Способ получения биологически активного вещества - селенопирана, селенопиран и продукты, его содержащие

Изобретение относится к области технологии получения биологически активных соединений, используемых при производстве биологически активных добавок к пище (БАД к пище), функциональных продуктов питания, кормовых добавок с целью профилактики селеновой недостаточности у человека и животных. Биологически активное вещество - селенопиран обладает антиоксидантными, детоксицирующими, гиполиподемическими, антиатеросклеротическими, антиатерогенными, иммуномодулирующими, иммунокоррегирующими свойствами и анаболическим эффектом, и получено оно в соответствии со следующим способом. Способ предусматривает приготовление суспензии 9-фенил-симметричного октагидроксантена в ледяной уксусной кислоте. Затем суспензию в инертной атмосфере насыщают в течение 15 минут сначала хлористым водородом, а затем в течение 15 минут смесью газов селеноводорода и хлористого водорода. После этого пропускают в течение 2 часов селеноводород. Оптимальная температура реакционной смеси составляет 20-50°С. Общий расход селеноводорода составляет 2,3-2,6 л. После растворения 9-фенил-симметричного октагидроксантена в реакционную смесь вносят уксусный ангидрид и в течение 30 минут насыщают селеноводородом. Выпавший кристаллический осадок отфильтровывают и перекристаллизовывают из ацетона с фильтрацией горячего раствора через фильтр и получением селенопирана с выходом до 92-96%, чистотой не менее 99,2% и содержанием селена в целевом продукте 23,2-24,0%. Изобретение позволяет создать высокоэффективный способ промышленного получения селенопирана с рядом биологически активных свойств, высоким выходом целевого продукта, а также сократить длительность процесса его производства. 7 н. и 6 з.п. ф-лы, 5 табл.

 

Изобретение относится к области технологии получения биологически активных соединений, используемых при производстве биологически активных добавок к пище (БАД к пище), функциональных продуктов питания, кормовых добавок с целью профилактики селеновой недостаточности у человека и животных.

В настоящее время всеобщее внимание исследователей и клиницистов привлекает микроэлемент селен, который является необходимым элементом для осуществления иммунологических процессов, для нормального функционирования антиоксидантной системы, монооксигеназной системы печени.

В связи с этим селенсодержащие препараты получают все большее распространение. Так в качестве микроэлемента селен вводят в различные витаминно-минеральные комплексы, например "Центрум" (Справочник Видаль. Лекарственные препараты в России. М.: Астрафармсервис, 1997, с.654 - ближайший аналог для витаминно-минерального комплекса).

Известны различные функциональные продукты питания с селеном, например селеносодержащие водоросли (патент РФ № 2096037), хлеб (патент РФ № 2103874), кондитерские изделия (заявка РФ № 2003102630), пиво (патент РФ № 2209237) и дрожжи (патент РФ № 2194523, патент РФ № 2146874), а также селенсодержащие L-аминокислоты - селенометионин или селеноцистеин. Наиболее близким аналогом к заявленному функциональному пищевому продукту является патент РФ № 2103874. Наиболее близким аналогом для заявленной БАД к пище является патент РФ № 2146874.

Однако указанные продукты имеют ряд недостатков. Неорганические соединения селена, например селенит натрия, обладают высокой токсичностью и связанным с этим риском токсических передозировок, а недостатком селенсодержащих водорослей и дрожжей является широкая вариабельность количества поглощенного селена. Отсюда возникают трудности с точным дозированием препарата и мониторингом эффективности профилактики и лечения. Кроме того, селенсодержащие аминокислоты сложны в получении и соответственно дороги.

Из уровня техники известно много способов получения различных соединений селена (авторские свидетельства СССР: № 325843, 963988, 1167184, 1246566, 1816762, патенты РФ: № 2221793 и 2226192).

Например, из авторского свидетельства СССР № 929642 известен способ получения α, α'-дизамещенных производных селенофена, включающий взаимодействие фуранового соединения с селеноводородом при температуре 0-50°С в присутствии кислоты и органического растворителя. В качестве кислоты используют хлорную или соляную кислоту, или газообразный хлористый водород, а в качестве органического растворителя - метиловый или этиловый спирт. Соответствующее фурановое соединение в органическом растворителе помещают в реакционную колбу, снабженную мешалкой, капельной воронкой и газоподводной трубкой, продувают реакционную колбу аргоном в течение часа, насыщают реакционную смесь селеноводородом в течение 45 мин, затем медленно прикапывают раствор кислоты, реакционную смесь перемешивают в токе селеноводорода при 20°С 1 ч, затем нейтрализуют раствором бикарбоната натрия до нейтральной реакции, продукт экстрагируют эфиром, сушат, эфир отгоняют, а остаток перегоняют в вакууме. В случае использования газообразного хлористого водорода его пропускают одновременно с селеноводородом в течение 1,5 ч. Полученный таким образом целевой продукт может применяться в качестве биологически активного соединения.

