Способ разделения инбредных мышей на типологические группы с учетом особенностей высшей нервной деятельности

Изобретение относится к области медицины, а именно к экспериментальной медицине. Осуществляют типирование мышей при выработке условного питьевого рефлекса в 3-звенном Т-образном лабиринте. Регистрируют количество вертикальных стоек, время достижения поилки, время замирания, число ошибок, совершаемых животным при поиске поилки, и количество невротических реакций. При этом типирование проводят в течение 2 дней по 2 побежки каждый день с интервалом 1 ч и при средних значениях 4 побежек: вертикальных стоек - ниже 12, количества ошибок равным или ниже 12, времени достижения поилки равным или менее 100 с, времени неподвижности равным или менее 3 с. При отсутствии невротических реакций животных относят к группе хорошо обучаемых, а животных, у которых 60% и более этих показателей были выше данных показателей, относят к плохообучаемым. Способ повышает достоверность разделения мышей на типологические группы с учетом особенностей их внешней нервной деятельности. 9 табл.

 

Способ разделения инбредных мышей на типологические группы с учетом особенностей высшей нервной деятельности

Изобретение относится к области медицины, конкретно к экспериментальной медицине (патологической физиологии и фармакологии), и может быть использовано для изучения особенностей высшей нервной деятельности инбредных животных в норме и при патологии различного генеза.

Важный аспект данной проблемы состоит в определении тех особенностей высшей нервной деятельности, которые могут предопределять возникновение, течение и исход патологии. Следует отметить отсутствие сведений об изучении особенностей высшей нервной деятельности у инбредных мышей.

Известен способ выработки условного питьевого рефлекса со сложной пространственной ориентировкой в Т-образном лабиринте, когда рефлекс вырабатывается у крыс в течение 10 дней по одной побежке каждый день [1].

Данный способ является близким к заявляемому по технической сущности и достигаемому результату и выбран в качестве прототипа.

Недостатком является усреднение экспериментальных данных. Это обстоятельство приводит к искажению итогов исследования.

Задачей, решаемой данным изобретением, является повышение точности предлагаемого способа, что способствует повышению качества изучения особенностей высшей нервной деятельности у инбредных животных при развитии патологических процессов и созданию новых индивидуализированных методов фармакологической коррекции нарушений.

Поставленная задача достигается тем, что инбредных мышей разделяют на группы хорошо и плохо обучаемых животных путем типирования при выработке условного питьевого рефлекса со сложной пространственной ориентировкой в 3-звенном Т-образном лабиринте в течение 2 дней по 2 побежки с интервалом в 1 ч. К группе хорошо обучаемых животных относят особей, у которых средние значения 4 побежек вертикальной активности равны или ниже 12 условных единиц, количества ошибок, совершаемых животным при поиске поилки, равны или ниже 12 условных единиц, времени достижения поилки равны или менее 100 с, времени неподвижности равны или менее 3 с и отсутствуют невротические реакции. Животных, у которых 60% и более этих показателей были выше данных показателей и присутствуют невротические реакции, относят к плохо обучаемым.

Новым в предлагаемом изобретении является то, что индивидуально-типологические особенности высшей нервной деятельности выявляют путем типирования инбредных мышей в Т-образном лабиринте в течение 2 дней по 2 побежки каждый день с интервалом 1 ч. При средних значениях 4 побежек: вертикальной активности ниже 12 условных единиц, времени достижения поилки меньше или равным 100 с, времени замирания меньше или равным 3 с, числа ошибок, совершаемых животным при поиске поилки, менее или равным 12 условных единиц и при отсутствии невротических реакций животных относят к группе хорошо обучаемых. Особей, у которых 60% и более данных показателей выше и присутствуют невротические реакции, относят к плохо обучаемым. Далее проводятся любые другие экспериментальные манипуляции.

Обнаружены нарушения условно-рефлекторной деятельности мышей линии CBA/CaLac при экспериментальных невротических воздействиях [2]. Известно, что в лабораторных линиях, прошедших процесс селективного отбора, животные реагируют более или менее единообразно, обнаруживая либо низкую, либо высокую способность к обучению. Вместе с тем, в литературе имеются сведения о внутрипопуляционных различиях животных инбредных линий, в частности мышей линии СВА, как в уровне поведенческой активности [3, 4], так и в генотипе [5]. В связи с вышесказанным для проведения экспериментов нами была выбрана линия мышей СВА.

