Способ определения оксиметилурацила в крови
Владельцы патента RU 2276360:
Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Башкирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию"(ГОУ ВПО БГМУ РОСЗДРАВА) (RU)
Общество с ограниченной ответственностью Научно-производственное Объединение "БАШБИОМЕД" (ООО НПО "Башбиомед") (RU)
Предлагаемое изобретение относится к медицине, а именно к фармации. Сущность изобретения: проводят экстракцию смесью диметилсульфоксида и воды, взятых в соотношении 3:1 в колбе с обратным холодильником на водяной бане в течение 1 часа, полученный экстракт фильтруют, фильтрат хроматографируют сначала в колонках с оксидом алюминия высотой 5 см и диаметром 0,7 см, затем в тонком слое сорбента в системе растворителей аммиак концентрированный:спирт 96%, взятых в соотношении 1:4, после чего элюат спектрофотометрируют при длине волны 278±2 нм. Количественное содержание оксиметилурацила определяют по формуле где С - концентрация вещества, %, D - оптическая плотность, b - разведение, - удельный показатель поглощения, а - точная навеска, г. Способ позволяет проводить количественное определение оксиметилурацила в крови с целью контроля в процессе лечения.
Предлагаемое изобретение относится к области медицины, а именно к фармации, и может быть использовано для определения фармакокинетики с целью расчета доз, кратности введения, изучения метаболизма, а также для дальнейшего изучения фармакокинетики различных лекарственных форм оксиметилурацила и его сочетания с другими лекарственными препаратами для более эффективного лечения различных заболеваний, таких как острая пневмония затяжного течения, хронический гнойный и гнойно-обструктивный бронхит, абсцессы легкого и ряда других.
Известно количественное определение оксиметилурацила в субстанции методом обратной иодометрии, а также количественное определение оксиметилурацила в субстанции и таблетках (ВФС 42-2729-96). Количественное определение оксиметилурацила в таблетках осуществляется растворением таблеток в воде при негревании с последующим фильтрованием и спектрофотометрическим определением при длине волны 278 нм в кювете с толщиной рабочего слоя 1 см. Однако данные методы неприменимы для определения оксиметилурацила в крови.
Технический результат при использовании изобретения - проведение терапевтического мониторинга, то есть уровня оксиметилурацила в процессе курсовой терапии с целью контроля за поддержанием эффекта и безопасного уровня оксиметилурацила.
Указанный технический результат достигается тем, что проводят экстракцию смесью диметилсульфоксида и воды, взятых в соотношении 3:1 в колбе с обратным холодильником на водяной бане в течение 1 часа, полученный экстракт фильтруют, фильтрат хроматографируют сначала в колонках с оксидом алюминия высотой 5 см и диаметром 0,7 см, затем в тонком слое сорбента в системе растворителей аммиак концентрированный:спирт 96%, взятых в соотношении 1:4, после чего элюат спектрофотометрируют при длине волны 278±2 нм и определяют количественное содержание оксиметилурацила по формуле
С - концентрация вещества, %;
D - оптическая плотность;
b - разведение;
- удельный показатель поглощения;
а - точная навеска, г.
Способ определения оксиметилурацила из крови осуществляется следующим образом. Кровь животного, которому был введен препарат, помещают в сухую химическую круглодонную колбу емкостью 50 см3 в количестве 1 мл и прибавляют 4 мл раствора диметилсульфоксида (ДМСО) в воде (3:1), перемешивают стеклянной палочкой, закрывают обратным холодильником и проводят экстракцию на водяной бане при температуре 80°С в течение 1 часа. Экстракт охлаждают до комнатной температуры, фильтруют через бумажный фильтр "синяя лента" в сухую мерную пробирку, устанавливают объем, который должен быть не менее 4,5 мл. Фильтрат пропускают через подготовленные хроматографические колонки с оксидом алюминия. Для подготовки хроматографических колонок берут полые стеклянные трубки диаметром 0,7 см, высотой 5 см, заполняют окисью алюминия (ГФ X, с.867) и элюируют водой очищенной до получения прозрачного элюата - сравнение с эталоном (ГФ XI, с.198).
