Способ получения инъекционной лекарственной формы фосфолипидного препарата "фосфоглив" для лечения и профилактики острых и хронических заболеваний печени
Изобретение относится к фармацевтической промышленности и касается способа получения инъекционной формы фосфолипидного препарата "Фосфоглив" для лечения и профилактики заболеваний печени, содержащего фосфолипиды растительного происхождения, глицирризиновую кислоту или ее соли и углеводы, путем смешения фосфолипидов, глицирризиновой кислоты или ее солей и углеводов в водной среде с последующими гомогенизацией эмульсионно-дисперсионной смеси при давлении 800-1200 бар, фильтрацией и сублимационной сушкой. Препарат стабилен в течение трех лет. 1 табл.
Изобретение относится к области фармацевтики и касается способа получения инъекционной лекарственной формы фосфолипидного препарата "Фосфоглив" для лечения и профилактики острых и хронических заболеваний печени, нарушения липидного обмена, восстановления функции печени после интоксикации, содержащего растительные фосфолипиды, глицирризиновую кислоту или ее соли и вспомогательные вещества.
Известно, что патологические процессы в печени при различных заболеваниях сопровождаются нарушением структуры и функции мембранных систем гепатоцитов. Повреждение мембран обусловлено нарушением липидного бислоя за счет вовлечения липидов в процессы перекисного окисления и воздействия на них эндогенных фосфолипаз. Изменение физико-химических свойств липидов приводит к нарушению структуры липидного матрикса биомембран и к потере их барьерной функции, что сопровождается инактивацией мембранных ферментных систем.
В ряде исследований, в том числе и в ГУ НИИ БМХ РАМН, было показано, что наиболее перспективным в плане использования фосфолипидов для восстановления поврежденных мембран гепатоцитов являются фосфолипиды растительного происхождения, которые имеют в своем составе незаменимые жирные кислоты (линолевую и линоленовую). Это делает их более жидкими, чем обычный мембранный фосфатидилхолин, позволяя выполнять роль "мембранного клея", способного репарировать дефекты поврежденных клеточных мембран. Механизм действия растительных фосфолипидов связан с включением в мембраны полиненасыщенного фосфатидилхолина, способного восстанавливать структуру и функцию поврежденных клеток.
Известен ряд препаратов на основе фосфолипидов, применяемых как в виде капсул, драже или таблеток, так и в виде инъекционных форм. Одним из таких препаратов, который уже более 40 лет применяется в практическом здравоохранении для восстановления функций печени является "Эссенциале" и более современный "Эссенциале Н" (Франция-Германия) [1]. "Эссенциале" содержит смесь фосфолипидов, ненасыщенных жирных кислот и витаминов.
В технологии производства инъекционной формы "Эссенциале" для растворения жироподобной фосфолипидной субстанции в качестве детергента используют соль дезоксихолевой кислоты, обладающей цитотоксическим действием и оказывающей негативное воздействие на клетку.
Известен способ получения инъекционной формы фосфолипидного препарата "Фосфоглив" для лечения и профилактики заболеваний печени, содержащего растительные фосфолипиды с высоким содержанием фосфадитилхолина (75-98%), глицирризиновую кислоту или ее соли и вспомогательные вещества [2]. Используемая в качестве эмульгатора глицирризиновая кислота или ее соль помимо мягкого детергентного действия обладает гепатопротекторным противовоспалительным, противоаллергическим и противовирусным свойствами.
Описано два способа получения инъекционной формы препарата "Фосфоглив".
Первый способ предусматривает смешение спиртового раствора фосфолипида с водными растворами глицирризиновой кислоты или ее соли и мальтозы с последующей обработкой полученной смеси ультразвуком, фильтрацией, отгонкой растворителя и лиофилизацией.
Второй способ заключается в смешение жироподобного фосфолипида с водными растворами соли глицирризиновой кислоты и мальтозы. Полученную смесь подвергают пяти циклам щелевой гомогенизации при давлении 600 бар с последующей фильтрацией, отгонкой растворителя и лиофилизацией.
