (416 ммолей, 66 г) в гептане (200 мл) при комнатной температуре добавляли н-бутиламин (460 ммолей, 45,5 мл). После добавления реагента проходила экзотермическая реакция до полного растворения твердого вещества. Полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч, переносили в делительную воронку, промывали солевым раствором (200 мл) и сушили над безводным сульфатом магния. После отделения осушителя фильтрованием и концентрирования получали масло желтого цвета, которое очищали перегонкой в высоком вакууме (tкип.95-98°С/4,5 мм рт.ст.), при этом получали 86,31 г (выход 97%) N-(2-хлор-6-фторбензилидин)бутиламина в виде масла желтого цвета. МС-ВР (EI): m/e рассч. для C11H13ClFN (М+) 213,0720. найд. 213,0714.

б) Получение 2-хлор-6-этилбензальдегида

К раствору N-(2-хлор-6-фторбензилидин)бутиламина (15 ммолей, 3,21 г) в ТГФ (20 мл) по каплям добавляли раствор этилмагнийбромида (30 ммолей, 30 мл, 1М) в ТГФ, при этом температуру реакционной смеси поддерживали на уровне 5-15°С. После добавления реагента реакционную смесь нагревали до 20°С и перемешивали в течение 5 ч. Затем охлаждали до 0°С (ледяная баня) и по каплям добавляли 20%-ный раствор HCl в воде (50 мл), поддерживая температуру ниже 15°С охлаждением на ледяной бане. После добавления кислоты смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 15 ч. Затем смесь разбавляли водой (75 мл) и экстрагировали этилацетатом (2×50 мл). Объединенные экстракты промывали солевым раствором (100 мл) и сушили над безводным сульфатом магния. После отделения осушителя фильтрованием и концентрирования получали 2,27 г (выход 90%) 2-хлор-6-этилбензальдегида в виде масла желтого цвета. МС-ВР (EI): m/e рассч. для С9Н9ClO (М+ 167,0264, найд. 167,0263.

в) Получение 2-хлор-6-этилбензойной кислоты

К суспензии 2-хлор-6-фторбензальдегида (13,5 ммоля, 2,27 г) в ацетонитриле (25 мл) при комнатной температуре добавляли раствор одноосновного фосфата натрия (3,4 ммоля, 0,465 г) в воде (7,5 мл), а затем пероксид водорода (1,8 мл, 30%). Затем при 0°С добавляли по каплям раствор хлорита натрия (23,7 ммоля, 2,15 г) в воде (20 мл), поддерживая температуру ниже 3°С. После добавления реагента суспензию желтого цвета перемешивали при температуре от 0°С до комнатной температуры в течение 15 ч, после чего данные ТСХ реакционной смеси указывали на отсутствие исходного материала. Затем при 0°С добавляли по каплям раствор бисульфита натрия (20,5 ммоля, 2,8 г) в воде (10 мл) до исчезновения желтого цвета (положительная реакция на KI-бумаге). Охлаждение необходимо для контроля за ходом экзотермической реакции. Через 1 ч растворитель удаляли в вакууме. Нейтральные примеси экстрагировали диэтиловым эфиром (200 мл) и основный водный раствор подкисляли 10% HCl до рН ˜1. Осадок в виде твердого вещества белого цвета отделяли фильтрованием и высушивали на воздухе, при этом получали 2,415 г (выход 97%) 2-хлор-6-этилбензойной кислоты в виде аморфного твердого вещества белого цвета. МС-ВР (EI): m/e рассч. для С9Н9ClO2 (М+) 184,0291, найд. 184,0295.

г) Получение метилового эфира N-[(2-хлор-6-этилфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина

К суспензии гидрохлорида метилового эфира 4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина (0,5 ммоля, 184 мг), HBTU (0,7 ммоля, 265 мг) и 2-хлор-6-этилбензойной кислоты (0,7 ммоля, 129 мг) в ДМФ (2 мл) при комнатной температуре добавляли диизопропилэтиламин (1,25 ммоля, 0,22 мл). Через 5 мин все компоненты растворялись, и прозрачный раствор желтого цвета перемешивали при комнатной температуре в течение 15 ч. Полученный раствор темно-коричневого цвета разбавляли этилацетатом (30 мл). Слой этилацетата последовательно промывали 1н. хлористоводородной кислотой (2×30 мл), насыщенным раствором бикарбоната натрия (30 мл), солевым раствором (30 мл) и сушили над безводным сульфатом магния. После отделения осушителя фильтрованием и концентрирования растворителя получали неочищенный продукт, который очищали хроматографией на силикагеле с использованием колонки Biotage (40m), при этом получали 175 мг (выход 70%) метилового эфира N-[(2-хлор-6-этилфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина в виде аморфного твердого вещества белого цвета. МС-ВР (ES): m/e рассч. для С26Н28ClN3O5 (M+Na) 520,1611, найд. 520,1613.

д) Получение N-[(2-хлор-6-этилфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина

К суспензии метилового эфира N-[(2-хлор-6-этилфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина (0,33 ммоля, 164 мг) в этаноле (2 мл) при комнатной температуре добавляли 1,0. н водный раствор гидроксида натрия (0,7 мл) и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Этанол удаляли при пониженном давлении, остаток разбавляли водой (30 мл). Водный раствор промывали диэтиловым эфиром (30 мл) для удаления нейтральных примесей. Водный слой подкисляли 1,0н. HCl и полученный продукт экстрагировали этилацетатом (2×35 мл). Объединенные органические экстракты промывали солевым раствором (50 мл) и сушили над безводным сульфатом магния. После отделения осушителя фильтрованием и концентрирования фильтрата получали 138 мг (выход 87%) N-[(2-хлор-6-этилфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина в виде твердого вещества белого цвета, tпл. 187-190°C. MC-BP (ES): m/e рассч. для С25Н26ClN3O5 (M+Na) 506,1459, найд. 506,1455.

Пример 16

Получение N-[(2-хлор-6-пропилфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина

а) Получение 2-хлор-6-пропилбензойной кислоты

2-хлор-6-пропилбензойную кислоту получали из (2-фтор-6-хлорбензилидин)бутиламина и пропилмагнийбромида с использованием общего метода, описанного в примере 15.

б) Получение N-[(2-хлор-6-пропилфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина

N-[(2-хлор-6-пропилфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланин получали из метилового эфира 4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина и 2-хлор-6-пропилбензойной кислоты с использованием общих методов, описанных в примере 15, в виде твердого вещества белого цвета, tпл.225-227°С. МС-ВР (ES): m/e рассч. для С26Н28ClN3O5 (M+Na) 520,1611, найд. 520,1615.

Пример 17

Получение N-[[2-хлор-6-(2-метилэтил)фенил]карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина

а) Получение 2-хлор-6-(2-метилэтил)бензойной кислоты

2-хлор-6-(2-метилэтил)бензойную кислоту получали из 2-фтор-6-хлорбензилидин)бутиламина и изопропилмагнийбромида с использованием общего метода, описанного в примере 15.

б) Получение N-[[2-хлор-6-(2-метилэтил)фенил]карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина

N-[[2-хлор-6-(2-метилэтил)фенил]карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланин получали из метилового эфира 4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина и 2-хлор-6-(2-метилэтил)бензойной кислоты с использованием общих методов, описанных в примере 15, в виде твердого вещества белого цвета, tпл.205-209°С. МС-ВР (ES): m/e рассч. для С26H28ClN3O5 (M+Na) 520,1611, найд. 520,1611.

Пример 18

N-[(2,6-дихлорфенил)карбонил]-4-(1,3-диэтил-6-метил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланин

а) Получение 5-иод-1,3-диэтил-6-метилурацила

К суспензии 5-иод-6-метилурацила (20,97 ммоля, 5,45 г) и порошкообразного карбоната калия (60 ммолей, 8,29 г) в ДМФ (188 мл) добавляли этилиодид (83,88 ммоля, 6,7 мл), реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 ч, а затем выливали в воду (150 мл) и этилацетат (150 мл). Слои разделяли и водный слой экстрагировали этилацетатом (2×100 мл). Объединенные экстракты промывали солевым раствором (150 мл) и сушили над безводным сульфатом магния. После отделения осушителя фильтрованием и концентрирования получали неочищенное твердое вещество, которое растирали в дихлорметане/диэтиловом эфире/гексане (1:1:1), при этом получали 3,89 г (выход 60%) 5-иод-1,3-диэтил-6-метилурацила в виде твердого кристаллического вещества белого цвета, tпл. 159-161,5°С. МС-ВР (EI): m/e рассч. для C9H13lN2O2 (M+) 308,0022, найд. 308,0018.

б) Получение метилового эфира N-[(1,1-диметилэтокси)карбонил]-4-(1,3-диэтил-6-метил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина

К суспензии цинковой пыли (33 моля, 1,96 г) в ТГФ (3 мл) при комнатной температуре добавляли 1,2-дибромэтан (3 ммоля, 0,261 мл). Полученную суспензию нагревали при 60-65°С феном до прекращения выделения газообразного этилена. Суспензию охлаждали до комнатной температуры, добавляли триметилхлорсилан (1,5 ммоля, 0,19 мл) и полученную смесь перемешивали в течение 15 мин. Суспензию 5-иод-1,3-диэтил-6-метилурацила (11 ммолей, 3,39 г) в ДМА (6 мл) нагревали до получения прозрачного раствора и добавляли одной порцией к реакционной смеси. После добавления реагента смесь нагревали до 70°С. За счет экзотермической реакции температура реакционной смеси повышалась до 75°С. Реакционную смесь перемешивали при 70°С в течение 15 ч, после чего данные ТСХ аликвотной части реакционной смеси, в которой реакцию останавливали добавлением насыщенного раствора хлорида аммония, указывали на отсутствие исходного материала. Реакционную смесь разбавляли ТГФ (6 мл), охлаждали до комнатной температуры и выдерживали до осаждения избытка цинковой пыли.

Полученный, как описано выше, раствор соединения цинка (11 ммолей) добавляли при комнатной температуре к раствору Pd(dba)2 (0,14 ммоля, 80 мг), трифурилфосфина (TFP) (0,52 ммоля, 134 мг) и метилового эфира N-[(1,1-диметилэтокси)карбонил]-4-иод- L-фенилаланина (9 ммолей, 3,65 г) в ТГФ (6 мл) и полученную смесь светло-желтого цвета перемешивали при 50-55°С в течение 72 ч. Затем реакционную смесь выливали в насыщенный раствор хлорида аммония (100 мл) и экстрагировали этилацетатом (3×75 мл). Объединенные экстракты промывали солевым раствором (150 мл) и сушили над безводным сульфатом магния. После отделения осушителя фильтрованием и концентрирования получали неочищенный продукт, который очищали хроматографией на силикагеле с использованием колонки Biotage (40m), при этом получали 1,78 г (выход 43%) метилового эфира N-[(1,1-диметилэтокси)карбонил]-4-(1,3-диэтил-6-метил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина в виде аморфного твердого вещества белого цвета. МС-ВР (ES): m/e рассч. для С24Н33N3O6 (M+Na) 482,2262, найд. 482,2262.

в) Получение гидрохлорида метилового эфира 4-(1,3-диэтил-6-метил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина

К раствору метилового эфира N-[(1,1-диметилэтокси)карбонил]-4-(1,3-диэтил-6-метил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина (3,87 ммоля, 1,78 г) в диоксане (10 мл) при комнатной температуре добавляли 4н. раствор хлористоводородной кислоты в диоксане (20 ммолей, 5 мл) и полученный раствор перемешивали в течение 1 ч. Затем раствор концентрировали и разбавляли диэтиловым эфиром до образования твердого вещества белого цвета. Маточный раствор отделяли декантацией, остаток сушили на роторном испарителе и в высоком вакууме, при этом получали 0,72 г (выход 47%) гидрохлорида метилового эфира 4-(1,3-диэтил-6-метил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина в виде аморфного твердого вещества. МС-ВР (ES): m/e рассч. для C19H25N3O4 (M+Na) 382,1737, найд. 382,1736.

г) Получение метилового эфира N-[(2,6-дихлорфенил)карбонил]-4-(1,3-диэтил-6-метил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина

К суспензии гидрохлорида метилового эфира 4-(1,3-диэтил-6-метил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина (0,76 ммоля, 0,3 г) и 2,6-дихлорбензоилхлорида (0,84 ммоля, 0,175 г) в дихлорметане (2 мл) при комнатной температуре добавляли диизопропилэтиламин (3,03 ммоля, 0,53 мл). Через 5 мин все компоненты растворялись, и прозрачный раствор желтого цвета перемешивали при комнатной температуре в течение 15 ч. Полученный раствор коричневого цвета разбавляли дихлорметаном (25 мл). Слой дихлорметана последовательно промывали 1н. хлористоводородной кислотой (2×25 мл), насыщенным раствором бикарбоната натрия (25 мл), солевым раствором (25 мл) и сушили над безводным сульфатом магния. После отделения осушителя фильтрованием и концентрирования растворителя получали неочищенный продукт, который очищали хроматографией на силикагеле с использованием колонки Biotage (40s), при этом получали 0,40 г (выход 99%) метилового эфира N-[(2,6-дихлорфенил)карбонил]-4-(1,3-диэтил-6-метил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина в виде аморфного твердого вещества белого цвета. МС-ВР (ES): m/e рассч. для С2бН27Cl2N3O5 (M+Na) 554,1221, найд. 554,1229.