В авторском свидетельстве СССР № 1051089 описан способ синтеза солей селенопирилия, получаемых при обработке 1,5-дикетонов селеноводородом и хлористым водородом в среде уксусной кислоты в отсутствие водорода. Указывается, что целевые продукты могут представлять интерес в качестве биологически активных веществ или полупродуктов при синтезе лекарственных средств.

Однако на практике имеет место преимущество селенопирана над солями селенопирилия и селенофеном, так как было установлено, что эти соединения не обладают ни антиоксидантными, ни иммуномодулирующими, ни детоксициирующими свойствами, характерными для селенопирана. В связи с этим данные соединения не нашли адекватного применения ни в медицине, ни в ветеринарии, ни в пищевой промышленности.

Наиболее близким к предлагаемому способу является способ получения 9-фенил-симметричного октагидроселеноксантена взаимодействием 9-фенил-симметричного октагидроксантена с селеноводородом и соляной кислотой в смеси ледяной уксусной кислоты и уксусного ангидрида в соотношении 4:1 (патент РФ №2213092).

Недостатком этого способа является длительность процесса, значительный расход дорогостоящего уксусного ангидрида и низкая конверсия селеноводорода из-за ее разложения в присутствии воды, которая содержится в соляной кислоте, при недостаточной кислотности реакционной смеси на стадии насыщения газом.

Кроме того, известные способы получения селенопирана не могут обеспечить производство соединения с широким спектром биологически активных свойств и получение целевого продукта с чистотой не менее 99,2%, а также не могут обеспечить многотоннажное промышленное производство конечного продукта без снижения его качества и выхода, значительных временных и материальных затрат.

Известен противоопухолевый фармацевтический препарат, содержащий селен в виде соединения селенофена (заявка WO 97/46225). В патенте RU №2213092 упоминается возможность получения фармацевтического препарата, предназначенного для регуляции обмена веществ, и который может быть использован для устранения селеновой недостаточности. Данный фармпрепарат является наиболее близким аналогом для заявленного препарата, однако он неэффективен и имеет низкое качество.

Из авторского свидетельства СССР №1526626 известна кормовая добавка для коров, содержащая витамины A, D, Е, сульфаты меди, цинка, кобальта, йодид калия и селенит натрия. Однако ее недостатком является отсутствие стабильного содержания селена в добавке за счет его свободного состояния, а также ограниченное видовое применение.

Наиболее близким аналогом для заявляемой кормовой добавки является кормовая добавка, содержащая селенит натрия (патент RU №2164758). Данная порошкообразная композиция применяется для профилактики селеновой недостаточности у сельскохозяйственных животных и птиц, однако обладает рядом недостатков, а именно низким качеством, недостаточным содержанием селена и наличием побочных эффектов.

Кроме того, не один из вышеприведенных источников информации не решает задачи, поставленной в заявляемом изобретении.

Задачей предлагаемой группы изобретений является создание биологически активного вещества (БАВ) - селенопирана, обладающего набором качественно новых биологически активных свойств, в результате разработки более усовершенствованного и эффективного способа его промышленного получения. Другой задачей является введение полученного селенопирана в ряд продуктов функционального пищевого, кормового и медицинского назначения, которое не сопровождалось бы побочными последствиями, а вызывало бы системный профилактический, а также лечебный эффект.

Учитывая недостатки способов получения соединений селена из предшествующего уровня техники, авторами настоящего изобретения был разработан новый недорогой и эффективный способ. Согласно этому способу получают биологически активное вещество, которое также является предметом заявляемого изобретения. Биологически активное вещество включает низкомолекулярное органическое гетероциклическое селеносодержащее соединение, полученное путем химического синтеза. Полное название 9-фенил-симметричный октагидроселеноксантен или селенопиран с формулой

Поставленная задача настоящего изобретения решается тем, что биологически активное вещество - селенопиран обладает антиоксидантными, детоксицирующими, гиполиподемическими, антиатеросклеротическими, антиатерогенными, иммуномодулирующими, иммунокоррегирующими свойствами и анаболическим эффектом, и получено оно в соответствии со следующим способом. Способ предусматривает приготовление суспензии 9-фенил-симметричного октагидроксантена в ледяной уксусной кислоте, которую затем в инертной атмосфере насыщают в течение 15 минут сначала хлористым водородом, а затем в течение 15 минут смесью газов селеноводорода и хлористого водорода, после этого пропускают в течение 2 часов селеноводород, оптимальная температура реакционной смеси составляет 20-50°С, а общий расход селеноводорода составляет 2,3-2,6 л, после растворения 9-фенил-симметричного октагидроксантена в реакционную смесь вносят уксусный ангидрид и в течение 30 минут насыщают селеноводородом, выпавший кристаллический осадок отфильтровывают и перекристаллизовывают из ацетона с фильтрацией горячего раствора через фильтр и получением селенопирана с выходом до 92-96%, чистотой не менее 99,2% и содержанием селена в целевом продукте 23,2-24,0%.