Сравнение предлагаемого изобретения с существующими способами оценки эмоционально-стрессовой реакции в открытом поле [6] и по способности к формированию навыка отыскания подводной платформы в водном лабиринте Морриса у инбредных мышей [7], уровня агрессивности [3, 4] мышей одной линии показало, что ни один из известных способов деления животных на типологические группы не является универсальным, так как не учитывает особенностей высшей нервной деятельности и психоэмоциональных проявлений. Поэтому для психофизиологических и доклинических фармакологических исследований разделение в зависимости от способности к формированию условного питьевого рефлекса представляется нам преимущественным, в виду того, что при выработке условного питьевого рефлекса со сложной пространственной ориентировкой в Т-образном лабиринте затрагивается целый комплекс проявлений высшей нервной деятельности животных, регистрируемый в выбранных нами показателях. Уровень вертикальной активности, количество ошибок, совершаемых животным при поиске поилки, время достижения поилки и время замирания, невротические реакции являются отражением условной и безусловной рефлекторной деятельности, исходного уровня двигательной активности и эмоциональности животных. Условия типирования 2 побежки с интервалом в 1 ч в течение 2 дней представляются нам как наиболее оптимальные для проведения разделения мышей.

Отличительные признаки проявили в заявляемой совокупности новые свойства, явным образом не вытекающие из уровня техники в данной области и неочевидные для специалиста. Идентичной совокупности признаков не обнаружено в проанализированной патентной и научно-медицинской информации.

Данный способ может быть использован на практике для оптимизации создания новых методов фармакологической коррекции патологий различного генеза.

Исходя из вышеизложенного, заявляемое изобретение соответствует критериям патентоспособности изобретения «Новизна» и «Изобретательский уровень» и «Промышленная применимость».

Способ осуществляют следующим образом: выработку и воспроизведение сложного условного питьевого рефлекса у здоровых животных проводят в Т-образном лабиринте в течение 4 дней по 2 побежки с интервалом в 1 ч каждый день. Опыты выполнялись на мышах линии CBA/CaLac на фоне водной депривации. Согласно существующим представлениям поведение животных в условиях этой методики преимущественно отражает функциональное состояние интегративных механизмов, контролирующихся эмоциональной системой достижения цели или поведенческой активации, и являющейся филогенетически самой молодой и сложной поведенческой системой мотивационного характера.

Лабиринт представляет собой установку, состоящую из одной стартовой камеры и двух систем коридоров, каждая из которых включает в себя по 3 Т-образных колена, спирально соединенных между собой и заканчивающихся целевыми камерами. Процедура обучения выглядит следующим образом: предварительно мышей оставляют без воды на одни сутки. Затем, в течение 2 дней каждую особь адаптируют к экспериментальным условиям, для чего дважды в день на 20 мин с интервалом в 1 ч индивидуально помещают в лабиринт, где беспорядочно расставляют 6 поилок (1-й этап обучения). На третий день животное помещают в стартовую камеру лабиринта, при этом все поилки из последнего были убраны. Мышь начинает искать поилку, выходит из стартовой камеры и делает первый поворот в правую или левую часть лабиринта. Направление первого поворота фиксируют и считают предпочтительным направлением поворота для данного животного. Немедленно вслед за этим в целевую камеру, находящуюся в половине лабиринта, противоположной той, в которую мышь повернула в первый раз, ставят поилку. При всех последующих побежках поилку ставят для данной мыши именно в эту целевую камеру. Это делается для того, чтобы при становлении условного рефлекса исключить влияние предпочтительного направления поворота на процесс обучения. Каждое животное тестируется в лабиринте таким образом в течение 10 мин, если оно не находит поилку раньше. Если животное не находит поилки в течение этого времени, его помещают в целевую камеру, чтобы мышь могла напиться. В тот же день животное через 1 ч совершает вторую побежку. Таким образом каждая особь обучается в течение 2 дней (2-й этап обучения - 4 побежки - типирование). При этом регистрируют время достижения поилки, количество ошибок (заходы в неправильные рукава лабиринта и тупики), количество вертикальных стоек и груминг. Груминг и вертикальные стойки характеризуют смещенную и ориентировочно-исследовательскую активность соответственно. Отказ от поиска поилки после двух успешных ее нахождений, фризинговые реакции, отказ от питья после успешного обнаружения поилки считаются проявлением невротической реакции. О скорости обучения судят по усредненным показателям с 1-й по 4-ю побежки 2-го этапа обучения по каждому параметру в отдельности. Разделение мышей на хорошо, плохо и средне обучаемых производят исходя из средних значений 4 побежек 2-го этапа обучения (вертикальной активности, количества ошибок, времени достижения поилки, времени неподвижности, числа невротических реакции). Данные показатели выбирались из расчета значимости их влияния на скорость выработки сложного условного питьевого рефлекса. Животные, у которых вертикальная активность ниже 12 условных единиц, количество ошибок равно или ниже 12 условных единиц, время достижения поилки равно или менее 100 с, время неподвижности равно или менее 3 с, невротические реакции отсутствуют, относят к хорошо обучаемым. Животные, у которых 60% и более этих показателей были выше данных значений общей группы, относились к плохо обучаемым.