д) Получение N-[(2,6-дихлорфенил)карбонил]-4-(1,3-диэтил-6-метил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина

К суспензии метилового эфира N-[(2,6-дихлорфенил)карбонил]-4-(1,3-диэтил-6-метил-2,4-диоксо-5-пирнмндинил)-L-фенилаланина (0,77 ммоля, 0,41 г) в этаноле (2 мл) при комнатной температуре добавляли 1,0 н. водный раствор гидроксида натрия (1.5 мл). Смесь нагревали до 50°С и полученный прозрачный раствор перемешивали в течение 2 ч. Затем этанол удаляли при пониженном давлении и остаток разбавляли водой (25 мл) и NaOH (2 мл, 1,0н.) для растворения соли натрия. Водный раствор промывали диэтиловым эфиром (30 мл) для удаления нейтральных примесей, подкисляли 1,0н. HCl и продукт экстрагировали этилацетатом (2×35 мл). Объединенные органические экстракты промывали солевым раствором (50 мл) и сушили над безводным сульфатом магния. После отделения осушителя фильтрованием и концентрирования фильтрата получали 320 мг (выход 80%) N-[(2,6-дихлорфенил)карбонил]-4-(1,3-диэтил-6-метил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина в виде аморфного твердого вещества белого цвета. МС-ВР (ES): m/e рассч. для С25Н25Cl2N3O5 (M+Na) 541,3921, найд. 541,3925.

Пример 19

Получение N-[(2-хлор-6-метилфенил)карбонил]-4-(1,3-диэтил-6-метил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина

а) Получение метилового эфира N-[(2-хлор-6-метилфенил)карбонил]-4-(1,3-диэтил-6-метил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина

К суспензии гидрохлорида метилового эфира 4-(1,3-диэтил-6-метил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина (0,758 ммоля, 300 мг), HBTU (0,84 ммоля, 318 мг) и 2-хлор-6-метилбензойной кислоты (0,84 ммоля, 142 мг) в ДМФ (2 мл) при комнатной температуре добавляли диизопропилэтиламин (1,9 ммоля, 0,33 мл). Через 5 мин все компоненты растворялись, и прозрачный раствор желтого цвета перемешивали при комнатной температуре в течение 48 ч. Полученный раствор темно-коричневого цвета разбавляли этилацетатом (30 мл). Слой этилацетата последовательно промывали 1н. хлористоводородной кислотой (2×30 мл), насыщенным раствором бикарбоната натрия (30 мл), солевым раствором (30 мл) и сушили над безводным сульфатом магния. После отделения осушителя фильтрованием и концентрирования получали неочищенный продукт, который очищали хроматографией на силикагеле с использованием колонки Biotage (40m), при этом получали 380 мг (выход 98%) метилового эфира N-[(2-хлор-6-метилфенил)карбонил]-4-(1,3-диэтил-6-метил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина в виде аморфного твердого вещества белого цвета. МС-ВР (ES): m/e рассч. для С27Н30ClN3O5 (M+Na) 535,1026, найд. 535,1024.

б) Получение N-[(2-хлор-6-метилфенил)карбонил]-4-(1,3-диэтил-6-метил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина

К суспензии метилового эфира N-[(2-хлор-6-метилфенил)карбонил]-4-(1,3-диэтил-6-метил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина (0,82 ммоля, 420 мг) в этаноле (2 мл) при комнатной температуре добавляли 1,0н. водный раствор гидроксида натрия (1,6 мл). Смесь нагревали до 50°С и полученный прозрачный раствор перемешивали в течение 2 ч. Этанол удаляли при пониженном давлении и остаток разбавляли водой (25 мл) и NaOH (3 мл, 1,0н.) для растворения соли натрия. Водный раствор промывали диэтиловым эфиром (30 мл) для удаления нейтральных примесей, подкисляли 1,0н. HCl и полученный продукт экстрагировали этилацетатом (2×25 мл). Объединенные органические экстракты промывали солевым раствором (50 мл) и сушили над безводным сульфатом магния. После отделения осушителя фильтрованием и концентрирования фильтрата получали 277 мг (выход 68%) N-[(2-хлор-6-метилфенил)карбонил]-4-(1,3-диэтил-6-метил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина в виде аморфного твердого вещества белого цвета. МС-ВР (ES): m/e рассч. для С26Н28ClN3O5 (M+Na) 520,1611, найд. 520,1616.

Пример 20

Получение 4-(1,3-диэтил-6-метил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-N-[[1-(2-метоксиэтил)циклопентил]карбонил]-L-фенилаланина

4-(1,3-диэтил-6-метил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-N-[[1-(2-метоксиэтил)циклопентил]карбонил]-L-фенилаланин получали из метилового эфира 4-(1,3-диэтил-6-метил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина и 1-(2-метоксиэтил)циклопентанкарбоновой кислоты с использованием общих методов, описанных в примере 19, в виде аморфного твердого вещества белого цвета. МС-ВР (ES): m/e рассч. для C27H37N3O6 (M+Na) 522,2575, найд. 522,2581.

Пример 21

N-[1-(2,6-дихлорфенил)карбонил]-4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-6-(трифторметил)-5-пиримидинил)-L-фенилаланина

а) Получение 3-метил-6-(трнфторметил)урацила

К предварительно приготовленному раствору метоксида натрия (55 ммолей, 2,97 г) и этилового эфира 3-амино-4,4,4-трифторкротоновой кислоты (55 ммолей, 10,0 г) в ДМСО (19 мл, осушенный на молекулярных ситах) при температуре 20°С в течение 15 мин добавляли метилизоцианат (55 ммолей, 3,2 г) в ДМСО (2,5 мл)). Раствор перемешивали в течение 15 мин и затем добавляли вторую порцию метоксида натрия (27,5 ммоля, 1,34 г). После перемешивания при температуре 20°С в течение 15 мин добавляли метилизоцианат (14 ммолей, 0,8 г) при указанной температуре. Через 15 мин реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. Полученную суспензию желтого цвета выливали в воду (50 мл), при этом получали раствор светло-желтого цвета. Нейтральные примеси экстрагировали диэтиловым эфиром (3×50 мл). Водный слой подкисляли концентрированной хлористоводородной кислотой, при этом получали твердое вещество белого цвета. Твердый продукт отделяли фильтрованием и промывали водой. После высушивания на воздухе получали 6,79 г (выход 63%) 3-метил-6-(трифторметил)урацила в виде твердого вещества белого цвета, tпл.235-237°C. MC-BP (EI): m/e рассч. для С6Н5F3N2O2 (М+) 194,0303, найд. 194,0303.

б) Получение 1,3-диметил-6-(трифторметил)урацила

К суспензии 3-метил-6-(трифторметил)урацила (20,6 ммоля, 4,0 г) и порошкообразного карбоната калия (41,2 ммоля, 5,7 г) в DME (30 мл) добавляли метилиодид (82,4 ммоля, 5,13 мл). Затем реакционную смесь кипятили с обратным холодильником в течение 4 ч, после чего данные ТСХ реакционной смеси указывали на отсутствие исходного материала. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и разбавляли водой (50 мл). Затем удаляли DME при пониженном давлении, при этом получали суспензию белого цвета. Твердое вещество отделяли фильтрованием и промывали водой. После высушивания на воздухе получали 3,55 г (выход 83%) 1,3-диметил-6-(трифторметил)урацила в виде твердого вещества белого цвета, tпл. 85-87°С. МС-ВР (EI): m/e рассч. для С7H7F3N2O2 (М+) 208,0459, найд. 208,0460.

в) Получение 1,3-диметил-5-иод-6-(трифторметил)урацила

Смесь 1,3-диметил-6-(трифторметил)урацила (16,91 ммоля, 3,52 г), трифторуксусной кислоты (20 мл) и трифторуксусного ангидрида (5 мл) кипятили с обратным холодильником в течение 5 мин. Затем добавляли NIS (16,91 ммоля, 3,8 г) и полученную смесь перемешивали в течение 15 ч, после чего данные ТСХ реакционной смеси указывали на присутствие в реакционной смеси некоторого количества исходного материала. Затем добавляли вторую порцию NIS (8,45 ммоля, 1,9 г) и смесь кипятили с обратным холодильником в течение 5 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и медленно выливали в насыщенный раствор карбоната калия (100 мл). Затем добавляли раствор тиосульфита натрия для удаления избыточного иода. Полученное твердое вещество отделяли фильтрованием и промывали водой. После высушивания на воздухе получали 3,73 г (выход 66%) 1,3-диметил-5-иод-6-(трифторметил)урацила в виде твердого вещества белого цвета, tпл. 149-151°С. МС-ВР (EI): m/e рассч. для С7Н6F3IN2O2 (M+) 333,9426, найд. 333,9436.

г) Получение метилового эфира N-[(1,1-диметилэтокси)карбонил]-4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-6-(трифторметил)-5-пиримидинил)-L-фенилаланина

К суспензии цинковой пыли (33 ммоля, 1,96 г) в ТГФ (3 мл) при комнатной температуре добавляли 1,2-дибромэтан (3 ммоля, 0,261 мл). Полученную суспензию нагревали при 60-65°С феном до прекращения выделения газообразного этилена. Суспензию охлаждали до комнатной температуры, добавляли триметилхлорсилан (1,5 ммоля, 0,19 мл) и полученную смесь перемешивали в течение 15 мин. Суспензию 1,3-диметил-5-иод-6-(трифторметил)урацила (10 ммолей, 3,34 г) в ДМА (8 мл) нагревали до получения прозрачного раствора и одной порцией добавляли к реакционной смеси. После добавления смесь нагревали до 70°С. За счет экзотермической реакции температура реакционной смеси повышалась до 75°С. Реакционную смесь перемешивали при 70°С в течение приблизительно 3 ч, после чего данные ТСХ аликвотной части смеси, в которой реакцию останавливали добавлением насыщенного раствора хлорида аммония, указывали на отсутствии исходного материала. Реакционную смесь разбавляли ТГФ (5 мл), охлаждали до комнатной температуры и выдерживали до осаждения избытка цинковой пыли.

Полученный, как описано выше, раствор соединения цинка (10 ммолей) добавляли при комнатной температуре к раствору Pd(dba)2 (1,0 ммоля, 520 мг), трифурилфосфина (TFP) (4,0 ммоля, 0,93 г) и метилового эфира N-[(1,1-диметилэтокси)карбонил]-4-иод-L-фенилаланина (7 ммолей, 2,84 г) в ТГФ (10 мл) и полученную смесь светло-желтого цвета перемешивали при 45°С в течение 12 ч. Затем реакционную смесь выливали в насыщенный раствор хлорида аммония (100 мл) и экстрагировали этилацетатом (3×75 мл).

Объединенные экстракты промывали солевым раствором (150 мл) и сушили над безводным сульфатом магния. После отделения осушителя фильтрованием и концентрирования получали неочищенный продукт, который очищали хроматографией на силикагеле с использованием колонки Biotage (40m), при этом получали 1,45 г (выход 42%) метилового эфира N-[(1,1-диметилэтокси)карбонил]-4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-6-(трифторметил)-5-пиримидинил)-L-фенилаланина в виде аморфного твердого вещества белого цвета. МС-ВР (ES): m/e рассч. для C22H26NF3N3O6 (M+Na) 508,1666, найд. 508,1670.

д) Получение гидрохлорида метилового эфира 4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-6-(трифторметил)-5-пиримидинил)-L-фенилаланина

Метиловый эфир N-[(1,1-диметилэтокси)карбонил]-4-(1,3-диметил-6)-2,4-диоксо-6-(трифторметил)-5-пиримидинил)-L-фенилаланина (2,92 ммоля, 1,42 г) в виде твердого вещества обрабатывали при комнатной температуре 4н. раствором хлористоводородной кислоты в диоксане (28 ммолей, 7 мл) и полученный раствор перемешивали в течение 2 ч. Реакционную смесь разбавляли дихлорметаном (5 мл) и концентрировали при пониженном давлении на роторном испарителе. Остаток разбавляли диэтиловым эфиром до образования твердого вещества светло-коричневого цвета. Твердое вещество отделяли фильтрованием и промывали диэтиловым эфиром. После высушивакия получали 1,21 г (выход 91%) гидрохлорида метилового эфира 4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-6-(трифторметил)-5-пиримидинил)-L-фенилаланина в виде твердого вещества светло-коричневого цвета, tпл.244-247°С. МС-ВР (ES): m/e рассч. для C17H18F3N3O4. (M+H) 386,1322, найд. 386,1319.

е) Получение метилового эфира N-[(2,6-дихлорфенил)карбонил]-4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-6-(трифторметил)-5-пиримидинил)-L-фенилаланина

К суспензии гидрохлорида метилового эфира 4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-6-(трифторметил)-пиримидинил-L-фенилаланина (1,0 ммоля, 421 мг) и 2,6-дихлорбензоилхлорида (1,1 ммоля, 0,235 г) в дихлорметане (3 мл) при комнатной температуре добавляли диизопропилэтиламин (4,4 ммоля, 0,622 мл). Через 1 мин все компоненты растворялись, и раствор светло-коричневого цвета перемешивали при комнатной температуре в течение 72 ч. Затем полученный раствор темно-коричневого цвета разбавляли дихлорметаном (25 мл). Слой дихлорметана последовательно промывали 1н. хлористоводородной кислотой (2×25 мл), насыщенным раствором бикарбоната натрия (25 мл), солевым раствором (25 мл) и сушили над безводным сульфатом магния. После отделения осушителя фильтрованием и концентрирования растворителя получали неочищенный продукт, который очищали хроматографией на силикагеле с использованием колонки Biotage (40s), при этом получали 0,541 г (выход 97%) метилового эфира N-[1-(2,6-дихлорфенил)карбонил]-4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-6-(трифторметил)-5-пиримидинил)-L-фенилаланина в виде аморфного твердого вещества белого цвета. МС-ВР (ES): m/e рассч. для C24H20Cl2F3N3O5 (M+Na) 580,0624, найд. 580,0629.

