Комбинированная терапия, использующая ингибиторы рецептора тирозинкиназы и ингибиторы ангиогенезиса

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и касается фармацевтической композиции, предназначенной для лечения опухолей и метастазов опухоли, включающей (i) по крайней мере одно антитело или его функционально интактное производное, содержащее сайт связывания, который связывается с эпитопом ErbB1(Her1) рецептора, и (ii) по крайней мере одно ингибирующее ангиогенезис средство, необязательно вместе с фармацевтически приемлемым носителем, разбавителем или реципиентом для комбинированной терапии лечения опухолей и метастазов опухоли Предложенная композиция может привести к возможному синергичному увеличению эффекта ингибирования пролиферации опухолевой клетки каждого конкретного терапевтического средства, обеспечивая более эффективное лечение, чем при применении индивидуальных средств по отдельности. 3 н. и 22 з.п. ф-лы.

 

Техническая область изобретения

Изобретение касается комбинированной терапии лечения опухолей и метастаз опухоли, включающей назначение антагонистов/ингибиторов рецептора тирозинкиназы, особенно антагонистов рецептора ErbB, более предпочтительны антагонисты и анти-ангиогенные средства рецептора EGF (Her 1), предпочтительно интегрин антагонисты, необязательно вместе со средствами или формами терапии, которые имеют аддитивный или синергичный эффект, когда они применяются вместе с указанной комбинацией антагонистов/ингибиторов, такими как химиотерапевтические средства и/или лучевая терапия. Предложенный метод терапии может привести к возможному синергичному увеличению эффекта ингибирования пролиферации опухолевой клетки каждого конкретного терапевтического средства, обеспечивая более эффективное лечение, чем при применении индивидуальных средств по отдельности.

Предпосылки изобретения

Рецептор эпидермального фактора роста (EGF рецептор или EGFR), так же известный как c-erbB1/Her 1, и продукт neu онкогена (так же известный как с-erbB2/Her 2) - члены суперсемейства EFG рецептора, которое принадлежит большому семейству рецепторов тирозинкиназы. Они взаимодействуют на поверхности клетки с определенными факторами роста или природными лигандами, такими как EGF или альфа TGF, таким образом активируя рецептор тирозинкиназы. Каскад нисходящего потока, сигнализирующих белков активируется, что в общем приводит к изменению экспрессии гена и увеличению скорости роста.

C-erbB2 (Her 2) - трансмембранная тирозинкиназа, имеющая молекулярную массу около 185000, со значительной гомологией с рецептором EGF (Her 1), хотя специфический лиганд к Her 2 пока еще четко не идентифицирован.

EGF рецептор - трансмембранный гликопротеин, который имеет молекулярную массу 170000 и найден во многих типах клеток эпителия. Он активируется по крайней мере тремя лигандами, EGF, TGF-α (преобразующий фактор роста альфа) и амфирегулином. Как было показано, эпидермальный фактор роста (EGF) как и преобразующий фактор роста альфа (TGF-α), связывается с EGF рецептором и приводит к клеточной пролиферации и росту опухоли. Эти факторы роста не связываются с Her 2 (Ulrich и Schlesinger, 1990, Cell 61, 203). В отличие от нескольких семейств факторов роста, которые вызывают димеризацию рецептора в силу их димерной природы (например, PDGF), мономерные факторы роста, такие как EGF, содержат два связующих места для их рецепторов и, поэтому, могут кросс-связывать два соседних EGF рецептора (Lemmon и др., 1997, EMBO J. 16, 281). Димеризация рецептора является существенной для стимулирования внутренней каталитической активности и для автофосфорилирования рецепторов фактора роста. Следует отметить, что рецепторы протеин тирозин-киназ (PTKs) способны претерпевать как гомо-, так и гетеродимеризацию.

Клинические исследования показали, что как и EGF рецептор, так и c-erbB2 с избытком присутствуют в определенных типах опухолей, особенно, груди, яичника, пузыря, ободочной кишки, почки, рака головы и шеи, сквамозного рака легкого (Mendelsohn, 1989, Cancer Cells 7, 359; Mendelsohn, 1990, Cancer Biology 1, 339). Поэтому эти наблюдения стимулировали доклинические исследования, направленные на ингибирование функции EGF рецепторов человека или с-erbB2, как новые терапевтические подходы к лечению рака (см., например, Baselga и др., 1996, J. Clin. Oncol. 14, 737; Fan и Mendelsohn, 1998, Curr. Opin. Oncol. 10, 67). Сообщалось, что, например, антитела анти-EGF рецептора, а также антитела анти-Her 2 показывают многообещающие результаты в терапии рака человека. Так, гуманизированное моноклональное антитело 4D5 (hMAb 4D5, HERCEPTIN^®) - уже является продажным препаратом.

Было показано, что антитела анти-EGF рецептора, блокируя EGF и TGF-α связывания с рецептором, приводит к подавлению пролиферации опухолевой клетки. Принимая во внимание эти результаты, было произведено некоторое количество мышиных и крысиных моноклональных антител против EGF рецептора и проверена их способность подавлять рост опухолевых клеток in vitro и in vivo (Modjtahedi и Dean, 1994, J. Oncology 4, 277). Гуманизированное моноклональное антитело 425 (hMAb 425) (US 5558864; ЕР 0531472) и химерное моноклональное антитело 225 (cMAb 225) (Naramura и др., 1993, Cancer Immunol. Immunother. 37, 343-349, WO 96/40210), направленные на EGF рецептор, показали свою эффективность в клинических экспериментах. С225 антитело продемонстрировало способность ингибировать EGF-опосредованый рост опухолевой клетки in vitro и подавлять формирование опухоли человека in vivo на бесшерстных мышах. Антитело, кроме того, проявляет синергизм, главным образом, с некоторыми химиотерапевтическими средствами (например, доксорубицин, адриамицин, таксол и цисплатин), чтобы ликвидировать опухоли человека in vivo на ксенотрансплантатных моделях мышей. Ye и др. (1999, Oncogene 18, 731) сообщили, что овариальные раковые клетки яичника человека могут успешно лечиться комбинацией cMAb 225 и hMAb 4D5.

Ангиогенез, также называемый неоваскуляризацией, является процессом васкуляризации ткани, который включает рост новых кровеносных сосудов в ткани. Процесс опосредствуется инфильтрацией эндотелиальных клеток и клеток гладкой мышцы. Процесс, как полагают, может проходить любым из трех путей: (1) сосуд может вырасти от существующего ранее сосуда; (2) de novo развитие сосудов может явиться результатом клеток предшественника (образование и развитие сосудов); или (3) существующие малые сосуды могут увеличиваться в диаметре (Blood и др., 1990, Bioch. Biophys. Acta 1032, 89. Сосудистые эндотелиальные клетки, как известно, содержат, по крайней мере, пять RGD-зависимых интегринов, включая рецептор витронектина (α_vβ₃ или α_vβ₅); коллаген тип I и IV рецептор, ламинин рецептор, фибронектин/ламинин/коллаген рецептор и фибронектин рецептор (Davis и др., 1993, J. Cell. Biochem. 51, 206). Клетка гладкой мышцы, как известно, содержит по крайней мере шесть RGD-зависимых интегринов, включая а_vβ₃ α_vβ₅.

Ингибирование адгезии клеток, in vitro, используют иммуноспецифические моноклональные антитела для различных субъединиц α или β интегрина, вовлекает витронектин рецептор α_vβ₃ в клеточную адгезию различные типы клеток, включая капиллярные эндотелиальные клетки (Davis и др., 1993, J. Cell. Biol. 51, 206).

Интегрины - класс клеточных рецепторов, известных связыванием внеклеточных матриксных белков и служат связующим звеном клетка-внеклеточный матрикс и клетка-клеточное взаимодействие, относящихся, в основном, к случаю адгезии клеток. Рецепторы интегрина относятся к семейству белков с общими структурными свойствами нековалентных гетеродимерных гликопротеиновых комплексов, образованных из α и β субъединиц. Витронектин рецептор, названный по его оригинальному свойству предпочтительного связывания с витронектином, как известно, относится к трем различным интегринам, обозначаемым как a_vβ₁, α_vβ₃ и α_vβ₅. α_vβ₁ связывает фибронектин и витронектин. α_vβ₃ связывает большинство разнообразных лигандов, включая фибрин, фибриноген, ламинин, тромбоспондин, витронектин и фактор фон Виллебранда. α_vβ₅ связывает витронектин. Ясно, что имеются различные интегрины с различными биологическими функциями так же, как различные интегрины и субъединицы имеют общую биологическую специфичность и функцию. Важным участком распознавания в лиганде для многих интегринов является трипептидная последовательность аргинин-глицин-аспарагиновая кислота (RGD). RGD найден у всех лигандов, идентифицированных выше для интегринов витронектин рецептора. Этот RGD участок узнавания может быть имитирован линейными и циклическми (поли-) пептидами, которые содержат RGD последовательность. Такие RGD пептиды, как известно, являются ингибиторами или антагонистами, соответственно, функции интегрина. Важно, однако, отметить, что в зависимости от последовательности и структуры RGD пептида, специфичность ингибирования может быть изменена, нацелена на определенные интегрины. Были описаны различные RGD полипептиды с различной интегрин-специфичностью, например, Cheresh, и др., 1989, Cell 58, 945, Aumailley и др., 1991, FEBS Letts. 291, 50, в многочисленных приложениях к патентам и патентах (например, патенты US 4517686, 4578079, 4589881, 4614517, 4661111, 4792525; ЕР 0770622).

Образование новых кровеносных сосудов или ангиогенезис играет ключевую роль в росте злокачественного заболевания и вызывает большой интерес в развитии средств, которые ингибируют ангиогенезис (см., например, Holmgren и др., 1995, Nature Medicine 1, 149; Folkman, 1995, Nature Medicine 1, 27; O'Reilly и др., 1994, Cell 79, 315). Использование α_vβ₃ антагонистов интегрина для подавления ангиогенезиса известны в методах, препятствующих росту солидной опухоли, уменьшая подачу крови к солидной опухоли (см., например, US 5753230 и US 5766591, которые описывают использование α_vβ₃ антагонистов, таких как синтетические полипептиды, моноклональных антител и миметиков α_vβ₃, которые связываются с α_vβ₃ рецептором и ингибируют ангиогенезис). Методы и композиции для ингибирования α_vβ₅ опосредственного ангиогенезиса ткани, используя антагонисты витрониктин рецептора α_vβ₅, описаны в WO 97/45447. Ангиогенезис характеризуется инвазией, миграцией и пролиферацией эндотелиальных клеток, процессами, которые зависят от взаимодействий клетки с внеклеточными компонентами матрикса. В этом контексте, интегрин клетка-матрикс рецепторы опосредствуют распространение и миграцию клетки. Как было показано, рецепторы эндотелиальной адгезии интегрина α_vβ₃ играют ключевую роль в обеспечении васкулар-специфического нацеливания в стратегии анти-ангиогенного лечения (Brooks и др., 1994, Science 264, 569; Friedlander и др., 1995, Science 270).

Требование для интегрина α_vβ₃ сосудов при ангиогенезисе было продемонстрировано несколькими моделями in vivo, где образование новых кровеносных сосудов при трансплантировании опухолей человека было полностью подавлено либо систематическим введением пептидных антагонистов интегрина α_vβ₃ и α_vβ₅, как указано выше, или, альтернативно, анти-α_vβ₃ антителом LM609 (Brooks и др., 1994, Cell 79, 1157; АТСС НВ 9537). Эти антитела блокируют α_vβ₃ интегрин рецептор, активация которого с помощью его природных лигандов способствует апоптозу пролиферативных ангиогенных сосудистых клеток и, таким образом, прерывает образование новых кровеносных сосудов, что является существенным событием для пролифирации опухолей. Однако, как было недавно сообщено, клетки меланомы способны образовывать паутино-подобные структуры кровеносных сосудов, даже в отсутствие эндотелиальных клеток (1999, Science 285, 14), подразумевается, что опухоли способны обойти действие таких антиангиогенных препаратов, которые эффективны только в присутствии эндотелиальной ткани.