В указанных известных способах получения инъекционной формы фосфолипидной композиции во всех случаях получают неоднородные и относительно большие по размеру липосомальные частицы, агрегирующие в растворе при хранении. Лиофильно высушенный порошок препарата при хранении в течение 4-6 месяцев при растворении мутнеет, не сохраняет липосомально/мицелярную структуру, частицы укрупняются. Отмечено также увеличение содержания в препарате окисленных фосфолипидов, в частности лизофосфатидилхолина. Поэтому срок хранения такого препарата не превышает трех месяцев. Весь технологический процесс очень сложен в исполнении и не позволяет получать стабильные при длительном хранении, однородные, по размеру не превышающие 30-50 нм липосомально/мицелярные частицы, восстанавливающие свою структуру при растворении в воде после длительного хранения.
Необходимо также отметить, что известные способы получения инъекционной формы фосфолипидной композиции не предусматривают предохранение фосфолипидов в процессе технологической обработки от окисления. При гомогенизации эмульсия разогревается до 90°С, что ускоряет процесс окисления и образования лизофосфатидилхолина. Согласно нормативной документации содержание этого соединения в готовом препарате не должно превышать 3%. Анализ образцов, полученных известным способом, показал, что уровень лизофосфатидилхолина в них превышал 8%, что указывало на низкое качество препарата. В силу указанных причин препарат не мог быть разрешен к использованию в медицинской практике.
Задачей настоящего изобретения является устранение указанных недостатков и разработка технологии получения инъекционной формы лекарственного препарата "Фосфоглив" с содержанием фосфатидилхолина 75-98%, содержащего глицирризиновую кислоту или ее соли и вспомогательные вещества при суммарном содержании фосфолипидов и глицирризиновой кислоты или ее соли 2-80 мас.% и массовом соотношении фосфолипидов и глицирризиновой кислоты не более 4:1.
В соответствии с изобретением описывается способ получения инъекционной формы фосфолипидного препарата для лечения и профилактики заболеваний печени, нарушения липидного обмена и восстановления функции печени после интоксикации, содержащего растительные фосфолипиды с содержанием фосфатидилхолина 75-98%, глицирризиновую кислоту или ее фармацевтически приемлемые соли и вспомогательные вещества при суммарном содержании фосфолипидов и глицирризиновой кислоты или ее соли 2-80 мас.% и массовом соотношении фосфолипидов и глицирризиновой кислоты не более 4:1, путем смешения эмульсии растительных фосфолипидов в водном растворе глицирризиновой кислоты или ее фармацевтически приемлемой соли с водным раствором углевода, в качестве которого используют лактозу, мальтозу и/или изомальтозу, при рН 6,5-7,5, и полученную эмульсионно-дисперсионную систему подвергают 5-22 циклам гомогенизации при комнатной температуре и давлении 800-1200 бар с последующими предварительной фильтрацией, стерилизующей фильтрацией и сублимационной сушкой.
Получают мелкодисперсные, однородные и стабильные липосомальные частицы размером 20-100 нм, из которых 95% составляют частицы размером 20-35 нм, что позволяет получать стабильный раствор, наиболее пригодный для внутривенного введения. Однородность частиц обеспечивает высокую прозрачность и стабильность раствора. Частицы восстанавливают свою структуру при растворении в воде после трехлетнего хранения.
Изобретение иллюстрируют следующие примеры.
Пример 1.
Раствор А: 6,9 г динатриевой соли глицирризиновой кислоты растворяют в воде для инъекций и доводят объем до 90 мл. Добавляют 2,25 мл 1 н. NaOH (для достижения в конечном объеме 300 мл рН 6,7-7,5). Добавляют 16,5 г измельченного фосфолипида с содержанием фосфатидилхолина 80%. Растворение проводят на высокоэффективной пропеллерной мешалке в токе инертного газа (азот).
Раствор Б: Растворяют 59,4 г мальтозы в воде для инъекций, тщательно перемешивают на мешалке до тех пор, пока раствор не станет прозрачным, и доводят конечный объем до 150 мл. Можно добавить немного больше воды, чтобы (V раствора А+V раствора Б)≤300 мл. Смешивают растворы А и Б. Доводят общий объем смеси до 300 мл водой для инъекций.
Гомогенизация раствора
Пропускают раствор через гомогенизатор (модель Mini-Lab 7.30 VH, Rannie, Дания) в течение 60 минут под давлением 800 бар. Охлаждение осуществляют через обратный холодильник. На этом этапе получают гомогенные по размеру липосомы диаметром 40-60 нм. Светопропускание (прозрачность) образца при 660 нм после гомогенизации не менее 60%.