ж) Получение N-[(2,6-дихлорфенил)карбонил]-4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-6-(трифторметил)-5-пиримидинил)-L-фенилаланина

К суспензии метилового эфира N-[1-(2,6-дихлорфенил)карбонил]-4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-6-(трифторметил)-5-пиримидинил)-L-фенилаланина (0,422 ммоля, 0,236 г) в пиридине (15 мл) при комнатной температуре добавляли иодид лития (4,22 ммоля, 0,571 г) и реакционную смесь кипятили с обратным холодильником в течение 15 ч. Затем реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли 1н. HCl и экстрагировали этилацетатом (2×25 мл). Объединенные органические экстракты промывали солевым раствором (50 мл) и сушили над безводным сульфатом магния. После отделения осушителя фильтрованием и концентрирования фильтрата получали 201 мг (выход 87%) N-[1-(2,6-дихлорфенил)карбонил]-4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-6-(трифторметил)-5-пиримидинил)-L-фенилаланина в виде твердого вещества светло-желтого цвета, tпл. 125-128°С. МС-ВР (ES): m/e рассч. для С23Н18Cl2F3N3O5 (M+Na) 566,0469, найд. 566,0468.

Пример 22

Получение N-[(2-хлор-6-метилфенил)карбонил]-4-[1,3-диметил-2.4-диоксо-6-(трифторметил)-5-пиримидинил]-L-фенилаланина

Раствор 2-хлор-6-метилбензойной кислоты (190 мг, 1,14 ммоля) в дихлорметане (7 мл), содержащем ДМФ (4 капли), обрабатывали оксалилхлоридом (0,42 мл, 4,8 ммоля) и смесь перемешивали в течение 2 ч. Затем смесь концентрировали кипячением азеотропной смеси с толуолом для удаления следов оксалилхлорида и остаток непосредственно использовали на следующей стадии.

Смесь полученного, как описано выше, хлорангидрида (2-хлор-6-метилбензойной кислоты) и гидрохлорида метилового эфира 4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-6-(трифторметил)-5-пиримидинил)-L-фенилаланина (423 мг, 1,003 ммоля) в дихлорметане (5 мл) обрабатывали DIPEA (0,625 мл, 4,46 ммоля) и полученный раствор светло-коричневого цвета перемешивали в течение 3 сут. Смесь концентрировали, разбавляли этилацетатом, промывали 1н. HCl, солевым раствором и сушили над безводным сульфатом магния. После фильтрования и упаривания получали остаток, который очищали хроматографией на силикагеле с использованием колонки Biotage (40s), при этом получали метиловый эфир N-[(2-хлор-6-метилфенил)карбонил]-4-[1,3-диметил-2,4-диоксо-6-(трифторметил)-5-пиримидинил]-L-фенилаланина в виде пены белого цвета (179 мг, 33%). МС-ВР (ES): m/e рассч. для С25Н23ClN3O5 (M+Na) 560,1171, найд. 560,1172.

Раствор метилового эфира N-[(2-хлор-6-метилфенил)карбонил]-4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-6-(трифторметил)-5-пиримидинил)-L-фенилаланина (260 мг, 0,48 ммоля), полученный, как описано выше, и иодида лития (6534 мг, 4,8 ммоля) в пиридине (14 мл) кипятили с обратным холодильником в течение ночи. Смесь разбавляли 1н. HCl и экстрагировали этилацетатом. Объединенные экстракты промывали солевым раствором, сушили над безводным сульфатом магния, фильтровали и упаривали. Остаток растирали с эфиром, гексаном и дихлорметаном, при этом получали N-[(2-хлор-6-метилфенил) карбонил]-4-[1,3-диметил-2,4-диоксо-6-(трифторметил)-5-пиримидинил]-L-фенилаланин (205 мг, выход 81%) в виде твердого вещества белого цвета, tпл.243-247°C. МС-ВР (ES): m/e рассч. для С24Н21ClF3N3O5 (M+Na) 546,1014, найд. 546,1013.

Пример 23

Получение N-[[2-фтор-6-(трифторметил)фенил]карбонил]-4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-6-(трифторметил)-5-пиримидинил)-L-фенилаланина

Раствор 2-фтор-6-трифторметилбензойной кислоты (125 мг, 0,60 ммоля) (фирма Aldrich 33080-9) в дихлорметане (3 мл), содержащем ДМФ (2 капли), обрабатывали оксалилхлоридом (0,21 мл, 2,4 ммоля) и смесь перемешивали в течение 2 ч. Затем смесь концентрировали кипячением азеотропной смеси с толуолом для удаления следов оксалилхлорида и остаток непосредственно использовали на следующей стадии.

Смесь полученного, как описано выше, хлорангидрида (2-фтор-6-трифторметил-бензойной кислоты) и гидрохлорида метилового эфира 4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-6-(трифторметил)-5-пиримидинил)-L-фенилаланина (210 мг, 0,50 ммоля) в дихлорметане (3 мл) обрабатывали DIPEA (0,336 мл, 2,4 ммоля) и полученный раствор светло-коричневого цвета перемешивали в течение 3 сут. Смесь концентрировали, разбавляли этилацетатом, промывали 1н. HCl, солевым раствором и сушили над сульфатом магния. После фильтрования и упаривания получали остаток, который очищали хроматографией на силикагеле с использованием колонки Biotage (40s), при этом получали метиловый эфир N-[[2-фтор-6-(трифторметил)фенил]карбонил]-4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-6-(трифторметил)-5-пиримидинил)-L-фенилаланина в виде пены белого цвета (179 мг, 62%). МС-ВР (ES): m/e рассч. для C25H20F7N3O5 (M+Na) 598,1183, найд. 598,1186.

Раствор метилового эфира N-[[2-фтор-6-(трифторметил)фенил] карбонил]-4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-6-(трифторметил)-5-пиримидинил)-L-фенилаланина (266 мг, 0,46 ммоля), полученный, как описано выше, и иодида лития (624 мг, 4,6 ммоля) в пиридине (14 мл) кипятили с обратным холодильником в течение ночи. Смесь разбавляли 1н. HCl и экстрагировали этилацетатом. Объединенные экстракты промывали солевым раствором, сушили над сульфатом магния, фильтровали и упаривали. Остаток растирали с эфиром и дихлорметаном, при этом получали N-[[2-фтор-6-(трифторметил)фенил]карбонил]-4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-6-(трифторметил)-5-пиримидинил)-L-фенилаланин (167 мг, 64%) в виде твердого вещества белого цвета, tпл.122-125°С. МС-ВР (ES): m/e рассч. для C24H18F7N3O5 (M+Na) 584,1027, найд. 584,1028.

Пример 24

Получение N-[(2-хлор-6-метилфенил)карбонил]-4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-3-метил-L-фенилаланина

а) Получение 4-[(1,1-диметилэтокси)карбонил]амино-3-метилбензилового спирта

Смесь 4-нитро-3-метилбензилового спирта (56,53 ммоля, 9,45 г), ди-трет-бутилкарбоната (63 ммоля, 13,74 г) и палладия на угле (450 мг) в этилацетате (240 мл) гидрогенизировали при комнатной температуре в течение 2 ч. Затем реакционную смесь фильтровали через слой целита и промывали этилацетатом (50 мл). Фильтрат концентрировали в вакууме, при этом получали 10,18 г (выход 76%) 4-[(1,1-днметилэтокси)карбонил]амино-3-метилбензилового спирта в виде твердого вещества светло-желтого цвета. МС-ВР (EI): m/e рассч. для С13Н19NO3 (М+) 237,0126, найд. 237,0129.

б) Получение 4-[[(1,1-диметилэтокси)карбонил]амино]-3-метилбензальдегнда

К раствору 4-[(1,1-диметилэтокси)карбонил]амино-3-метилбензилового спирта (42,9 ммоля, 10,18 г) в дихлорметане (85 мл) при комнатной температуре добавляли диоксид марганца (138 ммолей, 12 г) и молекулярные сита 4А (6 г). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 76 ч и фильтровали через слой целита с последующим промыванием дихлорметаном. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, остаток очищали хроматографией на силикагеле с использованием колонки Biotage (40m), при этом получали 7,82 г (выход 77%) 4-[[(1,1-диметилэтокси)карбонил]амино]-3-метилбензальдегида в виде твердого вещества белого цвета, tпл.109-111°С. МС-ВР (EI): m/e рассч, для C13H17NO3 (M+) 235,1208, найд. 235,1207.

в) Получение метилового эфира N-(бензилоксикарбонил)-4-[[(1,1-диметилэтокси)карбонил]амино]-3-метилдегидрофенилаланина

К раствору триметилового-эфира N-(бензилоксикарбонил)-α-фосфоноглицина (18 ммолей, 5,96 г) (фирма Aldrich Chemical Company) в дихлорметане (30 мл) при комнатной температуре добавляли тетраметилгуанидин (18 ммолей, 2,07 г), реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч и охлаждали до -30°С. Затем одной порцией добавляли раствор 4-[[(1,1-диметилэтокси)карбонил]амино]-3-метилбензальдегида (15 ммолей, 3,52 г) в дихлорметане (12,5 мл). Смесь выдерживали при указанной температуре в течение 30 мин, нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 15 ч. Затем реакционную смесь разбавляли диэтиловым эфиром (100 мл) и последовательно промывали 0,5 н. хлористоводородной кислотой (2×50 мл), насыщенным раствором бикарбоната натрия (100 мл), солевым раствором (100 мл) и сушили над безводным сульфатом магния. После отделения осушителя фильтрованием и концентрирования получали неочищенный продукт, который очищали хроматографией на силикагеле с использованием колонки Biotage (40m), при этом получали 3,87 г (выход 58%) метилового эфира N-(бензилоксикарбонил)-4-[[(1,1-диметилэтокси)карбонил]амино]-3-метилдегидрофенилаланина в виде твердого вещества белого цвета. МС-ВР (EI): m/e рассч. для C24H28N2O6 (M+) 440,1527. найд. 440,1524.

г) Получение метилового эфира N-(бензилоксикарбонил)-4-[[(1,1-диметилэтокси)карбонил]амино]-3-метил-L-фенилаланина

Через раствор метилового эфира N-(бензилоксикарбонил)-4-[[(1,1-диметил-зтокси)карбонил]амино]-3-метилдегидрофенилаланина (8,08 ммоля. 3,56 г) в метаноле (25 мл), помещенного в сосуд Парра высокого давления, пропускали аргон в течение ночи. Затем в атмосфере аргона, в камере с перчатками добавляли катализатор трифторметансульфонат (+)-1,2-бис((25,5S)-2,5-диметилфосфолано)бензол(циклооктадиен)родия (I) [[Rh(COD)(S,S)(me)DuPHOS]+TfO-] (˜40 мг). Раствор перемешивали в атмосфере водорода при давлении 60 фунт/кв.дюйм при комнатной температуре в течение 22 ч. Полученный раствор концентрировали и неочищенный продукт очищали хроматографией на силикагеле с использованием колонки Biotage (40m), при этом получали 2 г (выход 55%) метилового эфира N-(бензилоксикарбонил)-4-[[(1,1-диметилэтокси)карбонил]амино]-3-метил-L-фенилаланина в виде аморфного твердого вещества белого цвета. МС-ВР (EI): m/e рассч. для C24H30N2O6 (M+) 442,1627, найд. 442,1629.

д) Получение гидрохлорида метилового эфира N-(бензилоксикарбонил)-4-амино-3-метил-L-фенилаланина

К раствору метилового эфира N-(бензилоксикарбонил)-4-[(1,1-диметилэтокси)карбонил]амино-3-метил-L-фенилаланина (4,52 ммоля, 2 г) в диоксане (12 мл) при комнатной температуре добавляли 4 н. хлористоводородную кислоту в диоксане (48 ммолей, 2 мл) и раствор перемешивали в течение приблизительно 2 ч, при этом выпадал осадок белого цвета. Твердое вещество суспендировали в диэтиловом эфире, маточный раствор отделяли декантацией, остаток сушили сначала на роторном испарителе, а затем в высоком вакууме, при этом получали 1,487 г (выход 87%) гидрохлорида метилового эфира N-(бензилоксикарбонил)-4-амино-3-метил-L-фенилаланина в виде аморфного твердого вещества желтого цвета. МС-ВР (FAB): m/e рассч. для C19H22N2O4 (M+H) 343,0142, найд. 343,0144.