Многочисленные молекулы стимулируют эндотелиальную пролиферацию, миграцию и образования, включая VEGF, Ang1 и bFGF, и являются жизненно важными факторами выживания. VEGF (эндотелиальный фактор роста сосудов) был идентифицирован как избирательный ангиогенный фактор роста, который может стимулировать эндотелиальный клеточный митогенезис. VEGF, в особенности, является главным медиатором ангиогенезиса в первичной опухоли и при ишемических глазных болезнях. VEGF - гомодимер (ММ: 46000), который является эндотелиальным клетко-специфическим ангиогеном ((Ferrara и др., 1992, Endocrin. Rev., 13, 18) и вазопроникающим фактором (Senger и др., 1986, Cancer Res., 465629), который связывается с высоко аффинными мембраносвязанными рецепторами, обладающими тирозинкиназной активностью (Jakeman и др., 1992, J. Clin. Invest., 89, 244). Биопсии опухоли человека проявляют увеличенную экспрессию VEGF мРНК злокачественными клетками и VEGF рецептора мРНК в смежных эндотелиальных клетках. VEGF экспрессия наиболее проявляется в областях опухолей, смежных с областями некроза сосудов (для обзора см. Thomas и др., 1996, J. Biol. Chem. 271(2), 603; Folkman, 1995, Nature Medicine 1, 27).

WO 97/45447 предлагает использование α_vβ₅ интегрина при неоваскуляризации, особенно вызванной VEGF, EGF и TGF-α, и описывает, что α_vβ₅ антагонист может подавлять VEGF вызванный ангиогенезис. Эффективная антиопухолевая терапия также возможна при использовании целевого VEGF рецептора для ингибирования ангиогенезиса, используя моноклональные антитела (Witte и др., 1998, Cancer Metastasis Rev. 17(2), 155). MAb DC-101, как известно, ингибирует ангиогенезис опухолевых клеток.

Подытоживая вышесказанное, является очевидным, что EGF, VEGF и интегрины α_vβ₃ и α_vβ₅ и их рецепторы в основном вовлечены в пролиферацию опухоли и ангиогенезис опухоли, и что эффективные ингибиторы, особенно моноклональные антитела, направленные на EGF рецептор и/или VEGF рецептор и/или интегрин рецепторы, или любые другие белковые рецепторы тирозин-киназы являются подходящими кандидатами для лечения опухоли. Моноклональные антитела, которые могут специфично распознавать их антиген эпитопы на соответствующих рецепторах, представляют особый интерес.

Однако, использование таких антител, которые были успешны in vitro и на моделях животных, не показали удовлетворительную эффективность на пациентах при моно-лекарственной терапии. Подобные результаты были получены, когда другие анти-ангиогенетики антагонисты или антагонисты EGF рецептора, чем антитела, использовались в клинических экспериментах. Похоже, что опухоли, при блокировании некоторых активных центров, могут использовать другие молекулы поверхности клетки, чтобы компенсировать указанное первоначальное блокирование. Так, опухоли действительно не уменьшаются в течение различных анти-ангиогенных или анти-пролиферативных терапий. По этим причинам были предложены комбинированные терапии, чтобы решить эту проблему, используя моноклональные антитела вместе с цитотоксическими или химиотерапевтическими средствами или в комбинации с лучевой терапией. Действительно, клинические эксперименты показали, что эти комбинированные терапии более эффективны, чем соответствующие моновоздействия. Так, например, была описана антитело-цитокин объединенная белковая терапия, которая вызывает иммунно-опосредованную реакцию угнетения известных опухолей, таких как метастазы карциномы.

Например, цитокин интерлейкин 2 (IL-2) был присоединен к специфическим моноклональным антителам KS1/4, и ch14.18, направленным к опухоль-ассоциированным антигенам эпителиальной клетки адгезионной молекулы (Ер-САМ, KSA, KS1/4 антиген) или дисиалоганлиозиду GD, соответственно, чтобы образовать объединение белков ch14.18-IL-2 и KS1/4-IL-2, соответственно (US 5650150). Другой клинический подход основан на применении моноклональных антител с225 в комбинации с Herceptin^® (Ye и др., 1999, I.c). Более того, комбинации антител анти-EGF рецептора вместе с противоопухолевыми средствами, такими как цисплатин или доксорубицин, были описаны в ЕР 0667165 (А1) и US 6217866; подобные комбинации, особенно комбинация Herceptin^® с цисплатином и другими цитотоксическими факторами, была описана в Genentech's US 5770195. Синергические эффекты между анти-ангиогенным антагонистом интегрина α_v и вышеупомянутым антитело-цитокин объединенными белками наблюдались в метастазах опухоли (Lode и др., 1999, Proc. Natl. Acad. Sci. 96, 1591, WO 00/47228). Методы использования интегрин антагонистов вместе с противоопухолевыми средствами недавно были заявлены в WO 00/38665. Недавно было найдено, что комбинация гемцитабина со специфическим моноклональным антителом DC-101, которое ингибирует ангиогенезис, увеличила антиопухолевый эффект при раке поджелудочной железы мыши, по сравнению с применением только одного гемцитабина. DE 19842415 раскрывает комбинацию специфического циклического RGD пептида, как интегрин ингибитора, со специфическими анти-ангиогенными агентами. Другие подходы предлагают применение EGF рецептор блокирующих препаратов, содержащих антитела, или интегрин антагонистов совместно с облучением или лучевой терапией, соответственно (напр. WO 99/60023, WO 00/0038715).

Хотя различные комбинированные терапии находятся на стадии исследований и клинических испытаний, результаты этих клинических испытаний являются недостаточно плодотворными. Поэтому, необходимо разрабатывать другие комбинации, которые смогут привести к увеличению эффективности и снизить побочные эффекты.

Краткое описание изобретения

Настоящее изобретение впервые описывает новое фармацевтическое лечение, которое основывается на новой концепции терапии опухоли для применения в индивидуальной терапии терапевтически эффективного количества средства, которое блокирует или подавляет рецептор тирозинкиназы, предпочтительно ErbB рецептор и более предпочтительно EGF рецептор вместе с анти-ангиогенным средством, композиция, согласно изобретению, необязательно может включать другие терапевтически активные соединения, предпочтительно выбранные из группы, состоящей из цитотоксических средств, химиотерапевтических средств и других фармакологически активных соединения, которые могут усиливать эффективность упомянутых средств или уменьшать побочные эффекты указанных средств.

Таким образом, изобретение относится к фармакологическим композициям, содержащим как предпочтительные антагонисты ErbB рецептора анти-EGFR (ErbB1/Her 1) антитела и, как антиангиогенное средство ингибитор или антагонист любого из α_vβ₃, α_vβ₅ или α_vβ₆ интегрин рецепторов, предпочтительно RGD содержащий линейный или циклический пептид. В особенности, изобретение относится, как предпочтительное воплощение, к специфической комбинированной терапии, содержащей анти-EGFR или анти-Her 2 антитела, такие как гуманизированное моноклональное антитело 425 (h425, EMD 72000), химерное моноклональное антитело 225 (с225) или Herceptin^® вместе с предпочтительно RGD-содержащими интегрин ингибиторами, более предпочтительно с цикличным пептидом цикло-(Arg-Gly-Asp-DPhe-NMe-Val), необязательно вместе с химиотерапевтическим соединением.

Согласно данному изобретению, указанные терапевтически активные средства могут также дополняться средствами фармацевтического набора, состоящего из упаковки, содержащей один или более антагонистов рецептора тирозинкиназы, одного или более анти-ангиогенных агентов и необязательно одного или более цитотоксических/химиотерапевтических агентов в единичных пакетах или в раздельных упаковках, терапия с такими комбинациями может включать, необязательно, и лучевую терапию.

Однако изобретение относится, кроме того, к комбинированной терапии, включающей применение только одной (объединенной) молекулы, имеющей антирецептор тирозинкиназы, предпочтительно анти-ErbB рецептор активность и анти-ангиогенную активность, необязательно с одним или более цитотоксическими / химиотерапевтическими средствами. Примером является анти-EGFR антитело, такое как h425 или с225, как описано выше и ниже, которое присоединено С-концом его Fc части к анти-гормональному средству известными рекомбинантными или химическими методами. Следующий пример - биспецифическое антитело, в котором одна специфичность направлена на ядерный рецептор гормона, а другая направлена на EGF рецептор.

Преимущественно, применение может сопровождаться лучевой терапией, причем лучевая терапия может быть сделана одновременно, перед или после применения лекарственного средства. Применение различных средств комбинированной терапии, согласно изобретению, может быть также достигнуто, главным образом, одновременно или последовательно. Опухоли, имеющие рецепторы на поверхностях их клетки, которые вовлеченные в формирование кровеносных сосудов опухоли, могут успешно лечиться комбинированной терапией этого изобретения.

Известно, что опухоли выявляют альтернативные пути для своего развития и роста. Если один путь блокирован, они часто имеют способность переключаться на другой путь, изыскивая и используя другие рецепторы и пути передачи сигналов. Поэтому, фармацевтические комбинации настоящего изобретения могут блокировать несколько из таких возможных стратегий развития опухоли и, следовательно, обеспечить различные полезные результаты. Комбинации, согласно настоящего изобретения, полезны при лечении и предотвращении опухолей, опухолеподобных новообразований и неоплазийных нарушений, метастазов опухоли, которые развиваются и растут активацией их соответствующих рецепторов гормона, которые присутствуют на поверхности опухолевых клеток. Предпочтительно, различные комбинированные средства настоящего изобретения применяются в комбинации в низкой дозе, то есть в дозе ниже, чем традиционно используемая в клинике. Выгода понижения дозы соединений, составов, средств и терапий настоящего изобретения, применяемого пациентом, содержит в себе уменьшение действия неблагоприятных эффектов, связанных с более высокими дозировками. Например, при понижении дозы средства, описанного выше и ниже, наблюдается сокращение частоты и серьезности тошноты, прекращение рвоты, по сравнению с тем, что наблюдается при более высоких дозах. Понижая сферу действия неблагоприятных эффектов, наблюдалось улучшение качества жизни больного раком. Другие выгоды от уменьшения сферы действия неблагоприятных эффектов приводит к улучшению самочувствия, сокращению количества госпитализаций, необходимых для лечения неблагоприятных эффектов, и уменьшению применения болеутоляющих средств, необходимых для снятия болевых симптомов, связанных с неблагоприятными эффектами. Альтернативно, методы и комбинация настоящего изобретения могут также максимизировать терапевтический эффект в более высоких дозах.

Опухоли, несущие (сверх-экспрессивные) ErbB рецепторы, предпочтительно ErbB1 (Her 1, EGFR) или ErbB2 (Her 2) рецепторы на поверхностях их клеток, могут успешно лечиться комбинациями согласно изобретениям. Комбинации в пределах фармацевтического лечения, согласно изобретениям, показывают удивительный синергетический эффект. При применении комбинации препаратов наблюдалась реальная усадка и разложение опухоли в течение клинических исследований, в то время как никаких значительных неблагоприятных реакций на лекарственные средства не было обнаружено. Прежде всего, комбинации с тремя лекарственными средствами (рецептор тирозинкиназы, предпочтительно блокирующее средство ErbB рецептора плюс анти-ангиогенное средство, плюс химиотерапевтическое средство) показывают превосходную эффективность. Однако, обладает ли химиотерапевтическое лекарственное средство синергетичным эффектом или нет, зависит от самого средства, рецептор тирозинкиназа, предпочтительно антагонист ErbB рецептора и опухолевая клетка, которая подвергается лечению вышеуказанными средствами, должны проверяться обычно от случая к случаю.