Дополнительно после фильтрации маточный раствор разбавляют водой, а выпавший при этом осадок экстрагируют эфиром, затем эфирный экстракт сушат и отгоняют растворитель, после этого остаток перекристализовывают из ацетона и объединяют с полученным ранее целевым продуктом.

Биологически активная добавка к пище (БАД к пище) содержит биологически активное вещество - селенопиран, полученное именно заявленным способом, является еще одним объектом настоящего изобретения. БАД к пище может быть выполнена в виде таблеток, порошков, капсул, леденцов, микрокапсул, пилюль, жевательной резинки, драже, водных и масляных растворов.

Функциональный пищевой продукт, например растительное масло, содержит биологически активное вещество - селенопиран, полученное именно заявленным способом, который также является предметом настоящего изобретения. При этом для специалиста в пищевой промышленности должно быть понятно, что селенопиран может быть добавлен с профилактической целью в любой пищевой продукт.

Кроме этого, кормовая добавка содержит биологически активное вещество - селенопиран, полученное именно заявленным способом. Кормовая добавка может быть выполнена в виде гранул, порошков, водных и масляных растворов.

Также витаминно-минеральный комплекс содержит биологически активное вещество - селенопиран, полученное именно заявленным способом. Комплекс может быть выполнен в виде таблеток, порошков, капсул, микрокапсул, драже, леденцов, пилюль, жевательной резинки, водных и масляных растворов.

Еще одним объектом изобретения является фармацевтический препарат для устранения селеновой недостаточности, который содержит биологически активное вещество - селенопиран, полученное именно заявленным способом. Препарат может быть выполнен в виде таблеток, порошков, капсул, микрокапсул, драже, леденцов, пилюль, жевательной резинки, водных и масляных растворов, растворов для внутримышечных инъекций и энтерального питания.

По сравнению с ближайшим аналогом усовершенствование способа состоит в том, что имеет место синергетический эффект, который заключается в том, что увеличивается конверсия селеноводорода за счет замены концентрированной соляной кислоты газообразным хлористым водородом, что, в свою очередь, позволяет снизить расход количества вводимого уксусного ангидрида в 2 раза. Кроме того, поставленная задача достигается путем обработки 9-фенил-симметричного октагидроксантена именно смесью газов селеноводорода и хлористого водорода и введением уксусного ангидрида на конечной стадии синтеза. При таком методе ведения синтеза уменьшается расход селеноводорода на 20-25% и сокращается длительность ведения процесса синтеза на 1-1,5 часа и соответствующие материальные затраты на него. Вместе с тем, неожиданно повышается выход целевого продукта и его качество (чистота), а содержание селена в селенопиране составляет 23,2-24,0%.

Получаемое согласно заявленному способу биологически активное вещество проявляет антиоксидантные свойства in vivo, стимулируя ферментативную и неферментативную системы организма человека и животного.

Получаемое согласно заявленному способу биологически активное вещество проявляет также и иммуномодулирующие свойства, поскольку установлено, что в условиях окислительного стресса селенопиран препятствует снижению количества Т-лимфоцитов и иммуноглобулинов С-, М- и А-классов в организме животных и человека.

Получаемое согласно заявленному способу биологически активное вещество проявляет также и иммунокоррегирующие свойства, поскольку установлено, что после проведения химио- и лучевой терапии восстанавливает количество Т-хелперов и нормализует соотношение Т-хелперов и Т-супрессоров, функционирование фагоцитирующих клеток и количество лейкоцитов крови. При этом у возрастных животных проявляется антиапоптозное действие на клетках тимуса, продлевая срок жизни Т-клеток.

Получаемое согласно заявленному способу биологически активное вещество - селенопиран также обладает и гиполиподемическим действием, снижая количество холестерина атерогенного типа и триглицеридов в сыворотке крови.

Получаемое согласно заявленному способу биологически активное вещество - селенопиран обладает также и антиатеросклеротическим эффектом, снижая очаговые утолщения стенки аорты и ветвей брюшной аорты при развитии атеросклероза.

Получаемое согласно заявленному способу биологически активное вещество - селенопиран также обладает и детоксицирующим эффектом по отношению к соединениям тяжелых металлов.

Кроме того, получаемое согласно заявленному способу биологически активное вещество обладает также анаболическим эффектом, поскольку обеспечивает плавное наращивание мышечной массы и обеспечивает тонус мышц.

Таким образом, в основе настоящего изобретения лежит создание вещества - селенопирана с уникальными свойствами - антиоксидантными,детоксицирующими,гиполиподемическими, антиатеросклеротическими, антиатерогенными, иммунокоррегирующими, иммуномодулирующими и анаболическими, которое может быть использовано как биологически активное начало в различных конечныхпродуктах дляустраненияпризнаковселеновой недостаточности у человека и животного. Такое биологически активноевещество,обладающееодновременновсеми вышеперечисленными свойствами, можно получить только в соответствии с заявленным способом со специально разработанным методом ведения процесса синтеза и подобранными режимами. Только применение в способе заявленных приемов с указанными режимами позволяет получить селенопиран с высокой степенью чистоты в промышленных масштабах с улучшением и расширением его исходных биологических свойств.