е) Получение метилового эфира N-(бензилоксикарбонил)-4-иод-3-метил-L-фенилаланина

Суспензию серной кислоты (0,3 мл), воды (36 мл) и гидрохлорида метилового эфира N-(бензилоксикарбонил)-4-амино-3-метил-L-фенилаланина (2,9 ммоля, 1,1 г) нагревали до получения прозрачного раствора. Затем раствор охлаждали до -1°С (ледяная баня) и по каплям добавляли раствор нитрита натрия (5,8 ммоля, 400 мг) в воде (8 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин и добавляли раствор иодида натрия (8,7 ммоля, 1,5 г) в воде (6 мл), при этом получали суспензию коричневого цвета. После перемешивания в течение 30 мин реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 1 ч. Затем реакционную смесь разбавляли водой (100 мл) и экстрагировали этилацетатом (3×50 мл). Объединенные экстракты промывали насыщенным раствором бисульфита натрия (100 мл) и солевым раствором (100 мл), сушили над безводным сульфатом магния. После отделения осушителя фильтрованием и концентрирования получали неочищенный продукт, который очищали хроматографией на силикагеле с использованием колонки Biotage (40m), при этом получали 0,84 г (выход 64%) метилового эфира N-(бензилоксикарбонил)-4-иод-3-метил-L-фенилаланина в виде аморфного твердого вещества белого цвета. МС-ВР (ES): m/e рассч. для C19H20INO4 (M+Na) 476,0329, найд. 476,0336.

ж) Получение метилового эфира N-(бензилоксикарбонил)-4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-3-метил-L-фенилаланина

К суспензии цинковой пыли (15 ммолей, 0,98 г) в ТГФ (1,5 мл) при комнатной температуре добавляли 1,2-дибромэтан (1 ммоль, 0,13 мл). Полученную суспензию нагревали при 60-65°С феном до прекращения выделения газообразного этилена. Затем суспензию охлаждали до комнатной температуры, добавляли триметилхлорсилан (0,5 ммоля, 70 мкл) и полученную смесь перемешивали в течение 15 мин. Суспензию 5-иод-1,3-диметилурацила (2,5 ммоля, 665 мг) в ДМА (2 мл) нагревали до получения прозрачного раствора и одной порцией добавляли к реакционной смеси. После добавления реагента смесь нагревали до 70°С и перемешивали при 70°С в течение приблизительно 3 ч, после чего данные ТСХ аликвотной части смеси, в которой реакцию останавливали добавлением насыщенного раствора хлорида аммония, указывали на отсутствие исходного материала. Смесь разбавляли ТГФ (2 мл), охлаждали до комнатной температуры и выдерживали до осаждения избытка цинковой пыли.

Полученный, как описано выше, раствор соединения цинка (2,5 ммоля) добавляли при комнатной температуре к раствору Pd(dba)2 (0,05 ммоля, 27 мг), трифурилфосфина (TFP) (0,2 ммоля, 50 мг) и метилового эфира N-(бензилоксикарбонил)-4-иод-3-метил-L-фенилаланина (0,5 ммоля, 227 мг) в ТГФ (2 мл) и полученную смесь светло-желтого цвета перемешивали при 45°С в течение 15 ч. Затем реакционную смесь выливали в насыщенный раствор хлорида аммония и экстрагировали этилацетатом (3×30 мл). Объединенные экстракты промывали солевым раствором (50 мл) и сушили над безводным сульфатом магния. После отделения осушителя фильтрованием и концентрирования получали неочищенный продукт, который очищали хроматографией на силикагеле с использованием колонки Biotage (40m), при этом получали 161 мг (выход 69%) метилового эфира N-(бензилоксикарбонил)-4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-3-метил-L-фенилаланина в виде аморфного твердого вещества белого цвета. МС-ВР (ES): m/e рассч. для С25Н27N3O6 (M+Na) 488,1792, найд. 488,1801.

з) Получение метилового эфира 4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-3-метил-L-фенилаланина

Смесь метилового эфира N-(бензилоксикарбонил)-4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-3-метил-L-фенилаланина (0,34 ммоля, 159 мг), циклогексена (1 мл) и 10% палладия на угле (100 мг) в этаноле (3 мл) кипятили с обратным холодильником в течение 20 мин. Затем смесь фильтровали через слой целита и слой промывали этанолом (10 мл). Объединенный фильтрат концентрировали, остаток сушили в высоком вакууме, при этом получали 96 мг (выход 85%) метилового эфира 4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-3-метил-L-фенилаланина виде твердого липкого вещества желтого цвета.

МС-ВР (ES): m/e рассч. для C17H21N3O4 (M+Na) 354,1424, найд. 354,1424.

и) Получение метилового эфира N-[(2-хлор-6-метилфенил)карбонил]-4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-3-метил-L-фенилаланина

К суспензии метилового эфира 4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-3-метил-L-фенилаланина (0,125 ммоля, 46 мг), HBTU (0,125 ммоля, 47,5 мг) и 2-хлор-6-метилбензойной кислоты (0,137 ммоля, 25 мг) в ДМФ (2 мл) при комнатной температуре добавляли диизопропилэтиламин (0,312 ммоля, 44 мкл). Через 5 мин все исходные компоненты растворялись, и прозрачный раствор желтого цвета перемешивали при комнатной температуре в течение 72 ч. Полученный раствор темно-коричневого цвета разбавляли этилацетатом (30 мл). Слой этилацетата последовательно промывали 1н. хлористоводородной кислотой (2×30 мл), насыщенным раствором бикарбоната натрия (30 мл) и солевым раствором (30 мл), сушили над безводным сульфатом магния.

После отделения осушителя фильтрованием и концентрирования растворителя получали неочищенный продукт, который очищали хроматографией на силикагеле с использованием колонки Biotage (40s), при этом получали 42 мг (выход 70%) метилового эфира N-[(2-хлор-6-метилфенил)карбонил]-4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-3-метил-L-фенилаланина в виде маслянистого остатка. МС-ВР (ES): m/e рассч. для С25Н26ClN3O5 (M+Na) 506,1454, найд. 506,1459.

к) Получение N-[(2-хлор-6-метилфенил)карбонил]-4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-3-метил-L-фенилаланина

К суспензии метилового эфира N-[(2-хлор-6-метилфенил)карбонил]-4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-3-метил-L-фенилаланина (0,083 ммоля, 40 мг) в этаноле (1 мл) при комнатной температуре добавляли 1,0н. водный раствор гидроксида натрия (0,2 мл) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Затем этанол удаляли при пониженном давлении, остаток разбавляли водой (5 мл). Водный раствор промывали диэтиловым эфиром (20 мл) для удаления нейтральных примесей. Водный слой подкисляли 1,0н. HCl и продукт экстрагировали этилацетатом (2×25 мл). Объединенные органические экстракты промывали солевым раствором (50 мл) и сушили над безводным сульфатом магния. После отделения осушителя фильтрованием и концентрирования фильтрата получали 34 мг (выход 87%) N-[(2-хлор-6-метилфенил)карбонил]-4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-3-метил-L-фенилаланина в виде аморфного твердого вещества белого цвета. МГ-ВР (ES): m/e рассч. для C24H24ClN3O5 (M+Na) 492,1295, найд. 492,1301.

Пример 25

Получение N-[(2,6-дихлорфенил)карбонил]-4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-3-метил-L-фенилаланина

а) Получение метилового эфира N-[(2,6-дихлорфенил)карбонил]-4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-3-метил-L-фенилаланина

К суспензии метилового эфира 4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-3-метил-L-фенилаланина (0,128 ммоля, 47 мг) и 2,6-дихлорбензоилхлорида (0,153 ммоля, 32 мг) в дихлорметане (1 мл) при комнатной температуре добавляли диизопропилэтиламин (0,45 ммоля, 77 мкл). Через 5 мин исходные компоненты растворялись, и прозрачный раствор желтого цвета перемешивали при комнатной температуре в течение 15 ч. Полученный раствор коричневого цвета разбавляли дихлорметаном (25 мл). Слой дихлорметана последовательно промывали 1н. хлористоводородной кислотой (2×25 мл), насыщенным раствором бикарбоната натрия (25 мл), солевым раствором (25 мл) и сушили над безводным сульфатом магния. После отделения осушителя фильтрованием и концентрирования получали неочищенный продукт, который очищали хроматографией на силикагеле с использованием колонки Biotage (40m), при этом получали 52 мг (выход 81%) метилового эфира N-[(2,6-дихлорфенил)карбонил]-4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-3-метил-L-фенилаланина в виде аморфного твердого вещества белого цвета. МС-ВР (ES): m/e рассч. для C24H23Cl2N3O5 (M+Na) 526,0907, найд. 526,0912.

б) Получение N-[(2,6-дихлорфенил)карбонил]-4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-3-метил-L-фенилаланина

К суспензии метилового эфира N-[(2,6-дихлорфенил)карбонил]-4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-3-метил-L-фенилаланина (0,1 ммоля, 59 мг) в этаноле (1 мл) при комнатной температуре добавляли 1,0н. водный раствор гидроксида натрия (0,2 мл) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Этанол удаляли при пониженном давлении, остаток разбавляли водой (10 мл). Водный раствор промывали диэтиловым эфиром (20 мл) для удаления нейтральных примесей. Водный слой подкисляли 1,0н. HCl и продукт экстрагировали этилацетатом (2×15 мл). Объединенные органические экстракты промывали солевым раствором (50 мл) и сушили над безводным сульфатом магния. После отделения осушителя фильтрованием и концентрирования фильтрата получали 20 мг (выход 41%) N-[(2,6-дихлорфенил)карбонил]-4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-3-метил-L-фенилаланина в виде аморфного твердого вещества белого цвета. МС-ВР (ES): m/e рассч. для С23H21Cl2N3O5 (M+Na) 512,0752, найд. 512,0754.

Пример 26

Получение N-[(2,6-дихлорфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-3-метил-L-фенилаланина

а) Получение метилового эфира N-(бензилоксикарбонил)-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-3-метил-L-фенилаланина

К суспензии цинковой пыли (15 ммолей, 0,98 г) в ТГФ (1,5 мл) при комнатной температуре добавляли 1,2-дибромэтан (1 ммоль, 0,13 мл). Полученную суспензию нагревали при температуре 60-65°С феном до прекращения выделения газообразного этилена. Затем суспензию охлаждали до комнатной температуры, добавляли триметилхлорсилан (0,5 ммоля, 70 мкл) и смесь перемешивали в течение 15 мин. Суспензию 5-иод-1,3,6-триметилурацила (2,5 ммоля, 700 мг) в ДМА (2 мл) нагревали до получения прозрачного раствора и одной порцией добавляли к реакционной смеси. Затем реакционную смесь перемешивали при 70°С в течение 3-4 ч, после чего данные ТСХ аликвотной части смеси, в которой реакцию останавливали добавлением насыщенного раствора хлорида аммония, указывали на отсутствие исходного материала. Реакционную смесь разбавляли ТГФ (3 мл) и выдерживали до осаждения избытка цинковой пыли.

Полученный, как описано выше, раствор соединения цинка (2,5 ммоля) добавляли при комнатной температуре к раствору Pd(dba)2 (0,05 ммоля, 27 мг), трифурилфосфина (TFP) (0,2 ммоля, 50 мг) и метилового эфира N-(бензилоксикарбонил)-4-иод-3-метил-L-фенилаланина (0,5 ммоля, 227 мг) в ТГФ (2 мл) и полученную смесь светло-желтого цвета перемешивали при 45°С в течение 15 ч. Затем реакционную смесь выливали в насыщенный раствор хлорида аммония и экстрагировали этилацетатом (3×30 мл). Объединенные экстракты промывали солевым раствором (50 мл) и сушили над безводным сульфатом магния. После отделения осушителя фильтрованием и концентрирования получали неочищенный продукт, который очищали хроматографией на силикагеле с использованием колонки Biotage (40m), при этом получали 71 мг (выход 30%) метилового эфира N-(бензилоксикарбонил)-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-3-метил-L-фенилаланина в виде масла желтого цвета. МС-ВР (ES): m/e рассч. для С26Н29N3О6 (M+Na) 502,2173, найд. 502,2174.

б) Получение метилового эфира 4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-3-метил-L-фенилаланина

Смесь метилового эфира N-(бензилоксикарбонил)-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-3-метил-L-фенилаланина (0,145 ммоля, 70 мг), циклогексена (1 мл) и 10% палладия на угле (100 мг) в этаноле (2 мл) кипятили с обратным холодильником в течение 15 ч. Затем смесь фильтровали через слой целита и слой промывали этанолом (10 мл). Объединенный фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток сушили в высоком вакууме, при этом получали 36 мг (выход 72%) метилового эфира 4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-3-метил-L-фенилаланина в виде твердого вещества светло-желтого цвета. МС-ВР (ES): m/e рассч. для C18H23N3O4 (M+Na) 368,1327, найд. 368,1321.

в) Получение метилового эфира N-[(2,6-дихлорфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-3-метил-L-фенилаланина

К суспензии метилового эфира 4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-3-метил-L-фенилаланина (0,089 ммоля, 34 мг) и 2,6-дихлорбензоилхлорида (0,1 ммоля, 21 мг) в дихлорметане (2 мл) при комнатной температуре добавляли диизопропилэтиламин (0,4 ммоля, 77 мкл). Через 5 мин исходные компоненты растворялись, и прозрачный раствор желтого цвета перемешивали при комнатной температуре в течение 15 ч. Полученный раствор коричневого цвета разбавляли дихлорметаном (25 мл). Слой дихлорметана последовательно промывали 1н. хлористоводородной кислотой (2×25 мл), насыщенным раствором бикарбоната натрия (25 мл), солевым раствором (25 мл) и сушили над безводным сульфатом магния. После отделения осушителя фильтрованием и концентрирования растворителя получали неочищенный продукт, который очищали хроматографией на силикагеле с использованием колонки Biotage (40m), при этом получали 22 мг (выход 48%) метилового эфира N-[(2,6-дихлорфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-3-метил-L-фенилаланина в виде вязкого масла. МС-ВР (ES): m/e рассч. для C25H25Cl2N3O5 (M+Na) 541,1065, найд. 541,1063.

