Вакцина, ассоциированная против сальмонеллеза и энтерококковой инфекции нутрий
Владельцы патента RU 2296583:
Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Кубанский государственный аграрный университет (RU)
Изобретение относится к ветеринарной медицине, в частности к вакцинам, и может быть использовано в научно-исследовательских и производственных учреждениях, занимающихся конструированием биопрепаратов, а также на предприятиях биологической промышленности. Вакцина в качестве антигенов содержит суспензию клеток чистой культуры возбудителя сальмонеллеза Salmonella typhimurium и энтерококковой инфекции Streptococcus fecalis, полученных путем отбора пораженных органов от павших нутрий из местного эпизоотического очага, приготовления суспензии, посева на дифференциально-диагностические среды, выделения чистых культур возбудителей, выращивание проводят раздельно в мясопептонном бульоне с глюкозой с концентрацией микробных клеток 4-5 млрд. в 1 см3, смешивают их в соотношении 1:2, вносят формалин и гидроокись алюминия при следующем соотношении компонентов, мас.%: суспензия клеток чистой культуры возбудителя сальмонеллеза Salmonella typhimurium, выделенного из местного эпизоотического очага, в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см3 25,5-27,5; суспензия клеток чистой культуры возбудителя энтерококковой инфекции Streptococcus fecalis, выделенного из местного эпизоотического очага, в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см3 50,5-55,0; глюкоза 2,0-1,0; формалин 2,0-1,5; гидроокись алюминия остальное. Изобретение обеспечивает повышение специфичности и эффективности ассоциированной вакцины против сальмонеллеза и энтерококковой инфекции нутрий и исключает отрицательное побочное действие на животных. 1 табл.
Изобретение относится к ветеринарной медицине, в частности к вакцинам, и может быть использовано в учреждениях, занимающихся конструированием биологических препаратов, а также на предприятиях биологической промышленности.
Известна ассоциированная вакцина против диареи телят, содержащая бактериальные клетки эшерихий, штаммы: 0138 К88, 09К99, 200; сальмонелл, штаммы: ГИСК № 195, ГИСК № 196, ГИСК № 197; протеи, штаммы: ГИСК № 198, ГИСК № 199; клебсиелл, штаммы: ГИСК № 201, ГИСК № 202 (патент на изобретение РФ № 2035916 от 17.06.93, МКИ А 61 39/125, 39/135). Данная вакцина предназначена для профилактики инфекционных заболеваний у телят, вызываемых эшерихиями, сальмонеллами, протеями и клебсиеллами, для нутрий не применяется.
Известна вакцина против стрептококкоза и пастереллеза нутрий (патент РФ на изобретение № 2099084 от 30.09.94, МКИ А61K 39/125, 39/135). Данная вакцина содержит в качестве антигена суспензию штамма Streptococcus zooepidemicus ВГНКИ № К-ДЕП с титром 2,5-3,0 млрд. микробных клеток в 1 мл в культуральной среде, суспензию клеток штаммов Pasteurella multosida ВГНКИ № 6011, Pasteurella multosida ВГНКИ № 2394 и Pasteurella multocida ВГНКИ № 1015 в равных соотношениях общим содержанием 2,5-3,0 млрд. микробных клеток в 1 мл питательной среды глюкозу, формалин, гидроокись алюминия и сапонин. Данная вакцина применяется для профилактики стрептококкоза и пастереллеза нутрий. Сырье получают путем культивирования штаммов возбудителей стрептококкоза и пастереллеза нутрий в питательной среде с низкой активностью. Использование сапонина в вакцине может вызывать у привитых животных различные поствакцинальные осложнения (воспалительные процессы, абсцессы на месте введения, хромоту и др.)
Техническим решением задачи изобретения является устранение перечисленных недостатков, в частности повышение специфичности, эффективности вакцины против сальмонеллеза и энтерококковой инфекции у нутрий, путем введения новых чистых культур возбудителей, компонентов, исключая отрицательного и побочного влияния.