Таким образом, все вышеизложенное и является техническим результатом заявленной группы изобретений, поскольку обеспечивает решение поставленной задачи, и в том числе создание высокоэффективного способа промышленного получения селенопирана с рядом биологически активных свойств, высоким выходом целевого продукта и сокращение длительности процесса его производства. Наряду с этим введение полученного селенопирана в ряд продуктов функционального пищевого, кормового и медицинского назначения обеспечивает им системный профилактический, а также лечебный эффект без побочных последствий, что доказано нижеследующими примерами.

Пример 1. Способ получения селенопирана.

Суспензию 15,9 г 9-фенил-симметричного-октагидроксантена в 93,5 мл ледяной уксусной кислоты в инертной атмосфере насыщают 15 минут сначала хлористым водородом со скоростью пропускания 1,5 литра в час, а затем 15 минут смесью газов селеноводорода и хлористого водорода с такой же скоростью. После этого пропускают 2 часа селеноводород. Оптимальная температура реакционной смеси 40°С. После растворения 9-фенил-симметричного-октагидроксантена в реакционную смесь вносят 6,5 мл уксусного ангидрида и 30 мин насыщают селеноводородом. Выпавший обильный кристаллический осадок отфильтровывают и перекристализовывают из ацетона с фильтрацией горячего раствора через фильтр Шотта №4. Перекристаллизация из ацетона требует растворения исходного продукта в ацетоне при его кипячении, затем сразу проводят фильтрацию горячего раствора ацетона для того, чтобы растворенный исходный продукт прошел через фильтр, а нерастворившиеся примеси остались на фильтре.

Получают 16,7 г целевого продукта (85,0%), температура плавления 95-96°С (из ацетона). Содержание селена в препарате 23,2%. Расход селеноводорода составляет 2,3 л. ЯК-спектр содержит полосы поглощения 1660 и 1675 см^-1 характерные для колебания γ-селенопиранового цикла.

Пример 2. Способ получения селенопирана.

Суспензию 15,9 г 9-фенил-симметричного-октагидроксантена в 93,5 мл ледяной уксусной кислоты в инертной атмосфере насыщают 15 минут сначала хлористым водородом со скоростью пропускания 2 литра в час, а затем 15 минут смесью газов селеноводорода и хлористого водорода с такой же скоростью. После этого пропускают 2 часа селеноводород. Оптимальная температура реакционной смеси 30°С. После растворения 9-фенил-симметричного-октагидроксантена в реакционную смесь вносят 6,5 мл уксусного ангидрида и 30 мин насыщают селеноводородом. Выпавший обильный кристаллический осадок отфильтровывают и перекристализовывают из ацетона с фильтрацией горячего раствора через фильтр Шотта №4. Маточный раствор разбавляют 50 мл воды. Выпавший осадок экстрагируют диэтиловым эфиром. Эфирный экстракт сушат и отгоняют растворитель. Остаток перекристализовывают из ацетона и объединяют с полученным целевым продуктом. Получают 96,0% выхода. Содержание селена в препарате 24,0%. Расход селеноводорода составляет 2,6 л. ИК-спектр содержит полосы поглощения 1660 и 1675 см^-1, характерные для колебания γ-селенопиранового цикла.

Пример 3. Антиоксидантные свойства селенопирана.

Для получения данных об антиоксидантных свойствах селенопирана в условиях in vivo авторами проводилось специальное исследование, в котором был смоделирован кормовой стресс у цыплят-бройлеров (таблица 1).

Результаты исследований показали, что при введении в рацион окисленного жира (1 опытная группа) наблюдалось резкое снижение активности ферментов антирадикальной системы защиты (супероксиддисмутазы (СОД) и глутатионпероксидазы (ГПО)), что свидетельствовало о высокой интенсивности протекания свободнорадикальных процессов, высокой концентрации пероксидов и истощении ферментативной системы организма цыплят.

Антиоксидантные свойства селенопирана (вторая опытная группа) способствовали снижению количества свободных радикалов и концентрации пероксидных продуктов.

Таблица 1 Активность ферментов антирадикальной системы защиты организма
Возраст,	Активность ферментов (Е/г белка)
сутки	СОД	ГПО
	контроль	1 опытная	2 опытная	контроль	1 опытная	2 опытная
1	11.3	11,0	11,7	260	263	258
14	18,3	7,0	17,6	359	226	444
28	9,0	6,1	8,3	345	283	655

Таким образом, был доказан антиоксидантный характер селенопирана, обусловленный электродонорными свойствами его молекул, проявляющийся опосредовано через стимуляцию селенсодержащей ГПО.

Пример 4. Функциональный пищевой продукт с селенопираном.

