Способ диагностики начальной стадии открытоугольной глаукомы

Изобретение относится к диагностическим методам, в частности в области офтальмологии. Способ диагностики начальной стадии открытоугольной глаукомы (ОУГ) заключается в том, что определяют уровень содержания аутоантител (ААТ) к антигенам (АГ) нативной и денатурированной ДНК (н- и д-ДНК) и уровень содержания циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) в слезной жидкости пациента. При значениях уровня аутоантител к н- и д-ДНК выше 0,7 и 0,8 усл.ед. соответственно и при значении уровня ЦИК выше 33,0 усл.ед. диагностируют начальную стадию ОУГ. Использование предлагаемого способа позволяет с высокой точностью осуществлять диагностику начальной стадии ОУГ и соответственно проводить своевременное, адекватное лечение и предотвращать переход глаукоматозного процесса из начальной в развитую стадию: 1 табл.

 

Изобретение относится к офтальмологии и предназначено для диагностики начальной стадии открытоугольной глаукомы и соответственно назначения своевременного лечения.

На сегодняшний день в мире насчитывается более 750 тыс.больных глаукомой. Частота развития слепоты от глаукомы в нашей стране и мире устойчиво держится на уровне 14-15% от общего числа всех слепых, что позволяет отнести проблему глаукомы в разряд не только важных медицинских, но и медико-социальных.

При выраженных проявлениях глаукомы клинико-офтальмологического обследования вполне достаточно для постановки точного диагноза. Однако имеется категория пациентов, у которых постановка диагноза глаукомы, основанная на данных клинико-офтальмологического обследования, затруднительная, а часто невозможна. Проблема ранней диагностики начальной стадии открытоугольной глаукомы (ОУГ) и соответственно правильного и своевременного лечения глаукомы остается одной из самых актуальных в современной офтальмологии, в связи с этим постановка точного, обоснованного диагноза приобретает особую значимость.

В настоящее время ключевым звеном патогенеза первичной ОУГ считаются деструктивные процессы в трабекуле, приводящие к уменьшению ее проницаемости для водянистой влаги (Нестеров Д.П. Глаукома. - М., 1995, с.104, 115-117). Современные представления о сущности деструктивных повреждений базируются на постулате о ведущей роли изменения клеточных мембран вплоть до их разрушения за счет процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) и свободнорадикального окисления. Данные процессы контролируются антиоксидантной системой, защищающей целостность клеточных мембран от разрушительного действия свободных радикалов (Бунин А.Я. и др. Вестник офтальмологии, 1985, № , с.13-16).

Диагностику начальной стадии ОУГ осуществляют чаще всего по величине внутриглазного давления (ВГД) и состоянию зрительных функций (Нестеров Д.П. - Глаукома, 1995, с.165-170). Известен, например, способ диагностики начальной стадии ОУГ путем определения зрительных функций, конкретно состояния зрительных полей (Листопадова Н.А. и др. Вестник офтальмологии, 1989, № , с.3-7). Недостатком известного способа является его низкая диагностическая точность, т.к. изменение поля зрения зависит от очень многих факторов, таких как время суток, общая усталость, тренированность, шум, неверное освещение в помещении, где проходит исследование, и т.д.

Ближайшим к заявляемому способу-прототипом является способ прогнозирования развития глаукомы, включающий определение суммарной антиокислитсльной активности слезы и при снижении данного показателя ниже 70 мкМ прогнозирование прогрессирование глаукомы (Патент РФ № 2139538, кл. G01N 33/53, опубл. 10.10.99). Недостатками известного способа являются его ограниченные функциональные возможности, поскольку его использование предусмотрено уже у глаукомных больных.

Технической задачей, на решение которой направлено заявляемое изобретение, является повышение точности и обеспечение ранней диагностики глаукоматозного процесса на стадии доклинических проявлений.

Поставленная техническая задача достигается заявляемым способом, заключающимся в следующем.

