Парааминобензоилгидразид янтарной кислоты - противодиабетическое средство с иммуномодулирующими свойствами

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и касается применения биологически активного пара-аминобензоилгидразида янтарной кислоты в качестве лекарственного иммуномодулирующего препарата. Показано восстановление фагоцитарной активности нейтрофилов до нормальных значений под действием соединения на фоне иммунодефицита. 2 табл.

 

Изобретение относится к биологически активным соединениям, а именно пара-аминобензоилгидразиду янтарной кислоты (I) формулы

применение которого у животных с дексаметазоновой моделью инсулинорезистентности и иммунодефицита способствует сохранению фагоцитарной активности нейтрофилов, что позволяет предположить возможность его использования в медицине в качестве средства для лечения сахарного диабета. Ближайшими структурными аналогами заявляемому соединению являются орто- и мета-аминобензоилгидразиды янтарной кислоты (II и III) общей формулы

II: R¹=NH₂, R²=H; III: R¹=H, R²=NH₂

описанные в работе [Колотова Н.В., Козьминых Е.Н., Колла В.Э. и др. // Хим.-фарм. журнал. - 1999. - Т.33. - №5. - С.22-28]. Соединение II гипогликемической активностью не обладает, а гипогликемическое действие соединения III выражено слабо [Колотова Н.В., Долженко А.В., Козьминых В.О. и др. // Хим.-фарм. журнал. - 1999. - Т.33. - №12. - С.9-11].

Известно, что соединение I оказывает гипогликемическое действие на здоровых животных и крыс с аллоксановой моделью диабета [Колотова Н.В., Долженко А.В., Козьминых В.О. и др. // Хим.-фарм. журнал. - 1999. - Т.33. - №12. - С.9-11; Долженко А.В., Котегов В.П., Година А.Т. и др. // Эксп. клин. фармакол. - 2003. - Т.66. - №3. - С.36-38; Dolzhenko A.V., Kolotova N.V, Kozminykh V.О. et al. // Pharmazie. - 2002. - Vol.57. - №11. - P.776-778], однако влияние соединения I на иммунную систему не описано.

Известны и применяются при терапии сахарного диабета гипогликемические препараты: гликлазид и метформин [Энциклопедия лекарств (ред. Вышковский Г.Л.) М., «РЛС-2004», 2004, с.248, 549], которые были взяты нами в качестве эталонов сравнения по действию.

Целью предлагаемого изобретения является поиск в ряду ацилгидразидов янтарной кислоты соединения, обладающего, наряду с гипогликемической активностью, низкой токсичностью и иммуномодулирующей активностью. Поставленная цель достигается получением пара-аминобензоилгидразида янтарной кислоты [Колотова Н.В., Козьминых Е.Н., Колла В.Э. и др. // Хим.-фарм. журнал. - 1999. - Т.33. - №5. - С.22-28]. ацилированием гидразида пара-аминобензойной кислоты янтарным ангидридом.

Методика получения пара-аминобензоилгидразида янтарной кислоты (I). Раствор 1,00 г (0,01 моль) янтарного ангидрида в 30 мл диоксана и раствор 1,51 г (0,01 моль) гидразида пара-аминобензойной кислоты в 30 мл диоксана сливают при температуре 20°С, нагревают до 50°С в течение 10 мин. Через 2 ч выпавший осадок отфильтровывают и кристаллизуют из этанола, выход 2,26 г. 90% Т.пл.=159-161°С.

Полученное соединение представляет собой белое кристаллическое вещество, растворимое в этаноле, ДМСО, ДМФА. В спектре ЯМР ¹Н («РЯ-2310» (60 МГц) в ДМСО-d₆, внутренний стандарт - ГМДС) соединения I имеются: синглет четырех протонов сукцинильного фрагмента при 2,42 м.д., мультиплет четырех протонов ароматической системы бензоильного фрагмента в области 6,55-7,58 м.д., два уширенных сигнала двух протонов гидразидной группы CONH-NHCO при 9,85 и 10,25 м.д.

