Питательная среда для обнаружения и предварительной идентификации escherichia coli

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для бактериологического обнаружения кишечной палочки в воде, пищевых продуктах и другом инфицированном материале по ее способности расти с образованием газа из лактозы при 43°С в присутствии борной кислоты. Питательная среда, в качестве источника азотистого питания, содержит панкреатический гидролизат рыбы, селективный агент - борную кислоту, буферные соли - натрий гидрофосфат и калий дигидрофосфат, лактозу, хлорид натрия, а также феноловый красный и агар микробиологический в качестве индикаторов кислотообразования и газообразования, растворенные в дистиллированной воде. Изобретение обеспечивает уменьшение времени роста и газообразования кишечной палочки (в результате ферментации лактозы) до 24 часов, а также улучшение дифференцирующих свойств среды. 1 табл.

 

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для бактериологического обнаружения кишечной палочки в пищевых продуктах и воде по ее способности расти с образованием газа из лактозы при 43°С в присутствии борной кислоты.

В настоящее время для данного целевого назначения используется жидкая лабораторного приготовления борно-кислая буферная среда с лактозой (1, 2).

Недостатком данной среды является то, что на данной среде газообразование в присутствии борной кислоты (основной дифференцирующий признак обнаружения E.coli) наблюдается через 48 часов культивирования микроорганизма.

Наиболее близким решением задачи того же назначения к заявленному изобретению по совокупности признаков является Boric Acid Broth (лактозный бульон с борной кислотой), содержащий протеозопептон, лактозу, калий гидрофосфат, калий дигидрофосфат и борную кислоту (3).

Вышеупомянутая и используемая в отечественной микробиологической практике лабораторного приготовления борно-кислая буферная среда готовится на 1% пептонной воде с добавлением лактозы, фосфатного буфера и борной кислоты.

К причинам, препятствующим достижению нижеуказанного технического результата при использовании известной среды, является то, что Boric Acid Broth обеспечивает образование газа из лактозы через 48 часов культивирования при температуре 43°С.

Технический результат предлагаемого изобретения - уменьшение времени роста и газообразования кишечной палочки (в результате ферментации лактозы) до 24 часов при тех же условиях культивирования.

Указанный технический результат достигается тем, что в качестве источника азотистого питания среда содержит панкреатический гидролизат рыбы, в качестве буферных солей - натрий гидрофосфат и калий дигидрофосфат, селективный агент - борную кислоту, лактозу, дополнительно содержит хлорид натрия, а также агар микробиологический и феноловый красный в качестве индикаторов газообразования и кислотообразования при следующем соотношении компонентов, г/л дистиллированной воды:

Панкреатический гидролизат рыбы	9,90-10,10
Натрия хлорид	4,90-5,10
Лактоза	4,90-5,10
Натрия гидрофосфат	12,10-12,30
Калия дигидрофосфат	4,10-4,30
Кислота борная	3,24-3,26
Агар микробиологический	1,55-1,65
Феноловый красный	0,075-0,085

Компонентный состав питательной среды обеспечивает высокую скорость роста (18-20 часов) кишечной палочки и полную ингибицию роста других видов энтеробактерий. Введение в среду агара микробиологического обеспечивает четкое улавливание пузырьков газа, что позволяет исключить необходимость работы со стеклянными поплавками и, следовательно, упростить работу бактериолога. Использование в среде индикатора фенолового красного, обладающего высокой чувствительностью к изменению рН среды, позволяет четко провести визуальную оценку изменения цвета среды в результате ферментации лактозы микроорганизмами (E.coli).

Среда сконструирована из ингредиентов на основе сухого питательного бульона, имеющего промышленный выпуск (4).

Среду получают следующим образом.

Пример 1. В колбе с 1 л дистиллированной воды растворяют 9,9 г панкреатического гидролизата рыбы, 4,9 г хлорида натрия, 4,9 г лактозы, 12,10 г натрия гидрофосфата, 4,20 г калия дигидрофосфата, 3,24 г борной кислоты, 1,55 г агара микробиологического, 0,075 г фенолового красного.