Дополнительные антиоксидантные свойства селенопирана были исследованы также in vitro. Полученный заявленным способом селенопиран в условиях in vitro, например, в составе функционального продукта питания - растительного (подсолнечного) масла ингибирует накопление гидропероксидов органических кислот. При этом дополнительно установлено, что селенопиран оказывает влияние на сам пищевой продукт и препятствует развитию процессов автоокисления жирных кислот, и, следовательно, позволяет удлинить срок хранения масел.

Селенопиран растворяют в растительном масле в концентрации от 0,0005 до 0,001% от массы. Автоокисление проводили в мягких условиях - при комнатной температуре без принудительного пропускания воздуха. Контролем служило растительное масло, например подсолнечное без селенопирана. В первой опытной группе в композицию вносили селенопиран, во второй группе в качестве антиоксиданта использовали витамин Е. Результаты исследований показали, что даже при таких малых концентрациях (0,0005%) селенорганическое соединение существенно тормозит процессы окисления жирных кислот. В контрольной группе перекисное число через 6,5 месяцев достигло 14 ммоль активного кислорода на 1 кг продукта, в то время как в первой опытной - только через 8 месяцев хранения. Витамин Е подобного эффекта не давал.

Пример 5. Иммуномодулирующие и иммунокоррегирующие свойства селенопирана.

Иммунологическими исследованиями на молодняке животных было показано, что во время стресса происходит снижение иммунного статуса организма, характеризующееся уменьшением абсолютного количества Т-лимфоцитов в крови, снижением уровня иммуноглобулинов М- и А-классов, а также бактерицидной активности сыворотки крови и функциональной активности нейтрофилов. Результаты исследований указывают на то, что на Т-клеточную популяцию лимфоцитов влияет химический состав введенного соединения селена. Неорганическая форма - селенит натрия - не оказывала существенного влияния на количественные характеристики Т-клеток, тогда как селенопиран в стрессовой ситуации предотвращал снижение концентрации Т-лимфоцитов в периферической крови молодняка крупного рогатого скота (таблица 2). Аналогичная ситуация наблюдалась при экспериментально вызванном стрессе у поросят и ягнят, независимо от характера стресса - кормовой или ранний отъем молодняка от матерей.

Таблица 2 Содержание Т-лимфоцитов в крови молодняка крупного рогатого скота (тыс/мкл крови)
Сутки эксперимента	контроль	Опытные группы
Первая (селенопиран)	Вторая (селенит натрия)
1	2,53±0,08	2,40±0,11	2,46±0,10
7	2,00±0,12	2,29±0,09	2,15±0,09
18	1,91±0,11	2,42±0,12	2,00±0,15
46	1,95±0,11	2,20±0,13	1,90±0,10

В условиях стресса соединения селена стимулировали синтез иммуноглобулинов М-класса у поросят, ягнят и бычков, а селенопиран (в отличие от селенита натрия) увеличивал также и концентрацию иммуноглобулинов А-класса.

Иммуномодулирующие свойства селенопирана были продемонстрированы в опытах на лабораторных животных. Так кормление мышей в течение 21 дня селенопираном достоверно и дозозависимо повысило число антителообразующих клеток селезенки в ответ на иммунизацию эритроцитами барана. При дозе 200 нг селенопирана в сутки на голову этот показатель составил 120 клеток на 10 млн. клеток селезенки по сравнению с тридцатью в контроле. Достоверное повышение антителообразующих клеток отмечено и в лимфатических узлах.

При вторичном иммунном ответе на Т-зависимый антиген оба препарата также оказали стимулирующий эффект. Число антителообразующих клеток, как в селезенке, так и в лимфатических узлах возрастало дозозависимо.

Иммунокоррегирующие свойства наиболее выражено проявились на старых мышах (возраст самцов 18 месяцев). Количество антителообразующих клеток в селезенке при введении селенопирана в дозе 200 нг/на мышь увеличилось в 10 раз. В лимфатических узлах эффект был менее выражен, чем в селезенке.

Однако было установлено, что при введении селенопирана наблюдалось повышение экспрессии рецептора фактора некроза опухолей на клетках лимфатических узлов и селезенки. Учитывая это, были проведены дополнительные исследования по выявлению взаимосвязей между экспрессией рецепторов фактора некроза опухолей, селенопираном и сигнальными путями апоптоза (программированной гибели клеток).

Известно, что данный рецептор инициирует четыре сигнальных пути, два из которых сцеплены с сигналами апоптоза, а другие проводят активационные стимулы. Апоптоз индуцировали введением рекомбинантного фактора некроза опухоли альфа. Результаты исследований показали, что препарат селена снижает негативное воздействие фактора некроза опухоли на число апоптозных клеток тимуса. Селенопиран снижает количество клеток, вышедших в апоптоз с 14 до 8% при дозе 10 ммоль рекомбинатного фактора некроза опухолей и с 21 до 11% при дозе 20 ммоль.

Таким образом, был сделан вывод, что повышение экспрессии рецептора фактора некроза опухолей связано с активационными процессами и не увеличивает процент клеток, выходящих в апоптоз. Напротив было продемонстрировано антиапоптозное действие селенопирана на клетках тимуса.