г) Получение N-[(2,6-дихлорфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-3-метил-L-фенилаланина

К суспензии метилового эфира N-[(2,6-дихлорфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-3-метил-L-фенилаланина (0,04 ммоля, 22 мг) в этаноле (2 мл) при комнатной температуре добавляли 1,0н. водный раствор гидроксида натрия (0,5 мл) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Этанол удаляли при пониженном давлении, остаток разбавляли водой (10 мл). Водный раствор промывали диэтиловым эфиром (20 мл) для удаления нейтральных примесей. Водный слой подкисляли 1,0н. HCl и продукт экстрагировали этилацетатом (2×15 мл). Объединенные органические экстракты промывали солевым раствором (50 мл) и сушили над безводным сульфатом магния. После отделения осушителя фильтрованием и концентрирования фильтрата получали 20 мг (выход 93%) N-[(2,6-дихлорфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-3-метил-L-фенилаланина в виде аморфного твердого вещества белого цвета. МС-ВР (ES): m/e рассч. для С23Н21Cl2N3O5 [(M-H)+2Na)] 548,0725, найд. 548,0733.

Пример 27

Получение этилового эфира N-[(2,6-дихлорфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина

К суспензии N-[(2,6-дихлорфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина (0,6 ммоля, 300 мг) и бикарбоната натрия (3,6 ммоля, 302 мг) в ДМФ (4 мл) при комнатной температуре добавляли иодэтан (3,6 ммоля, 0,29 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 72 ч, затем выливали в воду (50 мл) и экстрагировали этилацетатом (3×20 мл). Объединенные экстракты промывали солевым раствором (60 мл) и сушили над безводным сульфатом магния. После отделения осушителя фильтрованием и концентрирования фильтрата получали неочищенный продукт, который очищали хроматографией на силикагеле с использованием колонки Biotage (40m), при этом получали 155 мг (выход 50%) этилового эфира N-[(2,6-дихлорфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина в виде кристаллического твердого вещества белого цвета, tпл.262-265°С. МС-ВР (ES): m/e рассч. для C25H25Cl2N3O5 (M+Na) 540,1062, найд. 540,1049.

Пример 28

Получение 2-[(N,N-диэтил)амино]этилового эфира N-[(2,6-дихлорфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина

Смесь N-[(2,6-дихлорфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина (320 мг, 0,65 ммоля), гидрохлорида 2-[(N,N-диэтил)амино]этилхлорида (579 мг, 3,26 ммоля) и карбоната калия (451 мг, 3,27 ммоля) в этилацетате (5 мл) и воде (5 мл) выдерживали при комнатной температуре в течение ночи. Слои разделяли и водный слой экстрагировали этилацетатом. Объединенные экстракты промывали солевым раствором, сушили над сульфатом магния и концентрировали, при этом получали 2-[(N,N-диэтил)амино]этиловый эфир N-[(2,6-дихлорфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина (190 мг, выход 49%) в виде аморфного твердого вещества белого цвета. МС-ВР (ES): m/e рассч. для C29H34Cl2N4O5 (М+Н) 589,1978, найд. 589,1980.

При подкислении водного слоя получали N-[(2,6-дихлорфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланин (167 мг).

Пример 29

Получение 2-[(N,N-диэтил)амино]этилового эфира N-[(2-хлор-6-метилфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина

2-[(N,N-диэтил)амино]этиловый эфир N-[(2-хлор-6-метилфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина получали из N-[(2,6-дихлорфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина и гидрохлорида 2-[(N,N-диэтил)амино]этилхлорида с использованием общего метода, описанного в примере 28, в виде аморфного твердого вещества белого цвета. МС-ВР (ES): m/e рассч. для С30Н31ClN4O5 (М+Н) 569,2525, найд. 569,2530.

Пример 30

Получение этилового эфира N-[(2-хлор-6-метилфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина

Этиловый эфир N-[(2-хлор-6-метилфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина получали из N-[(2-хлор-6-метилфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина и иодэтана с использованием общего метода, описанного в примере 27, в виде аморфного твердого вещества белого цвета. МС-ВР (ES): m/e рассч. для C26H28ClN3O5 (M+Na) 520,1610, найд. 520,1591.

Пример 31

Получение 2-(4-морфолино)этилового эфира N-[(2,6-дихлорфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина

а) Получение N-[(1,1-диметилэтокси)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина

К суспензии метилового эфира N-[(1,1-диметилэтокси)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина (8,8 ммоля, 3,79 г) в этаноле (20 мл) при комнатной температуре добавляли 1,0н. водный раствор гидроксида натрия (17,57 мл) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Затем смесь разбавляли водой (50 мл) и этанол удаляли при пониженном давлении. Водный раствор промывали диэтиловым эфиром (100 мл) для удаления нейтральных примесей. Водный слой подкисляли 1,0н. HCl и продукт экстрагировали этилацетатом (2×100 мл). Объединенные органические экстракты промывали солевым раствором (200 мл) и сушили над безводным сульфатом магния. После отделения осушителя фильтрованием и концентрирования фильтрата получали 3,44 г (выход 94%) N-[(1,1-диметилэтокси)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина в виде твердой пены светло-коричневого цвета. МС-ВР (ES): m/e рассч. для C21H27N3O6 (M+Na) 440,1792, найд. 440,1792.

б) Получение 2-(4-морфолино)этилового эфира N-[(1,1-диметилэтокси)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина

К раствору N-[(1,1-диметилэтокси)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина (1,21 ммоля, 505 мг) и 2-(4-морфолино)этанола (2,42 ммоля, 318 мг) в ТГФ (8 мл) при комнатной температуре добавляли диизопропилкарбодиимид (DIC) (1,82 ммоля, 0,287 мл) и 4-диметиламинопиридин (0,6 ммоля, 74 мг). Полученный раствор перемешивали в течение 72 ч. Затем реакционную смесь выливали в воду (50 мл) и экстрагировали этилацетатом (3×50 мл). Объединенные экстракты промывали водой (2×50 мл) и солевым раствором (100 мл) и сушили над безводным сульфатом магния. После отделения осушителя фильтрованием и концентрирования фильтрата получали неочищенный продукт, который очищали хроматографией на силикагеле с использованием колонки Biotage (40m), при этом получали 428 мг (выход 67%) 2-(4-морфолино)этилового эфира N-[(1,1-диметилэтокси)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина в виде аморфного твердого вещества белого цвета: МС-ВР (ES) m/e рассч. для C27H38N4O7 (M+Na) 553,2633, найд. 553,2636.

в) Получение гидрохлорида 2-(4-морфолино)этилового эфира 4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина

2-(4-Морфолино)этиловый эфир N-[(1,1-диметилэтокси)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина (1,6 ммоля, 0,85 г) в виде твердого вещества обрабатывали 4н. хлористоводородной кислотой в диоксане (16,02 ммоля, 4 мл) при комнатной температуре и раствор перемешивали в течение 3 ч до появления осадка белого цвета. Твердое вещество суспендировали в диэтиловом эфире, маточный раствор отделяли декантацией, остаток сначала высушивали на роторном испарителе, а затем и в высоком вакууме, при этом получали 0,75 г (выход 99%) гидрохлорида 2-(4-морфолино)этилового эфира 4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина в виде аморфного твердого вещества желтого цвета. МС-ВР (ES): m/e рассч. для C22H30N4O5 (M+H) 431,2289, найд. 431,2292.

г) Получение 2-(4-морфолино)этилового эфира N-[(2,6-дихлорфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина

К суспензии гидрохлорида 2-(4-морфолино)этилового эфира 4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина (0,85 ммоля, 399 мг) и 2,6-дихлорбензоилхлорида (0,95 ммоля, 0,201 г) в дихлорметане (4 мл) при комнатной температуре добавляли диизопропилэтиламин (4,75 ммоля, 0,66 мл). Через 5 мин исходные компоненты растворялись, и прозрачный раствор желтого цвета перемешивали при комнатной температуре в течение 48 ч. Полученный раствор светло-коричневого цвета разбавляли дихлорметаном (50 мл). Слой дихлорметана последовательно промывали 1н. хлористоводородной кислотой (2×50 мл), насыщенным раствором бикарбоната натрия (50 мл), солевым раствором (50 мл) и сушили над безводным сульфатом магния. После отделения осушителя фильтрованием и концентрирования получали неочищенный продукт, который очищали хроматографией на силикагеле с использованием колонки Biotage (40m), при этом получали 0,427 мг (выход 75%) 2-(4-морфолино)этилового эфира N-[(2,6-дихлорфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина в виде твердого вещества белого цвета, tпл.90-94°С. МС-ВР (ES): m/e рассч. для С29H32Cl2N4O6 (М+Н) 603,1772, найд. 603,1782.

Пример 32

Получение 2-(4-морфолино)этилового эфира N-[(2-хлор-6-метилфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина

2-(4-морфолино)этиловый эфир N-[(2-хлор-6-метилфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина получали из 2-(4-морфолино)этилового эфира 4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина и 2-хлор-6-метилбензоилхлорида с использованием общих методов, описанных в примере 31, в виде аморфного твердого вещества белого цвета. МС-ВР (ES): m/e рассч. для С30Н35ClN4O6 (М+Н) 583,2318, найд. 583,2326.

Пример 33

Получение 1-(ацетокси)этилового эфира N-[(2,6-дихлорфенил)-карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина

а) Получение 1-(ацетокси)этилового эфира N-[(1,1-диметилэтокси)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина

К суспензии N-[(1,1-диметилэтокси)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина (1,006 ммоля, 420 мг) и бикарбоната натрия (5,03 ммоля, 422 мг) в ДМФ (8 мл) при комнатной температуре добавляли 1-хлорэтилацетат (5,03 ммоля, 616 мг) и реакционную смесь перемешивали в течение 48 ч. Затем смесь выливали в воду (50 мл) и экстрагировали этилацетатом (3×50 мл). Объединенные экстракты промывали водой (2×50 мл), солевым раствором (100 мл) и сушили над безводным сульфатом магния. После отделения осушителя фильтрованием и концентрирования фильтрата получали неочищенный продукт, который очищали хроматографией на силикагеле с использованием колонки Biotage (40s), при этом получали 390 мг (выход 77%) 1-(ацетокси)этилового эфира N-[(1,1-диметилэтокси)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина в виде аморфного твердого вещества белого цвета: МС-ВР (ES): m/e рассч. для С25Н33N3O8 (M+Na) 526,2160, найд. 526,2143.

б) Получение гидрохлорида 1-(ацетокси)этилового эфира 4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина

1-(Ацетокси)этиловый эфир N-[(1,1-диметилэтокси)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина (1,4 ммоля, 0,705 г) в виде твердого вещества обрабатывали 4н. хлористоводородной кислотой в диоксане (20 ммолей, 5 мл) при комнатной температуре и раствор перемешивали в течение 2 ч до появления осадка белого цвета. Смесь разбавляли диэтиловым эфиром и дихлорметаном, твердое вещество отделяли фильтрованием и промывали диэтиловым эфиром. После высушивания на воздухе получали 0,63 г (выход 99%) гидрохлорида 1-(ацетокси)этилового эфира 4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина в виде аморфного твердого вещества серого цвета. МС-ВР (ES): m/e рассч. для C20H26N3O6 (М+Н) 404,1816, найд. 404,1818.

в) Получение 1-(ацетокси)этилового эфира N-[(2,6-дихлорфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина

К суспензии гидрохлорида 1-(ацетокси)этилового эфира 4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина (0,723 ммоля, 399 мг) и 2,6-дихлорбензоилхлорида (0,8 ммоля, 0,17 г) в дихлорметане (5 мл) при комнатной температуре добавляли диизопропилэтиламин (3,2 ммоля, 0,45 мл). Через 5 мин исходные компоненты растворялись, и прозрачный раствор желтого цвета перемешивали при комнатной температуре в течение 48 ч. Полученный раствор светло-коричневого цвета разбавляли дихлорметаном (50 мл). Слой дихлорметана последовательно промывали 1н. хлористоводородной кислотой (2×50 мл), насыщенным раствором бикарбоната натрия (50 мл), солевым раствором (50 мл) и сушили над безводным сульфатом магния. После отделения осушителя фильтрованием и концентрирования растворителя получали неочищенный продукт, который очищали хроматографией на силикагеле с использованием колонки Biotage (40s), при этом получали 0,312 г (выход 67%) 1-(ацетокси)этилового эфира N-[(2,6-дихлорфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина в виде твердого вещества белого цвета, tпл.168-170°С. МС-ВР (ES): m/e рассч. для С27Н27Cl2N3O7 (M+Na) 598,1118, найд. 598,1122.

Пример 34

Получение 1-(ацетокси)этилового эфира N-[(2-хлор-6-метилфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина

1-(ацетокси)этиловый эфир N-[(2-хлор-6-метилфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина получали из 1-(ацетокси)-этилового эфира 4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина и 2-хлор-6-метилбензоилхлорида с использованием общих методов, описанных в примере 33, в виде твердого вещества белого цвета, tпл.84-88°C. МС-ВР (ES) m/e рассч. для С28Н30ClN3O7 (M+Na) 578,1664, найд. 578,1665.