Среду доводят до кипения, рН должен соответствовать 7,0±0,2 при 25°С, разливают в стерильные пробирки про 9,0 мл, стерилизуют автоклавированием при температуре 110°С в течение 20 минут. Охлаждают до температуры 30-37°С и засевают тест-культурами. Засеянные пробирки с питательным бульоном перемешивают и инкубируют при температуре 37°С в течение 22±2 часа.

Пример 2. В колбе с 1 мл дистиллированной воды растворяют 10,0 г панкреатического гидролизата рыбы, 5,0 г лактозы, 12,20 г натрия гидрофосфата, 4,20 г калия дигидрофосфата, 3,25 г борной кислоты, 1,60 г агара микробиологического, 0,080 г фенолового красного.

Далее согласно примеру 1.

Пример 3. В колбе с 1 л дистиллированной воды растворяют 10,1 г панкреатического гидролизата рыбы, 5,1 г хлорида натрия, 5,1 г лактозы, 12,30 г натрия гидрофосфата, 4,30 г калия дигидрофосфата, 3,26 г борной кислоты, 1,65 г агара микробиологического, 0,085 г фенолового красного.

Далее согласно примеру 1.

Биологические показатели предлагаемой и известных питательных сред для обнаружения и предварительной идентификации Escherichia coli представлены в таблице.

Из таблицы видно, что предлагаемая среда имеет преимущество по сравнению с контрольной средой-прототипом Boric Acid Broth и борно-кислой буферной средой с лактозой. На указанных средах газообразование и кислотообразование (в результате ферментации лактозы штаммами кишечной палочки) наблюдается только через 48 часов, в то время как на предлагаемой среде дифференцирующие признаки выявляются через 24 часа инкубации данного вида микроорганизма, при полной ингибиции роста других видов энтеробактерий. Питательная среда удобна и проста в применении (исключается использование стеклянных поплавков), дешевле среды прототипа.

Источники информации

1. А.С.Лабинская Микробиология с техникой микробиологических исследований. М.: Медицина, 1978, с.385.

2. Методы санитарно-микробиологического исследования объектов окружающей среды. Под рук. Г.И.Сидоренко, М.: Медицина, 1978, с.20-23.

3. Руководство по применению продукции фирмы Himedia в лабораторной практике. 2003, с.127-128.

4. М.М.Меджидов. Справочник по микробиологическим питательным средам. М.: Медицина, 2003, с.24-25.

Таблица
Биологические показатели предлагаемой и известной питательных сред для обнаружения и предварительной идентификации Escherichia coli
Испытуемая среда	Посевная доза: количество микробных клеток в 1 мл среды	Время инкубации (час)	Рост и накопление тест-культур при температуре (44±1)°С	Примечание
E.coli 055 К-59	E.coli ATCC 25922	Salmonella typhi H-901	Enterobacter aerogenes №418
Предлагаемая среда	103	24,0	+++	+++	-	-
48,0	+++	+++	-	-
Boric Acid Broth прототип	103	24,0	+	+	-	-	В процессе роста и накопления культуры цвет среды не изменяется, т.к. в составе контрольных сред отсутствует индикатор
48,0	++	++	-	-
Борно-кислая буферная среда с лактозой	103	24,0	+	+	-	-
48,0	++	++	˜	-
Примечание: [-] - отсутствие роста, газа и кислотообразования [+] - наличие роста культур с помутнением среды [++] - рост культур с газообразованием (без изменения цвета среды) [+++] - рост культур с изменением цвета среды и обильным газообразованием

Питательная среда для обнаружения и предварительной идентификации Escherichia coli, содержащая питательную основу, лактозу, натрий гидрофосфат, калий дигидрофосфат, борную кислоту и воду, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит натрия хлорид, феноловый красный и агар микробиологический, а в качестве питательной основы - панкреатический гидролизат рыбы, воды - дистиллированную воду, при следующем содержании компонентов, г/л дистиллированной воды:

Панкреатический гидролизат рыбы	9,90-10,10
Натрия хлорид	4,90-5,10
Лактоза	4,90-5,10
Натрия гидрофосфат	12,10-12,30
Калия дигидрофосфат	4,10-4,30
Кислота борная	3,24-3,26
Агар микробиологический	1,55-1,65
Феноловый красный	0,075-0,085