Время прохождения фильтрата через колонку составляет 5-6 часов.
В элюате присутствие оксиметилурацила определяют хроматографически в тонком слое сорбента (ГФ X, с. 807). Исследуемый элюат стеклянным капилляром наносят на линию старта хроматографической пластинки марки "Силуфол" и параллельно на линию старта "свидетель" - 0,1% водный раствор стандартного образца (РСО) оксиметилурацила. Пластинку хроматографируют восходящим методом в системе растворителей аммиак концентрированный:спирт 96% (1:4). Пробег фронта растворителя 10 см. После подсушивания на воздухе пластинку рассматривают в ультрафиолетовом свете. На участке с исследуемым раствором наблюдают флюоресцирующие пятна. Пластинку проявляют в парах йода, на участке с исследуемым раствором наблюдаются окрашенные пятна желтого цвета с Rf=0,8; что соответствует Rf РСО оксиметилурацила. Полученный элюат в ультрафиолетовом спектре в области от 200 до 350 нм имеет максимум поглощения при длине волны 278±2 нм в кювете толщиной рабочего слоя 1 см.
Количественное определение оксиметилурацила в элюате проводят спектрофотометрически на спектрофотометре СФ-46 при длине волны 278±2 нм в кювете толщиной рабочего слоя 1 см. Контролем служит элюат плацебо.
Количественное содержание оксиметилурацила в элюате вычисляют по формуле
С - концентрация вещества, %;
D - оптическая плотность;
b - разведение;
- удельный показатель поглощения;
а - точная навеска, г.
Данное изобретение было апробировано на кроликах породы "шиншилла". Опытным животным оксиметилурацил вводился перорально в виде суспензии из расчета 250 мг/кг и был обнаружен в крови через 2 часа после введения в количестве 0,25×10-3 мг/мл. Максимальное количество в крови наблюдается к 5 часу после введения 7 мг/мл. Оксиметилурацил был обнаружен для последующего определения его в крови при различных путях введения, что имеет большое значение для изучения методов лечения различных заболеваний, их коррекции, титрования доз.
Пример 1. Способ определения оксиметилурацила из крови осуществляется следующим образом. Кровь животного, которому был введен препарат, помещают в сухую круглодонную колбу емкостью 50 см3 в количестве 1 мл и прибавляют 4 мл раствора диметилсульфоксида (ДМСО) в воде (3:1), перемешивают стеклянной палочкой, закрывают обратным холодильником и проводят экстракцию на водяной бане при температуре 80°С в течение 30 минут. Экстракт охлаждают до комнатной температуры, фильтруют через бумажный фильтр "синяя лента" в сухую мерную пробирку, устанавливают объем, который должен быть не менее 4,5 мл. Фильтрат пропускают через подготовленные хроматографические колонки с оксидом алюминия. Для подготовки хроматографических колонок берут полые стеклянные трубки диаметром 0,7 см, высотой 5 см, заполняют окисью алюминия (ГФ X, с.867) и элюируют водой очищенной до получения прозрачного элюата - сравнение с эталоном (ГФ XI, с.198).
Время прохождения через колонку составляет 5-6 часов.
В элюате присутствие оксиметилурацила определяют хроматографически в тонком слое сорбента (ГФ X, с. 807). Исследуемый элюат стеклянным капилляром наносят на линию старта хроматографической пластинки марки "Силуфол" и параллельно наносят на линию старта "свидетель" - 0,1% водный раствор стандартного образца (РСО) оксиметилурацила. Пластинку хроматографируют восходящим методом в системе растворителей аммиак концентрированный:спирт 96% (1:4). Пробег растворителя 10 см. После подсушивания на воздухе пластинку рассматривают в ультрафиолетовом свете. На участке с исследуемым раствором флюоресцирующие пятна. Пластинку проявляют в парах йода, на участке с исследуемым раствором наблюдаются окрашенные пятна желтого цвета с Rf=0,8; что соответствует Rf PCO оксиметилурацила. Полученный элюат в ультрафиолетовом спектре в области от 200 до 350 нм имеет максимум поглощения при длине волны 278±2 нм в кювете толщиной рабочего слоя 1 см.