Следует отметить, что в Т-лабиринте выявлены и амбивалентные животные, занимающие среднее положение между хорошо и плохо обучаемыми особями.

После завершения обучения всем животным давали отдохнуть в течение 7 суток при свободном доступе к воде и пище, после чего проводили дальнейшие экспериментальные манипуляции.

Предлагаемый способ изучен в экспериментах на мышах-самцах линии CBA/CaLac в количестве 450 штук, массой 20-22 г. Животные первой категории, конвенциональные линейные мыши, получены из питомника отдела экспериментального биомедицинского моделирования ГУ НИИ фармакологии ТНЦ СО РАМН (сертификат имеется).

Рефлекс вырабатывается по описанной выше методике, далее по итогам выработки условного питьевого рефлекса производили разделение животных на хорошо, плохо и средне обучаемых. Затем для подтверждения психосоматического статуса мышей проводили оценку поведенческой активности по уровню ориентировочно-исследовательской активности в открытом поле [8], тесту неассоциативного обучения [9], условно-рефлекторной деятельности (проверка условного питьевого рефлекса через 21 сутки после выработки). Кроме того, через неделю после типирования животных подвергали экспериментальным невротическим воздействиям (конфликтная ситуация, депривация парадоксального сна), через 21 сутки после которых проверяли сохранность условного питьевого рефлекса в Т-образном лабиринте. За 24 часа перед проверкой сохранности рефлекса у мышей снова убирали поилки.

Моделями невротических состояний являлись конфликтная ситуация [10] и депривация парадоксального сна [10].

Обработку результатов проводили методом вариационной статистики с использованием t-критерия Стьюдента [11].

Пример 1.

В случае использования прототипа не регистрировалось достоверных изменений условно-рефлекторной деятельности при проверке сохранности рефлекса через 21 сут после его выработки (табл.1). После конфликтной ситуации на 21 сут опыта у животных наблюдалось ухудшение воспроизведения условного питьевого рефлекса. Однако по общим значениям нельзя судить, как именно изменялось поведение каждого животного в отдельности. После депривации парадоксального сна показатели условно-рефлекторной деятельности (вертикальная активность, количество ошибок, время достижения поилки) были ниже, чем исходные значения. Итак, по полученным данным нельзя установить соответствие между индивидуальными особенностями обучения (типологией), характеристиками поведения и изменениями условно-рефлекторной деятельности.

Пример 2.

Рефлекс вырабатывается по описанной выше методике, далее по итогам выработки условного питьевого рефлекса производили разделение животных на хорошо, плохо и средне обучаемых. Затем проводили проверку условного питьевого рефлекса через 21 сутки после его выработки. За 24 часа перед проверкой сохранности рефлекса у мышей снова убирали поилки.

При выработке условного питьевого рефлекса в Т-лабиринте показано, что мыши линии CBA/CaLac разделяются на группы хорошо, средне и плохо обучаемых субъектов. В частности, у хорошо обучаемых особей не обнаруживались невротические реакции, время достижения поилки было в среднем около 1 мин, а время замирания - около 3 с, регистрировалось в среднем около 6 ошибок, совершаемых животным при поиске поилки, и 5 вертикальных стоек (табл. 2). При этом практически отсутствовали акты груминга и дефекаций.

У плохо обучаемых субъектов вертикальная активность (в 3,6 раза), количество ошибок (в 2,8 раза), время достижения поилки (в 2,3 раза), время неподвижности (в 10 раз), количество невротических эксцессов (в 8 раз), а также смещенная активность (числа актов груминга в 5 раз, дефекаций в 6 раз) статистически достоверно превосходили выявленные у хорошо обучаемых особей (табл. 2).

