Вакцина, ассоциированная против сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий

Изобретение относится к ветеринарной медицине. Вакцина в качестве антигенов содержит суспензию клеток чистой культуры возбудителя сальмонеллеза Salmonella typhimurium и стрептококкоза Streptococcus pneumoniae, полученных путем отбора пораженных органов от павших нутрий из местного эпизоотического очага, приготовления суспензии, посева на дифференциально-диагностические среды, выделения чистых культур возбудителей с последующим раздельным выращиванием в мясо-пептонном бульоне с глюкозой с концентрацией микробных клеток 4-5 млрд в 1 см³. Вакцина также содержит формалин и гидроокись алюминия при следующем соотношении компонентов, мас.%: суспензия клеток чистой культуры возбудителя сальмонеллеза Salmonella typhimurium, выделенного из местного эпизоотического очага, в питательной среде с титром 4-5 млрд микробных клеток в 1 см³ 38,0-41,5, суспензия клеток чистой культуры возбудителя стрептококкоза Streptococcus pneumoniae, выделенного из местного эпизоотического очага, в питательной среде с титром 4-5 млрд микробных клеток в 1 см³ 38,0-41,5, глюкоза 2,0-1,0, формалин 2,0-1,5, гидроокись алюминия остальное.

Вакцина обладает высокой иммуногенной активностью, формирует выраженный напряженный иммунитет, не вызывает поствакцинальных осложнений, стабильна при хранении. 1 табл.

 

Изобретение относится к ветеринарной медицине, в частности к вакцинам, и может быть использовано в учреждениях, занимающихся конструированием биологических препаратов, а также на предприятиях биологической промышленности.

Известна ассоциированная вакцина против диареи телят, содержащая бактериальные клетки эшерихий, штаммы: 0138 К88, 09К99, 200; сальмонелл, штаммы: ГИСК №195, ГИСК №196, ГИСК №197; протеи, штаммы: ГИСК №198, ГИСК №199; клебсиелл, штаммы: ГИСК №201, ГИСК №202 (патент на изобретение РФ №2035916 от 17.06.93, МКИ A 61 39/125, 39/135). Данная вакцина предназначена для профилактики инфекционных заболеваний у телят, вызываемых эшерихиями, сальмонеллами, протеями и клебсиеллами, для нутрий не применяется.

Известна вакцина против стрептококкоза и пастереллеза нутрий (патент РФ на изобретение №2099084 от 30.09.94, МКИ A 61 39/125, 39/135). Данная вакцина содержит в качестве антигена суспензию штамма Streptococcus zooepidemicus ВГНКИ №К-ДЕП с титром 2,5-3,0 млрд микробных клеток в 1 мл в культуральной среде, суспензию клеток штаммов Pasteuflella multosida ВГНКИ №6011, Pasteurella multosida ВГНКИ №2394 и Pasteurella multocida ВГНКИ №1015 в равных соотношениях общим содержанием 2,5-3,0 млрд микробных клеток в 1 мл питательной среды глюкозу, формалин, гидроокись алюминия и сапонин. Данная вакцина применяется для профилактики стрептококкоза и пастереллеза нутрий. Сырье получают путем культивирования штаммов возбудителей стрептококкоза и пастереллеза нутрий в питательной среде с низкой активностью. Использование сапонина в вакцине может вызывать у привитых животных различные поствакцинальные осложнения (воспалительные процессы, абсцессы на месте введения, хромоту и др.)

Техническим решением задачи изобретения является устранение перечисленных недостатков, в частности повышение специфичности, эффективности вакцины для профилактики сальмонеллеза и стрептококкоза у нутрий путем введения новых чистых культур возбудителей, компонентов, исключая отрицательного и побочного влияния.

Решение задачи достигается тем, что вакцина ассоциированная против сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий, включающая инактивированные антигены, адъювант, в качестве антигенов содержит суспензию клеток чистых культур возбудителей сальмонеллеза Salmonella typhimurium и стрептококкоза Streptococcus pneumoniae, полученных путем отбора пораженных органов от павших нутрий из местного эпизоогического очага, приготовления суспензии, посева на дифференциально-диагностические среды, выделения чистых культур возбудителей, выращивание проводят раздельно в мясо-пептонном бульоне с глюкозой до концентрации микробных клеток 4-5 млрд в 1 см³, смешивают в равных соотношениях, вносят формалин и гидроокись алюминия при следующем соотношении компонентов, мас.%:

суспензия клеток чистой культуры
возбудителя сальмонеллеза Salmonella
typhimurium, выделенного из местного
эпизоотического очага в питательной
среде с титром 4-5 млрд. микробных
клеток в 1 см3	38,0-41,5
суспензия клеток чистой культуры
возбудителя стрептококкоза
Streptococcus pneumoniae,
выделенного из местного
эпизоотического очага в питательной
среде с титром 4-5 млрд. микробных
клеток в 1 см3	38,0-41,5
глюкоза	2,0-1,0
формалин	2,0-1,5
гидроокиси алюминия	остальное