В частности, изобретение относится к:

- фармацевтической композиции, содержащей средство или средства, имеющие

(i) по крайней мере, одну блокирующую / ингибирующую специфичность к рецептору тирозинкиназы;

(ii) по крайней мере, одну блокирующую / ингибирующую специфичность к ангиогенезису, где указанное средство или средства является / являются - не цитокин иммуноконъюгатом, необязательно вместе с фармацевтически приемлемым носителем, разбавителем или реципиентом;

- как первая альтернатива, фармацевтическому средству, включающему

(1) по крайней мере, одно средство, обладающее блокирующей специфичностью к рецептору тирозинкиназы, и

(2) по крайней мере, одно средство, обладающее ингибирующей специфичностью к ангиогенезису;

- как вторая альтернатива, фармацевтической композиции, включающей в себя средство, обладающее блокирующей специфичностью к рецептору тирозинкиназы, так же как и обладающее ингибирующей специфичностью к ангиогенезису;

- соответствующим композициям, которые дополнительно содержат, по крайней мере, одно цитотоксическое, предпочтительно химиотерапевтическое средство;

- более подробно, фармацевтической композиции, в которой указанное средство (i) имеет

блокирующую / ингибирующую специфичность к ErbB рецептору;

- соответствующей фармацевтической композиции, в которой специфичность указанного средства к ErbB рецептору относится к EGF рецептору (ErbB1/Her1) или ErbB2/Her2 рецептору;

- более детально, фармацевтической композиции, в которой указанное средство является антителом или его функционально интактным производным, содержащим участок связывания, который связывается с эпитопом ErbB1 (Her1) или Erb2 (Her2) рецептора;

- как предпочтительное воплощение, фармацевтической композиции, в которой указанное антитело или его функционально интактное производное выбирают из группы, которая включает:

- гуманизированное моноклональное антитело 425 (h425);

- химерное моноклональное антитело 225 (с225);

- гуманизированное моноклональное антитело Her 2, соответствующие гуманизированные, химерные или де-иммунизированые функционально интактные производные включены;

- соответствующей фармацевтической композиции, в которой вышеупомянутым ингибирующим ангиогенезис средством является α_vβ₃, α_vβ₅ или α_vβ₆ интегрин ингибитор;

- соответствующей фармацевтической композиции, в которой указанным интегрин ингибитором является RGD-содержащий линейный или циклический пептид, предпочтительно цикло-(Arg-Gly-Asp-DPhe-NMeVal);

- как специфическое воплощение, фармацевтической композиции, в которой указанное антитело или его функционально интактное производное является гуманизированным моноклональным антителом 425 (h425) или химерным моноклональным антителом 225 (с225), включая де-иммунизированные формы, и вышеуказанный интегрин ингибитор является цикло-(Arg-Gly-Asp-DPhe-NMeVal), необязательно содержащей, необязательно в отдельных емкостях или пакетах, химиотерапевтическое средство, которое выбирают из любого соединения группы, которая включает: цисплатин, доксорубицин, гемцитабин, доцетаксел, паклитаксел, блеомицин;

- соответствующей фармацевтической композиции, в которой указанный интегрин ингибитор является антителом или его функционально интактным производным, которое включает участок связывания, связывающийся с эпитопом интегрин рецептора, предпочтительно выбранный из группы антител: LM609, P1F6, 17Е6, 14D9.F8, их гуманизированные, химерные и де-иммунизированные версии включены;

- фармацевтической композиции, в котором одно из названных средств является биспецифическим антителом или молекулой гетероантитела, включающей первый участок связывания, который связывается с эпитопом рецептора тирозинкиназы, предпочтительно ErbB рецептора, и второй участок связывания, который связывается с эпитопом рецептора ангиогенезиса, предпочтительно интегрин рецептора;

- специфической соответствующей фармацевтической композиции, в которой указанные моноклональные антитела выбирают из h425, c225 или Her 2, и из моноклональных антител LM609, P1F6, 17Е6 и 14D9.F8;

- фармацевтической композиции, в которой одно из указанных средств является иммуноконъюгатом, состоящим из антитела или фрагмента антитела, несущего одну из указанных блокирующих специфичностей, и неиммунологической молекулы, присоединенной к антителу или фрагменту антитела, несущей другую специфичность;

- соответствующей фармацевтической композиции, в которой часть антитела или его фрагмент содержит участок связывания, который связывается с эпитопом ErbB рецептора, предпочтительно EGF рецептора (Her 1), и соединенная неиммунологическая молекула содержит участок связывания, который связывается с эпитопом интегрин рецептора;

- ее специфической фармацевтической композиции, в которой указанную часть антитела, которая связывается с эпитопом ErbB рецептора, выбирают из моноклональных антител h425, c225 или Her 2, и указанная неиммунологическая часть, которая связывается с эпитопом интегрин рецептора, является цикло-(Arg-Gly-Asp-DPhe-NMeVal);

- фармацевтическому набору, который включает

(i) упаковку, содержащую, по крайней мере, один рецептор, ингибирующий тирозинкиназу, предпочтительно средство, блокирующее ErbB рецептор, и

(ii) упаковку, содержащую, по крайней мере, одно средство, ингибирующее ангиогенез, предпочтительно средство, ингибирующее α_vβ₃, α_vβ₅ или α_vβ₆ интегрин рецептор, более предпочтительно RGD-содержащий линейный или циклический пептид, в особенности цикло-(Arg-Gly-Asp-DPhe-NMeVal);

необязательно включающему упаковку, содержащую цитотоксическое средство;

- соответствующему фармацевтическому набору, в котором указанное средство, блокирующее ErbB рецептор, является антителом или его функционально интактным производным, имеющим участок связывания, который связывается с эпитопом указанного рецептора; указанное антитело предпочтительно выбирают из группы антител, которая включает:

гуманизированное моноклональное антитело 425 (h425), химерное моноклональное антитело 225 (с225) или гуманизированное моноклональное антитело Her 2;

- фармацевтическому набору, в котором указанное средство, ингибирующее ангиогенезис, является антителом или его активным производным, которое предпочтительно выбирают из группы антител, включающей: LM609, Р1Н6, 17Е6 и 14D9.F8;

- специфическое воплощение изобретения, специфическому фармацевтическому набору, содержащему

(i) упаковку, содержащую гуманизированное моноклональное антитело 425 (h425), химерное моноклональное антитело 225 (с225), или его функционально интактное производное, и

(ii) упаковку, содержащую цикло-(Arg-Gly-Asp-DPhe-NMeVal), необязательно содержащую химиотерапевтическое средство, выбранное из любого соединения группы, которая включает: цисплатин, доксорубицин, гемцитабин, доцетаксел, пеклитаксел, блеомыцин;

- применению фармацевтической композиции или фармацевтического набора, как указано выше, ниже и в формуле изобретения, для производства лекарственного средства для лечения опухоли и метастазов опухоли;

- фармацевтическое лечение или способ лечения опухоли или метастазов опухоли пациента, который включает применение к пациенту терапевтически эффективного количества средства или средств, обладающих

(i) по крайней мере, одной блокирующей специфичностью к рецептору тирозинкиназы, и

(ii) по крайней мере, одной ингибирующей специфичностью к ангиогенезису,

где указанное средство или средства является/являются не цитокин иммуноконъюгатом, необязательно, вместе с цитотоксическим, предпочтительно химиотерапевтическим средством, и где, предпочтительно, указанное средство (i) является антителом или его функционально интактным производным, содержащим участок связывания, который связывается с эпитопом ErbB рецептора, предпочтительно ErbB1 (Her1) или Еrb2 (Her2) рецептора, и указанное средство (ii) является α_vβ₃, α_vβ₅ или α_vβ₆ интегрин ингибитором или средством, блокирующим VEGF рецептор; и, наконец,

- соответствующему способу, в котором указанное антитело, направленное на ErbB рецептор, выбирают из группы, которая включает: гуманизированное моноклональное антитело 425 (h425), химерное моноклональное антитело 225 (с225) или гуманизированное моноклональное антитело Her 2, и анти-ангиогенное средство является цикло-(Arg-Gly-Asp-DPhe-NMeVal), необязательно вместе с цитотоксическим лекарственным средством, выбранным из группы, которая включает: цисплатин, доксорубицин, гемцитабин, доцетаксел, паклитаксел, блеомицин.

Фармацевтическое лечение, используя фармацевтические композиции и наборы, согласно изобретению, может сопровождаться, одновременно или последовательно, лучевой терапией.

Преимущественно, согласно изобретению, можно отметить четыре различные комбинации фармацевтических композиций:

(i) средство, содержащее, по крайней мере, одну блокирующую активность/специфичность к рецептору тирозинкиназы, предпочтительно ErbB рецептору, объединенное со средством, содержащим, по крайней мере, одну анти-ангиогенную активность (комбинация с двумя лекарственными средствами);

(ii) средство, содержащее, по крайней мере, одну блокирующую активность/специфичность к рецептору тирозинкиназы, предпочтительно ErbB рецептору, объединенное со средством, содержащим, по крайней мере, одну анти-ангиогенную активность, и объединенное, по крайней мере, с одним химиотерапевтическим средством (комбинация с тремя лекарственными средствами);

(iii) средство, содержащее, по крайней мере, одну блокирующую активность/специфичность к рецептору тирозинкиназы, предпочтительно ErbB рецептору, а также, по крайней мере, одну анти-ангиогенную активность, объединенные в одну молекулу (комбинация одного лекарственного средства, с активностью двух лекарственных средств);

(iv) средство, содержащее, по крайней мере, одну блокирующую активность/специфичность к рецептору тирозинкиназы, предпочтительно ErbB рецептору, а также, по крайней мере, одну анти-ангиогенную активность, объединенные в одну молекулу, объединенную по крайней мере с одним химиотерапевтическим средством (комбинация двух лекарственных средств, имеющая активность трех лекарственных средств).

Средства могут применяться одновременно или последовательно в любом из указанных случаев. Согласно вышесказанному, способы изобретения включают, в основном, следующие комбинации:

(i) средство, содержащее, по крайней мере, одну блокирующую активность/специфичность к рецептору тирозинкиназы, предпочтительно ErbB рецептору, объединенное со средством, содержащим, по крайней мере, одну анти-ангиогенную активность (назначение двух лекарственных средств);

(ii) средство, содержащее, по крайней мере, одну блокирующую активность/специфичность к рецептору тирозинкиназы, предпочтительно ErbB рецептору, объединенное со средством, содержащим, по крайней мере, одну анти-ангиогенную активность (назначение двух лекарственных средств), и лучевая терапия;

(iii) средство, содержащее, по крайней мере, одну блокирующую активность/специфичность к рецептору тирозинкиназы, предпочтительно ErbB рецептору, объединенное со средством, содержащим, по крайней мере, одну анти-ангиогенную активность, и объединенное, по крайней мере, с одним химиотерапевтическим средством (назначение трех лекарственных средств);

(iv) средство, содержащее, по крайней мере, одну блокирующую активность/специфичность к рецептору тирозинкиназы, предпочтительно ErbB рецептору, объединенное со средством, содержащим, по крайней мере, одну анти-ангиогенную активность, и объединенное, по крайней мере, с одним химиотерапевтическим средством (назначение трех лекарственных средств), и лучевая терапия;

(v) средство, содержащее, по крайней мере, одну блокирующую активность/специфичность к рецептору тирозинкиназы, предпочтительно ErbB рецептору, а также, по крайней мере, одну анти-ангиогенную активность, объединенные в одну молекулу (назначение одного лекарственного средства, с активностью двух лекарственных средств);

(vi) средство, содержащее, по крайней мере, одну блокирующую активность/специфичность к рецептору тирозинкиназы, предпочтительно ErbB рецептору, а также, по крайней мере, одну анти-ангиогенную активность, объединенные в одну молекулу (назначение одного лекарственного средства, с активностью двух лекарственных средств), и лучевая терапия;

(vii) средство, содержащее, по крайней мере, одну блокирующую активность/специфичность к рецептору тирозинкиназы, предпочтительно ErbB рецептору, а также, по крайней мере, одну анти-ангиогенную активность, объединенные в одну молекулу, объединенную по крайней мере с одним химиотерапевтическим средством (назначение двух лекарственных средств, имеющих активность трех лекарственных средств);

(viii) средство, содержащее, по крайней мере, одну блокирующую активность/специфичность к рецептору тирозинкиназы, предпочтительно ErbB рецептору, а также, по крайней мере, одну анти-ангиогенную активность, объединенные в одну молекулу, объединенные по крайней мере с одним химиотерапевтическим средством (назначение двух лекарственных средств, имеющих активность трех лекарственных средств), и лучевая терапия;

Фармацевтические комбинации и способы настоящего изобретения обеспечивают различные преимущества. Комбинации, согласно настоящему изобретению, полезны при лечении и предотвращении опухолей, опухолеподобных заболеваний и неоплазийных нарушений. Предпочтительно, различные комбинированные средства настоящего изобретения применяют в комбинации в низких дозах, то есть в дозах ниже, чем традиционно используемые в клинических ситуациях. Преимущество снижения дозы соединений, композиций, средств и терапий настоящего изобретения, назначаемых млекопитающим, включает уменьшение действия неблагоприятных факторов, связанных с более высокими дозами. Например, снижение дозировки химиотерапевтического средства, такого как метотрексат, доксорубицин, гемцитабин, доцетаксел, паклитаксел, блеомицин или цисплатин, приводит к сокращению частоты и серьезности тошноты и рвоты, по сравнению с наблюдаемыми при более высоких дозировках. В настоящем изобретении рассмотрены подобные преимущества для соединений, композиций, средств и терапий в комбинации с антагонистами интегрина. Понижая сферу воздействия неблагоприятных факторов, наблюдалось улучшение качества жизни больного раком. Другие преимущества от уменьшения области действия неблагоприятных факторов приводят к улучшению самочувствия, сокращению количества госпитализаций, необходимых для лечения неблагоприятных факторов, и уменьшению применения болеутоляющих средств, необходимых для лечения боли, связанной с неблагоприятными факторами.