Средняя группа занимала промежуточное положение между хорошо и плохо обучаемыми животными, достоверно отличаясь по основным исследованным параметрам (число ошибок, время достижения поилки, время неподвижности, вертикальная активность), как от той, так и другой группы животных.

На 21 сут после выработки условного питьевого рефлекса качество его у хорошо обучаемых мышей значительно уступало таковому при типировании, о чем свидетельствовало увеличение в указанный срок количества ошибок (в 2,2 раза), времени достижения поилки (в 2,4 раза) и неподвижности (в 26 раз), числа актов груминга (в 6 раз), а также появление невротических реакций (табл. 3). У плохо и средне обучаемых особей показатели условно-рефлекторной деятельности, напротив, улучшались. В частности, у плохо и средне обучаемых животных отмечалось снижение количества ошибок (в 2 и 2,4 раза соответственно), сокращение времени достижения поилки (в 1,9 и 2,5 раза соответственно) и времени неподвижности (в 2,5 и 3,8 раза соответственно), уменьшение вертикальной активности (в 4 и 4,5 раза соответственно) и количества актов груминга (в 5,7 и 8 раз соответственно). Животные этих групп при поиске поилки не обнаруживали невротических эксцессов при проверке рефлекса.

Таким образом, анализ данных обучения в трехзвенном Т-образном лабиринте позволил выявить неоднородность поведения инбредных животных (мыши линии CBA/CaLac). Первую группу составили хорошо обучаемые особи, которые быстро приспосабливались к условиям лабиринта и хорошо обучались находить поилку в заданный период времени. Во вторую группу вошли плохо обучаемые субъекты, медленнее адаптировавшиеся в лабиринте и поэтому хуже обучавшиеся находить поилку. Средне обучаемые субъекты занимали промежуточное положение между этими двумя группами.

Пример 3.

Разделение по итогам одной поведенческой методики может привести к выявлению различий во всем поведенческом паттерне. Рефлекс вырабатывался по описанной выше методике, далее у мышей проводили оценку поведенческой активности по уровню ориентировочно-исследовательской активности в открытом поле [8].

По результатам исследования общей двигательной активности в открытом поле животные, разделенные по способности к обучению, распределились следующим образом: хорошо обучаемые (самая высокая общая двигательная активность), далее по убывающей - средне обучаемые и плохо обучаемые особи (табл. 4).

Пример 4.

Через 7 сут после выработки условного питьевого рефлекса в Т-лабиринте у мышей проводили тест неассоциативного обучения [9].

Группы животных, разделенных по способности к обучению в Т-образном лабиринте, различались и по скорости развития реакции привыкания. Наиболее быстрое угасание общей двигательной активности в открытом поле, свидетельствующее о высокой скорости неассоциативного обучения, наблюдалось у средне обучаемых животных, что проявилось в резком снижении их двигательной активности на 2 сут опыта. Далее следует отметить хорошо обучающихся животных, у которых наблюдалось выраженное снижение общей двигательной активности (почти в 2 раза) к 4-м сут опыта. Менее всего менялась общая двигательная активность у плохо обучающихся особей, постепенно уменьшаясь на 4 сут (табл. 5, 6, 7).

Пример 5.

Через неделю после типирования животных по предлагаемому способу их подвергали экспериментальным невротическим воздействиям (конфликтная ситуация, депривация парадоксального сна), через 21 сутки после которых проверяли сохранность условного питьевого рефлекса в Т-образном лабиринте. За 24 часа перед проверкой сохранности рефлекса у мышей снова убирали поилки.

Конфликтная ситуация ухудшала сохранность условного питьевого рефлекса в Т-образном лабиринте у мышей линии CBA/CaLac. Так, у хорошо и средне обучаемых животных, перенесших конфликтную ситуацию, показатели условно-рефлекторной деятельности на 21 сут опыта статистически достоверно превосходили таковые до воздействия: вертикальная активность (в 8 и 2,6 раза соответственно), количество ошибок (в 7 и 3,3 раза соответственно), время достижения поилки (в 9 и 3,5 раза соответственно), время неподвижности (в 90 и 8,4 раза соответственно), число актов груминга и дефекаций (табл. 8). Одновременно отмечалось появление значительного количества невротических эксцессов (1,7±0,12 и 1,0±0,35 соответственно), тогда как в интактном контроле невротических реакций у хорошо и средне обучаемых мышей не выявлено.