Новизна заявляемого технического решения обусловлена тем, что в отличие от известных вакцин для получения сырья проводят отбор пораженных органов от павших нутрий из местного эпизоотического очага, приготовление суспензии, посев на дифференциально-диагностические среды, выделение чистых культур возбудителей Salmonella typhimurium и Streptococcus pneumoniae, выращивание чистых культур возбудителей проводят раздельно на мясо-пептонном бульоне, что позволяет повысить специфичность и иммуногенность вакцины.

Раздельное культивирование чистых культур возбудителей и добавление в питательную среду глюкозы до 0,2%-ной концентрации позволяют получать концентрацию микробных клеток не менее 4-5 млрд в 1 мл в течение 12-14 часов инкубирования. Инактивирование культур возбудителей формалином в 0,4-0,5%-ной конечной концентрации при температуре 37°С в течение 72-96 часов позволяет подавить патогенность возбудителей и сохранить их иммуногенные свойства в течение 12 месяцев. Смешивание инактивированных антигенов сальмонелл и стрептококков в равных соотношениях, внесение гидроокиси алюминия и тщательное перемешивание не вызывают у привитых нутрий поствакцинальных осложнений, позволяют обеспечить формирование напряженного иммунитета через 12-15 суток после однократного введения продолжительностью не менее 9 месяцев (срок наблюдения). Использование чистых культур возбудителей Salmonella typhimurium и Streptococcus pneumoniae, выделенных из местного эпизоотического очага от больных и павших нутрий, позволяет значительно повысить специфичность вакцины, после однократной вакцинации обеспечивает защиту животных сразу от двух опасных инфекционных болезней: сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий.

По данным патентной и научно-технической литературы не обнаружена аналогичная совокупность признаков, компонентов, что позволяет судить об изобретательском уровне заявленного технического решения.

Что касается критерия «промышленная применимость», то компоненты, входящие в состав вакцины, известны и широко применяются в ветеринарной практике при изготовлении инактивированных вакцин: формолквасцовая вакцина против паратифа (сальмонеллеза) телят ТУ 46-21-166-75, утверждено 10.05.75 г., инструкция по изготовлению и контролю данной вакцины утверждена Главным управлением ветеринарии MCX СССР 28.03.80 г.; вакцина против паратифа (сальмонеллеза) поросят ТУ 46-21-952-74, утверждено 15.07.74 г., инструкция по изготовлению и контролю данной вакцины утверждена Главным управлением ветеринарии МСХ СССР 23.10.96 г.; ассоциированная вакцина против сальмонеллеза, пастереллеза и энтерококковой инфекции поросят ТУ 10.09-62-90, утверждено 01.08.90 г., инструкция по изготовлению и контролю данной вакцины утверждена Главным управлением ветеринарии 16.07.90 г.; вакцина против энтерококковой инфекции телят, ягнят и поросят ТУ 10.09-91-90, утверждено 15.12.90 г. Однако для нутрий эти вакцины не применяются.

Методы выделения и характеристика сальмонелл описаны в методических указаниях «Лабораторная диагностика сальмонеллезов человека и животных, обнаружение сальмонелл в кормах, продуктах питания и объектах внешней среды». Москва, ВО «Агропромиздат», 1990 г., а также в справочнике «Определитель зоопатогенных микроорганизмов» под редакцией профессора Сидорова М.А., Москва, Колос, 1995, стр.201-204. В «Практикуме по ветеринарной микробиологии и иммунологии» авторы: Костенко Т.С., Родионова В.Б., Скородумов Д.И., М.: «Колос», 2001, стр.222-231.

Методы выделения и характеристика стрептококков представлены в «Методических указаниях по лабораторной диагностике стрептококкоза животных», утвержденных 25.09.1990 г., главным управлением ветеринарии с государственной инспекцией при Государственной комиссии СМ СССР по продовольствию и закупкам, а также в справочнике «Определитель зоопатогенных микроорганизмов» под редакцией профессора Сидорова М.А., Москва. Колос, 1995, стр.90-95.

Предложенная вакцина ассоциированная против сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий проста в исполнении, доступна и является промышленно применимой.

