Способ иммунотерапии вирусных респираторных болезней телят
Владельцы патента RU 2287994:
Государственное научное учреждение Научно-исследовательский ветеринарный институт Нечерноземной зоны РФ Российской академии сельскохозяйственных наук (RU)
Изобретение относится к области ветеринарии. Больным телятам после подтверждения диагноза подкожно до клинического выздоровления вводят иммунную сыворотку животных - доноров с титрами гемагглютининов к вирусу ИРТ 1:256, к вирусу ПГ-3 1:1280 и к вирусу ВД-БС 1:1024 и дополнительно применяют пробиотический препарат лактобифадол из расчета 32×108 микробных клеток бифидо- и 4×107 лактобактерий. Способ повышает эффективность лечения, повышает количество выздоровевших животных, сокращает продолжительность лечения и количество рецидивов. 3 табл.
Изобретение относится к ветеринарной иммунологии, касается способа иммунотерапии и может быть использовано для лечения вирусных респираторных болезней телят, протекающих как ассоциированная инфекция парагрипп-3 (ПГ-3), инфекционный ринотрахеит (ИРТ) и вирусная диарея - болезнь слизистых оболочек (ВД-БС).
Известны способы иммунотерапии вирусных респираторных болезней телят с применением моновалентных (живых и инактивированных) или поливалентных вакцин [1]. Известные способы иммунотерапии основаны на комплексных мероприятиях, включающих интраназальную прививку телят в первые недели жизни, их ревакцинацию (парентерально) через 3-4 месяца, а также вакцинацию коров [2]. Но при сложности осуществления известные способы малоэффективны, что обусловлено наличием у телят колостральных антител, которые блокируют антигены вводимых вакцин, тем самым блокируя формирование иммунитета и усугубляя инфекционный процесс. Живые вакцины, кроме того, обладают иммунодепрессивным действием и могут вызывать поствакцинальную болезнь.
Известен также способ иммунотерапии вирусных респираторных болезней телят с применением иммунной сыворотки крови животных-реконвалесцентов. Сыворотка крови животных-реконвалесцентов представляет собой препарат, содержащий антитела к возбудителям, формирующим вирусно-бактериальный фон животноводческого комплекса, однако набор антител сыворотки крови животных-реконвалесцентов и их титр не всегда соответствуют полному набору антигенной структуры "местной микрофлоры", а при изготовлении препарата и сложности контроля не обеспечиваются стабильность и высокое качество готовых форм, что снижает эффективность терапевтического вмешательства с применением сыворотки крови животных-реконвалесцентов.
В качестве предпочтительного аналога рассматривается способ иммунотерапии вирусных респираторных болезней телят с применением иммунной сыворотки животных-доноров [3]. Лечебно-профилактические иммунные сыворотки получают гипериммунизацией животных, они быстро обеспечивают формирование пассивного иммунитета, но из-за невысокой концентрации специфических антител в сыворотке крови терапевтическая эффективность иммунных сывороток животных-доноров невысока.
Цель изобретения - повышение эффективности.
Поставленная цель достигается применением иммунной сыворотки животных-доноров в комплексе с пробиотиком лактобифадол.
Иммунную сыворотку готовят по методу Н.И.Горбань (1981) из крови животных-доноров из хозяйства, для которого она предназначается, предварительно обследованных на вирус лейкоза крупного рогатого скота в РИД с отрицательными результатами. Животных иммунизируют двух- или трехвалентной вакциной. Эффективная сыворотка должна содержать антитела к этиологическим агентам вирусных респираторных болезней телят (гемагглютинины) в следующих титрах: к вирусу ПГ-3 - 1:1280, к вирусу ИРТ - 1:256, к вирусу ВД-БС - 1:1024.
Пробиотик лактобифадол изготовлен из живых бактерий видов В.adolescentis и L.acidophilum методом контактно-сорбционной сушки биомассы, обеспечивающей минимальное изменение ее биологических свойств [4].
Способ осуществляется следующим образом.
Больным телятам после постановки диагноза подкожно вводят иммунную сыворотку животных-доноров, содержащую гемагглютинины к вирусам ПГ-3, ИРТ и ВД-БС в титрах 1:1280, 1:256 и 1:1024 соответственно, и дополнительно после первой инъекции применяют пробиотический препарат лактобифадол в дозе 32×108 микробных клеток бифидо- и 4×107 микробных клеток лактобактерий. Препараты назначают с интервалом в 48 часов до клинического выздоровления.
Эффективность иммунотерапии с применением иммунной сыворотки животных-доноров в комплексе с пробиотическим препаратом лактобифадол определяли в условиях хозяйств Нижегородской области с заболеваемостью респираторными болезнями до 80,0% при летальности до 18,0% с тенденцией к стационарности. Результаты серологических исследований показали циркуляцию вирусов ПГ-3, ИРТ и ВД-БС. Количество серопозитивных животных составило в среднем 64% на ПГ-3, 87,2% на ИРТ и 98,8% на ВД-БС.