При проверке условного питьевого рефлекса у плохо обучаемых мышей на 21 сут после конфликтной ситуации наблюдалась лишь тенденция к увеличению исследуемых параметров (табл. 8). При этом статистически достоверно увеличивалось лишь число невротических реакций (в 3 раза; Р≤0,05).

Итак, конфликтная ситуация нарушала сохранность условного питьевого рефлекса со сложной пространственной ориентировкой у мышей линии CBA/CaLac (у хорошо обучаемых животных в большей степени, далее по убывающей - у средне обучаемых субъектов и у плохо обучаемых особей).

Проверка условного питьевого рефлекса через 21 сут после депривации парадоксального сна выявила статистически достоверное снижение ряда показателей поведения в Т-лабиринте у мышей двух групп (хорошо и плохо обучаемых): вертикальной активности, времени достижения поилки и числа совершаемых ошибок при поиске поилки (табл. 9). При этом следует отметить, что снижение поведенческой активности у плохо обучаемых особей более выражено, чем у хорошо обучаемых субъектов.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет успешно решить проблему отбора мышей линии CBA/CaLac для участия в изучении индивидуально-типологических особенностей высшей нервной деятельности как в условиях оптимальной жизнедеятельности, так при в развитии патологии различного генеза. Предложенный тест основан на оценке двигательной активности, эмоциональности и когнитивных способностях животных, помещенных в новую обстановку в условиях индивидуального тестирования. Типологическая дифференциация группы животных носит характер устойчивый, повторяющийся из эксперимента в эксперимент.

Литература

1. Першина О.В., Суслов Н.И., Литвиненко В.И., Попова Т.П. Влияние экстракта из надземной части Scutellaria baicalensis Georgi на выработку и воспроизведение условного питьевого рефлекса у интактных животных и животных с алкогольной интоксикацией // Растительные ресурсы. - 2000. - Вып.2. - С.120-124.

2. Скурихин Е.Г. Реакции системы крови, нарушения поведения и механизмы их развития в условиях экспериментального невроза. - Дис... канд. мед. наук. - 1997. - С.59-78, 83-85.

3. Августинович Д.Ф., Липина Т.В., Бондарь Н.П., Кудрявцева Н.Н. Особенности проявления наследственно обусловленной тревожности у самцов мышей линии C57BL/6J и CBA/Lac // Журнал высшей нервной деятельности им. И.П. Павлова. - 1999. - Т.49, №6. - С.1008-1017.

4. Кудрявцева Н.Н. Агонистическое поведение: модель, эксперимент, перспективы // Российский физиол. журнал им. И.М.Сеченова. - 1999. - Т.85, №1. - С.67-83.

5. Вейко Н.Н., Шубаева Н.О., Малашенко А.М. и др. Сравнение копийности активности рибосомных генов в четырех инбредных линиях мышей // Генетика и селекция животных. - 2002. - С.11.

6. Середенин С.Б., Бадыштов Б.А., Незнамов Г.Г. и др. Прогноз индивидуальных реакций на эмоциональный стресс и бензодиазепиновые транквилизаторы // Эксперим. и клиническая фармакология. - 2001. - Т.64, №1. - С.3-12.

7. Лильп И.Г., Бизикоева Ф.З., Полетаева И.И., Иванов В.И. Межлинейные различия в способности к обучению мышей лини 101/Н и СВА в водном лабиринте (модифицированный тест Морриса) // Бюллетень эксперим. биологии и медицины. - 1997. - Т.124, №12. - С.666-669.

8. Буреш Я., Бурешова О., Хьюстон Д.П. Методики и основные эксперименты по изучению мозга и поведения: под ред. А.С.Батуева. /Пер. с англ. Е.Н.Живописцевой. - М.: Высш. шк., 1991. - 399 с.

9. Воронина Т.А., Островская Р.У. Методические указания по изучению ноотропной активности фармакологических веществ // Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. М. - 2000. - С.155.

10. Скурихин Е.Г. Механизмы регуляции кроветворения при экспериментальных неврозах. - Дис... докт. мед. наук. - 2004. - С.78.

11. Зайцев Г.Н. Математическая статистика в экспериментальной ботанике. - Л.: Наука, 1984. - 425 с.