Альтернативно, способы и комбинация настоящего изобретения могут также максимизировать терапевтический эффект в более высоких дозах.

Детальное описание изобретения

Если не указано иначе, то выделенные термины и фразы, используемые в данном изобретении, имеют значения и определения, как приведено ниже. Кроме того, эти определения и значения описывают изобретение более подробно, включая предпочтительные варианты описания изобретения.

"Рецептор" или "молекула рецептора" это растворимый или связанный/ассоциированный с мембраной белок или гликопротеин, состоящий из одного или более доменов, с которыми связывается лиганд, чтобы сформировать комплекс рецептор-лиганд. Связывая лиганд, который может быть агонистом или антагонистом, рецептор активизируется или инактивируется и может активировать или блокировать прохождение сигнала.

Под термином "лиганд" или "рецептор лиганда" понимают природное или синтетическое соединение, которое связывает молекулу рецептора, для формирования комплекса рецептор-лиганд. Термин лиганд включает в себя понятие агонистов, антагонистов и соединений с частичным агонист/антагонист действием.

"Агонист" или "рецептор агониста" это природное или синтетическое соединение, которое связывает рецептор, чтобы сформировать рецептор-агонист комплекс, активируя упомянутый рецептор и комплекс рецептор-агонист, соответственно, инициируя возникновение сигнала и появление биологических процессов.

Под термином "антагонист" или "рецептор антагониста" понимают природное или синтетическое соединение, которое обладает биологическим эффектом, противоположным эффекту агониста. Антагонист связывает рецептор и блокирует действие рецептора агониста, конкурируя с агонистом за рецептор. Антагонист определяется по своей способности блокировать действия агониста. Рецептор антагониста может также быть антителом или его иммунотерапевтически эффективным фрагментом. Предпочтительные антагонисты, согласно данному изобретению, перечислены и проанализированы ниже.

"ErbB рецептор" это белковый рецептор тирозинкиназы, который относится к группе ErbB рецепторов и включает в себя EGFR (ErbB1), ErbB2, ErbB3 и ErbB4 рецепторы и другие члены этой группы, которые будут идентифицированы в будущем. ErbB рецептор в основном состоит из внеклеточного домена, который может связывать ErbB лиганд; липофильный трансмембранный домен; сохраненный внутриклеточный домен тирозинкиназы; а также передающий сигналы домен с карбоксильным окончанием, содержащий несколько тирозиновых остатков, которые могут быть фосфорилированы. ErbB рецептор может быть "природной последовательностью" ErbB рецептора или его "вариантом с аминокислотной последовательностью". Предпочтительно ErbB это рецептор с природной последовательностью ErbB рецептора человека. ErbB1 является продуктом генного кодирования EGFR белка. Наиболее предпочтительным является EGF рецептор (Her 1). Выражения "ErbB1" и "Her 1" взаимозаменяемы и относятся к протеину человека Her 1. Выражения "ErbB2" и " Her 2" взаимозаменяемы и относятся к протеину человека Her 2. Рецепторы ErbB1 (EGFR) являются предпочтительными согласно данному изобретению.

"ErbB лиганд" это полипептид, который связывается и/или активирует ErbB рецептор. ErbB лиганды, которые связываются с EGFR, включают в себя EGF, TGF-α, амфирегулин, бетацеллюлин, HB-EGF и эпирегулин.

Термин "антогонист/ингибитор тирозинкиназы" относится к природным или синтетическим средствам, которые способны ингибировать или блокировать тирозинкиназы, включая рецептор тирозинкиназ, которые являются предметом особого интереса данного изобретения. Так, термин включает в себя "антогонисты/ингибиторы ErbB рецептора", определение которых приведено ниже более подробно. Кроме этих антагонистов, предпочтительно антитела анти-ErbB рецептора, дополнительно подходящими антагонистами тирозинкиназы в изобретении являются химические соединения, которые показали эффективность при моно-лекарственной терапии, например, при раке молочной железы и простаты. Соответствующие ингибиторы тирозинкиназы индолкарбазольного типа могут быть получены на основе информации, содержащейся в документах, таких как патенты US 5516771; 5654427; 5461146; 5650407. Патенты US 5475110; 5591855; 5594009 и WO 96/11933 описывают ингибиторы пирролокарбазольного типа тирозинкиназы и рак простаты. Предпочтительно, дозировка химических ингибиторов тирозинкиназы, как указано выше, лежит в пределах от 1 пкг/кг до 1 г/кг веса тела, в сутки. Более предпочтительно, доза ингибитора тирозинкиназы лежит в пределах от 0,01 мг/кг до 100 мг/кг веса тела, в сутки.

Термин "антагонист/ингибитор ErbB рецептора" относится к природной или синтетической молекуле, которая связывает и блокирует или ингибирует ErbB рецептор и, следовательно, является частью группы "(рецепторов) антагонистов/ингибиторов тирозинкиназы". Таким образом, блокируя рецептор, антагонист предотвращает связывание ErbB лиганда (агониста) и активации комплекса агонист/лиганд рецептора. Антагонисты ErbB могут быть направлены на Her 1 (или EGFR / Her 1) или Her 2. Предпочтительные антагонисты, согласно изобретению, направлены на EGF рецептор (EGFR, Her 1). Антагонист ErbB рецептора может быть антителом или его иммунотерапевтически эффективным фрагментом или фрагментом неиммунобиологических молекул, таким как пептид, полипептидный белок. Химические молекулы также сюда относятся, однако, антитела анти-EGFR и антитела анти-Her 2 являются предпочтительными антагонистами, согласно изобретению.

Предпочтительными согласно изобретения являются антитела анти-Her1 и анти-Her2, более предпочтительно антитела анти-Her1. Предпочтительные антитела анти-Her1 это MAb 425, предпочтительно гуманизированные MAb 425 (hMAb 425, US 5558864; ЕР 0531472) и химерные MAb 225 (cMAb 225, US 4943533 и ЕР 0359282). Наиболее предпочтительным является моноклональное антитело h425, которое проявило при моно-лекарственной терапии высокую эффективность, вместе с уменьшенными неблагоприятным последствиями и побочными эффектами. Наиболее предпочтительным антителом анти-Her2 является Herceptin^®, производимое Genentech/Roche.

Эффективными антагонистами EGF рецептора согласно изобретению могут быть также другие природные или синтетические химические соединения. Некоторые примеры предпочтительных молекул этого класса включают в себя органические соединения, органометаллические соединения, соли органических и органометаллических соединений.

Эффективными антагонистами ErbB рецептора согласно изобретению могут быть также малые молекулы. Малые молекулы согласно изобретению это не биологические молекулы, как определено выше, с молекулярным весом приблизительно не больше чем 400. Предпочтительно, они не обладают протеиновой или пептидной структурой, и что наиболее предпочтительно, это синтетически полученные химические соединения. Некоторые примеры предпочтительных малых молекул включают в себя органические соединения, органометаллические соединения, соли органических и органометаллических соединений.

Многочисленные малые молекулы были описаны, поскольку являются полезными для ингибирования EGF рецептора и/или Her 2 рецептора. Примерами являются: стирил замещенные гетероарильные соединения (US 5656655); бис-, моно- и/или бицикличные арил гетероарилы, карбоцикличные и гетероцикличные соединения (US 5646153); трицикличные соединения пиримидина (US 5679683); производные хиназолина, обладающие активностью ингибирования рецепторов тирозинкиназы (US 5616582); производные гетероарилэтендиила или гетероарилэтендииларила (US 5196446); соединение, обозначенное как 6-(2,6-дихлорфенил)-2-(4-(2-диэтил-аминоэтокси)фениламино)-8-метил-8Н-пиридо(2,3)-5-пиримидин-7-он (Panek, и др., 1997, J. Pharmacol. Exp. Therap. 283,1433), ингибирующий EGFR, PDGFR и FGFR группы рецепторов.

"Анти-ангиогенное средство" относится к природному или синтетическому соединению, которое блокирует, или мешает до некоторой степени, развитию кровеносных сосудов. Анти-ангиогенная молекула может, например, быть биологической молекулой, которая связывает и блокирует ангиогенный фактор роста или рецептор фактора роста. Предпочтительная анти-ангиогенная молекула при этом связывается с рецептором, предпочтительно с интегрин рецептором или с VEGF рецептором. Термин включает в себя, согласно изобретению, также пролекарство указанного ангиогенного средства. Существует множество молекул, обладающих различной структурой и происхождением, которые проявляют антиангиогенные свойства. Наиболее значимыми классами ангиогенных ингибиторов или блокирующих средств, которые являются подходящими в данном изобретении, являются, например:

(i) анти-митоты, такие как фторурацил, митомицин-С, таксол;

(ii) метаболиты эстрогена, такие как 2-метоксиэстрадиол;

(iii) ингибиторы матрицы металлопротеиназы (ММР), которые ингибируют цинк металлопротеиназы (металлопротеазы) (такие как, например, бетимастат, ВВ16, TIMPs, миноциклин, GM6001, или описанные в "Inhibition of Matrix Metalloproteinases: Therapeutic Applications" Golub, Annals of the New York Academy of Science, Vol. 878a; Greenwald, Zucker (Eds.), 1999);

(iv) анти-ангиогенные многофункциональные средства и факторы, такие как IFNα (US 4,530,901; US 4,503,035; 5,231,176); ангиостатин и фрагменты плазминогена (например, крингл (kringle) 1-4, крингл 5, крингл 1-3 (O'Reilly, M.S. и др., Cell (Cambridge, Mass.) 79(2): 315-328, 1994; Сао и др., J. Biol. Chem. 271: 29461-29467, 1996; Сао и др., J. Biol Chem 272: 22924-22928, 1997); эндостатин (O'Reilly, M.S. и др., Cell 88(2), 277, 1997 и WO 97/15666), тромбоспондин (TSP-1; Frazier, 1991, Curr Opin Cell Biol 3(5):792); фактор тромбоцита 4 (PF4);

(v) ингибиторы плазминоген активатор/урокиназы;

(vi) антагонисты рецептора урокиназы;

(vii) гепариназы;

(viii) аналоги фумагиллина, такие как TNP-470;

(ix) ингибиторы тирозинкиназы, такие как SUI 01 (многие из выше и ниже указанных антагонистов ErbB рецептора (антагонисты EGFR / Her 2), а также ингибиторы тирозинкиназы, и могут поэтому показывать, анти-EGF рецептор блокирующую активность, которая проявляется в ингибировании роста опухоли, так же как анти-ангиогенная активность, которая проявляется в ингибировании развития кровеносных сосудов и эндотелиальных клеток, соответственно);

(х) сурамин и аналоги сурамина;

(xi) ангиостатичные стероиды;

(xii) антагонисты VEGF и bFGF;

(xiii) антагонисты VEGF рецептора, такие как антитела анти-VEGF рецептора (DC-101);

(xiv) антагонисты flk-1 и flt-1;

(xv) ингибиторы циклооксигеназа-II, такие как COX-II;

(xvi) антагонисты интегрина и антагонисты интегрин рецептора, такие как антагонисты αv и антагонисты αv рецептора, например, антитела анти-αv рецептора и RGD пептиды. Антагонисты интегрина (рецептора) являются предпочтительными, согласно данному изобретению.

Термин "антагонисты/ингибиторы интегрина" или "антагонисты/ингибиторы рецептора интегрина" относится к природной или синтетической молекуле, которая блокирует и ингибирует рецептор интегрина. В некоторых случаях, термин включает антагонисты, направленные на лиганды указанных рецепторов интегрина (таких как для α_vβ₃: витронектин, фибрин, фибриноген, фактор фон Виллебранда, тромбоспондин, ламинин; для α_vβ₅: витронектин; для α_vβ₁: фибронектин и витронектин; для α_vβ₆: фибронектин). Антагонисты, направленные на рецепторы интегрина, являются предпочтительными, согласно изобретению. Антагонисты интегрина (рецептора) могут быть природными или синтетическими пептидами, непептидами, пептидомиметиками, иммуноглобулинами, такими как антитела или их функциональные фрагменты, или иммуноконъюгатами (связанными протеинами). Предпочтительные ингибиторы интегрина изобретения направлены на рецептор α_v интегринов (например, α_vβ₃, α_vβ₅, α_vβ₆ и под-классы). Предпочтительными ингибиторами интегрина являются антагонисты α_v и в особенности антагонисты α_vβ₃. Предпочтительными антагонистами α_v, согласно изобретения, являются RGD пептиды, антагонисты пептидомиметиков (непептидов) и антитела анти-интегрин рецептора, такие как антитела, блокирующие α_v рецепторы.