Предфильтрация
Гомогенизированный раствор отфильтровывают под давлением азота 2 атм через мембрану ("Владипор") 3-4 мкм. Прозрачность раствора при 660 нм не менее 60%.
Стерилизующая фильтрация
Стерилизующую фильтрацию проводят в стерильной комнате в ламинаре (Ламинарбокс ЛБ-Г, Россия) на приборе напорного фильтрования (ПНФ-90, ЗАО "Мембраны", Россия) через фильтр ("Владипор") диаметром 0,2 мкм под давлением 3 атм. Прозрачность раствора 65%.
Стерильный розлив во флаконы
Дозатором в ламинарном потоке стерильного воздуха разливают раствор по 10 мл в темные флаконы и замораживают при -25°С.
Сублимационная сушка водного раствора
Замороженные образцы подвергают сублимационной сушке (LSL SECFROID, LYOLAB F, Германия) в течение 48 часов. Получают однородную липосомальную массу плотной консистенции. Флаконы с препаратом укупоривают резиновыми пробкам и закатывают алюминиевыми колпачками. Полученные образцы после трехлетнего хранения при комнатной температуре восстанавливают свою структуру при растворении в воде. Данные остальных примеров приведены в таблице.
Описываемый способ позволяет получить стабильный, высокоэффективный препарат с оптимальным размером наночастиц, который может использоваться в клинической практике в комплексном лечении различных заболеваний, сопровождающихся нарушениями функции печени.
Проведенные клинические исследования показали, что полученный в соответствии с изобретением препарат "Фосфоглив" лиофилизат для приготовления раствора для внутривенного введения обладает высокой эффективностью при лечении заболеваний печени различной этиологии. Внутривенная форма препарата хорошо переносится больными, не дает побочных реакций и приводит к заметному улучшению лабораторных показателей и общего состояния больных. Отмечено позитивное влияние препарата на репликативную активность вирусов гепатитов В и С, а также на иммунный и интерфероновый статусы, что позволяет рекомендовать его для использования в лечении хронических вирусных гепатитов и других заболеваний, при которых отмечается поражение печени.
| Таблица измерений размеров (диаметра) частиц (мицелл) в препарате " Фосфоглив для инъекций" | ||||||
| № п/п | Содержание ФХ*, % | Т% (660 нм) (светопропускание) | Размер частиц (нм) | Количество циклов гомогенизации, режим, температура и др. параметры. | Суммарное содержание ФЛ** и ГК***; % | Соотношение ФЛ и ГК |
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 |
| 2 | 75 | 70% | 1.22 нм (96%) и 68 нм (4%) | 9 циклов гомогенизации при 1000 бар, Т средняя 45°С, рН 6,85 | 2% | 4:1 |
| 2.22 нм (94%) и 77 нм (6%) | ||||||
| 3,26 нм (95%) и 73 нм (7%) | ||||||
| 4.22 нм (95%) и 75 нм (5%) | ||||||
| 5.20 нм (90%) и 54 нм (10%) | ||||||
| 3 | 75 | 72% | 21±1,9 нм (44%±10%)и 51±7,6 нм (47,1%±14%) | 500 мл при 1200 бар через 22 цикла, Т средняя 40°С | 2% | 3:1 |
| 4 | 80 | 27,2±7,6 нм (66,2%±13,4%); | 10 циклов гомогенизации при 1000 бар, Т средняя 45°С | 5% | 2,5:1 | |
| 70±12,3 нм (34%±10%) | ||||||
| 28,5±7,4 нм (60%±18%); |
| Продолжение таблицы | ||||||
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 |
| 71,1±9,8 нм (43%±12%) | ||||||
| 25,4±4,3 нм (80%±10%); | ||||||
| 70,1±13,8 нм (20%±10%) | ||||||
| 5 | 01109998 | 69% | 20±1 и 44±5; 20±4 и 39±2; 21±3 и 53±10; 24±6 и 54±8; 25±5 и 55±10 | 300 мл при 800 бар 14 циклов, Т средняя 43°С, рН 6,2 | 30% | 2,0:1 |