Решение задачи достигается тем, что вакцина, ассоциированная против сальмонеллеза и энтерококковой инфекции нутрий, включающая инактивированные антигены, адъювант, в качестве антигенов содержит суспензию клеток чистых культур возбудителей сальмонеллеза Salmonella typhimurium и энтерококковой инфекции Streptococcus fecalis, полученных путем отбора пораженных органов от павших нутрий из местного эпизоотического очага, приготовления суспензии, посева на дифференциально-диагностические среды, выделения чистых культур возбудителей, выращивание проводят раздельно в мясопептонном бульоне с глюкозой до концентрации микробных клеток 4-5 млрд. в 1 см3, смешивают их в соотношении 1:2, вносят формалин и гидроокись алюминия при следующем соотношении компонентов, мас.%:
| суспензия клеток чистой культуры | |
| возбудителя сальмонеллеза Salmonella | |
| typhimurium, выделенного из местного | |
| эпизоотического очага, в питательной | |
| среде с титром 4-5 млрд. микробных | |
| клеток в 1 см3 | 25,5-27,5 |
| суспензия клеток чистой культуры | |
| возбудителя энтерококковой инфекции | |
| Streptococcus fecalis, выделенного | |
| из местного эпизоотического очага, | |
| в питательной среде с титром 4-5 млрд. | |
| микробных клеток в 1 см3 | 50,5-55,0 |
| глюкоза | 2,0-1,0 |
| формалин | 2,0-1,5 |
| гидроокись алюминия | остальное |
Новизна заявляемого технического решения обусловлена тем, что в отличие от известных вакцин для получения сырья проводят отбор пораженных органов от павших нутрий из местного эпизоотического очага, приготовление суспензии, посев на дифференциально-диагностические среды, выделение чистых культур возбудителей Salmonella typhimurium и Streptococcus fecalis, выращивание чистых культур возбудителей проводят раздельно на мясопептонном бульоне, что позволяет повысить специфичность и иммуногенность вакцины.
При раздельном культивировании чистых культур возбудителей и добавление в питательную среду глюкозы до 0,2%-ной концентрации позволяет получать концентрацию микробных клеток не менее 4-5 млрд. в 1 мл в течение 12-14 часов инкубирования. Инактивирование баксырья формалином в 0,4-0,5%-ной конечной концентрации при температуре 37°С в течение 72-96 часов позволяет подавить патогенность возбудителей и сохранить их иммуногенные свойства в течение 12 месяцев. Смешивание инактивированных антигенов Salmonella typhimurium и Streptococcus fecalis в соотношении 1:2, внесение гидроокиси алюминия и тщательное перемешивание не вызывает у привитых нутрий поствакцинальных осложнений, позволяет обеспечить формирование напряженного иммунитета через 12-15 суток после однократного введения продолжительностью не менее 9 месяцев (срок наблюдения). Использование чистых культур возбудителей Salmonella typhimurium и Streptococcus fecalis, выделенных из местного эпизоотического очага от больных и павших нутрий, позволяет значительно повысить специфичность вакцины, после однократной вакцинации обеспечивает защиту животных сразу от двух опасных инфекционных болезней сальмонеллеза и энтерококковой инфекции.
По данным патентной и научно-технической литературы не обнаружена аналогичная совокупность признаков, компонентов, что позволяет судить об изобретательском уровне заявленного технического решения.
Что касается критерия «промышленная применимость», то компоненты, входящие в состав вакцины, известны и широко применяются в ветеринарной практике при изготовлении инактивированных вакцин: формолквасцовая вакцина против паратифа (сальмонеллеза) телят ТУ 46-21-166-75, утверждено 10.05.75 г., инструкция по изготовлению и контролю данной вакцины утверждена Главным управлением ветеринарии МСХ СССР 28.03.80 г.; вакцина против паратифа (сальмонеллеза) поросят ТУ 46-21-952-74, утверждено 15.07.74 г., инструкция по изготовлению и контролю данной вакцины утверждена Главным управлением ветеринарии МСХ СССР 23.10.96 г.; ассоциированная вакцина против сальмонеллеза, пастереллеза и энтерококковой инфекции поросят ТУ 10.09-62-90, утверждено 01.08.90 г., инструкция по изготовлению и контролю данной вакцины утверждена Главным управлением ветеринарии 16.07.90 г.; вакцина против энтерококковой инфекции телят, ягнят и поросят ТУ 10.09-91-90, утверждено 15.12.90 г., представлены все необходимые сведения о микроорганизмах рода Salmonella и рода Streptococcus. Однако для нутрий эти вакцины не применяются.