Примерами неиммунологических антагонистов α_vβ₃ являются описанные в патентах US 5,753,230 и US 5,766,591. Предпочтительными антагонистами являются линейные и циклические RGD-содержащие пептиды. Циклические пептиды, как правило, более устойчивы и проявляют расширенный серологический период полураспада. Наиболее предпочтительным антагонистом интегрина, согласно изобретения, является, однако, цикло-(Arg-Gly-Asp-DPhe-NMeVal) (EMD 121974, Cilengitide^®, Merck KgaA, Germany; EP 0770622), который является эффективным при блокировании рецепторов интегрина α_vβ₃, α_vβ₁, α_vβ₆, α_vβ₈, α_vβ₃. Подходящий пептидил, так же как и антагонисты пептидомиметика (непептида) рецептора интегрина α_vβ₃/α_vβ₅/α_vβ₆ были описаны как в научной литературе, так и в патентах. Например, можно сослаться на Hoekstra и Poulter, 1998, Curr. Med. Chem. 5, 195; WO 95/32710; WO 95/37655; WO 97/01540; WO 97/37655; WO 97/45137; WO 97/41844; WO 98/08840; WO 98/18460; WO 98/18461; WO 98/25892; WO 98/31359; WO 98/30542; WO 99/15506; WO 99/15507; WO 99/31061; WO 00/06169; EP 0853084; EP 0854140; EP 0854145; US 5,780,426 и US 6,048,861. Патенты, которые описывают бензазепин, так же как относящийся к нему бензодиазепин и бензоциклогептан антагонисты α_vβ₃ рецептора интегрина, которые также подходят для использования в данном изобретении, включая WO 96/00574, WO 96/00730, WO 96/06087, WO 96/26190, WO 97/24119, WO 97/24122, WO 97/24124, WO 98/15278, WO 99/05107, WO 99/06049, WO 99/15170, WO 99/15178, WO 97/34865, WO 97/01540, WO 98/30542, WO 99/11626 и WO 99/15508. Другие антагонисты рецептора интегрина, составляющие основу ограничения кольцевого строения, были описаны в WO 98/08840; WO 99/30709; WO 99/30713; WO 99/31099; WO 00/09503; US 5,919,792; US 5,925,655; US 5,981,546 и US 6,017,926. В US 6,048,861 и в WO 00/72801 описывается ряд производных нонановых кислот, которые являются мощными антагонистами α_vβ₃ интегрин рецептора. Другие химические малые молекулы антагонистов интегрина (в основном антагонисты витронектина) описаны в WO 00/38665. Другие антагонисты α_vβ₃ рецептора, как показано, проявили эффективность при ингибировании ангиогенезиса. Например, синтетические антагонисты рецептора, такие как (S)-10,11 -дигидро-3-[3-(пиридин-2-иламино)-1-пропилокси]-5Н-дибензо[а,d]циклогептан-10-уксусная кислота (известны как SB-265123), были проверены на ряде модельных систем млекопитающих (Keenan и др., 1998, Bioorg. Med. Chem. Lett. 8(22), 3171; Ward и др., 1999, Drug Metab. Dispos. 27(11), 1232).

Методики анализа для идентификации антагонистов интегрина, которые используют как антагонисты, описаны, например Smith и др., 1990, J. Biol. Chem. 265, 12267, и в указанной патентной литературе, на которую ссылаются. Антитела анти-интегрина рецептора также хорошо известны. Подходящие моноклональные антитела анти-интегрина (например, α_vβ₃, α_vβ₅, α_vβ₆) могут быть модифицированы для создания антиген связывающих фрагментов, включая F(ab)₂, Fab и создания F_v или антитела с одной цепью. Одно подходящее и предпочтительно используемое моноклональное антитело, направленное против рецептора интегрина α_vβ₃, идентифицируется как LM609 (Brooks и др., 1994, Cell 79, 1157; АТСС НВ 9537). Эффективное специфическое антитело анти-α_vβ₅, P1F6, описано в WO 97/45447, которое является также предпочтительно, согласно данному изобретению. Другим подходящим селективным антителом α_vβ₆ является MAb 14D9.F8 (WO 99/37683, DSM ACC2331, Merck KGaA, Germany), так же как MAb 17.Е6 (ЕР 0719859; DSM АСС2160, Merck KGaA), который селективно направлен на α_v-цепь рецепторов интегрина. Другим приемлемым антителом анти-интегрина является коммерческий препарат Vitraxin^®.

Термин "антитело" или "иммуноглобулин" здесь используется в самом широком смысле и в особенности охватывает интактные моноклональные антитела, поликлональные антитела, мультиспецифические антитела (например, биспецифические антитела) сформированные из по крайней мере двух интактных антител, и фрагментов антитела, поскольку они проявляют желаемую биологическую активность. Термин, в основном, включает в себя понятие гетероантител, которые состоят из двух или более антител, или их фрагментов, с различной связывающей специфичностью, которые связаны вместе. В зависимости от аминокислотной последовательности их неизменяемых частей, интактные антитела могут быть соотнесены к различным "антитело (иммуноглобулин) классам". Существует пять основных классов интактных антител: IgA, IgD, IgE, IgG и IgM, и некоторые из них могут быть в дальнейшем поделены на "подклассы" (изотипы), например, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA и IgA2. Неизменяемые домены, состоящие из тяжелых цепей, соответствующие различным классам антител, называют α, δ, ε, γ и μ соответственно. Предпочитаемый основной класс для антител, согласно изобретению, это IgG, а более подробно IgG1 и IgG2. Антитела это в основном гликопротены, с молекулярным весом, приблизительно около 150,000, состоящие из двух идентичных легких (L) цепей и двух идентичных тяжелых (Н) цепей. Каждая легкая цепь связана с тяжелой цепью одной ковалентной дисульфидной связью, в то время как число дисульфидных связей варьируется между тяжелыми цепями различных изотипов иммуноглобулина.

Каждая тяжелая и легкая цепь также обладает регулярно расположенными межцепочечными дисульфидными мостиками. У каждой тяжелой цепи на одном конце есть переменный домен (VH), дополняемый рядом постоянных доменов. Переменные области включают в себя гиперпеременные области или "CDR" области, которые содержат антиген связующий участок и отвечают за специфичность антитела, и "FR" области, которые являются важными в отношении сродства/авидности антитела. Гиперпеременная область обычно включает в себя остатки аминокислоты из "комплементарно определяемой области" или "CDR" (например, остатки 24-34 (L1), 50-56 (L2) и 89-97 (L3) в легкой цепи переменного домена и 31-35 (H1), 50-65 (Н2) и 95-102 (Н3) в тяжелой цепи переменного домена; и/или из остатков "гиперпеременной петли" (например, остатки 26-32 (L1), 50-52 (L2) и 91-96 (L3) в легкой цепи переменного домена и 26-32 (H1), 53-55 (Н2) и 96-101 (Н3) в тяжелой цепи переменного домена; Chothia and Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)). "FR" остатки (область работы структуры) это те остатки переменных доменов, которые отличаются от остатков гиперпеременной области, как определено здесь. Каждая легкая цепь обладает переменным доменом на одном конце (VL) и постоянным доменом на другом конце. Постоянный домен легкой цепи согласуется с первым постоянным доменом тяжелой цепи, и переменный домен легкой цепи согласуется с переменным доменом тяжелой цепи. Определенные остатки аминокислоты, как полагают, формируют связь между переменными доменами легкой цепи и тяжелой цепи. "Легкие цепочки" антител из любой особи позвоночного животного могут быть приписаны к одному из двух ясно отличающихся типов, называемых каппа (κ) и лямбда (λ), основанных на аминокислотной последовательности их постоянных доменов.

Термин "моноклональное антитело", так как он используется в данном изобретении, имеет отношение к антителу, полученному из популяции по существу однородных антител, то есть, индивидуальные антитела, включающие популяцию, идентичны, кроме возможно встречающихся мутаций, которые могут присутствовать в незначительных количествах. Моноклональные антитела высоко специфичны, направленно действуют относительно единственного антигенного участка. Кроме того, в отличие от препаратов поликлональных антител, которые включают различные антитела, направленные против различных детерминантов (эпитопов), каждое моноклональное антитело направлено против единственного детерминанта на антигене. В дополнение к их специфичности, моноклональные антитела предпочтительнее в том, что они могут синтезироваться незагрязненными другими антителами. Методы для создания моноклональных антител включают метод гибридома, описанный Kohler и Milstein (1975, Nature 256, 495) и в "Monoclonal Antibody Technology, The Production and Characterization of Rodent and Human Hybridomas" (1985, Burdon и др., Eds, Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology, Volume 13, Elsevier Science Publishers, Amsterdam), или могут быть получены известными рекомбинантными ДНК методами (смотри, например, US 4,816,567).

Моноклональные антитела также могут быть получены из коллекции антител фагов, используя методы, описанные, например Clackson и др., Nature, 352:624-628 (1991) и Marks и др., J. Mol. Biol., 222:58, 1-597(1991).

Термин "химерное антитело" означает антитела, у которых часть тяжелой и/или легкой цепи является идентичной с, или гомологична по отношению к соответствующим последовательностям в антителах, полученных от определенных видов или принадлежащих конкретному классу или подклассу антител, тогда как остаточный член цепочки(ек) идентичен с или гомологичен соответствующим последовательностям в антителах, полученных от других видов или принадлежащих другому классу или подклассу антител, так же как и фрагменты этих антител, поскольку они проявляют ожидаемую биологическую активность (например, US 4,816,567; Morrison и др., Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984)). Методы для создания химерных и гуманизированных антител также известны. Например, методы для создания химерных антител включают описание в патентах Boss (Celltech) и Cabilly (Genentech) (US 4,816,397; US 4,816,567).

"Гуманизированные антитела" являются формами химерных антител, полученных не от человека (например, грызун), которые содержат минимальную последовательность, полученную из не человеческого иммуноглобулина. В большей части, гуманизированные антитела это иммуноглобулины человека (антитело реципиента), в котором остатки от гиперпеременной области (CDRs) реципиента заменены остатками из гиперпеременной области не-человеческого вида (антитело донора), например мыши, крысы, кролика или примата, обладающего желательной специфичностью, сродством и способностью. В некоторых случаях, рабочая область (FR) остатков иммуноглобулина человека заменена соответствующими нечеловеческими остатками. Кроме того, гуманизированные антитела могут содержать остатки, которые не найдены в антителе реципиента или в антителе донора. Эти изменения сделаны, чтобы повысить качество исполнения антитела. Вообще, гуманизированное антитело включает в себя по крайней мере один, а обычно два, изменяемых домена, в которых все или почти все гиперпеременные петли соответствуют таковым в нечеловеческом иммуноглобулине и все или почти все FRs, которые соответствуют последовательности иммуноглобулина человека. Гуманизированное антитело необязательно также будет включать в себя, по крайней мере, часть иммуноглобулина с постоянной областью (Fc), обычно из иммуноглобулина человека. Методы для создания гуманизированных антител описаны, например, Winter (US 5,225,539) и Boss (Celltech, US 4,816,397).

