Способы профилактики и лечения инфекции, вызываемой флавивирусами у животных

Настоящее изобретение относится к способам профилактики и лечения инфекции, вызываемой флавивирусами у животных, и заключается в применении химерного флавивируса, включающего капсидные и неструктурные белки вируса желтой лихорадки и белки prM и оболочки вируса энцефалита Западного Нила в качестве лекарственного средства для профилактики инфекции, вызываемой вирусом Западного Нила у лошадей. Изобретение обеспечивает профилактику заболевания лошадей, вызываемого вирусом энцефалита Западного Нила. 2 табл.

 

Область изобретения

Данное изобретение относится к способам профилактики и лечения инфекции, вызываемой флавивирусами у животных.

Предпосылки изобретения

Флавивирусы являются небольшими, покрытыми оболочкой, содержащими «плюс-цепь» РНК вирусами, которые касаются многих медицинских и ветеринарных заболеваний во всем мире. Например, вирус Западного Нила (WN), который является членом семейства флавивирусов, представляет возбудитель энцефалита WN, инфекционного, неконтагиозного, переносимого членистоногими вирусного заболевания (Monath et al., "Flaviviruses", In Virology, Fields (ed.), Raven-Lippincott, New York, 1996, pp. 961-1034). Вирус был обнаружен в Африке, Западной Азии, Среднем Востоке, средиземноморском регионе Европы и недавно в США. Комары заражаются вирусом после питания на зараженных диких птицах и затем переносят вирус через укусы людям, птицам и животным, таким как лошади, овцы, крупный рогатый скот и свиньи.

В 1999 году в Нью-Йорке было обнаружено, что 25 лошадей с наличием неврологических симптомов были заражены вирусом WN. У данных лошадей наблюдали следующие симптомы: атаксию, затруднения при передвижении, неустойчивость суставов, наклонное положение головы, тремор мышц и неспособность подняться. Из 25 лошадей 9 животных пали или были подвергнуты эвтаназии, и в пробах тканей от этих лошадей обнаружили вирус, а также специфические к вирусу антитела. Все 16 выживших лошадей выздоровели, у них также были обнаружены антитела против вируса WN. Начиная с этого времени, сообщалось о все возрастающем числе лошадей, зараженных вирусом энцефалита Западного Нила.

Белки флавивируса продуцируются трансляцией единичной, длинной открытой рамки считывания с образованием полибелка, который претерпевает сложную серию посттрансляционных протеолитических расщеплений в результате сочетанного действия протеаз хозяина и вируса с образованием зрелых вирусных белков (Amberg et al., J. Virol. 73:8083-8094, 1999; Rice, "Flaviviridae", In Virology, Fields (ed.), Raven-Lippincott, New-York, 1995, Volume I, p. 937). Вирусные структурные белки организуются в полибелок в порядке С-prM-E, где «С» является капсидой, «prM» представляет собой предшественник вирусного белка, связанного с оболочкой М (мембраной), и «Е» является белком оболочки. Данные белки находятся в N-концевой области полибелка, в то время как неструктурные белки (NS1, NS2A, NS2B, NS3, NS4A, NS4B и NS5) расположены в С-концевой области полибелка.

Краткое описание изобретения

Изобретение обеспечивает способы профилактики или лечения инфекции, вызываемой флавивирусами (например, инфекции, вызываемой вирусом Западного Нила) у млекопитающих, не относящихся к человеку (например, лошадей), которые включают введение млекопитающим, не относящимся к человеку, химерных флавивирусов. Изобретение также обеспечивает применение химерных флавивирусов для получения лекарственных препаратов для использования в данных способах. Химерные флавивирусы могут включать, например, капсидные и неструктурные белки первого флавивируса (например, вируса желтой лихорадки, такого, как вирус желтой лихорадки, полученный из штамма 17D), и белков prM и оболочки второго флавивируса (например, вируса энцефалита Западного Нила).

Изобретение обеспечивает несколько преимуществ. Например, как обсуждается ниже, у лошадей, которых подвергли лечению с использованием способов по изобретению, не наблюдаются побочные эффекты за счет вакцинации, и они защищены против существенного заражения вирусом. Таким образом, способы по изобретению высокоэффективны для защиты лошадей против инфекции, вызванной флавивирусом, например, вирусом Западного Нила. Кроме того, касаясь конкретно химерного вируса желтой лихорадки/энцефалита Западного Нила, описанного здесь, ряд хозяев вируса желтой лихорадки является очень специфическим, будучи ограниченным для приматов. Таким образом, эффективность химерного вируса желтой лихорадки/энцефалита Западного Нила в защите лошадей против заражения вирусом Западного Нила была неожиданной, поскольку лошади, только очень отдаленно родственны приматам, не входят в природный круг хозяев вируса желтой лихорадки. Кроме того, поскольку используемые вакцинные вирусы по изобретению являются химерными, состоящими из материала от более чем одного вируса, шанс реверсии в вирус дикого типа исключается.