Пример 35

Получение L-пролил-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина

а) Получение метилового эфира L-[(1,1-диметилэтокси)карбонил]пролил-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина

К суспензии гидрохлорида метилового эфира 4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина (7 ммоля, 2,57 г), HBTU (8,75 ммоля, 3,32 г) и L-[(1,1-диметилэтокси)карбонил]пролина (8,75 ммоля, 1,88 г) в ДМФ (28 мл) при комнатной температуре добавляли диизопропилэтиламин (21 ммоль, 3,65 мл). Через 2 мин исходные компоненты растворялись, и прозрачный раствор желтого цвета перемешивали при комнатной температуре в течение 48 ч. Полученный раствор темно-коричневого цвета разбавляли этилацетатом (100 мл). Слой этилацетата последовательно промывали 1н. хлористоводородной кислотой (2×50 мл), насыщенным раствором бикарбоната натрия (100 мл), солевым раствором (100 мл) и сушили над безводным сульфатом магния.

После отделения осушителя фильтрованием и концентрирования растворителя получали неочищенный продукт, который очищали хроматографией на силикагеле с использованием колонки Biotage (40m), при этом получали 2,5 г (выход 67%) метилового эфира L-[(1,1-диметилэтокси)карбонил]пролил-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина в виде аморфного твердого вещества белого цвета. МС-ВР (ES): m/e рассч. для C27H36N4O7 (M+Na) 551, 2476, найд. 551, 2476.

б) Получение L-[(1,1-диметилэтокси) карбонил] пролил-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина

К суспензии метилового эфира L-[(1,1-диметилэтокси) карбонил] пролил-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина (1,51 ммоля, 800 мг) в этаноле (8 мл) при комнатной температуре добавляли 1,0н. водный раствор гидроксида натрия (5 мл). Смесь нагревали до 45-50°С и полученный прозрачный раствор перемешивали в течение 3 ч. Этанол удаляли при пониженном давлении, остаток разбавляли водой (25 мл). Водный раствор промывали диэтиловым эфиром (50 мл) для удаления нейтральных примесей. Водный слой подкисляли 1, 0н. HCl и продукт экстрагировали этилацетатом (2×50 мл). Объединенные органические экстракты промывали солевым раствором (50 мл) и сушили над безводным сульфатом магния. После отделения осушителя фильтрованием и концентрирования фильтрата получали 640 мг (выход 83%) L-[(1,1-диметилэтокси)карбонил]пролил-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина в виде аморфного твердого вещества белого цвета. МС-ВР (ES): m/e рассч. для C26H34N4O7 (M+ Na) 537, 2320, найд. 537, 2321.

в) Получение L-пролил-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина

L-[(1,1-Диметилэтокси) карбонил] пролил-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланин (0, 89 ммоля, 462 мг) в виде твердого вещества обрабатывали 4н. хлористоводородной кислотой в диоксане (16 ммоля, 4 мл) при комнатной температуре и раствор перемешивали в течение 3 ч. Затем растворитель удаляли в вакууме, остаток высушивали в высоком вакууме, при этом получали неочищенный продукт, который растирали в дихлорметане, диэтиловом эфире и ацетонитриле, при этом получали 395 мг (выход 99%) гидрохлорида L-пролил-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина в виде аморфного твердого вещества светло-желтого цвета. МС-ВР (ES): m/e рассч. для C21H26N4O5(М+Н) 415, 1976, найд. 415, 1976,

Пример 36

Этиловый эфир N-[(2,6-дифторфенил) карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина

К суспензии N-[(2,6-дифторфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина (0, 743 ммоля, 340 мг) и бикарбоната натрия (5,94 ммоля, 499 мг) в ДМФ (3,8 мл) при комнатной температуре добавляли иодэтан (5,94 ммоля, 0,475 мл) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 48 ч. Затем смесь выливали в воду (100 мл) и экстрагировали этилацетатом (3×25 мл). Объединенные экстракты промывали солевым раствором (80 мл) и сушили над безводным сульфатом натрия. После отделения осушителя фильтрованием и концентрирования фильтрата получали неочищенный продукт, который очищали хроматографией на силикагеле с использованием колонки Biotage (40s), при этом получали 335 мг (выход 93%) этилового эфира N-[(2,6-дифторфенил) карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина виде кристаллического твердого вещества белого цвета, tпл.218-219°C. MC-BP (ES): m/e рассч. для C25H25F2N3O5 (M+Na) 508, 1654, найд. 508, 1660.

Пример 37

Получение 2-[(N,N-диэтил)амино]этилового эфира N-[(2,6-дифторфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина

Смесь N-[(2,6-дифторфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина (1,0 ммоля, 460 мг), гидрохлорида 2-[(N,N-диэтил)амино]этилхлорида (8,05 ммоля, 1,43 г) и карбоната калия (8,05 ммоля, 1,11 г) в этилацетате (5 мл) и воде (5 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Слои разделяли и водный слой экстрагировали этилацетатом (2×40 мл). Объединенные экстракты промывали солевым раствором (50 мл) и сушили над безводным сульфатом натрия. После отделения осушителя фильтрованием и концентрирования фильтрата получали неочищенный продукт, который очищали хроматографией на силикагеле с использованием колонки Biotage (40m), при этом получали 426 мг (выход 76%) 2-[(N,N-диэтил)амино]этилового эфира N-[2,6-дифторфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина виде аморфного твердого вещества белого цвета. МС-ВР (ES): m/е рассч. для С29Н34F2N4O5 (М+Н) 557,2570, найд. 557,2575.

Пример 38

1-(ацетокси)этиловый эфир N-[(2,6-дифторфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина

К суспензии N-[(2,6-дифторфенил)карбонил]-4-(1,3,б-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина (0,743 ммоля, 340 мг) и бикарбоната натрия (5,94 ммоля, 499 мг) в ДМФ (3,0 мл) при комнатной температуре добавляли 1-хлорэтилацетат (5,94 ммоля, 0,73 г) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 48 ч. Затем смесь выливали в воду (50 мл) и экстрагировали этилацетатом (3×25 мл). Объединенные экстракты промывали солевым раствором (80 мл) и сушили над безводным сульфатом натрия. После отделения осушителя фильтрованием и концентрирования фильтрата получали неочищенный продукт, который очищали хроматографией на силикагеле с использованием колонки Biotage (40m), при этом получали 265 мг (выход 66%) 1-(ацетокси)этилового эфира N-[(2,6-дифторфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина в виде аморфного твердого вещества белого цвета. МС-ВР (ES): m/e рассч. для C27H27F2N3O7 (M+Na) 566,1709, найд. 566.1710.

Биологические испытания

Пример А

Анализ по ингибированию связывания VLA-4/VCAM-1

Активность антагониста VLA-4, которую определяли как способность конкурировать за связывание с иммобилизованным VCAM-1, рассчитывали с использованием твердофазного ИФА с двойными антителами ("сэндвич-ИФА"). VLA-4 (интегрин (α4β1), связанный с VCAM-1, идентифицировали в виде комплекса "антитела к интегрину β1: конъюгат пероксидазы хрена с мышиными антителами к IgG: хромогенный субстрат (К-Blue). Сначала на 96-луночные планшеты (фирма Nunc Maxisorp) в качестве "антигена-захвата" наносили рекомбинатный VCAM-1 (0,4 мкг в 100 мкл фосфатно-солевого буферного раствора, ФСБ), затем каждый планшет запечатывали и выдерживали при 4°С в течение приблизительно 18 ч. Планшеты, покрытые VCAM, блокировали 250 мкл 1% БСА/0,02% NaN3 для снижения неспецифического связывания. В день проведения анализа все планшеты дважды промывали буферным раствором для определения VCAM (в лунку вносили по 100 мкл 50 мМ трис-HCl буферного раствора с рН 7,4, 100 мМ NaCl, 1 мМ MnCl2, 0,05% твин 20). Исследуемые соединения растворяли в 100%-ном ДМСО и затем разбавляли 1:20 буферным раствором для определения VCAM, содержащим БСА в концентрации 1 мг/мл (то есть конечная концентрация ДМСО составляла 5%). Затем готовили серию разбавлений 1:4, чтобы диапазон концентраций для каждого тестируемого соединения составлял 0,005 нМ - 1,563 мкМ. В каждую лунку планшета, покрытого VCAM, добавляли по 100 мкл раствора тестируемых соединении при каждом разведении и по 10 мкл VLA-4 из клеток Ramos. Приготовленные планшеты перемешивали на платформе качалки в течение 1 мин, затем инкубировали при 37°С в течение 2 ч и четырежды промывали буферным раствором для определения VCAM (по 200 мкл в каждую лунку). Затем в каждую лунку добавляли по 100 мкл раствора мышиных антител к антителам интегрина β1 человека (0,6 мкг/мл в буферном растворе для определения VCAM+1 мг/мл БСА) и инкубировали при 37°С в течение 1 ч. После завершения указанного инкубационного периода все планшеты четырежды промывали буферным раствором для определения VCAM (по 200 мкл в лунку). Затем в каждую лунку добавляли соответствующее второе антитело, конъюгат пероксидазы хрена с козьими антителами к мышиному IgG (по 100 мкл в лунку, разбавление 1:800 буферным раствором для определения VCAM+1 мг/мл БСА), инкубировали при комнатной температуре в течение 1 ч, после чего трижды промывали буферным раствором для определения VCAM (по 200 мкл в каждую лунку). Развитие окраски инициировали добавлением по 100 мкл в каждую лунку красителя K-Blue (инкубация при комнатной температуре в течение 15 мин), окрашивание останавливали добавлением по 100 мкл в лунку буферного раствора Red Stop. Затем во всех планшетах измеряли поглощение на UV/Vis-спектрофотометре при 650 нм. Полученные результаты рассчитывали в виде % ингибирования максимального связывания (то есть VLA-4+VCAM-1 в отсутствии тестируемого соединения). Результаты представлены в таблице I, где А=IC50<1 нМ, В=IC50<10 нМ.

Таблица I
Пример (№), в котором описано тестируемое соединениеАктивность, определенная анализом связывания VLA-4/VCAM методом ИФА
2А
3В
4А
5А

Пример В

Анализ по адгезии клеток Ramos(VLA-4) на иммобилизованном VCAM-1

Материалы

Растворимый рекомбинантный VCAM-1 человека (смесь 5 и 7 доменов Ig) выделяли из культуральной жидкости клеток СНО методом иммуноаффинной хроматографии и хранили в растворе, содержащем 0,1 М трис-глицин (рН 7,5), 0,1 М NaCl, 5 мМ EDTA. 1 мМ PMSF, 0,02% NaN3 и 10 мкг/мл лейпептнна. Кальцеин-АМ был получен на фирме Molecular Probes Inc.

Методика

Активность антагониста VLA-4 (интегрина α4β1) определяли в виде способности конкурировать с VLA-4 на клеточной поверхности за связывание с иммобилизованным VCAM-1, которую определяли анализом адгезии клеток Ramos на VCAM-1. В клетки Ramos, экспрессирующие на поверхности VLA-4, вводили метку в виде флуоресцентного красителя (кальцеина-АМ) и проводили связывание с VCAM-1 в присутствии или отсутствии тестируемого соединения. Снижение интенсивности флуоресценции (процент ингибирования), связанное с адгезивными клетками, соответствовало конкурентному ингибированию тестируемым соединением клеточной адгезии, опосредованной VLA-4.

Сначала на 96-луночные планшеты (фирма Nunc Maxisorp) в качестве "антигена-захвата" наносили рекомбинатный VCAM-1 человека (100 нг в 100 мкл фосфатно-солевого буферного раствора, ФСБ), затем каждый планшет запечатывали и выдерживали при 4°С в течение приблизительно 18 ч. Планшеты, покрытые VCAM, дважды промывали 0,05% твин-20 в ФСБ и блокировали при комнатной температуре в течение 1 ч добавлением 200 мкл блокирующего буферного раствора (1% БСА/0,02% тимерозаль) для снижения неспецифического связывания. После инкубирования с блокирующим буферным раствором планшеты опрокидывали, промокали и остатки буферного раствора отсасывали. Затем каждый планшет промывали ФСБ (по 300 мкл), опрокидывали и остатки буферного раствора отсасывали.