Вакцина ассоциированная против сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий содержит инактивированные формалином чистые культуры возбудителей Salmonella typhimurium и Streptococcus pneumoniae, адсорбированные на гидрате окиси алюминия. По внешнему виду вакцина представляет собой жидкость светло-желтого цвета с рыхлым осадком, который при встряхивании легко разбивается в гомогенную взвесь. Срок хранения в сухом, темном месте при температуре от 2 до 10°С 1 год. Вакцина предназначена для профилактики опасных инфекционных заболеваний нутрий против сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий. Она вызывает образование специфического иммунитета против сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий. Вакцина безвредна и ареактогенна. Иммунитет у нутрий, привитых вакциной против сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий, формируется через 12-15 суток после вакцинации и сохраняется не менее 9 месяцев. Вакцину применяют в благополучных, неблагополучных и угрожаемых по сальмонеллезу и стрептококкозу нутрий хозяйствах. В благополучных и угрожаемых по сальмонеллезу и стрептококкозу нутрий хозяйствах вакцину вводят однократно, внутримышечно в область бедра, молодняку с 45-дневного возраста по 1,0 см³, а взрослым животным по 1,5 см³. В неблагополучных хозяйствах вакцину вводят внутримышечно в область бедра с 2-месячного возраста двукратно с интервалом 7-10 дней: первая вакцинация в дозе 1,0 см³, вторая - в дозе 1,5 см³. Продукты убоя вакцинированных нутрий используют без ограничений независимо от сроков вакцинации.

К факторам, обуславливающим получение вакцины заданного свойства, относятся последовательность изготовления и процентное соотношение между компонентами, входящими в препарат.

Приведено пять примеров, содержащих компоненты в различных соотношениях на 100 мл вакцины.

Пример 1.

Берут пораженные органы от павших нутрий из местного эпизоотического очага, из которых приготавливают суспензию, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистые культуры возбудителей сальмонеллеза Salmonella typhimurium и стрептококкоза Streptococcus pneumoniae, раздельно культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию микробных клеток 75,0 с титром 4-5 млрд и содержанием глюкозы 0,5, инактивируют внесением формалина 1,0, затем добавляют гидроокись алюминия остальное, тщательно смешивают и получают вакцину следующего состава при следующем соотношении компонентов, мас.%:

суспензия клеток чистой культуры
возбудителя сальмонеллеза Salmonella
typhimurium, выделенного из местного
эпизоотического очага в питательной
среде с титром 4-5 млрд микробных
клеток в 1 см3	37,5
суспензия клеток чистой культуры
возбудителя стрептококкоза
Streptococcus pneumoniae,
выделенного из местного
эпизоотического очага в питательной
среде с титром 4-5 млрд. микробных
клеток в 1 см3	37,5
глюкоза	0,5
формалин	1,0
гидроокись алюминия	остальное

При данном соотношении компонентов вакцина ассоциированная против сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий обладает слабой иммуногенной активностью.

Пример 2.

Берут пораженные органы от павших нутрий из местного эпизоотического очага, из которых приготавливают суспензию, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистые культуры возбудителей сальмонеллеза Salmonella typhimurium и стрептококкоза Streptococcus pneumoniae, раздельно культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию микробных клеток 78,0 с титром 4-5 млрд и содержанием глюкозы 1,0, инактивируют внесением формалина 1,5, затем добавляют гидроокись алюминия остальное, тщательно смешивают и получают вакцину следующего состава при следующем соотношении компонентов, мас.%:

суспензия клеток чистой культуры
возбудителя сальмонеллеза Salmonella
typhimurium, выделенного из местного
эпизоотического очага в питательной
среде с титром 4-5 млрд. микробных
клеток в 1 см3	39,0
суспензия клеток чистой культуры
возбудителя стрептококкоза
Streptococcus pneumoniae,
выделенного из местного
эпизоотического очага в питательной
среде с титром 4-5 млрд микробных
клеток в 1 см3	39,0
глюкоза	1,0
формалин	1,0
гидроокись алюминия	остальное

При данном соотношении компонентов вакцина ассоциированная против сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий обладает иммуногенной активностью.

Пример 3.

Берут пораженные органы от павших нутрий из местного эпизоотического очага, из которых приготавливают суспензию, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистые культуры возбудителей сальмонеллеза Salmonella typhimurium и стрептококкоза Streptococcus pneumoniae, выделенные из местного эпизоотического очага, раздельно культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию микробных клеток 80,0 с титром 4-5 млрд и содержанием глюкозы 1,7, инактивируют внесением формалина 1,3, затем добавляют гидроокись алюминия остальное, тщательно смешивают и получают вакцину следующего состава при следующем соотношении компонентов, мас.%:

суспензия клеток чистой культуры возбудителя
сальмонеллеза Salmonella typhimurium,
выделенного из местного эпизоотического
очага в питательной среде с титром 4-5 млрд
микробных клеток в 1 см3	40,0
суспензия клеток чистой культуры возбудителя
стрептококкоза Streptococcus pneumoniae,
выделенного из местного эпизоотического очага
в питательной среде с титром 4-5 млрд
микробных клеток в 1 см3	40,0
глюкоза	1,7
формалин	1,3
гидроокись алюминия	остальное

При данном соотношении компонентов вакцина ассоциированная против сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий обладает незначительной иммуногенной эффективностью.

