Вирус-вакцина против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных и способ ее изготовления

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии. Вакцина представляет собой приманку-таблетку с привлекательным для плотоядных животных вкусом и запахом. Она содержит лиофилизированный вакцинный штамм ТС-80 вируса бешенства, выращенный в перевиваемой культуре клеток почки сайги, защитные компоненты, пищевые и формообразующие компоненты. Предложен также способ ее получения. Способ предусматривает выращивание вакцинного штамма ТС-80 вируса бешенства, лиофильное высушивание со стабилизирующими добавками, размалывание лиофилизированного вакцинного штамма, смешивание его с пищевыми и формообразующими добавками и последующее прессование смеси. 2 н.п. ф-лы.

 

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии, а именно к вакцине против бешенства, и способу ее получения.

Наиболее приемлемой для диких плотоядных животных является оральная иммунизация.

Известна вакцина против бешенства, использовавшаяся для оральной вакцинации собак. Вакцина состоит из центрального ядра, содержащего лиофилизированный вакцинный штамм вируса бешенства SAG 2, и тонкого слоя матричного покрытия из материалов животного происхождения, искусственно увеличивающих поедаемость агентов и синтетического полимера. Эффективность вакцинации собак составила 73% [1].

Имеется вакцина против бешенства для оральной иммунизации плотоядных, которую изготавливают выращиванием вакцинного вируса бешенства, штамм ТС-80, в перевиваемой культуре клеток почки сайги. Суспензию выращенного вакцинного штамма смешивают со стабилизирующими компонентами, разливают во флаконы или кассеты, замораживают, высушивают сублимацией, размалывают в шаровой мельнице и заполняют высушенной вакциной полые брикеты-приманки из мясо-рыбного фарша [2].

Недостатки этой вакцины в том, что она не представляет собой гомогенную приманку-вакцину, а способ ее изготовления трудоемкий и длительный, требует отдельного изготовления приманок и лиофилизированного вакцинного штамма.

Существует способ изготовления вирус-вакцины против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных, заключающийся в нанесении на пористый брикет вирусного материала, выращенного в перевиваемой культуре клеток и смешанного с защитными компонентами, замораживании и лиофилизации брикетов [3].

Недостатки этого способа состоят в том, что полученная вакцина не является гомогенной, брикеты не стандартизованы и могут крошиться при хранении.

Целью предлагаемого изобретения является иммунологически эффективная вирус-вакцина для оральной иммунизации, представляющая собой приманку-таблетку с привлекательным для плотоядных вкусом, запахом, равномерным распределением лиофилизированого вакцинного штамма по всей приманке-таблетке. Поставленная цель достигается методом прямого прессования смеси лиофилизированного вакцинного штамма ТС-80 вируса бешенства с защитными компонентами (пептон, лактоза, пектин), пищевыми и формообразующими добавками. Положительный эффект достигается при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Лиофилизированный вакцинный
штамм ТС-80 вируса бешенства с
защитными компонентами	15,5-16,0
Молоко сухое обезжиренное	27,2-27,9
Лактоза	24,8-25,6
Порошок яичный	20,0-22,0
Мел тонкодисперсный Т-60	4,6-4,8
Мел тонкодисперсный Т 90	2,3-3,1
Стеарат кальция	Остальное

Способ получения вакцины заключается в следующем: смешивают вакцинный штамм ТС-80 вируса бешенства, выращенный в перевиваемой культуре клеток почки сайги, с защитными компонентами (40% пептона, 8% лактозы, 4% раствора пектина) в соотношении 1:2, затем полученную техническую жидкость (ТЖ) разливают во флаконы или кассеты, замораживают ТЖ, высушивают сублимацией. Лиофилизированный вакцинный штамм измельчают в шаровой мельнице, смешивают с пищевыми и формообразующими компонентами, а затем прессуют на пневматическом прессе при рабочем давлении 5-6 атм.

Примеры конкретного исполнения:

Пример 1

10 л суспензии вируса бешенства штамм ТС-80 с инфекционной активностью 7,2 lg МЛД₅₀/см³, выращенного в перевиваемой культуре клеток почки сайги, смешивают с 10 л защитными компонентами, состоящими из 40% раствора пептона и 8% раствора лактозы, к полученной смеси добавляют 20 л 4% раствора пектина. Полуфабрикат разливают в 5 л флаконы по 1,0 л, замораживают раскаткой при - 50°С и высушивают в аппарате лиофильной сушки в течение 42-44 часов. Лиофилизированный вакцинный штамм размалывают в шаровой мельнице с фарфоровыми шарами диаметром 1,0 см в течение 5 минут при скорости вращения барабана 50 об/мин. Для таблетируемой смеси используют размолотую вакцину с инфекционной активностью 6,5 lg МЛД₅₀/г, пищевые и формообразующие добавки из расчета 1 таблетка-приманка - 1 доза. С этой целью смешивают: 16 кг полученной вакцины, 27,9 кг сухого обезжиренного молока, 22 кг яичного порошка, 25,6 кг Д-лактозы, 4,8 кг мела Т-60, 3,1 кг мела Т-90, 0,6 кг стеарата кальция. Таблетируемую смесь тщательно перемешивают в шаровой мельнице с фарфоровыми шарами диаметром 1,0 см в течение 5-7 минут при скорости вращения барабана 50 об/мин и прессуют на пневматическом прессе при рабочем давлении 5 атм, прессуют таблетки размером: диаметр 3,0 см, высота 0,5 см; массой 6,3 г. Таблетки испытывают на прочность (при свободном падении с высоты 1 м таблетка оставалась целой), кислотоустойчивость в искусственном желудочном соке (при экспозиции в течение часа при 37°С в 0,1 н. растворе соляной кислоты инфекционная активность таблетки не снижалась по сравнению с первоначальной), контаминацию грибной и бактериальной микрофлорой (количество микробных тел в 1 см³ таблетки не превышает 500), безвредность (пятикратные дозы, скормленные 5-месячным щенкам, не вызывали видимых клинических изменений в течение 30 суток). В сыворотках проб крови 5-месячных щенков, иммунизированных двукратно с интервалом 15 суток 1 дозой (таблеткой) вакцины, титр вируснейтрализующих антител составил через 30 суток после второй иммунизации от 1:8 до 1:22.