| 6 | 98 | 64%; 71% после л/ф | 22±2,8 нм (47%) | Партия 1500 мл 3 раза по 500 мл, каждый прошел 7 циклов гомогенизации, рН 6,8 | 80% | 1:1 |
| 53±8 нм (43%) | ||||||
| 110±8,3 нм (10%) (после лиофилизации) | ||||||
| 7 | 80 | 1) 61,5% | До сушки | Готовили 1500 р-ра, делили на 3 части по 500 мл | 80% | 2,5:1 |
| 2) 69% | 21±7 нм (42%±4%); | |||||
| 3) 66% | 60±3,3 нм (57,5%±5%) | Гомогенизировали: 1) 15 циклов при 800 бар, | ||||
| 71% после | после | 2) 6 циклов при 1100 бар и | ||||
| ф/л | 24±5 нм (65%±10,5%); | 3) 8 циклов при 1000 бар, | ||||
| 71±11 нм (35%±9%) | прозрачность измеряли без |
| Продолжение таблицы | ||||||
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 |
| фильтрации, затем все 3 | ||||||
| части объединили, сушили. | ||||||
| Т средняя 46°С | ||||||
| рН 6,69 | ||||||
| 8 | 78 | 76% | 75,88 нм (1,62% по массе) | Гомогенизация в течение 5 | 50% | 0,5:1 |
| 23,02 нм (98,38% по массе) | циклов при 1000 бар, | |||||
| стартовая Т=40°С, | ||||||
| Т средняя 45°С | ||||||
| 9 | 85 | 78% | 58,80 нм (1,01% по массе) | Гомогенизация в течение 6 | 80% | 1,5:1 |
| 19,02 нм (98,83% по массе) | циклов при 1000 бар, | |||||
| стартовая Т=40°С, | ||||||
| Т средняя 45°С | ||||||
| 10 | Серия 02.09.02 (старая) | От 71,4% до 74,6% | 8550,57 нм (9,64% по массе) 133,06 нм (0,34% по массе) 34,91 нм (90,03% по массе) | 10% | 2,5:1 | |
| Продолжение таблицы | ||||||
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 |
| Та же серия, но другой флакон 6657,81 нм (6,65% по массе), 297,46 нм (0,07% по массе), 41,09 нм (93,28% по массе) | Гомогенизация в течение 10 циклов при 1000 бар, стартовая Т=40°С, | |||||
| Третий флакон серии 02.09.02 9063,63 нм (6,54% по массе), 139,63 нм (0,25% по массе), 35,20 нм (93,22% по массе) | Т средняя 45°С | |||||
| 11 | 80 | 67% | 7876,79 нм (5,26% по массе), 87,70 нм (0,39% по массе), 21,79 нм (94,35% по массе) | Гомогенизация в течение 8 циклов при 1000 бар, стартовая Т=40°С, Т средняя 45°С | 20% | |
| ФХ* - фосфатидилхолин ФЛ** - фосфолипид ГК*** - глицирризиновая кислота или ее соль |
Источники информации
1. Машковский М.Д. Лекарственные средства, М., 2001, т.1, стр.508.
2. RU 2133122, C1, A61K 31/685, 20.07.97.
Способ получения инъекционной лекарственной формы фосфолипидного препарата для лечения и профилактики заболеваний печени, нарушения липидного обмена и восстановления функции печени после интоксикации, содержащего растительные фосфолипиды с содержанием фосфатидилхолина 75-98%, глицирризиновую кислоту или ее фармацевтически приемлемую соль и углевод, при суммарном содержании фосфолипидов и глицирризиновой кислоты или ее фармацевтически приемлемой соли 2-80 мас.% и массовом соотношении фосфолипидов и глицирризиновой кислоты или ее фармацевтически приемлемой соли не более 4:1, путем смешения эмульсии растительных фосфолипидов в водном растворе глицирризиновой кислоты или ее фармацевтически приемлемой соли с водным раствором углевода, в качестве которого используют лактозу, мальтозу и/или изомальтозу, при рН 6,5-7,5 и полученную эмульсионно-дисперсионную систему подвергают 5-22 циклам гомогенизации при давлении 800-1200 бар с последующими предварительной фильтрацией и стерилизующей фильтрацией и сублимационной сушкой.