Клинически болезнь характеризовалась повышением температуры тела до 41,3°С, серозно-слизистыми выделениями из носовых отверстий, угнетением общего состояния, конъюнктивитом, кашлем, учащенным дыханием. У вынужденно убитых телят в период острого течения в легких обнаруживали уплотненные участки красного цвета, признаки энфиземы, гиперемию слизистой оболочки, слизисто-гнойный экссудат в трахее и бронхах, признаки геморрагического катарального гастроэнтерита. Заглоточные и бронхиальные узлы увеличены.
Сущность способа поясняется примерами.
Пример 1. Для обоснования дозы пробиотического препарата лактобифадол подбирали 4 группы телят 30-45-дневного возраста с подтвержденным диагнозом ассоциированная инфекция ПГ-3, ИРТ и ВД-БС 3 группы - опытные, 1 группа - контрольная. Телятам всех групп подкожно с интервалом в 48 часов до полного клинического выздоровления вводили иммунную сыворотку животных-доноров с содержанием гемагглютининов к вирусам ПГ-3, ИРТ и ВД-БС в титрах 1:1280, 1:256 и 1:1024 соответственно в дозе 2 мл/кг живой массы. Телятам опытных групп после первой инъекции дополнительно применяли пробиотический препарат лактобифадол из расчета микробных клеток: 24×108 и 3×107, 32×108 и 4×107, 4×109 и 5×107 бифидо- и лактобактерий соответственно. За телятами вели клинические наблюдения. Учитывали длительность лечения, наличие рецидивов, летальность и вынужденный убой. До начала и по окончанию лечения брали кровь для иммунологических исследований. Иммунный статус оценивали по показателям лизоцимной активности сыворотки крови (определяли по В.Г.Дорофейчук), бактерицидной активности сыворотки крови (определяли по О.В.Смирновой и Т.А.Кузьминой), фагоцитарной активности нейтрофилов крови (определяли по А.Н.Маянскому) и β-лизинной активности сыворотки крови (определяли по О.В.Бухарину). Результаты представлены в таблицах 1 и 2.
| Таблица 1 Эффективность лечения в зависимости от дозы лактобифадола | ||||
| ПОКАЗАТЕЛИ | Группы животных | |||
| 1-ая опытная n=12 | 2-ая опытная n=12 | 3-я опытная n=12 | 4-ая контрольная n=12 | |
| Доза лактобифадола, | - | |||
| микробных клеток бифидобактерий | 24×108 | 32×108 | 4×109 | |
| лактобактерий | 3×107 | 4×107 | 5×107 | |
| Выздоровело, гол.(%) | 11 (91,7) | 12 (100) | 12 (100) | 10 (83,3) |
| Пало, гол.(%) | - | - | - | - |
| Вынуждено убито, гол.(%) | 1 (8,3) | - | - | 2 (16,6) |
| Продолжительность лечения, дней | 16 | 15 | 15 | 18 |
| Среднесуточный прирост массы, г | 607,3±40,8 | 735,0±75,5 | 744,0±69,4 | 526,0±24,5 |
| Таблица 2 Дозозависимое влияние лактобифадола на иммунологические показатели | ||||
| ПОКАЗАТЕЛИ | Группы телят | |||
| 1-ая опытная n=10 | 2-ая опытная n=10 | 3-я опытная n=10 | 4-ая контрольная n=10 | |
| Бактерицидная активность сыворотки крови, % | |  |  |  |
| Лизоцимная активность сыворотки крови, % |  |  |  |  |
| β-лизинная активность сыворотки крови, % |  |  |  |  |
| Функциональная активность нейтрофилов крови, % | ||||
| - спонтанный тест |  |  |  |  |
| - индуцированный тест |  |  |  |  |
| Примечание: числитель - показатели до начала опыта, знаменатель - показатели после лечения. |
Как видно из таблиц 1 и 2, при испытанных дозах получены стабильные результаты. В качестве оптимальной дозы для применения на практике можно рекомендовать дозу из расчета 32×108 микробных клеток бифидо- и 4×107 микробных клеток лактобактерий на голову, обеспечившую максимальные показатели относительно контроля и граничных доз. Доза ниже рекомендуемой обеспечивала лишь незначительное повышение показателей относительно контроля, а доза выше рекомендуемой обеспечивала показатели на уровне рекомендуемой дозы, что сделало эти дозы экономически нецелесообразными.