Тестируемые соединения растворяли в 100% ДМСО и затем делали первое разведение 1:25 в буферном растворе для анализа адгезии клеток на VCAM (4 мМ CaCl2, 4 мМ MgCl2, в 50 мМ трис-HCl, рН 7,5) (конечная концентрация ДМСО составляла 4%). Для каждого соединения готовили серию из восьми разбавлений 1:4 (общий диапазон концентраций составлял 1 нМ - 12500 нМ). В каждую лунку планшета, покрытого VCAM, добавляли по 100 мкл раствора тестируемых соединений при каждом разбавлении, затем добавляли по 100 мкл суспензии клеток Ramos (в каждую лунку по 200000 клеток в 1% БСА/ФСБ). Планшеты, содержащие тестируемые соединения и клетки Ramos, инкубировали при комнатной температуре в течение 45 мин и затем в каждую лунку добавляли по 165 мкл ФСБ. Для удаления неадгезивных клеток планшеты переворачивали, промокали и в каждую лунку добавляли по 300 мкл ФСБ. Планшеты снова переворачивали, промокали и остатки буферного раствора осторожно отсасывали. В каждую лунку добавляли по 100 мкл буферного раствора для лизиса (0,1% SDS в 50 мМ трис-HCl, рН 8,5) и перемешивали на платформе ротационной качалки в течение 2 мин. В планшетах измеряли интенсивность флуоресценции с использованием системы для измерения флуоресценции Cytofluor 2300 (фирма Millipore) (возбуждение при 485 нм, испускание при 530 нм). Результаты представлены в таблице II, где А=IC50<100 нМ, В=IC50<10000 нМ

Таблица II
Пример (№), в котором описано тестируемое соединениеАктивность, определенная анализом адгезии клеток Ramos(VLA-4) на VCAM
2А
3А
4А
5В
6А
7А
8А
9А
10А
11А
12А
13А
14В
15А
16А
17А
18А
19А
20А
21А
22А
23А
24В
25А
26В
27В
28А
29А
30В
31В
32В
33В
34В
35А

Пример С

Анализ связывания α4β7 с MadCAM

За две недели до дня анализа иммунопланшеты высокого связывания F96 Maxisorp фирмы Nunc, #442404 или #439454, покрывали реактивом MadCAM (0,25 мкг/мл) по 25 нг в объеме 100 мкл на лунку. Планшеты покрывали герметичной крышкой, заворачивали в пленку саран и инкубировали в холодильнике в течение по меньшей мере 24 ч. В качестве буферного раствора для нанесения покрытия использовали 10 мМ карбонат/бикарбонатный буферный раствор, содержащий 0,8 г/л карбоната натрия и 1,55 г/л бикарбоната натрия, рН доводили 1н. HCl до 9,6.

Буферные растворы для анализа включают

Буферный раствор для промывки: 0,05% твин 20 в ФСБ

Буферный раствор для блокирования: 1% обезжиренное сухое молоко в ФСБ

Буферный раствор для введения метки: ФСБ

Буферный раствор для клеток: среда RPMI 1640 (без добавок)

Буферный раствор для связывания:

1,5 мМ CaCl2

0,5 мМ MnCl2

50 мМ трис-HCl, NaOH добавляли по каплям до рН 7,5

доводили до необходимого объема водой

доводили до рН 7,5

Буферный раствор для разбавления: 4% ДМСО в буфере для связывания.

Планшеты дважды промывали буферным раствором для промывки и блокировали при комнатной температуре в течение по меньшей мере 1 ч буферным раствором для блокирования. В некоторых случаях запечатанные планшеты блокировали в течение ночи в холодильнике. Затем планшеты промывали ФСБ и промокали вручную досуха. Остатки жидкости из лунок отсасывали.

Из исходной культуральной среды отбирали для анализа достаточное количество клеток RPMI 8866 (2×10 клеток /мл × 10 мл/планшет × число планшетов) и помещали в центрифужную пробирку. В пробирку добавляли ФСБ до определенного объема и центрифугировали при 200g в течение 8 мин. Буферный раствор удаляли, клетки ресуспендировали в ФСБ (10×106/мл) и добавляли исходный раствор кальцеина в ДМСО (5 мг/мл) в количестве 5 мкл/мл клеточной суспензии. Суспензию инкубировали в темноте при 37°С в течение 30 мин. Затем клетки промывали ФСБ и для культивирования при анализе ресуспендировали в буферном растворе для клеток при концентрации 2×106 клеток/мл.

Готовили исходный 25-кратный раствор (25х) тестируемых соединений (первое разбавление 1:25) в 100% ДМСО. Первое разбавление как стандарта, так и тестируемых соединений составляло 1:25 в буферном растворе для связывания, однако остальные серийные разбавления готовили в буферном растворе для разбавления (буфер для связывания/4% ДМСО). Концентрации исходных и разбавленных растворов тестируемых соединений определяли на основании ожидаемой активности.

Для анализа в первый ряд лунок добавляли по 129 мкл буферного раствора для связывания, а в остальные лунки по 100 мкл буферного раствора для разбавления. Аликвоту каждого соединения объемом 5,4 мкл добавляли пипеткой в помеченные лунки, по три повтора для каждого соединения. Затем соединения последовательно разбавляли вдоль планшета (34 мкл+100 мкл=4-кратное разбавление). Для контроля в неспецифичкские фоновые лунки (без клеток и без соединений) добавляли по 100 мкл буфера для разбавления+100 мкл буфера для клеток, а в лунки для определения максимального связывания (без соединения=100% связывание) добавляли по 100 мкл буфера для разбавления + 100 мкл клеток, В каждую лунку, содержащую соединение, добавляли суспензию меченых клеток (2×106 клеток/мл) по 100 мкл в лунку (=2×105 клеток в лунку). Планшеты запечатывали и инкубировали в темноте при комнатной температуре в течение 45 мин. После инкубирования несвязанные клетки удаляли, добавляя по 150 мкл ФСБ в лунку. Затем планшеты опрокидывали, промокали бумажным полотенцем и промывали, осторожно добавляли по 200 мкл ФСБ в лунку и снова промокали. Оставшийся буферный раствор осторожно отсасывали. Наконец, в каждую лунку добавляли по 100 мкл ФСБ.

В планшетах измеряли интенсивность флуоресценции с использованием системы для измерения флуоресценции Cytofluor 2300 (фирма Millipore) (возбуждение при 485 нм, испускание при 530 нм). Величину IC50 для каждого соединения определяли с использованием линейно-регрессионного анализа. Результаты представлены в таблице III.

Таблица III
Пример (№), в котором описано тестируемое соединениеАктивность, определенная анализом связывания клеток RPMI с MadCAM (А=IC50<100 нМ, В=IC50<10000 нМ, С=IC50<5000 нМ):
6А
7А
8А
9А
10В
11С
12А
13В
14С
15В
16В
17В
18А
19В
20В
21В
22В
23В
24В
25В
26В
27В

Пример 39

Соединение представленной выше формулы получено согласно приведенной в описании к настоящей заявке методике и характеризуется следующими физико-химическими константами:

MC (электрораспыление ионизацией) низкое разрешение: MC(-) m/e 438 (M-H), (+) пик 440 (+H), 462 (M+Na),

высокое разрешение ES(+): найдено для (M+H) 440,1452, расч.440,1453.

1. 4-Пиримидинил-N-ацил-L-фенилаланины формулы I

где R1 означает группу формулы Y-1

где R22 и R23 независимо означают водород, низший алкил, низший алкокси, галоген или перфтор-низший алкил, и по меньшей мере один из R22 и R23 не означает водород; a R24 означает водород, низший алкил, низший алкокси; или

R1 означает группу формулы Y-3, которая означает 3-7-членный цикл формулы

где R25 означает группу формулы R26-(CH2)e-, где R26 означает низший алкокси;

Q означает -(CH2)fN(R27)-, -(CH2)f-;

R27 означает Н или низший алкоксикарбонил,

и атомы углерода в цикле являются незамещенными;

е означает целое число от 1 до 4, а

f означает целое число от 1 до 3;

R2 означает водород или низший алкил;

R3 означает водород или низший алкил;

R4 означает водород, низший алкил, галоидзамещенный низший алкил;

R5 означает водород или низший алкил;

R6 означает водород, низший алкил, низший алкилкарбонилокси-низший алкил,

или R6 означает группу формулы Р-3

где R32 означает водород;

R33 означает низший алкил;

R34 означает низший алкил;

h означает целое число от 0 до 2;

g означает целое число от 0 до 2;

сумма h и g равна числу от 1 до 3; или

R6 означает группу формулы Р-4

где R32, g и h, имеют значения, указанные выше;

Q' означает О;

или его фармацевтически приемлемые соли.

2. Соединение по п.1, где

R2 означает водород или низший алкил;

R3 означает водород или низший алкил и

R4 означает водород, низший алкил или перфтор-низший алкил.

3. Соединение по п.1 или 2, где

R2 означает низший алкил;

R3 означает низший алкил и

R4 означает водород, низший алкил или перфтор-низший алкил.

4. Соединение по любому из пп.1-3, где R4 означает водород, низший алкил или перфтор-низший алкил.

5. Соединение по любому из пп.1-3, где R1 означает группу формулы Y-1, где R22 и R23 независимо означают низший алкил или галоген, a R24 означает водород.

6. Соединение по любому из пп.1-3, где R1 означает группу формулы Y-1, где R22 и R23 независимо означают водород или галоген, а R24 означает низший алкокси.

7. Соединение по любому из пп.1-3, где R1 означает группу формулы Y-3, которая является 3-7-членным циклом формулы

где R25 означает группу формулы R26-(CH2)e-, где R26 означает низший алкокси;

Q означает -(CH2)f-, е означает целое число от 1 до 4 и f означает целое число от 1 до 3.

8. Соединение по любому из пп.1-3 формулы I

где R1 имеет значения, указанные в п.1;

R2 означает низший алкил;

R3 означает низший алкил;

R4 означает водород, перфтор-низший алкил или низший алкил;

R5 означает водород или низший алкил; и

R6 означает водород, низший алкил, низший алкилкарбонилокси-низший алкил;

или R6 означает группу формулы Р-3, которая имеет значения, указанные в п.1;

или R6 означает группу формулы Р-4, которая имеет значения, указанные в п.1.

9. Соединение по п.8, где R1 означает группу формулы Y-1

где R22 и R23 независимо означают перфтор-низший алкил, низший алкил или галоген, a R24 означает водород.

10. Соединение по п.9, где R2 и R3 означают низший алкил; R4 означает водород или низший алкил, a R5 и R6 означают водород.

11. Соединение по п.10, которое выбирают из группы:

N-[(2,6-дихлорфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланин,

N-[(2-бром-6-метилфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланин,

N-[(2-хлор-6-метилфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланин,

N-[(2-этил-6-метилфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланин,

N-[[2-(2-метилэтил)-6-метилфенил]карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланин,

N-[(2,6-дифторфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланин,

N-[[2-фтор-6-(трифторметил)фенил]карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланин,

N-[[2,6-ди(2-метилэтил)фенил]карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланин,

N-[(2-хлор-6-этилфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланин,

N-[(2-хлор-6-пропилфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланин,

N-[[2-хлор-6-(2-метилэтил)фенил]карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланин,

N-[(2,6-дихлорфенил)карбонил]-4-(l,3-диэтил-6-метил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланин или

N-[(2-хлор-6-метилфенил)карбонил]-4-(1,3-диэтил-6-метил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланин.

12. Соединение по п.11, которое выбирают из группы:

N-[2-хлор-6-метилфенил)карбонил]-4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланин,

N-[(2-бром-6-метилфенил)карбонил]-4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланин или

N-[(2-бром-5-метоксифенил)карбонил]-4-[1,3-диметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил]-L-фенилаланин.

13. Соединение по п.9, где R2 и R3 означают низший алкил, R4 означает водород или низший алкил, R5 означает водород и R6 означает водород, низший алкилкарбонилокси-низший алкил, низший алкил или R6 означает группу формулы Р-3

где R32 означает водород или низший алкил, R33 означает низший алкил;

R34 означает низший алкил;

h означает целое число от 0 до 2;

g означает целое число от 0 до 2;

сумма h и g равна от 1 до 3; или

R6 означает группу формулы Р-4

где R32;

g и h имеют значения, указанные выше;

Q' означает О.

14. Соединение по п.13, где R6 означает низший алкил.

15. Соединение по п.14, которое означает

этиловый эфир N-[(2,6-дихлорфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина,

этиловый эфир N-[(2-хлор-6-метилфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина, или

этиловый эфир N-[(2,6-дифторфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина.

16. Соединение по п.13, где R6 означает низший алкилкарбонилокси-низший алкил.

17. Соединение по п.16, которое означает

1-(ацетокси)этиловый эфир N-[(2,6-дихлорфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина,

1-(ацетокси)этиловый эфир N-[(2-хлор-6-метилфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина или

1-(ацетокси)этиловый эфир N-[(2,6-дифторфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина.

18.Соединение по п.13, где R6 означает группу формулы Р-3, где R32 означает водород, R33 и R34 означают низший алкил, h равно 1 и g равно 0.

19. Соединение по п.18, которое означает

2-[(N,N-диэтил)амино]этиловый эфир N-[(2,6-дихлорфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина,

2-[(N,N-диэтил)амино]этиловый эфир N-[(2-хлор-6-метилфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина или

2-[(N,N-диэтил)амино]этиловый эфир N-[(2,6-дифторфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина.

20. Соединение по п.13, где R6 означает группу формулы Р-4, где R32 означает водород, h равно 1, g равно 0 и Q' означает О.

21. Соединение по п.20, которое означает

2-(4-морфолино)этиловый эфир N-[(2,6-дихлорфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина или

2-(4-морфолино)этиловый эфир N-[(2-хлор-6-метилфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланина.

22. Соединение по п.9, где R2 и R3 означают низший алкил, R4 означает перфтор-низший алкил, а R5 и R6 означают водород.

23. Соединение по п.22, которое означает

N-[(2,6-дихлорфенил)карбонил]-4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-6-(трифторметил)-5-пиримидинил)-L-фенилаланин,

N-[(2-хлор-6-метилфенил)карбонил]-4-[1,3-диметил-2,4-диоксо-6-(трифторметил)-5-пиримидинил]-L-фенилаланин или

N-[[2-фтор-6-(трифторметил)фенил]карбонил]-4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-6-(трифторметил)-5-пиримидинил)-L-фенилаланин.

24. Соединение по п.9, где R2 и R3 означают низший алкил, R4 означает водород, R5 означает низший алкил, а R6 означает водород.