Пример 4.

Берут пораженные органы от павших нутрий из местного эпизоотического очага, из которых приготавливают суспензию, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистые культуры возбудителей сальмонеллеза Salmonella typhimurium и стрептококкоза Streptococcus pneumoniae, выделенные из местного эпизоотического очага, раздельно культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию микробных клеток 83,0 с титром 4-5 млрд и содержанием глюкозы 1,0, инактивируют внесением формалина 1,5, затем добавляют гидроокись алюминия остальное, тщательно смешивают и получают вакцину следующего состава при следующем соотношении компонентов, мас.%:

суспензия клеток чистой культуры возбудителя
сальмонеллеза Salmonella typhimurium,
выделенного из местного эпизоотического
очага в питательной среде с титром
4-5 млрд микробных клеток в 1 см3	41,5
суспензия клеток чистой культуры
возбудителя стрептококкоза
Streptococcus pneumoniae,
выделенного из местного
эпизоотического очага в
питательной среде с титром
4-5 млрд микробных клеток в 1 см3	41,5
глюкоза	1,0
формалин	1,5
гидроокись алюминия	остальное

При данном соотношении компонентов вакцина ассоциированная против сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий обладает иммуногенной активностью, формирует после вакцинации выраженный напряженный иммунитет, не вызывает поствакцинальных осложнений, стабильна при хранении в течение 12 месяцев (таблица).

Пример 5.

Берут возбудитель сальмонеллеза Salmonella typhimurium, возбудитель стрептококкоза нутрий Streptococcus pneumoniae, выделенные из местного эпизоотического очага, раздельно культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию микробных клеток 85,0 с титром 4-5 млрд и содержанием глюкозы 2,0, инактивируют внесением формалина 1,5, затем добавляют гидроокись алюминия остальное, тщательно смешивают и получают вакцину следующего состава при следующем соотношении компонентов, мас.%:

суспензия клеток чистой культуры
возбудителя сальмонеллеза Salmonella
typhimurium, выделенного из местного
эпизоотического очага в питательной
среде с титром 4-5 млрд микробных
клеток в 1 см3	42,5
суспензия клеток чистой культуры
возбудителя стрептококкоза
Streptococcus pneumoniae,
выделенного из местного
эпизоотического очага в
питательной среде с титром
4-5 млрд микробных клеток в 1 см3	42,5
глюкоза	2,0
формалин	1,5
гидроокись алюминия	остальное

При данном соотношении компонентов вакцина ассоциированная против сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий обладает слабой иммуногенной активностью, формирует напряженный иммунитет, у отдельных животных на месте введения препарата вызывает слабое раздражение.

Сравнительная оценка эффективности вакцины
Вакцина	Доза вакцины в см3.	Метод введения	Иммунобиологические свойства
Кол-во нутрий в опыте (гол)	Наличие поствакцинальных осложнений	Длительность иммунитета (мес.)	Защита в (%)
По прототипу	двукратно 1-я доза 1,0 см3 2-я доза 2,0 см3	Внутримышечно	1500	Угнетение, хромата, отказ от корма в течение 2-3 суток	6	60-70
По предлагаемому способу	1,01	Внутримышечно	1500	нет	9	90-100

Из данных таблицы видно, что предлагаемая вакцина ассоциированная против сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий имеет значительные преимущества в сравнении с вакциной по прототипу.

Вакцина, ассоциированная против сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий, содержащая суспензии клеток чистых культур возбудителей сальмонеллеза Salmonella typhimurium и стрептококкоза Streptococcus pneumoniae, полученных путем отбора пораженных органов от павших нутрий из местного эпизоотического очага, приготовления суспензии, посева на дифференциально-диагностические среды, выделения чистых культур возбудителей, их раздельного выращивания в мясопептонном бульоне с глюкозой до концентрации микробных клеток 4-5 млрд в 1 см³, формалин и гидроокись алюминия при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Суспензия клеток чистой культуры возбудителя сальмонеллеза Salmonella typhimurium, выделенного из местного эпизоотического очага, в питательной среде с титром 4-5 млрд микробных клеток в 1 см3	38,0-41,5
Суспензия клеток чистой культуры возбудителя стрептококкоза Streptococcus pneumoniae, выделенного из местного эпизоотического очага, в питательной среде с титром 4-5 млрд микробных клеток в 1 см3	38,0-41,5
Глюкоза	2,0-1,0
Формалин	2,0-1,5
Гидроокись алюминия	Остальное