Другие признаки и преимущества изобретения станут понятными из последующего подробного описания и формулы изобретения.

Подробное описание

Изобретение обеспечивает способы профилактики и лечения инфекции, вызываемой флавивирусами (например, вирусом Западного Нила (WN)) у животных, таких как лошади. Способы по изобретению включают вакцинацию животных, у которых имеется риск заражения или наличия инфекции, вызываемой флавивирусами, живым, аттенуированным химерным флавивирусом. Данные вирусы состоят из флавивируса (т.е. остова флавивируса), в котором структурный белок (или белки) замещены на соответствующий структурный белок (или белки) второго флавивируса, на который желательна выработка иммунитета. Предпочтительно химеры состоят из остова флавивируса, в котором белки prM и Е замещены на белки prM и Е из второго вируса.

Химерные вирусы, которые используются в изобретении, могут состоять из любой комбинации вирусов, при условии, как уже указывалось выше, что вирус, на который желательна выработка иммунитета, является источником встроенного структурного белка(ов). Например, для вакцинации животного, такого как лошадь, против инфекции, вызываемой вирусом Западного Нила, можно использовать химерный флавивирус, состоящий из остова флавивируса, такого как вирус желтой лихорадки (YF), в который встроены структурные белки вируса Западного Нила (например, белки prM и Е). В данном химерном вирусе белки prM и Е YF замещают на таковые из WN. Аналогично, если желательна выработка иммунитета против вируса японского энцефалита (JE), то тогда белки prM и Е из вируса JE можно встраивать в остов флавивируса, такого как вирус желтой лихорадки вместо соответствующих белков остова. Другие флавивирусы, которые вызывают заболевание у лошадей и для которых можно использовать химерные вирусы для индукции защиты, включают вирусы Куньина, энцефалита долины Мюррея и шотландского энцефаломиелита овец.

Помимо лошадей животные, которых можно лечить с использованием способов по изобретению, включают, например, свиней, овец, крупный рогатый скот, домашних животных, таких как кошки и собаки, и домашних птиц. В качестве конкретных примеров вакцинации животных, не относящихся к лошадям, например, можно привести лечение овец с использованием химерного вируса, включающего структурные вставочные белки из вируса Вессельброна или вируса шотландского энцефаломиелита овец, и можно лечить свиней с использованием химерного вируса, включающего структурные вставочные белки вируса японского энцефалита.

Таким образом, примеры флавивирусов, которые можно использовать в изобретении в качестве источников остова вируса или структурных белковых вставок, включают переносимые комарами флавивирусы, такие как вирусы японского энцефалита, Денге (серотипы 1-4), желтой лихорадки, энцефалита долины Мюррея, энцефалита Сент-Луиса, Западного Нила, Куньина, энцефалита Росио, Вессельброна и вируса Ильеуса; переносимые клещами флавивирусы, такие как вирус центральноевропейского энцефалита, сибирского энцефалита, русского весенне-летнего энцефалита, киазанурской лихорадки, омской геморрагической лихорадки, шотландского энцефаломиелита овец, Повассана, Негиши, Абсеттарова, Хансалова, Апои и Гипра, а также вирусы из рода Hepacivirus (например, вирус гепатита С). Дополнительные вирусы, которые можно использовать в качестве источника встроенных структурных белков, включают вирусы из рода Pestivirus (например, вирус диареи крупного рогатого скота) и другие вирусы, такие как вирусы Ласса, Эбола и Марбурга. Как уже указывалось выше, предпочтительно вирус состоит из остова вируса желтой лихорадки, содержащего вставку из вируса Западного Нила.

Детали получения химерных вирусов, которые можно использовать в изобретении, представлены, например, в заявках на патент США под серийными номерами 09/007664, 09/121587 и 09/452638; международных заявках РСТ/US98/03894 и РСТ/US00/32821 и у Chambers et al., J. Virol. 73:3095-3101, 1999, каждый из данных источников включен здесь для сведения.