Например, БАД к пище - иммуномодулятор представляет собой масляный раствор селенопирана в концентрации 0,1-10 мг селенопирана в одном миллилитре. В качестве растворителя можно использовать оливковое масло.

Пример 6. Гиполиподемическое действие селенопирана.

Гиполиподемическое действие селенопирана доказано клиническими испытаниями биологически активного вещества.

Исследования выполнялись на следующих группах больных:

- контрольная группа - 15 человек, мужчины, перенесшие инфаркт миокарда, в возрасте от 48 до 70 лет, избыточная масса тела у 75% больных,

- опытная группа больных - 25 человек, была аналогичной контрольной по половозрастному составу и клинической симптоматике.

Больные опытной группы получали противоатеросклеротическую диету и дополнительно селенопиран в дозе 420 мкг в сутки. Больные контрольной группы получали аналогичную диету и плацебо.

За период клинических испытаний (30 дней) не было отмечено ни одного случая непереносимости препарата, аллергических реакций и других побочных явлений.

Анализ динамики показателей липидного обмена свидетельствует о явно выраженном гиполиподемическом эффекте. Так, содержание холестерина в сыворотке крови достоверно снижалось на 14% по сравнению с контролем. Наблюдалось также выраженное снижение уровня холестерина ЛПОНП атерогенного типа и триглициридов у больных опытной группы на 38 и 37% соответственно. Отмеченные изменения привели к снижению коэффициента атерогенности на 17% (таблица 3).

Таблица 3 Липидный спектр сыворотки крови под влиянием диеты с включением селенопирана
Показатели	Контрольная группа	Опытная группа
	До	После	До	После
Холестерин, моль/л	6,44±0,32	6,60±0,22	7,01±0,30	6,10±0,29
ХС ЛПВП, ммоль/л	0,96±0,15	1,00±0,06	1,30±0,06	1,25±0,05
ХС ЛПОНП, моль/л	0,99±0,30	1,07±0,16	1,40±0,20	0,88±0,10
ХС ЛПНП, ммоль/л	4,53±0,33	4,30±0,23	4,26±0,27	3,96±0,23
Триглицериды,	2,16±0,49	2,35±0,36	3,11±0,43	1,94±0,23
Коэффициент атерогенности	6,94	4,25	4,57	4,12

БАД к пище может использоваться в качестве средства, обладающего гиполиподемическим эффектом. Например, БАД к пище содержит селенопиран в количестве 0,01-0,1 мас.%, витамин С 10-20 мас.% и витамин Е 1-5 мас.%. Дополнительные компоненты могут усиливать гиполиподемические свойства селенопирана.

При добавлении к селенопирану витаминов и набора макро- и микроэлементов в количествах суточной потребности в 1 таблетке готовят витаминно-минеральный комплекс,

например такой как "Центрум".

Пример 7. Антиатеросклеротический эффект селенопирана.

Антиатеросклеротический эффект селенопирана экспериментально был доказан на лабораторных крысах породы "Вистар". Первая группа служила контролем и получала полусинтетический рацион. Во второй группе использовали модель развития атеросклероза. Инициировали процесс высокожировым окисленным рационом путем введения холестерина (1% от массы корма) и предварительно окисленного подсолнечного масла. Рацион третьей группы был аналогичен второй, однако в жировой компонент вводили селенопиран.

Результаты макро- и микроскопических исследований аорты показали, что при визуальном осмотре аорт в группе, где был смоделирован атеросклероз без селенопирана, во всех образцах отмечалось уплотнение стенки аорты как в брюшном, так и в грудном отделах, а также снижение эластичности стенок сосудов. В этой группе при микроскопическом исследовании во всех образцах были отмечены очаговые утолщения стенки аорты в брюшном отделе и в меньшей степени в грудном, за счет разрастания соединительной ткани. Местами со стороны интимы отмечено наложение фибрина. Во всех образцах обнаружены признаки склероза ветвей брюшного отдела аорты. В целом в этой группе имелись все признаки атеросклероза в стадии формирования фиброзной бляшки.

Включение в рацион селенопирана существенно затормозило процесс развития атеросклероза. При визуальном исследовании в 70% образцов аорт обнаруживались изменения, аналогичные первой опытной группе, но выражены они были менее отчетливо. В 30% - видимых изменений не отмечалось. При микроскопическом исследовании только в брюшном отделе встречались слабо выраженные очаговые утолщения стенки и в 70% образцов умеренно выраженные признаки склероза ветвей брюшной аорты. При этом ни в одном образце не было облитерации их просвета (таблица 4).

БАД к пище может использоваться в качестве средства для профилактики атеросклероза. Биологически активная добавка к пище кроме селенопирана дополнительно может содержать полиненасыщенные жирные кислоты, такие как линолевая и линоленовая в количестве 45-58 мас.%. В качестве источника полиненасыщенных жирных кислот используются масла льна, расторопши пятнистой, облепихи, рыжика, подсолнечника. Концентрация селенопирана находится в пределах от 0,01 до 10 мг в одном миллилитре.