У соединения I определяли гипогликемическую активность, острую токсичность и показатели фагоцитарной активности нейтрофилов.

Гипогликемическое действие изучали на здоровых крысах и крысах с аллоксановой моделью диабета [Колотова Н.В., Долженко А.В., Козьминых В.О. и др. // Хим.-фарм. журнал. - 1999. - Т.33. - №12. - С.9-11; Долженко А.В., Котегов В.П., Година А.Т. и др. // Эксп. клин. фармакол. - 2003. - Т.66. - №3. - С.36-38; Dolzhenko A.V., Kolotova N.V., Kozminykh V.O. et al. // Pharmazie. - 2002. - Vol.57. - №11. - P.776-778].

Острую токсичность при внутрибрюшинном введении определяли на нелинейных белых мышах массой от 20 до 25 г. Исследуемое вещество и препараты сравнения вводили внутрибрюшинно в виде водной суспензии из расчета 0,5 мл на 10 г массы в возрастающих дозах. Результаты обрабатывали по Прозоровскому с вычислением средней смертельной дозы (ЛД₅₀) при Р=0,05 [Прозоровский В.В., Прозоровская М.П., Демченко В.М. // Фармакол. и токсикол. - 1978. - Т.41. - №4. - С.497-502].

При изучении влияния соединения I и препаратов сравнения на фагоцитоз использовали 4 группы по 6 здоровых крыс в каждой и 4 группы по 6 крыс, которым ежедневно внутримышечно в дозе 0,1 мг/кг вводили дексаметазон. В течение 21 дня здоровым животным и крысам с моделью иммунодефицита ежедневно через рот в дозе 50 мг/кг вводили соединение I, гликлазид, метформин или эквиобъемное количество изотонического раствора хлорида натрия. После завершения курса определяли показатели фагоцитарной активности нейтрофилов. В качестве объекта фагоцитоза использовали эритроциты эритроцитарного диагностикума из шигелл Зонне. Для характеристики функциональной активности нейтрофилов определяли процент фагоцитоза, фагоцитарное число и индекс активности фагоцитоза [Мелкоян Н.Г., Арутсюнян М.С., Хачатурова И.А. // Лаб. дело - 1981. - №12. - С.748-749].

Степень гипогликемической активности изучаемого соединения через 3 и 5 часов после его введения сравнивали с активностью эталонных препаратов [Колотова Н.В., Долженко А.В., Козьминых В.О. и др. // Хим.-фарм. журнал. - 1999. - Т.33. - №12. - С.9-11; Долженко А.В., Котегов В.П., Година А.Т. и др. // Эксп. клин. фармакол. - 2003. - Т.66. - №3. - С.36-38; Dolzhenko A.V., Kolotova N.V., Kozminykh V.О. et al. // Pharmazie. - 2002. - Vol.57. - №11. - Р.776-778].

Сопоставляли токсичность исследуемого соединения и препаратов сравнения и их влияние на фагоцитарную активность нейтрофилов.

Как следует из проведенных нами ранее исследований, соединение I обладает выраженной гипогликемической активностью на здоровых животных [Колотова Н.В., Долженко А.В., Козьминых В.О. и др. // Хим.-фарм. журнал. - 1999. - Т.33. - №12. - С.9-11], и особенно на крысах с аллоксановой моделью диабета [Долженко А.В., Котегов В.П., Година А.Т. и др. // Эксп. клин. фармакол. - 2003. - Т.66. - №3. - С.36-38; Dolzhenko A.V., Kolotova N.V., Kozminykh V.O. et al. // Pharmazie. - 2002. - Vol.57. - №11. - P.776-778], не уступая, а в ряде случаев превосходя по выраженности эффекта препараты сравнения.