Методы выделения и характеристика сальмонелл описаны в методических указаниях «Лабораторная диагностика сальмонеллезов человека и животных, обнаружение сальмонелл в кормах, продуктах питания и объектах внешней среды». Москва, ВО «Агропромиздат», 1990 г., а также в справочнике «Определитель зоопатогенных микроорганизмов» под редакцией профессора Сидорова М.А., Москва. - Колос, 1995, стр.201-204. В «Практикуме по ветеринарной микробиологии и иммунологии» авторы: Костенко Т.С., Родионова В.Б., Скородумов Д.И., М.: Колос, 2001, на стр.222-231.
Методы выделения и характеристика стрептококков представлены в «Методических указаниях по лабораторной диагностике стрептококкоза животных», утвержденных 25.09.1990 г. Главным управлением ветеринарии с государственной инспекцией при Государственной комиссии СМ СССР по продовольствию и закупкам, а также в справочнике «Определитель зоопатогенных микроорганизмов» под редакцией профессора Сидорова М.А., Москва. - Колос, 1995, стр.90-95.
Предложенная вакцина, ассоциированная против сальмонеллеза и энтерококковой инфекции нутрий, проста в исполнении, доступна и является промышленно применимой.
Вакцина, ассоциированная против сальмонеллеза и энтерококковой инфекции нутрий, содержит инактивированные формалином чистые культуры возбудителей Salmonella typhimurium и энтерококковой инфекции нутрий Streptococcus fecalis, адсорбированные на гидрате окиси алюминия. По внешнему виду вакцина представляет собой жидкость светло-желтого цвета с рыхлым осадком, который при встряхивании легко разбивается в гомогенную взвесь. Срок хранения в сухом, темном месте при температуре от 2 до 10°С 1 год. Вакцина предназначена для профилактики опасных инфекционных заболеваний нутрий против сальмонеллеза и энтерококковой инфекции нутрий. Она вызывает образование специфического иммунитета против сальмонеллеза и энтерококковой инфекции нутрий. Вакцина безвредна и ареактогенна. Иммунитет у нутрий, привитых вакциной против сальмонеллеза и энтерококковой инфекции нутрий, формируется через 12-15 суток после вакцинации и сохраняется не менее 9 месяцев. Вакцину применяют в благополучных, неблагополучных и угрожаемых по сальмонеллезу и энтерококковой инфекции нутрий хозяйствах. В благополучных и угрожаемых по сальмонеллезу и энтерококковой инфекции нутрий хозяйствах вакцину вводят однократно, внутримышечно в область бедра, молодняку с 45-дневного возраста по 1,0 см3, а взрослым животным по 1,5 см3. В неблагополучных хозяйствах вакцину вводят внутримышечно в область бедра с 2-месячного возраста двукратно с интервалом 7-10 дней: первая вакцинация в дозе 1,0 см3, вторая - в дозе 1,5 см3. Продукты убоя вакцинированных нутрий используют без ограничений независимо от сроков вакцинации.
К факторам, обуславливающим получение вакцины заданного свойства, относятся последовательность изготовления и процентное соотношение между компонентами, входящими в препарат.
Приведено пять примеров, содержащих компоненты в различных соотношениях на 100 мл вакцины.
Пример 1.