Таблица 1 Показатели выработки и проверки условного питьевого рефлекса со сложной пространственной ориентировкой у интакных мышей-самцов линии CBA/CaLac и после экспериментальных невротических воздействий (Х±m)
Группы наблюдения	Вертикальная активность	Груминг	Дефекация	Количество ошибок	Время достижения поилки, с	Время замирания, с	Количество невротических реакций
Интактный контроль	8,6±1,1	0,9±0,4	0,1±0,03	9,8±1,8	106,6±18,6	9,2±1,2	0,12±0,03	А
10,3±3,0	0,8±0,3	0,2±0,08	10,8±1,9	112,9±24,8	13,9±2,7	0,25±0,08	Б
Конфликтная ситуация	9,8±1,8	3,4±0,3	0,2±0,1	10,2±1,2	99,8±14,5	3,0±1,4	0,2±0,05	А
24,5±5,6*	3,8±0,8	3,4±0,8*	32,3±7,2*	352,8±68,7*	17,9±7,8*	1,3±0,3*	Б
Депривация парадоксального сна	9,6±2,5	0,9±0,5	0,1±0,1	11,3±1,5	114,5±15,2	2,2±0,9	0,15±0,05	А
3,5±0,5*	0,3±0,1	0,1±0,1	5,6±1,0*	45,0±9,5*	1,0±0,3	0,04±0,03	Б
Примечание. А - исходные значения, Б - усредненные значения при проверке рефлекса через 21 сутки после его выработки или экспериментального невротического воздействия; * - различия достоверны по отношению к исходным данным каждой группы (Р≤0,01; Р≤0,05).

Таблица 2 Показатели, полученные при выработке условного питьевого рефлекса при разделении в Т-образном лабиринте мышей-самцов линии CBA/CaLac (X±m)
Группы животных	Вертикальная активность	Груминг	Дефекация	Количество ошибок	Время достижения поилки, с	Время замирания, с	Количество невротических реакций
Хорошо обучающиеся	4,0±0,4	0,3±0,1	0,03±0,02	5,4±0,5	67,6±4,0	0,5±0,2	0,0±0,0
Плохо обучающиеся	14,5±1,3 Р≤0,001	1,6±0,5 Р≤0,01	0,18±0,08 Р≤0,05	15,3±0,9 Р≤0,001	157,8±8,8 Р≤0,001	5,4±1,7 Р≤0,001	0,08±0,03 Р≤0,02
А
Средне обучающиеся	6,8±0,8 Р≤0,05 Р≤0,02	0,6±0,1 Р≤0,05	0,1±0,04	8,1±0,7 P≤0,01 P≤0,001	91,5±7,4 Р≤0,01 Р≤0,002	3,2±1,5 Р≤0,05	0,03±0,02
А Б
Примечание: А - различия достоверны по отношению к хорошо обучающимся животным, Б - различия достоверны по отношению к плохо обучающимся животным.

Таблица 3 Показатели проверки условного питьевого рефлекса через 21 сутки после его выработки у мышей-самцов линии CBA/CaLac, разделенных на хорошо, плохо и средне обучающихся (Х±m)
Группы животных	Вертикальная активность	Груминг	Дефекация	Количество ошибок	Время достижения поилки, с	Время замирания, с	Количество невротических реакций
Хорошо обучающиеся	3,5±0,7	0,3±0,1	0,0±0,0	4,6±0,9	50,2±8,4	0,5±0,3	0,0±0,0	А
4,3±2,0	2,0±1,0*	0,08±0,08	10,3±3,1*	119,5±39,3*	12,9±6,6	0,25±0,17	Б
Плохо обучающиеся	17,3±3,5	2,2±0,4	0,1±0,06	17,6±2,7	184,4±34,3	2,5±1,1	0,16±0,06	А
4,3±2,9*	0,4±0,3*	0,0±0,0	9,4±2,8*	52,8±25,3*	0,0±0,0*	0,0±0,0*	Б
Средне обучающиеся	7,7±0,9	0,8±0,18	0,2±0,1	9,4±1,5	103,8±10,2	3,8±2,1	0,0±0,0	А
1,7±1,1*	0,1±0,1*	0,0±0,0	4,0±1,9*	41,9±9,2*	1,0±0,8	0,0±0,0	Б
Примечание: А - исходные значения, Б - усредненные значения при проверке через 21 сутки после типирования; * - различия достоверны по отношению к исходным данным (Р≤0,05).