"Фрагменты антитела" включают часть интактного антитела, предпочтительно, включая его антиген-связанную или переменную область. Примерами фрагментов антитела являются Fab, Fab', F(ab')2, Fv и Fc фрагменты, диатела, линейные антитела, молекулы одно-цепочного антитела; и мультиспецифические антитела, образованные из фрагмента(ов) антитела. "Интактное" антитело - то, которое содержит антиген-связанную переменную область, а также неизменный домен легкой цепи (CL) и неизменный домен тяжелой цепи, СН1, СН2 и СН3. Предпочтительно, интактное антитело имеет одну или более эффекторных функций. Усвоение папаина антител производит два идентичных антиген-связанных фрагмента, называемых "Fab" фрагменты, каждый включает единичный антиген-связанный участок и CL и СН1 область, и остаточный "Fc" фрагмент, название которого отражает его способность быстро кристаллизоваться. "Fc" область антитела включает, как правило, СН2, СН3 и область петли IgG1 или IgG2 антитела основного класса. Область петли - группа приблизительно из 15 аминокислотных остатков, которые объединяют СН1 область с СН2-СН3 областью. Обработка пепсином дает "F(ab')2" фрагмент, который имеет два антиген-связанных участка и все еще способен к антиген крос-сшиванию. "Fv" является минимальным фрагментом антитела, который содержит полный антиген-узнавающий и антиген-связывающий участок. Эта область состоит из димера одной тяжелой цепи и одной легкой цепи переменного домена с плотной, нековалентной связью. Именно в этой конфигурации эти три гиперпеременные области (CDRs) каждого переменного домена взаимодействуют, чтобы определить антиген-связывающий участок на поверхности VH-VL димера. Все вместе, эти шесть гиперпеременных областей придают антигенсвязывающую специфичность антителу. Однако, даже отдельный переменный домен (или половина Fv, содержащая только три гиперпеременные области, определенные для антигена) имеет способность узнавать и связывать антиген, хотя в более низком сродстве, чем полный связывающий участок. Fab фрагмент также содержит постоянный домен легкой цепи и первый постоянный домен (СН1) тяжелой цепи. "Fab'" фрагменты отличаются от Fab фрагментов дополнительными несколькими остатками карбоксильного конца тяжелой цепи СН1 домена, включая один или более цистеинов из области петли антитела. F(ab')2 фрагменты антитела первоначально были произведены как пары Fab' фрагментов, которые имеют цистеиновые петли между ними. Другие химические соединения фрагментов антитела также известны (см., например, Hermanson, Bioconjugate Techniques, Academic Press 1996; US 4342566).

"Одиночная цепь Fv "или" scFv" фрагментов антитела включает V и V, домены антитела, где эти домены присутствуют в Единичной полипептидной цепи. Предпочтительно, Fv полипептид дальше включает полипептидный линкер между VH и VL доменами, которые позволяют scFv образовывать желательную структуру для связывания антигена. Одно-цепочные FV антитела известны, например, из Pluckthun (Pharmacology of Monoclonal Antibodies, Vol.113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp.269-315 (1994)), WO 93/16185; US 5,571,894; US 5,587,458; Huston и др. (1988, Proc.Natl. Acad. Sci. 85, 5879) или Skerra и Plueckthun (1988, Science 240, 1038).

"Биспецифические антитела" это одиночные, двухвалентные антитела (или его иммунотерапевтически эффективные фрагменты), которые имеют два различных специфических антиген-связывающих участка. Например, первый антиген-связывающий участок направлен на ангиогенезисный рецептор (например, интегрин или VEGF рецептор), тогда как второй антиген-связывающий участок направлен на ErbB рецептор (например, EGFR или Her 2). Биспецифическые антитела могут быть получены химическими методами (см., например, Kranz и др. (1981) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78, 5807), методом "polydoma" (смотри US 4,474,893), или методом рекомбинантной ДНК технологии, все из которых известны per se. Другие методы описаны в WO 91/00360, WO 92/05793 и WO 96/04305. Биспецифические антитела могут также быть получены из одиночной цепи антитела (см., например, Huston и др. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci 85, 5879; Skerra и Plueckthun (1988) Science 240, 1038). Они - аналоги переменных участков антитела, полученные как одиночная полипептидная цепь. Чтобы получить биоспецифически связывающее средство, одно-цепные антитела могут быть соединены вместе химически или методами генной инженерии, известными из уровня техники. Также можно получить биспецифические антитела, согласно этому изобретению, используя лейцин зипер последовательности. Используемые последовательности получены из лейцин зипер областей факторов транскрипции Fos и Jun (Landschulz и др., 1988, Science 240, 1759; для обзора, см. Maniatis и Abel, 1989, Nature 341, 24). Зиперы лейцина это определенные аминокислотные последовательности приблизительно 20-40 остатков с лейцином, обычно встречающимся в каждом седьмом остатке. Такие зиперы последовательности образуют амфипатические α-спирали, с остатками лейцина, выровненными на гидрофобной стороне для формирования димера. Пептиды, соответствующие зиперам лейцина Fos и Jun белков, образуют гетеродимеры избирательно (O'Shea и др., 1989, Science 245, 646). Зипер-содержащие биспецифические антитела и методы для получения их также раскрыты в WO 92/10209 и WO 93/11162. Биспецифическое антитело, согласно изобретению, может быть антителом, направленным на VEGF рецептор и α_vβ₃ рецептор, как обсуждалось выше относительно антител, имеющих единичную специфичность.

"Гетероантителами" являются два или больше антител или антител-связывающих фрагментов, которые соединены вместе, каждый из них имеет различную связывающую специфичность. Гетероантитела могут быть получены конъюгацией двух или больше антител или фрагментов антител. Предпочтительные гетероантитела состоят из поперечно сшитых Fab/Fab' фрагментов. Ряд соединяющих или кроссшивающих агентов могут быть использованы для конъюгации антител. Примерами являются протеин А, карбоимид, N-сукцинимидил-S-ацетил-тиоацетат (SATA) и N-сукцинимидил-3-(2-пиридилдитио)пропионат (SPDP) (см., например, Karpovsky и др. (1984) J. ЕХР. Med. 160, 1686; Liu et a. (1985) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82, 8648). Другие методы включают описанные Paulus, Behring Inst. Mitt., No. 78, 118 (1985); Brennan и др. (1985) Science 30 m:81 or Glennie и др. (1987) J. Immunol. 139, 2367. Другой метод использует о-фенилендималеимид (oPDM) для связывания трех Fab' фрагментов (WO 91/03493). В контексте этого изобретения, мультиспецифические антитела также подходят и могут быть получены, например, согласно методу WO 94/13804 и WO 98/50431.

Термин "белок слияния" относится к природной или синтетической молекуле, состоящей из одного или больше белков или пептидов или их фрагментов, имеющих различную специфичность, которые соединены вместе произвольно линкерной молекулой. Специфическое воплощение термина включает конструкции слияния, где по крайней мере один белок или пептид является иммуноглобулином или антителом, соответственно, или его частью ("иммуноконъюгаты").

Термин "иммуноконъюгаты" относится к антителу или иммуноглобулину, соответственно, или к их иммунологически эффективному фрагменту, который присоединен ковалентной связью к неиммунологически активной молекуле. Предпочтительно этот партнер связывания - пептид или белок, который может быть гликозилированным. Указанная молекула не-антитело может быть связана с С-терминалом неизменных тяжелых цепей антитела или с N-терминалами переменных легких и/или тяжелых цепей. Слияющиеся части могут быть связаны посредством молекулы линкера, которая, как правило, является пептидом, содержащим 3-15 остатков аминокислот. Иммуноконъюгаты, согласно изобретению, состоят из иммуноглобулина или его иммунотерапевтически активного фрагмента, направленного к рецептору тирозинкиназы, предпочтительно ErbB (ErbB1/ErbB2) рецептору и интегрин антагонистическому пептиду, или ангиогенному рецептору, предпочтительно интегрину или VEGF рецептору и TNFα или белку слияния, состоящему, по существу, из TNFα и IFNγ или другого. подходящего цитокина, который связан своим N-терминалом с С-терминалом указанного иммуноглобулина, предпочтительно его Fc часть. Термин включает также соответствующее слияние структур, содержащих би- или мультиспецифичные иммуноглобулины (антитела) или их фрагменты.

Термин "функционально интактное производное" означает, согласно изобретению, фрагмент или часть, модификацию, вариант, гомолог или де-иммунизированную форму (модификация, где эпитопы, которые являются ответственными за иммунные реакции, удалены) соединения, пептида, протеина, антитела (иммуноглобулина), иммуноконъюгата и т.д., который имеет преимущественно ту же самую биологическую и/или терапевтическую функцию по сравнению с первоначальным соединением, пептидом, белком, антителом (иммуноглобулином), иммуноконъюгатом, и т.д. Однако, термин включает в себя также такие производные соединения, которые выявляют сниженную или увеличенную эффективность.

Термин "цитокин" - родовой термин для белков, высвобожденных клеточной популяцией, которые взаимодействуют с другой клеткой как межклеточные медиаторы. Примером таких цитокинов являются лимфокины, монокины и традиционные полипептидные гормоны. Включены в число цитокинов гормоны роста, такие как гормон роста человека, N-метионил гормон роста человека; бычий гормон роста; паратгормон; тироксин; инсулин; проинсулин; релаксин; прорелаксин; гликопротеиновые гормоны, такие как фолликул стимулирующий гормон (FSH), тироид стимулирующий гормон (TSH) и лютеинизирующий гормон (LH); печеночный фактор роста; фактор роста фибробласта; пролактин; плацентарный лактоген; мышиный гонадотропин-ассоциированый пептид; ингибин; активин; сосудистый эндотелиальный фактор роста (VEGF); интегрин; тромбопоэтин (ТРО); факторы роста нервов, такие как NGFβ; фактор роста тромбоцита; преобразующие факторы роста (TGFs), такие как TGFα и TGFβ; эритропоэтин (ЕРО); интерфероны типа IFNα, IFNβ и IFNγ; колониестимулирующие факторы типа M-CSF, GM-CSF и G-CSF; интерлейкины типа IL-1, IL-la, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12; и TNFα или TNFβ. Предпочтительные цитокины, согласно изобретению, - интерфероны и TNFα.

Термин "цитотоксическое средство" используется здесь по отношению к субстанции, которая ингибирует или предотвращает функцию клеток и/или вызывает деструкцию клеток. Термин включает радиоактивные изотопы, химиотерапевтические средства, токсины, такие как энзиматически активные бактериальные токсины, токсины грибов, растений или животного происхождения, или их фрагменты. Термин может включать также члены семейства цитокина, предпочтительно IFNγ, а также противоопухолевые средства, имеющие цитотоксическую активность.

Термин "химиотерапевтическое средство" или "противоопухолевое средство" рассматривается, согласно изобретению, как член класса "цитотоксических средств", как определено выше, и включает химические реагенты, которые оказывают противоопухолевые действия, то есть, предотвращают развитие, созревание или распространение опухолевых клеток, непосредственно на опухолевую клетку, например, с цитостатической или цитотоксической активностью, и не косвенно через механизмы типа модификации биологического отклика. Подходящие химиотерапевтические средства, согласно изобретению, предпочтительно природные или синтетические химические вещества, но биологические молекулы, типа белков, полипептидов и т.д. полностью не исключаются. Существует большое количество противоопухолевых средств, доступных в продаже, в клинических испытаниях и в доклинической разработке, которые могли быть включены в настоящем изобретении для лечения опухолей/неоплазий методом комбинированной терапии с TNFα и анти-ангиогенными средствами, как процитировано выше, необязательно с другими средствами, такими как антагонистами EGF рецептора. Необходимо отметить, что химиотерапевтические средства могут применяться произвольно вместе с вышеупомянутой комбинацией лекарств. Примерами химиотерапевтических или средств, содержащих алкилирующие агенты, могут быть, например, азотные иприты, этилениминные производные, алкил сульфонаты и другие соединения с алкилирующим действием, типа нитрозомочевин, цисплатин и дакарбазин; антиметаболиты, например, фолиевая кислота, пурин или антагонисты пиримидина; митотические ингибиторы, например, алкалоиды барвинка и производные подофилотоксина; цитотоксические антибиотики и производные камптотецина. Предпочтительно химиотерапевтические средства или химиотерапия включает амифостин (этиол), цисплатин, дакарбазин (DTIC), дактиномицин, мехлорэтамин (азотный иприт), стрептозоцин, циклофосфамид, карнустин (BCNU), ломустин (CCNU), доксорубицин (адриамицин), доксорубицин липо (доксил), гемцитабин (гемзар), даунорубицин, даунорубицин липо (дауноксом), прокарбазин, митомицин, цитарабин, этопозид, метотрексат, 5-фторурацил (5-FU), винбластин, винкристин, блеомицин, паклитаксел (таксол), доцетаксел (таксотер), альдеслейкин, аспарагиназа, бусульфан, карбоплатин, кладрибин, камптотецин, СРТ-11, 10-гидрокси-7-этилкамптотецин (SN38), дакарбазин, флоксуридин, флударабин, гидроксимочевина, ифосфамид, идарубицин, месна, альфа интерферон, бета интерферон, иринотекан, митоксантрон, топотекан, леупролид, мегестрол, мелфалан, меркаптопурин, пликамицин, митотан, пегаспаргаза, пентостатин, пипоброман, пликамицин, стрептозоцин, тамоксифен, тенипозид, тестолактон, тиогуанин, тиотепа, иприт урацила, винорелбин, хлорамбуцил и их комбинации.