Берут пораженные органы от павших нутрий из местного эпизоотического очага, из которых приготавливают суспензию, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистые культуры возбудителей сальмонеллеза Salmonella typhimurium и энтерококковой инфекции нутрий Streptococcus fecalis, раздельно культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию микробных клеток 74,5 с титром 4-5 млрд. и содержанием глюкозы 0,5, инактивируют внесением формалина 1,0, затем добавляют гидроокись алюминия - остальное, тщательно смешивают и получают вакцину следующего состава при следующем соотношении компонентов, мас.%:
| суспензия клеток чистой культуры | |
| возбудителя Salmonella typhimurium, | |
| выделенного из местного эпизоотического | |
| очага, в питательной среде с титром 4-5 млрд. | |
| микробных клеток в 1 см3 | 24,5 |
| суспензия клеток чистой культуры возбудителя | |
| Streptococcus fecalis, выделенного из местного | |
| эпизоотического очага, в питательной среде с | |
| титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см3 | 50,0 |
| глюкоза | 0,5 |
| формалин | 1,0 |
| гидроокись алюминия | остальное |
При данном соотношении компонентов вакцина, ассоциированная против сальмонеллеза и энтерококковой инфекции нутрий, обладает слабой иммуногенной активностью.
Пример 2.
Берут пораженные органы от павших нутрий из местного эпизоотического очага, из которых приготавливают суспензию, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистые культуры возбудителей сальмонеллеза Salmonella typhimurium и энтерококковой инфекции нутрий Streptococcus fecalis, раздельно культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию микробных клеток 75,5 с титром 4-5 млрд. и содержанием глюкозы 1,0, инактивируют внесением формалина 1,5, затем добавляют гидроокись алюминия - остальное, тщательно смешивают и получают вакцину следующего состава при следующем соотношении компонентов, мас.%:
| суспензия клеток чистой культуры возбудителя | |
| сальмонеллеза Salmonella typhimurium, выделенного | |
| из местного эпизоотического очага, в питательной | |
| среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см3 | 25,0 |
| суспензия клеток чистой культуры возбудителя | |
| энтерококковой инфекции Streptococcus fecalis, | |
| выделенного из местного эпизоотического очага, | |
| в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных | |
| клеток в 1 см3 | 50,5 |
| глюкоза | 1,0 |
| формалин | 1,0 |
| гидроокись алюминия | остальное |
При данном соотношении компонентов вакцина, ассоциированная против сальмонеллеза и энтерококковой инфекции нутрий, обладает иммуногенной активностью.
Пример 3.
Берут пораженные органы от павших нутрий из местного эпизоотического очага, из которых приготавливают суспензию, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистые культуры возбудителей сальмонеллеза Salmonella typhimurium и энтерококковой инфекции нутрий Streptococcus fecalis, выделенные из местного эпизоотического очага, раздельно культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию микробных клеток 79,0 с титром 4-5 млрд. и содержанием глюкозы 1,7, инактивируют внесением формалина 1,3, затем добавляют гидроокись алюминия - остальное, тщательно смешивают и получают вакцину следующего состава при следующем соотношении компонентов, мас.%:
| суспензия клеток чистой культуры возбудителя | |
| сальмонеллеза Salmonella typhimurium, | |
| выделенного из местного эпизоотического | |
| очага, в питательной среде с титром 4-5 млрд. | |
| микробных клеток в 1 см3 | 26,5 |
| суспензия клеток чистой культуры возбудителя | |
| энтероокковой инфекции Streptococcus fecalis, | |
| выделенного из местного эпизоотического очага, | |
| в питательной среде с титром 4-5 млрд. | |
| микробных клеток в 1 см3 | 52,5 |
| глюкоза | 1,7 |
| формалин | 1,3 |
| гидроокись алюминия | остальное |
При данном соотношении компонентов вакцина, ассоциированная против сальмонеллеза и энтероокковой инфекции нутрий, обладает незначительной иммуногенной эффективностью.
Пример 4.