У пациента с подозрением на начальную стадию глаукомы берут слезу и определяют уровни содержания аутоантител (ААТ) к антигенам (АГ) нативной и денатурированной ДНК (н- и д-ДНК) и уровень циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) в слезной жидкости и при значениях показателей уровней аутоантител к антигенам н- и д-ДНК выше 0,7 и 0,8 усл.ед. соответственно, и при значении показателя уровня ЦИК выше 33,0 усл.ед. диагностируют начальную стадию ОУГ.

ААТ к антигенам нативной и денатурированной ДНК (н- и д-ДНК) в слезной жидкости определяли с помощью наборов «ДНК-ТЕСТ» производства ПМЦ «Сибмедприбор» по инструкции производителя. Результаты иммуноферментного анализа регистрировали на вертикальном фотометре Multiscan MCC 340 при длине волны 492 нм. Результаты теста считались положительными, если оптическая плотность анализируемой слезной жидкости была больше критической оптической плотности, которая составляла - оптическая плотность отрицательного контроля ×2. Уровень ААТ к антигенам нативной и денатурированной ДНК определяли в виде соотношения (индекса) оптической плотности исследуемого образца и критической оптической плотности.

Определение ЦИК в слезной жидкости проводили методом жидкостной преципитации в 7,5% полиэтиленгликогеле с м.м. 6000 на 0,01 М боратном буфере рН 8,4. В рядом находящиеся лунки параллельных стрипов 96-луночных плоскоидных планшетов для иммунологических реакций вносили по 0,3 мл 0,01 М боратного буфера рН 8,4 (контроль) и 0,3 мл 7,5% разведения ПЭГ-6000 на 0,01 М боратном буфере (рН 8,4) (опыт). В контрольную и опытные лунки добавляли по 0,005 мл исследуемой слезной жидкости человека. Инкубировали 1 час при комнатной температуре. Величину оптической плотности читали против контроля при длине волны 450 нм на вертикальном спектрофотометре Multiscan MMC/340. Количество циркулирующих иммунных комплексов выражали в условных единицах: величина оптической плотности ·1000/(усл.ед.).

Уровни аутоантитсл к АГ нативной и денатурированной ДНК, а также уровень циркулирующих иммунных комплексов, являющиеся показателями деструктивно-дегенеративных процессов, приводящих к разрушению клеточных мембран и выходу аутоантигенов и в возникновении и развитии аутоиммунных реакций, являются достаточно информативными прогностическими тестами для определения начальной стадии ОУГ.

Было проведено тестирование уровней ААТ к АГ нативной и денатурированной ДНК и уровней ЦИК в слезной жидкости у двух групп больных.

В основную группу исследования были отобраны 82 пациента с подозрением на глаукому.

В качестве нормативных значений уровней ААТ к АГ нативной и денатурированной ДНК и уровней ЦИК в слезной жидкости были взяты данные, полученные в Новосибирском филиале ФГУ «МНТК «Микрохирургия глаза» в 2000 году.

У всех пациентов слеза отсасывалась микроканюлей из нижнего конъюнктивального свода обоих глаз в сухую герметичную пробирку без предварительной анестезии в количестве 0,5 мл. Стимуляция слезопродукции осуществлялась механическим раздражением рецепторных окончаний тройничного нерва в слезной оболочке глаза.

Показатели уровней ААТ к АГ н-ДНК и к АГ д-ДНК, а также уровень ЦИК у пациентов исследуемой группы и в норме представлены в таблице.

Показатели	Уровень ЦИК, усл.сд.	Уровень ААТ к АГ н-ДНК, усл.ед	Уровень ААТ к АГ д-ДНК, усл.ед
Нормативные значения	25,13±3,99	0,47±0,03	0,57±0,04
Группа исследования	35,32±2,62 (р<0,01)	0,77±0,10(р<0,01)	0,82±0,06 (р<0,01)

Как видно из таблицы, средний уровень ААТ к антигенам нативной и денатурированной ДНК достоверно превышал нормативные значения на 0,3 усл.ед., что позволяет считать их определение достаточно информативным тестом на доклинической стадии развития глаукомы. Анализ индивидуальных значений, полученных у больных на начальной стадии ОУГ, позволяет отметить наличие высоких значений уровней ААТ как к АГ н-ДНК в 60,9%, так и к AT д-ДНК в 62,2% наблюдений.