Вакцины по изобретению можно вводить в количествах и с использованием способов, которые легко могут определить специалисты в данной области. Вакцины можно вводить и составлять, например, в виде жидкости, собранной из клеточных культур, зараженных соответствующих химерным вирусом. Живой, аттенуированный химерный вирус вводят в состав стерильного водного раствора, содержащего 10²-10⁸, например, 10⁶-10⁷ инфекционных единиц (например, бляшкообразующих единиц (БОЕ) или инфекционных доз для культур тканей) в объеме, равном от 0,1 до 1,0 мл для введения, например, подкожным, внутримышечным или внутрикожным путями. Кроме того, можно выбрать введение через слизистую, такое как пероральный путь. Специалисты в данной области могут легко определить соответствующее количество химерного вируса для введения, и данное количество может варьировать в зависимости от многих факторов, например, размера, типа и общего состояния животного, которому вводят химерный вирус.

Как уже указывалось выше, вакцины можно вводить в качестве основных средств профилактики животному при риске заражения флавивирусами. Также вакцины можно использовать в качестве вторичных средств для лечения зараженных флавивирусами животных стимуляцией иммунного ответа против инфицирующего флавивируса. Кроме того, хотя это и не обязательно, можно использовать адъюванты для повышения иммуногенности химерных вакцин. Специалисты в данной области могут легко выбрать соответствующие адъюванты.

Результаты экспериментов

На лошадях оценивали безопасность и эффективность вакцины ChimerVax-WN. Эффективность определяли по гуморальным иммунным ответным реакциям и защите от заражения.

Животные

В данном исследовании использовали 11 лошадей, как представлено в таблице 1. В течение опыта лошадей содержали в закрытых помещениях ABSL3 и кормили люцерновым сеном и смешанным зерном.

Таблица 1 Суммарные данные по характеристике и лечению животных
Лошадь	Пол	Возраст (годы)	Лечение	Комментарий
EQ1	самка (кобыла)	8	Двукратная вакцинация	Полная защита от заражения
EQ2	самка (кобыла)	14	Двукратная вакцинация	Полная защита от заражения
EQ3	самка (кобыла)	9	Двукратная вакцинация	Усыплена перед заражением в результате ламинита
EQ4	самец (жеребец)	16	Двукратная вакцинация	Полная защита от заражения
EQ5	самка (кобыла)	8	Разработанная модель заражения 104 БОЕ интратекально	Усыплена через 2 суток после заражения; отсутствие заболевания, вызванного WN
EQ6	самка (кобыла)	9	Разработанная модель заражения 104 БОЕ подкожно; пункция СМЖ на 4 сутки	Заболевание, вызванное WN, в слабой форме с возможным выздоровлением
EQ7	самка (кобыла)	10	Разработанная модель заражения 104 БОЕ интратекально	Заболевание на 20-22 сутки после заражения в клинической форме; усыплена на 24 сутки; подтверждено наличие энцефалита
EQ8	самка (кобыла)	8	Разработанная модель заражения 105 БОЕ интратекально	Заболевание в тяжелой форме с началом на 7 сутки; подтверждено наличие энцефалита
EQ9	самец (жеребец)	6	Разработанная модель заражения 105 БОЕ интратекально	Заболевание в тяжелой форме с началом на 8 сутки; подтверждено наличие энцефалита
EQ10	самец (жеребец)	8	Контрольное заражение 105 БОЕ интратекально	Заболевание в тяжелой форме с началом на 8 сутки; подтверждено наличие энцефалита
EQ11	самец (жеребец)	11	Контрольное заражение 105 БОЕ интратекально	Заболевание в тяжелой форме с началом на 8 сутки; подтверждено наличие энцефалита

Иммунизация

4 лошади (EQ1, EQ2, EQ3 и EQ4) иммунизировали двумя инъекциями с интервалом три недели вирусом ChimerVax-WN. При каждой иммунизации вводили подкожно в область левой лопатки дозу, равную 10⁷ бляшкообразующих единиц (БОЕ) в 1 мл.

Виремию у вакцинированных лошадей определяли с использованием стандартного метода бляшкообразования для вируса WN. Пробы тестировали в двух параллелях без разведения и в разведении 1:5. Авторы установили, что, несмотря на то, что уровень виремии был очень низким в период от 0 до 7 суток, пик виремии обнаруживали на 3-4 сутки.