Берут пораженные органы от павших нутрий из местного эпизоотического очага, из которых приготавливают суспензию, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистые культуры возбудителей сальмонеллеза Salmonella typhimurium и энтерококковой инфекции нутрий Streptococcus fecalis, выделенные из местного эпизоотического очага, раздельно культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию микробных клеток 82,2 с титром 4-5 млрд. и содержанием глюкозы 1,0, инактивируют внесением формалина 1,5, затем добавляют гидроокись алюминия - остальное, тщательно смешивают и получают вакцину следующего состава при следующем соотношении компонентов, мас.%:
| суспензия клеток чистой культуры возбудителя | |
| сальмонеллеза Salmonella typhimurium, | |
| выделенного из местного эпизоотического очага, | |
| в питательной среде с титром 4-5 млрд. | |
| микробных клеток в 1 см3 | 27,5 |
| суспензия клеток чистой культуры возбудителя | |
| энтероокковой инфекции Streptococcus fecalis, | |
| выделенного из местного эпизоотического очага, | |
| в питательной среде с титром 4-5 млрд. | |
| микробных клеток в 1 см3 | 55,0 |
| глюкоза | 1,0 |
| формалин | 1,5 |
| гидроокись алюминия | остальное |
При данном соотношении компонентов вакцина, ассоциированная против сальмонеллеза и энтерококковой инфекции нутрий, обладает иммуногенной активностью, формирует после вакцинации выраженный напряженный иммунитет, не вызывает поствакцинальных осложнений, стабильна при хранении в течение 12 месяцев (таблица 1).
Пример 5.
Берут возбудитель сальмонеллеза Salmonella typhimurium, возбудитель энтерококковой инфекции нутрий Streptococcus fecalis, выделенные из местного эпизоотического очага, раздельно культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию микробных клеток 84,5 с титром 4-5 млрд. и содержанием глюкозы 2,0, инактивируют внесением формалина 1,5, затем добавляют гидроокись алюминия - остальное, тщательно смешивают и получают вакцину следующего состава при следующем соотношении компонентов, мас.%:
| суспензия клеток чистой культуры возбудителя | |
| сальмонеллеза Salmonella typhimurium, | |
| выделенного из местного эпизоотического очага, | |
| в питательной среде с титром 4-5 млрд. | |
| микробных клеток в 1 см3 | 28,5 |
| суспензия клеток чистой культуры возбудителя | |
| энтероокковой инфекции Streptococcus fecalis, | |
| выделенного из местного эпизоотического очага, | |
| в питательной среде с титром 4-5 млрд. | |
| микробных клеток в 1 см3 | 56,0 |
| глюкоза | 2,0 |
| формалин | 1,5 |
| гидроокись алюминия | остальное |
При данном соотношении компонентов вакцина, ассоциированная против сальмонеллеза и энтерококковой инфекции нутрий, обладает слабой иммуногенной активностью, формирует напряженный иммунитет, у отдельных животных на месте введения препарата вызывает слабое раздражение.
Из данных таблицы видно, что предлагаемая вакцина, ассоциированная против сальмонеллеза и энтерококковой инфекции нутрий, имеет значительные преимущества в сравнении с вакциной по прототипу.
Вакцина, ассоциированная против сальмонеллеза и энтерококковой инфекции нутрий, содержащая инактивированные антигены, адъювант, отличающаяся тем, что в качестве антигенов содержит суспензию клеток чистых культур возбудителей сальмонеллеза Salmonella typhimurium и энтерококковой инфекции Streptococcus fecalis, полученных путем отбора пораженных органов от павших нутрий из местного эпизоотического очага, приготовления суспензии, посева на дифференциально-диагностические среды, выделения чистых культур возбудителей, выращивание проводят раздельно в мясопептонном бульоне с глюкозой до концентрации микробных клеток 4-5 млрд. в 1 см3, смешивают их в соотношении 1:2, вносят формалин и гидроокись алюминия при следующем соотношении компонентов, мас.%:
| Суспензия клеток чистой культуры | |
| возбудителя сальмонеллеза Salmonella | |
| typhimurium, выделенного из местного | |
| эпизоотического очага, в питательной | |
| среде с титром 4-5 млрд. микробных | |
| клеток в 1 см3 | 25,5-27,5 |
| Суспензия клеток чистой культуры | |
| возбудителя энтерококковой инфекции | |
| Streptococcus fecalis, выделенного | |
| из местного эпизоотического очага, | |
| в питательной среде с титром 4-5 млрд. | |
| микробных клеток в 1 см3 | 50,5-55,0 |
| Глюкоза | 2,0-1,0 |
| Формалин | 2,0-1,5 |
| Гидроокись алюминия | Остальное |