«Средняя» уровней ЦИК в исследуемой группе составляла 35,32±2,63 усл. ед., что достоверно превышало «среднюю» нормативных значений, равную 25,13±3,99 ул. ед., на 10,2 усл.ед.

Таким образом, выявлены достоверно высокие уровни содержания ААТ к АГ н- и д-ДНК в слезной жидкости у пациентов с диагнозом «начальная стадия ОУГ», что свидетельствует о развитии на доклинической стадии заболевания деструктивных процессов с повреждением клеточных мембран, приводящих к выходу ядерных АГ к н- и д-ДНК в слезную жидкость.

Показано, что начальная стадия ОУГ сопровождается также активацией гуморального звена иммунной системы, проявляющейся достоверным повышением уровня содержания ЦИК, являющихся продуктом реакции антиген-антитело.

Проведенные исследования по патентным и научно-техническим источникам информации показали, что предлагаемый способ не известен и не следует явным образом из известного уровня техники, т.е. соответствует критериям «новизна» и «изобретательский уровень».

Предлагаемый способ отличается диагностической точностью, простотой и доступностью и может быть применен в любом офтальмологическом отделении, оснащенном соответствующим оборудованием.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами конкретного выполнения.

Пример 1

Пациент К., 62 года, поступил в НФ ФГУ «МНТК «Микрохирургия глаза» с подозрением на глаукому обоих глаз.

При обследовании выявлено повышение ВГД обоих глаз до 27 мм. По результатам клинико-офтальмологического исследования данных на глаукому не найдено.

При иммунобиохимическом исследовании слезной жидкости заявляемым способом выявлено: уровень ААТ к АГ н-ДНК=0,72 усл.ед.; уровень ААТ к АГ д-ДНК=0,87 усл.ед.; уровень ЦИК=37 усл.ед.

Был поставлен диагноз: начальная стадия открытоугольной глаукомы обоих глаз. При повторном обследовании через 7 мес выявлены первые клинические проявления в виде расширения экскавации ДЗН до 0,5, также по данным статической периметрии - появление характерной для начальной стадии глаукомы скотомы в поле зрения в зоне Бьеррума.

Диагноз «начальная стадия ОУГ» подтвержден, назначено своевременное лечение.

Пример 2

Пациентка Т., 52 года, поступила в НФ ФГУ «МНТК «Микрохирургия глаза» с подозрением на открытоглаукому обоих глаз.

При иммунобиохимическом исследовании слезной жидкости заявленным способом выявлено: уровень ААТ к АГ н-ДНК=0,52 усл.ед.; уровень ААТ к АГ д-ДНК=0,58 усл.ед.; уровень ЦИК=25 усл. ед.

Поскольку уровни ААТ к АГ н- и д-ДНК, а также уровень ЦИК были ниже критических значений, диагноз «начальная стадия ОУГ» не был поставлен, пациентка находилась без лечения.

При повторном обследовании через 6 и 12 месяцев отрицательная динамика как по клиническим, так и по иммунобиохимическим показателям не выявлена, диагноз «подозрение на глаукому» снят, пациентка находится под наблюдением, без лечения.

Использование предлагаемого способа позволит с высокой точностью осуществлять раннюю диагностику начальной стадии ОУГ, проводить своевременное, адекватное лечение и предотвращать переход глаукоматозного процесса из начальной в развитую стадию.

Способ диагностики начальной стадии открытоугольной глаукомы путем исследования слезной жидкости, отличающийся тем, что определяют уровни содержания аутоантител к антигенам нативной и денатурированной ДНК (н- и д-ДНК) и уровень содержания циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) и при значениях уровня аутоантител к антигенам н- и д-ДНК выше 0,7 и 0,8 усл.ед. соответственно, и при значении уровня ЦИК выше 33,0 усл.ед. диагностируют начальную стадию открытоугольной глаукомы.