В пробах, отобранных от каждой лошади после вакцинации, определяли уровень антител, как указано в таблице 2, с использованием теста нейтрализации снижением бляшкообразования (PRNT). В итоге у двух лошадей выработался и имел место 80% снижающий титр, равный 10, в течение 2 недель после первичной иммунизации, и у всех 4 лошадей значение титра находилось в пределах от 10 до 20 через 4 недели (через 1 неделю после второй иммунизации).

Разработка модели заражения лошадей

Заражение лошадей вирусом WN через комаров-переносчиков обычно приводит к появлению виремии, но клинически заболевание проявляется редко. Таким образом, для оценки защитного иммунитета против WNV разрабатывали подходящую модель заражения. Вирусом, используемым для заражения в данных исследованиях, был вирус WNV NY99 (4132), который первоначально был выделен из вороны и пассирован один раз в клетках Веро и один раз в клетках С636. За счет проявления реакций гиперчувствительности, наблюдаемых после бустер-инъекций вакцины, авторы дополнительно пассировали вирус в клетках ВНК-21, вымывали FBS-содержащий инокулят после адсорбции, и получали исходные растворы с использованием 20% WNV/SLE-серонегативной лошадиной сыворотки. Данный несодержащий FBS препарат разводили PBS и использовали для заражения лошадей EQ1, EQ2, EQ4, EQ8, EQ9, EQ10 и EQ11.

Большую часть лошадей заражали введением инокулята интратекально. Для этой процедуры им проводили анестезию комбинацией ксилазина и кетамина и в асептических условиях проводили цистернальную пункцию. Удаляли 2 мл СМЖ и вводили 1 мл вируса. Во всех случаях после процедуры у животных наступало восстановление.

Результаты исследований по разработке модели заражения можно обобщить следующим образом.

Лошадь EQ5

Данной лошади интратекально вводили 10⁴ БОЕ WNV. В этот день состояние лошади было нормальным, но затем утром на 2 сутки она находилась в лежачем положении, и у нее наблюдали слабую реактивность. Лошадь подвергали эвтаназии и вскрытию, и вирус не выделяли из нескольких областей мозга. Лошадь могла упасть во время предыдущей ночи и серьезно повредить спинной мозг, который не исследовали при вскрытии. Совершенно очевидно, что амбель не была вызвана заражением WNV.

Лошадь EQ6

Данную лошадь заражали 10⁴ БОЕ WNV подкожно; через 4 суток провели цистернальную пункцию с намерением способствовать прохождению вируса через гемато-энцефалический барьер. Утром на 10 сутки у лошади наблюдали выраженное беспокойство и отклонения от нормы, но вечером того же дня ее состояние нормализовалось. В течение 6 недель после заражения никаких других клинических признаков не наблюдали. В течение первых 13 суток после заражения два раза в сутки отбирали пробы сыворотки крови, которые анализировали на наличие вируса в клетках Веро, вирус не выделяли ни из одной пробы. Тесты PRNT ставили с использованием сыворотки, полученной в день заражения и через 3 недели после. 80% (и 90%) титры нейтрализации в данных пробах равнялись 10 (< 10) и 40 (40) соответственно. Перед опытом лошадь была тестирована как серологически отрицательная, и таким образом 80% титр 1:10 в день вакцинации был неожиданным. У данного животного могла быть слабая инфекция, вызванная WN.

Лошадь EQ7

Данную лошадь заражали 10⁴ БОЕ WNV интратекально; обратное титрование инокулята выявило дозу, равную 6×10³ БОЕ. До 20 суток клинические признаки заболевания отсутствовали, затем у животного отмечали беспокойство и нервозность. В течение 2 последующих суток ее состояние ухудшалось, что выражалось в повышенном беспокойстве, треморе головы и губ, поддергивании мышц и парезе задних конечностей. Однако к вечеру 23 суток ее состояние нормализовалось и по степени выраженности клинические признаки уменьшились. Ее усыпляли на 24 сутки для подтверждения того, что заболевание действительно было вызвано WNV. В результате гистопатологического обследования мозга был выявлен диффузный широко распространенный энцефалит. Пробы сыворотки крови отбирали дважды в сутки, начиная с 1 по 9 сутки, для анализа вируса по бляшкообразованию в клетках Веро; вирус не был выделен ни из одной пробы. Авторам также не удалось выделить вирус из СМЖ и из гомогенатов головного мозга, мозжечка и ствола мозга, взятых при вскрытии (ткани анализировали в виде 10% суспензий и в разведениях -1 и -2). Титры при постановке PRNT (80 или 90%) в пробах сыворотки, взятых на 0, 7, 14 и 23 сутки, составляли соответственно <10, <10, 160 и 160.