Таблица 4 Показатели ориентировочно-исследовательского поведения в открытом поле мышей-самцов линии CBA/CaLac, разделенных по способности к обучению в Т-образном лабиринте на хорошо, плохо и средне обучающихся (Х±m)
Группы животных	Суммарная двигательная активность	Горизонтальная активность	Вертикальная активность	Норковый рефлекс	Груминг	Дефекация	Латентный период первого выхода в центр поля (секунды)
1-я минута исследования
Хорошо обучающиеся	15,3±1,2	6,9±0,9	0,9±0,2	6,7±0,6	0,0±0,0	0,7±0,2	116,6±12,9
Плохо обучающиеся	14,4±1,2	6,6±0,7	0,7±0,3	6,5±0,6	0,05±0,05	0,7±0,2	132,5±11,1
Средне обучающиеся	12,6±0,8 *Р≤0,05	5,3±0,7	0,9±0,3	5,8±0,5	0,2±0,15	0,5±0,1	122,5±11,0
2-е последующих минуты исследования
Хорошо обучающиеся	52,8±3,5	21,7±2,1	3,0±0,4	26,2±1,7	1,0±0,3	0,8±0,2	-
Плохо обучающиеся	40,6±3,6 *Р≤0,05	16,2±2,1	2,8±0,5	18,8±1,8 *Р≤0,01	1,7±0,4	1,1±0,3	-
Средне обучающиеся	45,2±3,7	19,4±2,4	2,4±0,3	22,0±1,9	0,6±0,2	0,9±0,3	-
3 общих минуты исследования
Хорошо обучающиеся	68,1±3,9	28,7±2,7	3,9±0,5	33,0±1,6	1,0±0,3	1,6±0,3	-
Плохо обучающиеся	55,1±4,2 *Р≤10,05	22,8±2,5	3,5±0,7	25,2±1,9 *Р≤0,01	1,8±0,4	1,8±0,3	-
Средне обучающиеся	57,7±4,0	24,7±2,8	3,2±0,5	27,8±2,0	0,8±0,3	1,3±0,3	-
Примечание: * - различия достоверны по отношению к хорошо обучающимся животным.

Таблица 5 Показатели ориентировочно-исследовательского поведения хорошо, плохо и средне обучающихся мышей-самцов линии CBA/CaLac (1-я минута исследования) при развитии реакции привыкания в открытом поле (Х±m)
Сроки исследования, сутки	Суммарная двигательная активность	Горизонтальная активность	Вертикальная активность	Норковый рефлекс	Груминг	Дефекации	Латентное время первого выхода в центр поля (секунды)
ХОРОШО ОБУЧАЮЩИЕСЯ ЖИВОТНЫЕ
1	25,0±3,1	13,7±2,1	0,7±0,4	10,2±1,3	0±0	0,4±0,2	117,4±21,7
2	21,1±3,9	11,1±2,1	1,0±0,4	8,0±1,7	0,2±0,2	0,8±0,3	112,9±21,7
3	17,7±2,2 Р≤10,05	8,4±1,2 Р≤0,05	1,3±0,4	7,0±1,4	0,8±0,4	0,1±0,1	134,4±24,7
4	17,8±2,1 Р≤0,05	9,4±1,8	0,9±0,4	4,9±1,1 Р≤0,01	1,2±0,5 Р≤0,05	1,3±0,3 Р≤0,05	138,6±16,9
ПЛОХО ОБУЧАЮЩИЕСЯ ЖИВОТНЫЕ
1	22,0±2,2	11,7±1,2	0,6±0,3	9,5±1,2	0,1±0,08	0,1±0,08	129,2±17,3
2	17,9±2,0	8,3±1,4	0,8±0,2	7,5±0,8	0,2±0,2	1,2±0,3 Р≤0,01	101,4±19,1
3	14,9±2,0 Р≤0,05	6,8±1,1 Р≤0,01	0,9±0,2	5,4±0,9 Р≤0,02	0,6±0,3	1,2±0,4 Р≤0,01	120,0±16,8
4	16,0±1,2 Р≤0,05	8,5±1,2	0,8±0,2	4,7±0,7 Р≤0,01	1,2±0,5 Р≤0,05	0,9±0,3	140,9±18,1
СРЕДНЕ ОБУЧАЮЩИЕСЯ ЖИВОТНЫЕ
1	22,5±1,9	11,8±1,9	0,5±0,4	9,8±1,4	0,0±0,0	0,5±0,3	111,5±22,2
2	15,8±2,4	9,4±1,5	0,5±0,3	5,1±1,0	0,0±0,0	0,8±0,3	118,0±22,2
3	14,8±2,5	8,0±1,6	0,6±0,4	5,4±0,7	0,0±0,0	0,8±0,3	168,0±8,5
4	14,0±1,6 Р≤0,05	7,8±1,2	0,6±0,3	4,4±0,9 Р≤0,05	0,4±0,3	0,9±0,4	163,8±9,1 Р≤0,05
Примечание. Р≤0,01; Р≤0,02; Р≤0,05 - различия достоверны по отношению к данным 1-х суток каждой группы