Более предпочтительны, согласно изобретению, химиотерапевтические средства - цисплатин, гемцитабин, доксорубицин, паклитаксел (таксол) и блеомицин.

Термин "рак" и "опухоль" относится к или описывает физиологическое состояние млекопитающих, которое обычно характеризуется нерегулируемым ростом клетки. Посредством фармацевтических композиций, в соответствии с настоящим изобретением, могут лечиться опухоли такого типа: опухоли груди, сердца, легкого, тонкой кишки, ободочной кишки, селезенки, почки, пузыря, головы и шеи, яичника, простаты, мозга, поджелудочной железы, кожи, кости, костного мозга, крови, тимуса, матки, яичников, гортани и печени. Более определенно опухоль выбрана из группы, состоящей из аденомы, ангиосаркомы, астроцитомы, эпителиального рака, герминомы, глиобластомы, глиомы, гамартомы, гемангиоэндотелиомы, гемангиосаркомы, гематомы, гепатобластомы, лейкоза, лимфомы, медуллобластомы, меланомы, нейробластомы, остеогенной саркомы, ретинобластомы, рабдомиосаркомы, саркомы и тератомы. В частности, опухоль выбирают из группы, которая включает лентигиноз конечностей (acral lentiginous melanoma), актинический кератоз, аденокарциному, цистаденоидную карциному, аденому, аденосаркому, аденосквамозную карциному, астроцитарные опухоли, карциному бартолиновой железы, базально-клеточную карциному, карциномы бронхиальной железы, капиллярные карциноиды, рак, карциносаркому, кавернозна/холангиокарциному, хондосаркому, папиллому/карциному хориодного сплетения, карциному светлых клеток, кистозную аденому, опухоль эндодермального синуса, эндометриальную гиперплазию, эндометриальную стромальную саркому, эндометриоидную аденокарциному, эпендимому, эпителому, саркому Юинга, фиброламеллярную карциному, центральную узловую гиперплазию, гастриному, опухоли зародышевой клетки, глиобластому, глюкагоному, гемангиобластомы, гемангиоэндотелиому, гемангиомы, печеночную аденому, печеночный аденоматоз, гепатоцеллюлярный рак, инсулиному, интраэпителиальную неоплазию, межэпителиальную плоскоклеточную неоплазию, инвазивный плоскоклеточный рак, большую клеточную карциному, лейомиосаркому, лентиго малигни меланомы, злокачественную меланому, злокачественные мезотелиальные опухоли, медуллобластому, медуллоэпителиому, меланому, менингеальный, мезотелиальный метастатический рак, мукоэпидермоидный рак, нейробластому, нейроэпителиальную аденокарциному, узловую меланому, овсяно-клеточный рак, олигодендроглиому, остеогенную саркому, панкреатический полипептид, папиллярную серозную аденокарциному, опухоли клеток шишковидной железы, гипофизарные опухоли, плазмоцитому, псевдосаркому, легочную бластому, рак почечной клетки, ретинобластому, рабдомио-саркому, саркому, серозный рак, мелкоклеточную карциному, карциномы мягкой ткани, соматостатин-выделяющую опухоль, сквамозный рак, плоскоклеточный рак, подмезотелиальную поверхностно распространяющуюся меланому, недифференцированный рак, увеальную меланому, бородавчатый рак, випому, высокодифференцированные опухоли и опухоль Вилма.

"Фармацевтические композиции" изобретения могут включать средства, которые уменьшают или исключают побочные факторы, связанные с комбинированной терапией данного изобретения ("добавочная терапия"), включая, но не ограничиваясь теми средствами, например, которые уменьшают токсическое действие антираковых препаратов, например, ингибиторы поглощения кости, кардиопротекторные средства. Упомянутые добавочные средства предотвращают или уменьшают побочные эффекты, тошноту и рвоту, связанную с химиотерапией, лучевой терапией или операцией, или уменьшают действие инфекции, связанной с назначением миелосупрессорных антираковых препаратов. Добавочные средства известны из уровня техники. Иммунотерапевтические средства, согласно изобретению, могут дополнительно назначаться со стимуляторами, такими как BCG и иммунностимуляторами. Кроме того, композиции могут включать иммуннотерапевтические средства или химиотерапевтические средства, которые содержат цитотоксически эффективные радиомеченные изотопы или другие цитотоксические средства, такие как цитотоксические пептиды (например, цитокинины) или цитотоксические препараты и т.п.

Термин "фармацевтический набор" для лечения опухолей или метастазов опухоли относится к упаковке и, как правило, инструкции использования реагентов в методах лечения опухолей и метастазов опухоли. Реактив в наборе этого изобретения обычно сформулирован как терапевтическая композиция, как описано здесь, и поэтому может быть в любых различных формах, подходящих для размещения в наборе. Такие формы могут включать жидкость, порошок, таблетку, суспензию и подобный состав для обеспечения антагониста и/или белок слияния данного изобретения. Реактивы могут находиться в отдельных контейнерах, подходящих для назначения, отдельно, согласно данного метода, или альтернативно могут быть объединены в композиции в отдельном контейнере в упаковке. Упаковка может содержать количество, достаточное для одной или более дозировок реагента, согласно методам лечения, описанным здесь. Набор этого изобретения также содержит "инструкцию для использования" материалов, содержавшихся в упаковке.

Термин "фармацевтическое лечение" относится к терапевтическим методам настоящего изобретения, для лечения опухолевых клеток в опухолях и метастазов опухоли, основывается на объединенном использовании терапии ингибирования ангиогенезиса (анти-ангиогенезис) и антиопухолевой иммунотерапии, используя блокирующие средства рецептор тирозинкиназу, предпочтительно ErbB антагонисты, прежде всего анти-ErbB1 (EGFR, Her1)/анти-ErbB2 (Her2) антитела. Более чем один тип средства ингибирования ангиогенезиса может использоваться в комбинации с более чем одним типом, предпочтительно, ингибирующего средства анти-ErbB рецептора. Совместное использование может проводиться одновременно, последовательно, или с интервалом времени между лечением. Любая специальная терапия может применяться более чем один раз в течение курса лечения. Метод может привести к синергичному потенцированию эффекта ингибирования пролиферации опухолевой клетки каждой индивидуальной терапии, давая более эффективное лечение, чем найденное, применяя только индивидуальный компонент. Таким образом, в одном аспекте, метод изобретения охватывает применение к пациенту, в комбинации, количество анти-ангиогенного средства и средство анти-ErbB рецептора (Her1/Her2), которое не может привести к эффективному ингибированию ангиогенезиса, или антиопухолевой клеточной активности, если дано в том количестве индивидуально. Метод изобретения охватывает разнообразие моделей для практикующего изобретение постадийно. Например, средства, согласно изобретению, могут применяться одновременно, последовательно, или отдельно. Кроме того, блокирующее средство рецептора тирозинкиназы, и анти-ангиогенное средство могут применяться раздельно с интервалами во времени около 3 недель между назначениями, т.е., в основном, немедленно сразу после первого активного средства, применяемого приблизительно до 3 недель, после того, как первое средство применили. Метод может применяться после хирургической процедуры. Альтернативно, хирургическая процедура может практиковаться в интервале между назначением первого активного вещества и второго активного вещества. Образцом этого метода является комбинация настоящего метода с хирургическим удалением опухоли. Лечение, согласно методу, обычно включает назначение терапевтических композиций с одним или большим количеством циклов назначения. Например, когда одновременно назначают терапевтическую композицию, включающую оба средства, применяемую в интервале времени приблизительно от 2 дней до 3 недель в отдельном цикле. После того, цикл применения может быть повторен, если необходимо, согласно мнению врача. Точно так же, когда предполагается последовательное применение, время назначения для каждой индивидуальной терапии должно быть отрегулировано, чтобы закрыть тот же самый интервал времени. Интервал между циклами может изменяться от нуля до 2 месяцев. Моноклональные антитела, полипептиды или органические миметики/химиотерапевтики этого изобретения могут назначаться парентерально в виде инъекций или инфузий через какое-то время. Несмотря на то, что ткани, которые необходимо лечить, можно обычно достигнуть в теле путем общего применения и поэтому наиболее часто обрабатываются путем внутривенного введения терапевтических композиций, другие ткани и средства доставки рассматривают, где есть вероятность того, что целевая ткань содержит целевую молекулу. Таким образом, моноклональные антитела, полипептиды или органические средства этого изобретения могут применяться внутриглазно, внутривенно, внутрибрюшинно, внутримышечно, подкожно, внутриполостно, трансдермально, ортотопическими инъекциями и инфузиями, и могут также быть снабжены перистальтическими средствами. Терапевтические композиции, содержащие, например, антагонист интегрина, этого изобретения, традиционно применяются внутривенно, например, в виде инъекцией в разовой дозе. Терапевтические композиции данного изобретения содержат физиологически приемлемый носитель вместе с соответствующим средством, как описано здесь, в растворенном или диспергированном виде, как активный ингредиент.

Как используемый здесь, термин "фармацевтически приемлемые" так и его грамматические вариации, как он ссылается на композиции, носители, разбавители и реагенты, используется равнозначно, и представляет, что вещества допустимые к применению млекопитающим без проявления нежелательных физиологических последствий, таких как тошнота, головокружение, желудочное расстройство и т.п. Приготовление фармакологической композиции, которая содержит активные ингредиенты, в растворенном или диспергированном виде, понятны в технологии и не должны ограничиваться на основании состава. Как правило, такие композиции приготовлены как инъекционные или как жидкие растворы или суспензии, однако, твердые формы, подходящие для раствора, или суспензии, могут также быть приготовлены в виде раствора до использования. Препарат может также быть в виде эмульсии. Активный ингредиент может быть смешан с эксципиентами, которые являются фармацевтически приемлемыми и совместимыми с активным ингредиентом и в количествах, подходящих для использования в терапевтических методах, описанных здесь. Подходящие эксципиетны, например, вода, солевой раствор, декстроза, глицерин, этанол или подобные и их комбинации. Кроме того, если необходимо, композиция может содержать незначительные количества вспомогательных веществ, таких как смачивающие или эмульгирующие агенты, буферные средства и т.п., которые усиливают эффективность активного ингредиента. Терапевтическая композиция данного изобретения может включать фармацевтически приемлемые соли компонентов. Фармацевтически приемлемые соли включают соли присоединения кислот (образованные свободными аминогруппами полипептида), полученные с минеральными кислотами, такими как, например, соляная или фосфорная кислоты, или с органическими кислотами, такими как уксусная, винная, миндальная и т.п. Соли, образованные свободными карбоксильными группами, могут также быть получены из неорганических оснований, таких как, например, гидроксидов натрия, калия, аммония, кальция или железа, и таких органических оснований, как изопропиламин, триметиламин, 2-этиламиноэтанол, гистидин, новокаин и т.п. Особенно предпочтительна HCl соль, используемая в приготовлении циклических полипептидных α_v антагонистов. Физиологически приемлемые носители известны из уровня техники. Примерами жидких носителей являются стерильные водные растворы, не содержащие дополнительно никаких веществ кроме активных ингредиентов и воды, или содержащие буфер, такой как фосфорнокислый натрий с физиологическим значением величины рН, физиологический солевой раствор или оба фосфатный буфер и солевой раствор. Далее, водные носители могут содержать более чем одну буферную соль, а также соли, такие как натрий и калий хлористые, декстрозу, полиэтиленгликоль и другие растворители. Жидкие композиции могут также содержать жидкие фазы в дополнение к и исключая воду. Примерами таких дополнительных жидких фаз является глицерин, растительные масла, такие как хлопковое масло, и водно-масляные эмульсии.

