Патент ссср 236365

 

и C COfOЭт ащ патент и С К Й и

236365

Союз Советских

Социалистических

Республик

К ПАТЕНТУ

Зависимьш от патента М

Заявлено 24.3V.1967 (Зт3Е 1152461/28-13) К.1 6а, 14

Приоритет 25.IV.1966, Л 25864,66, Япоггня, 1ПК С 32k

Комитет по делам изобретений и открытий при Совете Министров

СССР

Опубликовано 24.1.1969. Вюллетсш Х> 6

УДК 663. 3 1:577. 3 55.2 (088.8) Дата опубликования ol1lfcaHIIH 27А .1969

Автор изобретения

Иностранец

Масао Танака (Япония) Иностранная фирма

«Кийова Хакко Когио Ко Лтд.», Япония

Заявитель

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТИАМ И НАДЕНИ НД И НУКЛЕОТИДОВ

Получение TиаминадсHHHäèíóêëåîтидов микробиологическим способом оы lo неизвестно.

Предлагаемый способ заключается в том, что тиаминадсниндннуклеотид получают путем культивирования в аэробных условиях микроорганизмов, например Вгеi1Ьас1егium ammoniagenes H Corynebacterium glatamicus, в воднои питательной среде, содержащей источник углерода, например глюкозу, фруктозу, мальтозу, сахарозу, крахмал, гидролизат крахмала, мелассу, глицерин, сорбит, органические ки слоты, источник азота, например мочевину, аммониевые соли, гидролизат казеина, жидкость от замочки кукурузы, дрожжевой экстрак1, мясной экстракт, пептон, рыбн1 ю м>укl в присутствии неорганических веществ, необходимых для роста продуцентов, например сульфата магния, фосфата натрия.

К культуральной среде добавляют тиамин или его фосфорнокислый эфир и аденин или соответствующее его производное. Их вводят сразу или периодически B культуральную среду в процессе ферментации, которую проводят прн температуре 20 — 40 С и рН среды

5,5 — 9,0.

По окончании ферментации тиаминадениндинуклеотид отделяют от ферментационной жидкости одним нз известных спо-îáîâ,,например путем обработки ионообменной смолой.

В качестве микроорганизма, продуцпрующего тнаминаденнндннукaeoTHI,, используют штамм Вге ibactel ium aln»IoniageITes ATCI

6872. Его выращивают при температуре 30 С в течение 21 час на питательной среде, содер10 жащей 2Я глюкозы, 1 о пептона, 1 /о дрожжевого экстракта, 0,30/o IopucTolo натрия и

30 у.г бнотнна.

Выращеннуго посевную культуру (матери15 à1) в количестве 10% вносят в ферментационную культуральную среду, содержащую 100 г глюкозы, 10 г дпкалийфосфата, 10 г семиводного сульфата магния, 0,1 г двухосновного

xëoðèäà кальция, 10 г дрожжевого экстракта, 20 30 ..l биотнна и 6 г мочевнны. Iscfo среду, за исключением мочевины, стерилизуют под давлением 1 кг, с,тг- в течение 10 лгин, .Чочевину стерилнзуют отдельно в виде 12%-ного водного и добавляют в среду в таком ко25 лнчсстве, чтобы концентрация ее достигла

6 г/.г.

Дальнейшее выращивание осуществляют при температуре 30 С в аэробных условиях в

2363() 5

Предмет изобретения (.остави е.ll> T. Полянск ав

1 е. и д Л. Я. Левина

Редактор Э. Рубан

1(орректор А. П. Васильева

Лакал 7YOil(i 1 п11 1ж 155 I 1о тписпо{

ЦНИИПИ 1(омитета по делам изобретений и открвпий при Совете Минјстров СССР

Москва, Центр, пр. Серова, д. 4

Типо рафпв. пр. Сапунова, 2 гечение 72 час с добавлением по 2 яг/л тиамина и аденина и продол>ка(от выращивать еще

24 час.

Через 96 час от начала выращивания вырабатывается 0,92 яг/лл тиаминадениндинуклеoтида.

Затем фермента ционную хкидкость освобождают от бактериальных клеток путем фильтрации, рН доводят до 7,0 и пропускают черсз колонку, заполненную 2 л анионообмснной смолы даиайон SA2TB (в хлоридной форме) для адсорбции тиаминадениндинуклеотида. Ионообменную смолу элюируют водным раствором милинормальной соляной кислоты и 0,02 . раствором хлорида лития, в результате чего получают 500 мл элюата.

Последний концентрируют в вакууме, осаждают ацетонмстанолом, получая таким образом 0,71 г литиевой соли тиаминадениндинуклеотида. Соль очищают повторным раствоpeI»le i, высаливают и получают продукт, по физическим и химическим свойствам сходный с тпаминадснпндпнуклеотидом.

Способ получения тпамппаденппдпнуклеоти;IoB бпосиптезом, оглшчпющийся тем, что его производят путем аэробного культивирования микроорганизмов Вгеi ibactci ium ammoniagenes u CoI).nebacicl glatamicus в водной питательной среде, содержащей источник углерода, например гл(окозу, фруктозу, сахарову, 10 крахмал, гидролизат крахмала, мелассу, глицерин, сорбит, органические кислоты, источilIIK азота, например мо (свину, аммониевые соли; гидролизат казеина, жидкость от замочки кукурузы, дров(жсвой экстракт, мясной

15 экстракт, псптон, рыбную муку 1 др. в присутствии неорганических веществ, необходимых для роста продуцентов, например сульфата магния, фосфата натрия; к K);IbT) ðaëüíoé среде добавляют тиамин или фосфорнокислый

20 эфир и аденин или соответствующее его производное, причем их вводят сразу или периодически в культуральную жидкость в процессе ферментации, которую проводят при температуре от 20 до 40=С и рН около 5,5 — 9,0.