Пример 8. Биологически активная добавка к пище с селенопираном.

Биологически активная добавка к пище содержит 0,01-0,1 мас.% селенопирана, адаптогены растительного происхождения, в частности корни солодки в количестве 10-15 мас.%, порошка жмыха расторопши пятнистой 15-20 мас.%, порошка плодов черной смородины 10-15 мас.%, порошка моркови 20-25 мас %, листьев крапивы и земляники в количестве, обеспечивающих суточную потребность для организма человека в витаминах С, Е и каротина. Используются технологические компоненты для таблетирования. Полученная смесь таблетируется в виде таблеток или капсул и расфасовывается в герметические упаковки. БАД к пище (0,15 г в таблетке) назначают по 2-3 таблетки два раза в день.

Анализ доклинических исследований на лабораторных крысах показал, что заявленная композиция и ее количество достаточно для проявления иммуномодулирующих, адаптогенных и детоксициирующих свойств.

Пример 9. Анаболический эффект селенопирана.

Использование селенопирана в кормлении половозрастных бычков подтвердило анаболический эффект препарата. Селенопиран входил в рацион животных в дозе 0,4-1,2 мг/кг сухого корма. После 6 месяцев эксперимента живая масса опытных бычков превосходила контроль на 6,6% (таблица 5). Было установлено, что масса мясной части туши опытных животных превышала контроль на 4,0%, а площадь мышечного глазка на 12,7%. Анаболический эффект подтверждает химический анализ мышечной ткани. В длиннейшей мышце спины содержание общего белка выше в опытной группе по сравнению с контрольной группой на 8,0%.

Таким образом, использование селенопирана в кормлении животных увеличивает их живую массу за счет увеличения мышечной ткани.

Дополнительно проведенные клинические испытания позволяют утверждать, что селенопиран может быть рекомендован в составе БАД к пище в питании больных в послеоперационный период и спортсменов после операций и травм для восстановления тонуса мышц.

Таблица 5 Результаты контрольного убоя и обвалки туши половозрастных бычков, получавших селенопиран (M±m)
Показатели	Группы	Процент к контролю
Контроль	Опытная
Живая масса, кг	345±2,8	368±5,0	106,6
Масса мяса туши, кг	125±4,3	130±3,3	104,0
Площадь мышечного глазка	67,9±3,3	76,5±3,9	112,7
Содержание белка в мышечной ткани, г %	19,8±0,33	21,4±0,08	108,0

Пример 10. Фармацевтический препарат для устранения селеновой недостаточности.

Масляный раствор селенопирана является эффективным препаратом для коррекции нарушений иммунной системы при различных патологических процессах. Способ стимуляции и коррекции иммунной системы осуществляют следующим образом: полученный препарат в виде масляного раствора (используют смесь масел льна и расторопши пятнистой в равных количествах) вводят перорально. Доза зависит от клинического состояния больного, его возраста и веса. Суточная доза селенопирана составляет 1-120 мкг на 1 кг живой массы. Эффективная терапевтическая суточная доза для больного составляет от 0,05 до 5 мг активного вещества в 10 г смеси масел. Препарат вводят одномоментно или дробно. Длительность лечения может колебаться от 1 до 3 месяцев. В период проведения лечения контролируют иммунологический статус больного по развернутой клинической формуле крови и иммунограмме.

Например, у больной В.В.А. 56 лет была иммунологическая недостаточность, обусловленная опухолевой патологией, после проведения стандартной терапии. При этом иммунограмма показала до лечения: лимфоциты - 1,4×10⁹ на л, Т-хелперы СД 4-40% (0,56×10⁹ на л), СД 8-31% (0,43×10⁹ на л), СД4/СД8=1,3.

Анализ крови: лейкоциты - 3,0×10⁹ на л, базофилы - 1%, эозинофилы - 2%, палочкоядерные нейтрофилы - 6%, сегментоядерные нейтрофилы - 33%, лимфоциты - 46%, моноциты - 12%.

После проведения лечения в течение одного месяца иммунограмма была следующей: Т-хелперы СД4 - 42%, СД8 - 27%, СД4/СД8=1,5.

Анализ крови: лейкоциты - 5,1×10⁹ на л, эозинофилы - 3%, палочкоядерные нейтрофилы - 5%, сегментоядерные нейтрофилы - 72%, лимфоциты - 16%, моноциты - 4%.

Таким образом, четко установлено, что в процессе лечения увеличивается количество Т-хелперов и Т-киллеров и уменьшается количество супрессоров, а также повышается количество лейкоцитов и нормализуется лейкограмма.

С помощью предложенного средства проведено лечение 16 больных, у которых иммунологическая селеновая недостаточность была обусловлена преимущественно инфекционной и опухолевой патологией.

Пример 11. Кормовая добавка с селенопираном.