25. Соединение по п.24, которое означает

N-[(2-хлор-6-метилфенил)карбонил]-4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-3-метил-L-фенилаланин,

N-[(2,6-дихлорфенил)карбонил]-4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-3-метил-L-фенилаланин или

N-[(2,6-дихлорфенил)карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-3-метил-L-фенилаланин.

26. Соединение по п.8, где R1 означает группу формулы Y-3, которая является 3-7-членным циклом формулы

где R25 означает группу формулы R26-(CH2)e-,

где R26 означает низший алкокси;

Q означает -(CH2)f-;

е означает целое число от 1 до 4;

и f означает целое число от 1 до 3.

27. Соединение по п.26, где R2 и R3 означают низший алкил, R4 означает водород или низший алкил, а R5 и R6 означают водород.

28. Соединение по п.27, которое означает

4-(1,3-диметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-N-[[1-(2-метоксиэтил)циклопентил]карбонил]-L-фенилаланин,

N-[[1-(2-метоксиэтил)циклопентил]карбонил]-4-(1,3,6-триметил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-L-фенилаланин или

4-(1,3-диэтил-6-метил-2,4-диоксо-5-пиримидинил)-N-[[1-(2-метоксиэтил)циклопентил]карбонил]-L-фенилаланин.

29. Соединение по п.8, где R2 и R3 означают низший алкил, R4 означает водород, a R5 и R6 означают водород.

30. Соединение по п.29, где R1 означает группу формулы Y-1.

31. Соединение по п.29, где R1 означает группу формулы Y-1, где R22 и R23 независимо означают низший алкил или галоген, a R24 означает водород.

32. Соединение по п.29, где R1 означает группу формулы Y-1, где R22 и R23 независимо означают водород или галоген, a R24 означает низший алкокси.

33. Соединение по п.29, где R1 означает группу формулы Y-3.

34. Соединение по п.33, где R1 означает группу формулы Y-3, где R25 означает группу формулы R26-(CH2)e-, где R26 означает низший алкокси, Q означает -(СН2)f-, е означает целое число от 1 до 4 и f означает целое число от 1 до 3.

35. Соединение по любому из пп.1-34, обладающее свойствами ингибировать связывание VCAM-1 с интегрином VLA-4 (α4β1) или с экспрессирующими VLA-4 клетками, предназначенное для использования в качестве лекарственного средства.

36. Фармацевтическая композиция, обладающая свойствами ингибировать связывание VCAM-1 с интегрином VLA-4 (α4β1) или с экспрессирующими VLA-4 клетками, включающая соединение по любому из пп.1-35 или его фармацевтически приемлемую соль, и фармацевтически приемлемый носитель.

37. Соединение по любому из пп.1-34, обладающее свойствами ингибировать связывание VCAM-1 с интегрином VLA-4 (α4β1) или с экспрессирующими VLA-4 клетками, предназначенное для использования при лечении патологических состояний, опосредованных связыванием VCAM-1 с VLA-4 или с экспрессирующими VLA-4 клетками, прежде всего при лечении ревматоидного артрита, рассеянного склероза, воспаления кишечника и астмы.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к синтетическим биологически активным производным пиримидина, а именно калиевой, натриевой или аммониевой соли 2,4-диоксо-5-(2-гидрокси-3,5-дихлорбензилиден)имино-1,3-пиримидина общей формулы где Х выбран из группы: Na, К, NH4 + .

Изобретение относится к новым производным урацилаформулы [I], обладающим гербицидным действием, гербицидной композиции на их основе и способу подавления роста сорняков.

Изобретение относится к замещенным ациламинофенил-урацилам общей формулы I где n - 0 или 1; А - незамещенный или замещенный алкандиил; Ar - замещенный арил или незамещенный или замещенный гетероциклил с атомом кислорода, Q - группа -О-, R1 - незамещенный или замещенный алкил, R2 - незамещенный или замещенный алкил, R3 - водород, R4 или R5 - независимо друг от друга циано или галоген, R6 - алкилсульфонил; гербицидному средству, содержащему по меньшей мере один замещенный ациламинофенил-урацил и обычные наполнители.

Изобретение относится к усовершенствованному способу получения соединений формулы (I), где каждый из остатков Х и Y независимо друг от друга означает водород, галоген, (С1-С4)-алкил, (С1-С4)-алкоксигруппу или (С1-С4)-алкилтиогруппу, причем каждый из трех последних остатков является незамещенным или замещен одним или несколькими остатками из группы, включающей галоген, (С1-С4)-алкоксигруппу или (С1-С4)-алкилтиогруппу, или означает ди[(С1-С4)алкил]-амино, (С3-С6)-циклоалкил, (С3-С5)-алкенил, (С3-С5)-алкинил, (С3-С5)-алкенилоксигруппу или (С3-С5)-алкинилоксигруппу, в котором соединение формулы (II) или его соли, где Х и Y имеют указанные в формуле (I) значения, подвергают взаимодействию с 1-6 молями фосгена на 1 моль соединения формулы (II) в присутствии 2-3,5 мольных эквивалентов органического аминооснования на моль соединения формулы (II) и в присутствии апротонного органического растворителя при температуре реакции в области от -30 до +60oС.

Изобретение относится к новым производным фенилсульфонилмочевины общей формулы (I), которые обладают гербицидными и регулирующими рост растений свойствами и могут найти применение в сельском хозяйстве.

Изобретение относится к улучшенному способу получения 6-замещенных урацилов общей формулы I, где R = СН3, С6Н5CH2, 2,6-F2С6Н3СН2, которые могут быть использованы в фармацевтической промышленности для получения лекарственных препаратов.

Изобретение относится к новому 6-(3-ацетилфенил)аминоурацилу формулы I, которое обладает иммуностимулирующим и противовирусным действием и может быть использовано при лечении вирусных заболеваний, вызываемых хламидиями, а также заболеваний, вызываемых иммунодефицитом, в частности злокачественных новообразований, а также в ветеринарии.

Изобретение относится к области синтеза и технологии получения 6-метилурацил-5-сульфохлорида, перспективного исходного материала для производства медицинских препаратов и красителей.

Изобретение относится к группе новых индивидуальных соединений общей формулы I где R обозначает циклопропил, циклобутил, циклогексил, фенил, незамещенный или моно- ди- или тризамещенный группой, выбранной из гидрокси, С1-С4 алкила, С1-С4 алкокси, галогена, трифторметила, цианогруппы и аминогруппы; 1-или 2-нафтил, 9-антраценил; 2-антрахинонил, пиризил, незамещенный или замещенный группой, выбранной из 1-C4 алкила, С1-С4 алкокси, цианогруппы и галогена; 2-, 3- или 4-хинолинил, оксиранил, 1-бензотриазолил, 2-бензоксазолил, фуранил, замещенный С1-С4 алкоксикарбонилом; С1-С4 алкилкарбонил или бензоил; R1 обозначает галоген или С1-С4 алкил, R2 и R3 независимо обозначают водород или С1-С4 алкил; Х обозначает атом кислорода и Y обозначает атом кислорода, атом серы или карбонил, или их фармацевтически приемлемым солям, способу их получения и фармацевтической композиции, обладающей антивирусной активностью, содержащей антивирусно-эффективное количество соединения общей формулы I.

Изобретение относится к новым 2,4-диоксо-5-арилиденимино-1,3-пиримидинам общей формулы I, где R независимо выбран из группы: Н, ОН, низший алкоксил, галоген, нитро, ди(низший)алкиламино, n = 1-3, или два близлежащих R вместе бензольным кольцом, к которому они присоединены, при n = 2, 4 образуют бензо, дибензо и при n = 2 образуют 3,4-диоксолановое кольцо.

Изобретение относится к производным арилсульфонамидо-замещенной гидроксамовой кислоты, к способам и новым промежуточным соединениям для их получения, фармацевтическим композициям, включающим вышеуказанные производные, фармацевтическим композициям, включающим селективные ингибиторы ММП2, к применению производных гидроксамовой кислоты в качестве лекарственных средств, способу лечения ММП-, прежде всего ММП2-зависимых заболеваний, прежде всего гиперпролиферативных заболеваний или состояний млекопитающих, связанных с ММП, прежде всего ММП2, к ингибированию с использованием селективных инигибиторов ММП2, прежде всего производных гидроксамовой кислоты формулы I, или фармацевтических композиций, включающих селективные ингибиторы ММП2, прежде всего производные гидроксамовой кислоты формулы I.

Изобретение относится к новым производным триазаспиро[5.5]ундекана формулы (I): где значения радикалов R1-R5 указаны в формуле изобретения, или их четвертичным аммониевым солям, N-оксидам или нетоксичным солям.

Изобретение относится к новым замещенным 2-арил-3-(гетероарил)имидазо[1,2-а]пиримидинам формулы I или к их фармацевтически приемлемым солям, где (a) R 1 выбирают из группы, состоящей из NH2, С 1-5алкиламино, ди-С1-5алкиламино, фенилметиламино; (b) Y выбирают из группы, состоящей из Н, галогена, пиперидина, OR4, SR4, -SO2СН3 , NHR4 и NR4R5, где R4 и R5 выбирают, независимо, из Н, -алкилфенил-С 1-5алкила, прямого или разветвленного алкила, необязательно замещенного С3-5карбоциклом, фенилом или замещенным фенилом, где указанный фенил может быть замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из С1-5алкокси; (с) R 2 представляет от одного до пяти членов, независимо выбранных из группы, включающей Н, галоген, трифторметил; (d) R3 представляет Н, или радикалы R3, взятые вместе, образуют ароматическое кольцо; и (е) Х представляет N или СН.
Изобретение относится к области фармацевтики, а именно к средствам наружного применения для лечения болезней суставов. .
Изобретение относится к области медицины, а именно к препаратам наружного применения для лечения болезней суставов. .

Изобретение относится к новым замещенным индолам формулы I: и/или стереоизомерная форма соединения формулы I и/или физиологически приемлемая соль соединения формулы I, причем R 3 обозначает остаток формулы II, где D обозначает -С(O)-; R7 обозначает Н, или -(С1-С4)-алкил; R8 обозначает а) характерный остаток аминокислоты из группы: фенилаланин или гомофенилаланин, причем фенильный остаток незамещен или замещен галогеном, или b) -(С1-С4)-алкил, где алкил является неразветвленным или разветвленным и b)1) независимо друг от друга одно- или двукратно замещенным остатком пиррол, причем остаток является незамещен или замещен галогеном, b)2) независимо друг от друга одно- или двукратно замещенным остатком -S(O)x-R10, где х является целым числом ноль, 1 или 2, или b)3) независимо друг от друга одно- или двукратно замещенным остатком – N(R10)2; R10 обозначает а) Н, b) -(С1-С6)-алкил, где алкил является незамещенным или от одно- до трехкратно замещенным галогеном, c) фенил, где фенил является незамещенным или от одно- до трехкратно замещенным галогеном, в случае (R10) 2 остатки R10 независимо друг от друга имеют значения а), b), с); Z обозначает а) остаток из группы гетероциклов, включающей бензотиадиазин, пиррол, пиридин, пиримидин, пиразин, имидазол, пиразол, оксазол, изоксазол, тиазол, изотиазол, тетразол, оксадиазолон, триазол, причем гетероциклы являются незамещенными или от одно- до трехкратно замещенными –NH 2,=O, алкоксикарбонилом или аминокарбонилом или b) -C(O)-R 11, где R11 обозначает 1.

Изобретение относится к области фармацевтики и касается твердой лекарственной формы хондроитина сульфата. .

Изобретение относится к органической химии, в частности к производным адамантана общей формулы где m равно 1 или 2; каждый R1 независимо представляет атом водорода; А представляет C(O)NH или NHC(O); Ar представляет группу X представляет связь, атом кислорода или группу СО, (CH 2)1-6, CH=, O(CH2)1-6 , O(СН2)2-6О, O(СН2)2-3 О(СН2)1-3, CR'(OH), NR5 , (CH2)1-6NR5, CONR5 , S(O)n, S(O)nCH2, CH2 S(O)n; n равно 0, 1 или 2; R' представляет атом водорода; один из R2 и R3 представляет галоген, нитро, C1-C6-алкил, и другой из R2 и R3 представляет атом водорода или галогена; либо R4 представляет 3-9-членную насыщенную или ненасыщенную алифатическую гетероциклическую кольцевую систему, содержащую один или два атома азота и необязательно атом кислорода, причем гетероциклическая кольцевая система необязательно замещена одним или более заместителями, независимо выбранными из атомов гидроксила, C1-С6-алкила, C1 -С6-гидроксиалкила, -NR6R7, -(СН2)rNR6R7; либо R4 представляет 3-8-членную насыщенную карбоциклическую кольцевую систему, замещенную одним или более заместителями, независимо выбранными из -NR6R7, -(CH 2)rNR6R7, r равно 1; R 5 представляет атом водорода; R6 и R 7, каждый независимо, представляет атом водорода или C 1-С6-алкильную, или С2-С6 -гидроксиалкильную группу, обладающих антагонистическим действием в отношении R2Х7-рецептора.
Изобретение относится к области медицины и может быть использовано преимущественно при обострении деформирующего остеоартроза (ОА). .
Изобретение относится к медицине, к хирургии и эндоскопии и может быть использовано для проведения эндоскопического гемостаза при осложненных кровотечением хронических гастродуоденальных язвах.
© Патентный поиск, поиск патентов на изобретения - FindPatent.RU 2012-2024
Политика конфиденциальности 1999-12-06 2013-03-23T02:08:38
Наверх