Лошади EQ8 и EQ9

Данных лошадей заражали 10⁵ БОЕ WNV интратекально: обратное титрование выявило дозу вируса для введения, равную 2×10⁵ БОЕ. У обоих животных в течение 7-7,5 суток оставалось клинически нормальное состояние, затем у них развивалось прогрессирующее тяжелое заболевание (описание клиники представлено в отчете по каждому животному). Течение заболевания у обеих лошадей было практически одинаковым, и обеих усыпляли и вскрывали на 9 сутки. В результате гистопатологического обследования у обеих лошадей был выявлен тяжелый энцефалит. Пробы сыворотки крови, отбираемые дважды в сутки, после заражения анализировали на бляшкообразование в клетках Веро. Титры виремии были следующими (log₁₀ БОЕ/мл):

	Сутки после заражения
0,5	1,0	1,5	2,0	2,5	3,0	3,5	4,0	4,5	5,0	5,5	6,0	6,5	7,0	7,5
EQ8	<1	<1	<1	1,0	1,0	1,5	<1	1,4	<1	<1	<1	<1	<1	<1	<1
EQ9	<1	<1	1,7	2,5	2,0	2,3	2,3	2,3	1,6	<1	<1	<1	<1	<1	<1

Пробы СМЖ, головного мозга, мозжечка, ствола мозга и краниального шейного тяжа, взятые при вскрытии, анализировали на присутствие вируса в клетках Веро. У лошади EQ8 вирус находился в стволе мозга в очень небольшом количестве (1,5 log₁₀ БОЕ/мл), и у лошади EQ8 небольшое количество вируса (1,3 log₁₀ БОЕ/мл) было обнаружено в мозжечке, все другие пробы давали отрицательный результат. У обоих животных титры при постановке PRNT были <10 на время заражения. На время эвтаназии у лошадей EQ8 и EQ9 титры при PRNT (90%) составляли соответственно 160 и <10.

Заражение вакцинированных и контрольных лошадей

Вакцинированных лошадей EQ1, EQ2 и EQ4 заражали точно через 24 недели после первичной иммунизации. Одновременно заражали две дополнительные контрольные лошади. Заражение во всех случаях заключалось в интратекальном введении 1,0 мл, содержащего 10⁵ БОЕ WNV (несодержащий FBS препарат, разбавленный в PBS). Обратное титрование инокулята указывало на то, что лошади получали примерно 125000 БОЕ вируса.

У двух контрольных лошадей (EQ10 и EQ11) развивалось заболевание в тяжелой клинической форме, начиная с 7-8 суток после введения вируса, и их усыпляли соответственно на 8,5 и 10 сутки после заражения. На время усыпления титры антител при постановке PRNT составляли соответственно 1:40 и <10. Пробы сыворотки крови, отбираемые с интервалом в 0,5 суток в период между заражением и усыплением, анализировали на бляшкообразование в клетках Веро; титры виремии (log₁₀ БОЕ/мл сыворотки) представлены в следующих таблицах (пробы с отрицательным результатом от лошади EQ11, взятые после 8 суток, не представлены).

	Сутки после заражения
1,0	1,5	2,0	2,5	3,0	3,5	4,0	4,5	5,0	5,5	6,0	6,5	7,0	7,5	8,0
EQ10	1,0	1,3	1,9	1,9	2,3	2,4	2,4	1,8	<1	<1	<1	<1	<1	<1	<1
EQ11	<1	1,0	2,8	2,9	2,5	2,4	2,4	2,3	1,3	<1	<1	<1	<1	<1	<1

Пробы СМЖ, головного мозга, мозжечка и ствола мозга, взятые при вскрытии, также анализировали по бляшкообразованию в клетках Веро. Вирус не выделяли ни из одной пробы СМЖ. У лошади EQ10 небольшое количество вируса (1-2 бляшки на лунку при внесении 0,1 мл 10% суспензии) выделяли из всех трех областей мозга, у лошади EQ11 - только из ствола мозга. В результате гистопатологического исследования мозга лошадей EQ10 и EQ11 был обнаружен диффузный энцефалит.