Как правило, терапевтически эффективное количество иммунотерапевтического средства в форме, например, антитела анти-ErbB рецептора или фрагмента антитела, или сопряженного антитела, или антитела анти-ангиогенного рецептора, фрагмента или конъюгата - это такое количество, применяемое в физиологически приемлемой композиции, которое является достаточным, чтобы достигнуть концентрации в плазме приблизительно от 0,01 микрограмма (μg) в миллилитре (мл) до приблизительно 100 μg/ml, предпочтительно, от приблизительно 1 μg/ml приблизительно до 5 μg/мл и обычно около 5 μg/мл. Дозировка может быть назначена по-другому и изменяться приблизительно от 0,1 мг/кг до приблизительно 300 мг/кг, предпочтительно, приблизительно от 0,2 мг/кг до приблизительно 200 мг/кг, наиболее предпочтительно приблизительно от 0,5 мг/кг до приблизительно 20 мг/кг, в одной или большем количестве доз введения ежедневно в течение одного или нескольких дней. Если иммунотерапевтическое средство находится в форме фрагмента моноклонального антитела или сопряжения, то количество может быть отрегулировано в пересчете на массу фрагмента/конъюгата относительно массы целого антитела. Предпочтительная концентрация в плазме в мольной концентрации составляет приблизительно от 2 микромолей (μМ) приблизительно до 5 миллимолей (мМ) и, предпочтительно, приблизительно 100 μM на 1 мМ антагониста антитела. Терапевтически эффективное количество средства, согласно изобретению, которое является неиммунотерапевтическим пептидом или белком полипептида (например, IFN-α), или другой малой молекулой подобного размера, является, обычно, такое количество полипептида, применение которого в физиологически приемлемой композиции является достаточным, чтобы достигнуть концентрации в плазме приблизительно от 0,1 микрограмма (μg) в миллилитре (мл) до приблизительно 200 μg/мл, предпочтительно, приблизительно от 1 μg/мл приблизительно до 150 μg/m1. Для полипептида, имеющего массу приблизительно 500 граммов на моль, предпочтительная концентрация в плазме в молях составляет приблизительно от 2 микромолей (μМ) до приблизительно 5 миллимолей (мМ) и, предпочтительно, около 100 μМ на 1 мМ антагониста полипептида. Типичная дозировка активного вещества, которое является, предпочтительно, химическим антагонистом или (химически) химиотерапевтическим средством, согласно изобретению, (ни иммунотерапевтическое средство, ни неиммунотерапевтический пептид/белок) - 10 мг - 1000 мг, предпочтительно, приблизительно 20-200 мг, и более предпочтительно, 50-100 мг на килограмм веса тела в сутки.

Термин "терапевтически эффективный" или "терапевтически эффективное количество" относится к количеству лекарственного средства, эффективного, чтобы лечить болезнь или нарушение в млекопитающем. В случае рака, терапевтически эффективное количество лекарственного средства может уменьшить количество раковых клеток; уменьшить размер опухоли; ингибировать (т.е., снижать до некоторой степени и, предпочтительно, останавливать) инфильтрацию раковой клетки в периферических органах; ингибировать (т.е., снижать до некоторой степени и, предпочтительно, останавливать) метастазы опухоли; ингибировать, до некоторой степени, рост опухоли; и/или снимать до некоторой степени один или больше симптомов, связанных с раком. В значительной степени лекарственное средство может предотвратить рост и/или уничтожить раковые клетки, оно может быть цитостатическим и/или цитотоксическим. Для терапии рака, эффективность может, например, быть измерена, оценивая время к прогрессии болезни (ТТР) и/или определяя быстродействие (RR).

Пример: короткий клинический отчет испытания:

Пациент, 45 лет, первоначально страдал от прогрессирующего плоскоклеточного рака верхней челюсти.

EMD 72000: моноклональное антитело человека 425 (h425), Merck KgaA, Germany

EMD 121974: Цикло-(Arg-Gly-Asp-DPhe-NMeVal), Cilengitide®, Merck KgaA, Germany

Химиотерапия: разнообразная (гемцитабин, цисплатин и т.д.)

История болезни и клинические результаты/статус в начале использования сострадательного лечения: В июле 1997 г. пациент впервые доставлен в Virchow Klinikum, Германия. Была сделана биопсия подозреваемой большой опухоли в верхней челюсти. Гистология показала плоскоклеточный рак, классифицированный как Т4 N0 М0. 5 августа 1997 г. была сделана частичная резекция верхней челюсти и резекции региональных лимфатических узлов. Гистологические исследования показали, что не была достигнута чистая граница, была сделана дополнительная резекция в течение того же самого пребывания в стационаре. Вследствие неблагоприятной гистологической классификации пациент получил послеоперационную лучевую терапию до 50,4 Грей с сентября по октябрь 1997 г.

В июле 1998 г. возникли подозрения о прогрессировании болезни, которые привели к госпитализации. Теперь гистология показала аденосквамозную карциному. После консультации врачей - рентгенологов была рекомендована другая лучевая терапия, которая началась в августе 1998 г. Пациента одновременно лечили гемцитабином (100 мг) как сенсибилизатором облучения. 6-недельная терапия привела к полной клинической ремиссии.

За время комбинированной радио-химиотерапии пациент получил терапию с 1000 мг гемцитабина (5 курсов по 16 назначений).

В марте 1999 г. снова произошла прогрессия рака, которая привела к дополнительной лучевой терапии и паллиативной резекции опухоли. В августе 1999 г. снова прогрессия опухоли и была начата химиотерапия с цисплатином (75 мг/м²) и доцетакселом (75 мг/м²). После трех назначений терапия была остановлена вследствие отсутствия влияния на рост опухоли.

Рассеянное кровотечение из большой массы опухоли требовали частых переливаний концентратов эритроцита.

Курс сострадательного лечения с использованием анти-ангиогенных средств / химиотерапевтических средств: После лечения EMD 121974 (600 мг/м²) и гемцитабина (Gemzar) (1000 мг/м²) в ноябре 1999 г. была диагностирована регрессия опухоли. Начиная с середины января 2000 г. пациент был способен снова слышать на правое ухо, и он был способен открыть рот на 30% больше, чем в декабре 1999 г. Поверхность опухоли показала симптомы грануляции и заживления мелких ран.

Кровотечение остановилось, и не было никакой потребности в дальнейших переливаниях. Пациент пролечился EMD 121974 и гемзаром от 17.11.1999 по 30.03.2000. С 06.04.2000 по 28.04.2000 EMD 121974, гемзар и химиотерапия с 5-FU, цисплатин и рескуволином приписывались пациенту, потому что была обнаружена прогрессия опухоли. Химиотерапевтическое лечение было остановлено из-за гематотоксичности и было продолжено лечение только циленгитидом. С апреля по июнь 2000 г. пациент получил 600 мг/м² EMD 121974 по два раза в неделю, что только привело к стабильности болезни.

Состояние пациента ухудшилось после нескольких недель, и пациента начали лечить увеличенной дозой 1200 мг/м² EMD 121974 дважды в неделю.

Лечение с h425 + каленгитид + химиотерапия: EMD 72000 сначала давался в ноябре 2000 г. в дозировке 200 мг (инфузия в течение получаса), после предлечения с дексаметазоном / диметинденмалеатом (Fenistil) и ранитидин (Zantic). Спустя одну неделю пациент получил дополнительно гемцитабин (1000 мг/м²).

Еженедельный план лечения был таким: в понедельник: 1200 мг/м² каленгитид (инфузия в течение часа), четверг 200 мг EMD 72000 (инфузия в течение получаса), следующий - 1000 мг/м² гемцитабин (инфузия в течение часа), пятницу 1200 мг/м² каленгитид (инфузия в течение часа). После такого лечения было обнаружено кратероподобное разложение опухолевой массы. Опухолевые массы были хирургически удалены в нескольких случаях. Лечащие врачи считали эффект комбинированного лечения исключительно значительным. Никакой неблагоприятной реакции при терапии лекарственными средствами EMD 121974 и EMD 72000 не были выявлены. До сих пор состояние пациента оставалось улучшенным.

1. Фармацевтическая композиция, предназначенная для лечения опухолей и метастазов опухоли, включающая

(i) по крайней мере одно антитело или его функционально интактное производное, содержащий сайт связывания, который связывается с эпитопом ErbBl(Herl) рецептора и

(ii) по крайней мере одно ингибирующее ангиогенезис средство, необязательно вместе с фармацевтически приемлемым носителем, разбавителем или реципиентом.

2. Фармацевтическая композиция по п.1, в которой указанное антитело выбирают из группы, которая включает гуманизированное моноклональное антитело 425 к EGFR и химерное моноклональное антитело 225 (с225) к EGFR.

3. Фармацевтическая композиция по п.1, в которой указанным ингибирующим ангиогенезис средством, является α_vβ₃, α_vβ₅ или α_vβ₆ ингибирующее интегрин средство или средство блокирующее VEGR рецептор.

4. Фармацевтическая композиция по п.3, в которой указанным ингибирующим интегрин средством является RGD-содержащий линейный или циклический пептид, или антитело, включая его интактное производное.

5. Фармацевтическая композиция по п.4, в которой указанный RGD-содержащий пептид является цикло-(Arg-Gly-Asp-DPhe-NMeVal).

6. Фармацевтический композиция по п.3, где указанным ингибирующим интегрин средством является антитело или его активное производное, выбранное из группы, включающей LM609, P1F6 и 17Е6.

7. Фармацевтическая композиция по п.1, которая дополнительно включает цитотоксический агент.

8. Фармацевтическая композиция по п.7, где цитотоксический агент выбирают из группы, которая включает цисплатин, доксорубицин, гемцитабин, доцетаксел, паклитаксел, блеомицин.

9. Фармацевтический набор, предназначенный для лечения опухолей и метастазов опухоли, включающий

(i) первую упаковку, содержащую по крайней мере одно антитело или его функционально интактное производное, включающее сайт связывания, который связывается с эпитопом ErbBl(Herl) рецептора и

(ii) вторую упаковку, содержащую по крайней мере одно ингибирующее ангиогенезис средство.

10. Фармацевтическая набор по п.9, в которой указанное антитело выбирают из группы, которая включает гуманизированное моноклональное антитело 425 к EGFR и химерное моноклональное антитело 225 (с225) к EGFR.

11. Фармацевтический набор по п.9, в которой указанным ингибирующим ангиогенезис средством, является α_vβ₃, α_vβ₅ или α_vβ₆ ингибирующее интегрин средство или средство блокирующее VEGR рецептор.

12. Фармацевтический набор по п.11, в которой указанным ингибирующим интегрин средством является RGD-содержащий линейный или циклический пептид, или антитело, включая его интактное производное.

13. Фармацевтический набор по п.12, в которой указанный RGD-содержащий пептид является цикло-(Arg-Gly-Asp-DPhe-NMeVal).

14. Фармацевтический набор по п.11, где указанным ингибирующим интегрин средством является антитело или его активное производное, выбранное из группы, включающей LM609, P1F6 и 17Е6.

15. Фармацевтический набор по п.9, который дополнительно третью упаковку, включающую цитотоксический агент.

16. Фармацевтический набор по п.15, где цитотоксический агент выбирают из группы, которая включает цисплатин, доксорубицин, гемцитабин, доцетаксел, паклитаксел, блеомицин.

17. Способ лечения опухолей или метастазов опухоли у пациента, который включает введение пациенту терапевтически эффективного количества средства или средств включающих

i) по крайней мере одно антитело или его функционально интактное производное, включающее сайт связывания, который связывается с эпитопом ErbBl(Herl) рецептора и

(ii) по крайней мере одно ингибирующее ангиогенезис средство.

18. Способ по п.17, в котором указанное антитело выбирают из группы, которая включает гуманизированное моноклональное антитело 425 (h425) к EGFR, химерное моноклональное антитело 225 (с225) к EGFR.

19. Способ по п.17, в котором указанным средством ингибирующим ангиогенез является α_vβ₃, α_vβ₅ или α_vβ₆ ингибирующее интегрин средство или средство блокирующее VEGR рецептор.

20. Способ по п.19, в котором указанным ингибирующим интегрин средством является RGD-содержащий линейный или циклический пептид, или антитела, включая его интактное производное.

21. Способ по п.20, в котором указанный RGD-содержащий пептид является цикло-(Arg-Gly-Asp-DPhe-NMeVal).

22. Способ по 19, где указанным ингибирующим интегрин средством является антитело или его производное, выбранное из группы, включающей LМ609, Р1F6 и 17Е6.

23. Способ по п.19, предусматривающий дополнительное введение пациенту цитотоксического агента.

24. Способ по п.23, где цитотоксический агент выбирают из группы, которая включает: цисплатин, доксорубицин, гемцитабин, доцетаксел, паклитаксел, блеомицин.

25. Способ по п.17, который включает введение пациенту терапевтически эффективного количества (i) гуманизированного моноклонального антитела 425 (h425) или химерного моноклонального антитела 225 (с225), (ii) цикло-(Arg-Gly-Asp-DPhe-NMeVal), и необязательно (iii) цисплатина, доксорубицина, гемцитабина, доцетаксела, паклитаксела, блеомицина.