Обычно в кормовых добавках - премиксах для животных и птиц используется неорганическое соединение селена - селенит натрия. Отличительной особенностью предлагаемого премикса является то, что селенит натрия заменяется селенопираном в тех же дозах в расчете на селен. Селенопиран можно вводить в премиксы для птиц П1-1 - для племенных кур-несушек, П1-2 - для кур-несушек промышленного стада, П5-1 - для цыплят-бройлеров первого возраста, П6-1 - для цыплят-бройлеров второго возраста, КС-1 - для свиней, П51-1 - для поросят до 4-месячного возраста.

Например, опыт был проведен на цыплятах-бройлерах кросса "Иза" с суточного до 36-дневного возраста. В контроле в комбикорм на кукурузно-пшеничной основе добавляли стандартный премикс П5-1 для первого возраста и П6-1 для второго возраста в опытной группе использовали премиксы, где селенит натрия заменяли селенопираном. Результаты исследований показали, что цыплята-бройлеры опытной группы к концу выращивания превосходили контрольных на 5% по живой массе и на 2,5% по сохранности. Выход потрошеного мяса в опытной группе увеличился на 1,5% и тушек первой категории на 2,8%.

Таблица 4 Антиатеросклеротический эффект селенопирана
ПРИЗНАКИ	Атеросклероз	Атеросклероз+селенопиран
%	степень	%	степень
Макроскопические исследования
Уплотнение стенки аорты в брюшном отделе	100	++	70	+
Уплотнение стенки аорты в грудном отделе	100	++	-	-
Снижение эластичности стенки	100	++	70	+
Микроскопические исследования
Очаговые утолщения стенки аорты в брюшном отделе	100	++	70	+
Очаговые утолщения стенки аорты в грудном отделе	50	+	-	-
Наложения фибрина	100	++	-	-
Склероз ветвей брюшной аорты	100	+++	70	++
Облитерация просвета ветвей брюшной аорты	40	+	-	-

1. Биологически активное вещество - селенопиран, обладающее антиоксидантными, детоксицирующими, гиполиподемическими, антиатеросклеротическими, антиатерогенными, иммуномодулирующими, иммунокоррегирующими свойствами и анаболическим эффектом, которое получено по способу п.10 или 11.

2. Биологически активная добавка к пище, отличающаяся тем, что содержит биологически активное вещество - селенопиран по п.1.

3. БАД к пище по п.2, отличающаяся тем, что она выполнена в виде таблеток, порошков, капсул, леденцов, микрокапсул, пилюль, жевательной резинки, драже, водных и масляных растворов.

4. Функциональный пищевой продукт, отличающийся тем, что содержит биологически активное вещество - селенопиран по п.1.

5. Функциональный пищевой продукт по п.4, отличающийся тем, что представляет собой растительное масло.

6. Кормовая добавка, отличающаяся тем, что содержит биологически активное вещество - селенопиран по п.1.

7. Кормовая добавка по п.6, отличающаяся тем, что она выполнена в виде гранул, порошков, водных и масляных растворов.

8. Витаминно-минеральный комплекс, отличающийся тем, что содержит биологически активное вещество - селенопиран по п.1.

9. Комплекс по п.8, отличающийся тем, что он выполнен в виде таблеток, порошков, капсул, микрокапсул, драже, леденцов, пилюль, жевательной резинки, водных и масляных растворов.

10. Способ получения биологически активного вещества - селенопирана формулы 9-фенил - симметричный октагидроселеноксантен

предусматривающий приготовление суспензии 9-фенил симметричного октагидроксантена в ледяной уксусной кислоте, которую затем в инертной атмосфере насыщают в течение 15 мин сначала хлористым водородом, а затем в течение 15 мин смесью газов селеноводорода и хлористого водорода, после этого пропускают в течение 2 ч селеноводород, оптимальная температура реакционной смеси составляет 20-50°С, а общий расход селеноводорода составляет 2,3-2,6 л, после растворения 9-фенил симметричного октагидроксантена в реакционную смесь вносят уксусный ангидрид и в течение 30 мин насыщают селеноводородом, выпавший кристаллический осадок отфильтровывают и перекристаллизовывают из ацетона с фильтрацией горячего раствора через фильтр и получением селенопирана с выходом до 92-96%, чистотой не менее 99,2% и содержанием селена в целевом продукте 23,2-24,0%.

11. Способ по п.10, отличающийся тем, что дополнительно после фильтрации маточный раствор разбавляют водой, а выпавший при этом осадок экстрагируют эфиром, затем эфирный экстракт сушат и отгоняют растворитель, после этого остаток перекристаллизовывают из ацетона и объединяют с полученным в п.10 целевым продуктом.

12. Фармацевтический препарат для устранения селеновой недостаточности, отличающийся тем, что содержит биологически активное вещество - селенопиран по п.1.

13. Препарат по п.12, отличающийся тем, что он выполнен в виде таблеток, порошков, капсул, микрокапсул, драже, леденцов, пилюль, жевательной резинки, водных и масляных растворов, растворов для внутримышечных инъекций и энтерального питания.