В противоположность двум контрольным лошадям у вакцинированных лошадей EQ1, EQ2 и EQ4 отсутствовали признаки клинической формы заболевания в течение 4 недель после заражения. Кроме того, вирус не выделяли ни из одной пробы сыворотки крови, отбираемых дважды в сутки от данных животных в течение первых 10 суток после заражения, а также из проб головного мозга, мозжечка, ствола мозга и СМЖ, взятых при вскрытии на 28 сутки. В результате гистопатологического исследования мозга не было выявлено участков поражения, за исключением нескольких признаков случайного характера, не связанных с инфекцией, вызванной WNV.

Определяли антитела против WNV в СМЖ, взятой в день заражения и на время усыпления (28 сутки для лошадей EQ1, EQ2 и EQ4; 8,5 суток для лошади EQ10 и на 10 сутки для лошади EQ11). Пробы анализировали при разведении 1:5, 10 и 20. В пробах, взятых при вскрытии от лошади EQ1, было установлено 87% снижение бляшкообразующих единиц в разведении 1:5, и в пробе, взятой при вскрытии, у лошади EQ4 обнаружили 98% снижение при разведении 1:5. Во всех других пробах титры 80% снижения составляли <5.

Серологическая ответная реакция на вакцинацию

Отбирали пробы сыворотки крови от 4 иммунизированных лошадей каждую неделю в период их участия в опыте и хранили в двух параллелях. Определяли титры нейтрализующих антител в части данных сывороток с использованием стандартного теста нейтрализации снижением бляшкообразования в клетках Веро. Только некоторые тесты проводили с использованием 8% человеческой сыворотки в вирусном инокуляте, как представлено в таблице 2.

Таблица 2 Результаты PRNT по лошадям, вакцинированным вирусом ChimerVax-WN
День отбора проб	Недели	День постановки тестов	EQ1	EQ1	EQ2	EQ2	EQ3	EQ3	EQ4	EQ4
			80%	90%	80%	90%	80%	90%	80%	90%
3/9	0	Несколько	<10	<10	<10	<10	<10	<10	<10	<10
3/16	1	11/13-	10	<10	<10	<10	<10	<10	<10	<10
3/23	2	10/27-	10	10	10	10	<10	<10	<10	<10
3/30	3	10/27-	10	<10	10	<10	<10	<10	<10	<10
4/6	4	11/02-	20	10	40	40	10	10	<10	<10
4/6	4	10/27-	20	10	20	10	10	10	10	<10
4/6	4	11/13-	20	20	20	10	10	10	10	<10
4/13	5	10/27-	20	20	20	20	10	<10	<10	<10
5/4	8	10/27-	20	10	10	<10	<10	<10	<10	<10
5/4	8	11/13-	20	20	10	<10	<10	<10	<10	<10
5/18	10	10/27-	10	10	10	<10	<10	<10	<10	<10
6/1	12	10/27-	10	10	20	10	<10	<10	<10	<10
6/1	12	11/13-	20	<10	10	<10	<10	<10	<10	<10
6/29	16	10/27-	10	<10	10	<10	-	-	<10	<10
6/29	16	11/13-	10	<10	<10	<10	-	-	<10	<10
7/27	20	11/13-	10	<10	10	<10	-	-	<10	<10
8/24	24	10/4+	20	20	10	10	-	-	<10	<10
8/24	24	11/02-	10	<10	<10	<10	-	-	<10	<10
8/24	24	11/13-	10	10	<10	<10	-	-	<10	<10
8/31	25	10/4+	40	40	20	20	-	-	20	20
8/31	25	11/02-	20	10	10	10	-	-	20	10
9/7	26	10/4+	≥320	≥320	≥320	≥320	-	-	≥320	≥320
9/7	26	11/02-	320	160	320	160	-	-	640	640
9/7	26	11/13-	320	320	640	320	-	-	1280	640
9/14	27	10/4-	≥320	≥320	≥320	≥320	-	-	≥320	≥320
9/14	27	11/02-	160	160	320	320	-	-	640	320
9/21	28	10/4+	≥320	≥320	≥320	≥320	-	-	≥320	≥320
9/21	28	11/02-	160	160	320	320	-	-	320	160
9/21	28	11/13-	320	160	320	160	-	-	640	320
* (+) или (-) указывает с и без применения лабильного сывороточного фактора

Применение химерного флавивируса, включающего капсидные и неструктурные белки вируса желтой лихорадки и белки prM и оболочки вируса энцефалита Западного Нила в качестве лекарственного средства для профилактики инфекции, вызываемой вирусом Западного Нила у лошадей.