Вирус-вакцина для орального применения в виде приманок-таблеток сохраняла свои иммунобиологические характеристики в течение 12 месяцев при 6-8°С.

Пример 2

40 л суспензии вируса бешенства штамм ТС-80 с инфекционной активностью 7,2 lg МЛД₅₀/см³, выращенного в перевиваемой культуре клеток почки сайги, смешивают с 40 л защитными компонентами, состоящими из 40% раствора пептона и 8% раствора лактозы, к полученной смеси добавляют 80 л 4% раствора пектина. Полуфабрикат разливают в 5 л флаконы по 1 л или в поддоны по 12,5 л, замораживают при - 50°С и высушивают в аппарате лиофильной сушки в течение 72-78 часов. Лиофилизированный вакцинный штамм размалывают в шаровой мельнице с фарфоровыми шарами диаметром 1,0 см в течение 5 минут при скорости вращения барабана 50 об/мин. Для таблетируемой смеси используют сухую вакцину с инфекционной активностью 6,5 lg МЛД₅₀/г пищевые и формообразующие добавки из расчета 1 таблетка-приманка - 1 доза. С этой целью смешивают: 15,5 кг полученной вакцины, 27,2 кг сухого обезжиренного молока, 20 кг яичного порошка, 24,8 кг Д-лактозы, 4,6 кг мела Т-60, 2,3 кг мела Т-90, 5,6 кг стеарата Са. Таблетируемую смесь тщательно перемешивают в шаровой мельнице с фарфоровыми шарами диаметром 1,0 см в течение 5-7 минут при скорости вращения барабана 50 об/мин и прессуют на пневматическом прессе, при рабочем давлении 6 атм, таблетки размером: диаметр 3,0 см, высота 0,5 см; массой 6,5 г.

1000 таблеток раскладывали в отдельном районе госкомплекса "Завидово" вблизи мест обитания рыжих лисиц из расчета 1 доза (таблетка) на голову. Через 1,5 месяца проводили отстрел лис и определяли наличие вируснейтрализующих антител в пробах сывороток крови. При однократном применении приманок-таблеток в 55% случаев были обнаружены вируснейтрализующие антитела в титрах от 1:8 до 1:16. Вирус-вакцина сохраняла свои свойства в течение 12 месяцев при 6-8°С.

Представленные данные показывают, что предлагаемая технология изготовления вакцины прямым прессованием из смеси лиофилизированного вакцинного штамма ТС-80 с пищевыми и формообразующими компонентами позволяет получить таблетированную вирус-вакцину против бешенства с высокой иммунологической эффективностью при оральной иммунизации плотоядных животных. Предлагаемый способ технологичен, воспроизводим, таблетки представляют собой вакцину-приманку, в которой вакцинный вирус распределен равномерно и которая обладает привлекательностью для диких плотоядных и поедаемостью.

Источники информации

1. Rupprecht C.E., Shaddock J.S., Sanderlin D.W., Hanlon C.A., Niezgoda M. and Schumacher C.L.: Oral rabies vaccination of dogs Israel Journal Of Veterinary Medicine. Vol.53 4, 1998.

2. Патент РФ №2157700, 25.01.1999 г.

3. Патент РФ №2250781, 27.04. 2005 г.

1. Вирус-вакцина против бешенства, включающая лиофилизированный вакцинный штамм ТС-80 вируса бешенства, выращенный в перевиваемой культуре клеток почки сайги и защитные компоненты, отличающаяся тем, что дополнительно содержит пищевые и формообразующие компоненты в следующем соотношении, мас.%:

Лиофилизированный вакцинный
штамм ТС-80 вируса бешенства с
защитными компонентами	15,5-16,0
Молоко сухое обезжиренное	27,2-27,9
Лактоза	24,8-25,6
Порошок яичный	20,0-22,0
Мел тонкодисперсный Т-60	4,6-4,8
Мел тонкодисперсный Т 90	2,3-3,1
Стеарат кальция	Остальное

2. Способ изготовления вирус-вакцины против бешенства по п.1, включающий выращивание вакцинного штамма ТС-80 вируса бешенства в перевиваемой культуре клеток почки сайги, смешивание его с защитными компонентами, лиофильное высушивание и измельчение, отличающийся тем, что вакцинный штамм ТС-80 вируса бешенства, выращенный в перевиваемой культуре клеток почки сайги смешивают с защитными компонентами в соотношении 1:2, затем полученную техническую жидкость разливают во флаконы или кассеты, замораживают, лиофилизируют, далее измельчают в шаровой мельнице, смешивают с пищевыми и формообразующими компонентами в количестве по п.1, а затем прессуют на пневматическом прессе при рабочем давлении 5-6 атм.