Количественное определение оксиметилурацила в элюате проводят спектрофотометрически на спектрофотометре СФ-46 при длине волны 278±2 нм в кювете толщиной рабочего слоя 1 см. Контролем служит элюат плацебо.
Количественное содержание оксиметилурацила в элюате вычисляют по формуле
С - концентрация вещества, %;
D - оптическая плотность;
b - разведение;
- удельный показатель поглощения;
а - точная навеска, г.
Пример 2. Способ определения оксиметилурацила из крови проводят по методике примера 1. Время экстракции составляет 1 час, что соответствует максимальному содержанию оксиметилурацила в крови.
Пример 3. Способ определения оксиметилурацила из крови проводят по методике примера 1. Время экстракции составляет 1 час 30 минут.
Пример 4. Определение высоты хроматографической колонки проводят следующим образом. Предварительно берут полые стеклянные трубки диаметром 0,7 см и заполняют окисью алюминия (ГФ X, с.867) на высоту 3 см. Элюируют водой очищенной до получения прозрачного элюата в сравнении с эталоном (ГФ XI, с.198). Подготовленные таким образом хроматографические колонки с окисью алюминия заполняют стандартным 0,1% водным раствором стандартного образца (РСО) оксиметилурацила, точную концентрацию которого устанавливают методом обратной йодометрии. В полученном элюате определяют содержание оксиметилурацила. Потеря оксиметилурацила 2%.
Пример 5. Определение высоты колонки определяют по методике примера 4. Высота колонки составляет 5 см, потеря оксиметилурацила 1,5%.
Пример 6. Определение высоты колонки определяют по методике примера 4. Высота колонки составляет 10 см, потеря оксиметилурацила 5%.
Пример 7. Выбор растворителя для экстракции оксиметилурацила из крови осуществляется следующим образом. Точную навеску (около 0,1 г) препарата растворяют в 100 мл воды. Получают 0,1% раствор стандартного образца оксиметилурацила. Спектрофотометрически определяют оптическую плотность полученного РСО на спектрофотометре при длине волны 278 нм в кювете с толщиной рабочего слоя 1 см, оптическая плотность составила 0,64.
Пример 8. Выбор растворителя для экстракции оксиметилурацила из крови определяют по методике примера 7. В качестве растворителя использовали раствор диметилсульфоксида в воде в соотношении 2:1. Оптическая плотность составила 0,75.
Пример 9. Выбор растворителя для экстракции оксиметилурацила из крови определяют по методике примера 7. В качестве растворителя использовали раствор диметилсульфоксида в воде в соотношении 3:1. Оптическая плотность составила 0,96, что соответствует максимальному значению.
Пример 10. Выбор растворителя для экстракции оксиметилурацила из крови определяют по методике примера 7. В качестве растворителя использовали раствор диметилсульфоксида в воде в соотношении 1:2. Оптическая плотность составила 0,68.
Пример 11. Выбор растворителя для экстракции оксиметилурацила из крови определяют по методике примера 7. В качестве растворителя использовали диметилсульфоксид. Оптическая плотность составила 0,85.
Способ определения оксиметилурацила в крови, характеризующийся тем, что проводят экстракцию смесью диметилсульфоксида и воды, взятых в соотношении 3:1, в колбе с обратным холодильником на водяной бане в течение 1 ч, полученный экстракт фильтруют, фильтрат хроматографируют сначала в колонках с оксидом алюминия высотой 5 см и диаметром 0,7 см, затем в тонком слое сорбента системе растворителей аммиак концентрированный: спирт 96%, взятых в соотношении 1:4, после чего элюат спектрофотометрируют при длине волны (278±2) нм и определяют количественное содержание оксиметилурацила по формуле
С - концентрация вещества, %;
D - оптическая плотность;
b - разведение;
- удельный показатель поглощения;
а - точная навеска, г.