Для изучаемого соединения ЛД₅₀ оказалась больше 2000 мг/кг. Соединение I, в соответствии с классификацией токсичности химических веществ [Измеров Н.Ф., Саноцкий И.В., Сидоров К.К. Параметры токсикометрии промышленных ядов. М.: Медицина, 1977, с.197.], относится к классу практически нетоксичных препаратов. Для гликлазида и метформина ЛД₅₀ составила 355 (290-420) мг/кг и 980 (903-1063) мг/кг, соответственно. Приведенные результаты говорят о меньшей токсичности соединения I по сравнению с эталонными препаратами.

Из таблицы 1 видно, что соединение I не изменяет уровень фагоцитарной активности нейтрофилов у здоровых животных, в то время как препараты сравнения фагоцитоз достоверно угнетают. На фоне дексаметазонового иммунодефицита соединение I проявляет четко выраженные иммуномодулирующие свойства, восстанавливая показатели фагоцитарной активности до нормальных значений, тогда как введение эталонных препаратов не ведет к улучшению иммунной защиты (табл.2).

Таким образом, пара-аминобензоилгидразид янтарной кислоты (I) проявляет высокую гипогликемическую активность, является практически нетоксичным и обладает иммуномодулирующим действием. Следовательно, заявляемое соединение I может найти применение в медицине в качестве противодиабетического лекарственного средства с иммуномодулирующими свойствами.

Таблица 1 Влияние соединения I и препаратов сравнения на фагоцитарную активность нейтрофилов здоровых крыс
Соединение	Процент фагоцитоза	Фагоцитарное число	Индекс активности фагоцитоза
I	41,2±2,7	0,48±0,06	0,17±0,08
Метформин	28,0±4,1*	0,30±0,05*	0,04±0,04*
Гликлазид	26,3±4,8*	0,29±0,06*	0,07±0,04*
Контроль	40,8±2,6	0,51±0,04	0,19±0,04
* - значимые отличия по сравнению с контролем при р<0,05

Таблица 2 Влияние соединения I и препаратов сравнения на фагоцитарную активность нейтрофилов крыс с дексаметазоновой моделью иммунодефицита
Соединение	Процент фагоцитоза	Фагоцитарное число	Индекс активности фагоцитоза
I	44,0±l,7*	0,57±0,03*	0,27±0,04*
Метформин	19,2±2,2	0,22±0,03	0,05±0,01
Гликлазид	19,3±3,3	0,22±0,04	0,06±0,03
Контроль	16,7±4,9	0,19±0,06	0,04±0,04
* - значимые отличия по сравнению с контролем при р<0,05

Литература

1. Долженко А.В., Котегов В.П., Година А.Т. и др. // Эксп. клин. фармакол. - 2003. - Т.66. - №3. - С.36-38.

2. Измеров Н.Ф., Саноцкий И.В., Сидоров К.К. Параметры токсикометрии промышленных ядов. М.: Медицина, 1977, с.197.

3. Колотова Н.В., Долженко А.В., Козьминых В.О. и др. // Хим.-фарм. журнал. - 1999. - Т.33. - №12. - С.9-11.

4. Колотова Н.В., Козьминых Е.Н., Колла В.Э. и др. // Хим.-фарм. журнал. - 1999. - Т.33. - №5. - С.22-28.

5. Мелкоян Н.Г., Арутсюнян М.С., Хачатурова И.А. // Лаб. дело - 1981. - №12. - С.748-749.

6. Прозоровский В.В., Прозоровская М.П., Демченко В.М. // Фармакол. и токсикол. - 1978. - Т.41. - №4. - С.497-502.

7. Энциклопедия лекарств (ред. Вышковский Г.Л.) М., «РЛС-2004», 2004, С.248, 549.

8. Dolzhenko A.V., Kolotova N.V., Kozminykh V.О. et al. // Pharmazie. - 2002. - Vol.57. - №11. - P.776-778.

Применение парааминобензоилгидразида янтарной кислоты в качестве средства, обладающего иммуномодулирующими свойствами.