Пример 2. Сравнительную эффективность заявленного и известных способов иммунотерапии вирусных респираторных болезней телят определяли в условиях хозяйства, длительно неблагополучного по вирусным респираторным болезням, на 3 группах телят 30-45-дневного возраста, подобранных по принципу аналогов, с выраженной клиникой респираторных болезней. Лечение проводили по следующим схемам: 1 группа - до клинического выздоровления сыворотка животных-доноров, содержащая гемагглютинины к вирусам ПГ-3, ИРТ и ВД-БС в титрах 1:1280, 1:256 и 1:1024 соответственно, подкожно в дозе 2 мл/кг живой массы с интервалом в 48 часов и дополнительно внутрь лактобифадол из расчета 32×108 микробных клеток бифидо- и 4×107 микробных клеток лактобактерий на голову (заявленный способ); 2 группа - до клинического выздоровления сыворотка животных-доноров, содержащая гемагглютинины к вирусам ПГ-3, ИРТ и ВД-БС в титрах 1:1280, 1:256 и 1:1024 соответственно, подкожно в дозе 2 мл/кг живой массы с интервалом в 48 часов (способ-аналог); 3 группа - до клинического выздоровления внутримышечно сыворотка животных-реконвалесцентов в дозе 2 мл/кг живой массы двукратно с интервалом в 24 часа и дополнительно внутримышечно 4% раствор гентамицина в дозе 1,1 мл/кг живой массы 2 раза в день. За телятами вели клинические наблюдения с учетом течения болезни, ее исхода и рецидивов. Результаты представлены в таблице 3.
| Таблица 3 Сравнительная эффективность заявленного и известных способов лечения вирусных респираторных болезней телят 30-45-днвеного возраста | |||
| Показатели | Группы телят | ||
| 1 - заявленный способ | 2 - способ-прототип | 3 - базовый способ | |
| Количество телят, гол. | 12 | 12 | 12 |
| Схема лечения | Иммунная сыворотка животных-доноров + лактобифадол | Иммунная сыворотка животных-доноров | Сыворотка животных-реконвалесцентов + гентамицин |
| Выздоровело, гол.(%) | 12 (100) | 9 (75) | 11 (91,7) |
| Пало, гол. | - | 1 | - |
| Вынуждено убито, гол. | - | - | 1 |
| Продолжительность болезни, дней | 15 | 18 | 20 |
| Рецидивы, % | - | 10,0 | 5,0 |
Проведенные исследования показали эффективность включения пробиотического препарата в схему лечения вирусных респираторных болезней телят (таблица 3), поскольку течение вирусных болезней часто осложняется развитием секундарной микрофлоры. Так, в условиях хозяйства, в котором проводили экспериментальные исследования, изолировали (в процентах от числа исследованных проб, давших положительный результат на вирусные инфекции) от клинически здоровых телят сальмонеллы (60%), пастереллы (30%), от больных - культуры диплококков (30%), стрептококков (25%), стафилококков (20%), пневмококков (20%) с различной вирулентностью. Расшифровка этиологической структуры респираторных заболеваний в условиях стационарного неблагополучия по вирусным инфекциям вследствие скрытого вирусоносительства у переболевших животных и выяснение роли каждого инфекционного агента обусловили выбор пробиотического препарата лактобифадол. Оба вида бактерий, входящих в его состав, относятся к доминирующим по численности и физиологической значимости родам резидентной микрофлоры кишечника животного организма, обладают выраженной антагонистической активностью в отношении гнилостной, патогенной и условно-патогенной микрофлоры, что обеспечивает помимо синтеза антибиотических веществ, перекиси водорода, лизоцима, интерферона, интерлейкина конкурентоспособную адгезию на эритроцитах и иммуномодулирующее действие. Схема лечения, включающая иммунную сыворотку животных-доноров и пробиотический препарат лактобифадол, обеспечивает воздействие на различные патологические мишени, возникающие при течении вирусных респираторных заболеваний, что подтверждается результатами исследований.
Источники информации
1. Урбан В.П., Найманов И.Л. Болезни молодняка в промышленном животноводстве. - М.: Колос, 1984. - С.192-196.
2. Инфекционные болезни животных. Справочник / Сост. Ю.Ф.Борисович, Л.В.Кириллов; под ред. Д.Ф.Осидзе - М.: Агропромиздат, 1987. - С.99.
3. Иммунопрофилактика болезней животных Пер. с нем. Н.Б.Черных. - М.: Колос, 1981. - С.274-277.
4. М.А.Сидоров, В.В.Субботин, Н.В.Данилевская. Нормальная микрофлора животных и ее коррекция пробиотиками // Ветеринария. - 2000. - №11. - С.17-22.
Способ иммунотерапии вирусных респираторных болезней телят, включающий иммунизацию подкожным введением иммунной сыворотки животных - доноров с интервалом в 48 ч до клинического выздоровления, отличающийся тем, что используют гипериммунную сыворотку с титрами гемагглютининов к ИРТ 1:256, к ПГ-3 1:1280 и ВД-БС 1:1024 и дополнительно - пробиотический препарат лактобифадол из расчета 32·108 микробных клеток бифидо- и 4·107 лактобактерий.