Таблица 6 Показатели ориентировочно-исследовательского поведения хорошо, плохо и средне обучающихся мышей-самцов линии CBA/CaLac (2-е последних минуты исследования) при развитии реакции привыкания в открытом поле (Х±m)
Сроки исследования, сутки	Суммарная двигательная активность	Горизонтальная активность	Вертикальная активность	Норковый рефлекс	Груминг	Дефекации
ХОРОШО ОБУЧАЕМЫЕ ЖИВОТНЫЕ
1	61,3±6,8	31,4±3,9	3,8±1,5	24,1±3,6	1,0±0,5	1,0±0,4
2	40,0±5,6 Р≤0,05	19,8±2,9 Р≤0,05	3,6±1,3	13,3±2,3 Р<0,05	1,9±0,6	1,4±0,4
3	41,6±4,8 Р≤0,05	19,9±2,0 Р≤0,05	4,0±1,2	16,3±3,5 Р≤0,01	0,4±0,2	0,9±0,4
4	27,4±3,5 Р≤0,01	13,7±2,7 Р≤0,02	2,0±0,6 Р≤0,05	7,9±1,7 Р≤0,001	2,6±0,7	1,3±0,3
ПЛОХО ОБУЧАЕМЫЕ ЖИВОТНЫЕ
1	46,0±7,8	21,3±2,3	1,9±0,5	19,5±2,5	2,2±0,7	1,0±0,3
2	41,5±5,4	21,1±3,1	4,4±0,9 Р≤0,05	12,7±1,8 Р≤0,05	1,9±0,6	1,5±0,4
3	33,2±5,5	13,5±2,0 Р≤0,05	3,2±0,7	13,2±2,4	2,1±0,5	1,3±0,2
4	29,2±4,8 Р≤0,01	14,2±1,8 Р≤0,05	2,4±0,5	8,8±1,8 Р≤0,001	2,6±0,8	1,2±0,2
СРЕДНЕ ОБУЧАЕМЫЕ ЖИВОТНЫЕ
1	48,0±5,2	23,1±2,9	2,6±0,9	19,3±2,1	2,1 ±0,8	0,9±0,5
2	33,0±5,3	17,5±2,9	2,1±0,6	10,8±2,3	1,8±0,5	0,9±0,3
3	31,3±5,1 Р≤0,05	15,5±2,7	2,3±0,8	10,0±1,9 Р≤0,05	1,9±0,6	1,6±0,4
4	30,1±5,1 Р≤0,05	13,3±2,6 Р≤0,02	1,8±0,7	10,5±2,6	2,9±0,8	1,8±0,3
Примечание. Р≤0,001; Р≤0,01; Р≤0,02; Р≤0,05 - различия достоверны по отношению к данным 1-х суток каждой группы

Таблица 7 Показатели ориентировочно-исследовательского поведения хорошо, плохо и средне обучающихся мышей-самцов линии CBA/CaLac (3 общих минуты исследования) при развитии реакции привыкания в открытом поле (Х±m)
Сроки исследования, сутки	Суммарная двигательная активность	Горизонтальная активность	Вертикальная активность	Норковый рефлекс	Груминг	Дефекации
ХОРОШО ОБУЧАЕМЫЕ ЖИВОТНЫЕ
1	86,3±8,0	45,1±6,5	4,4±1,8	34,3±4,5	1,0±0,5	1,4±0,5
2	61,1±7,5 Р≤0,05	30,9±5,3	4,6±1,6	21,3±3,7 Р≤0,05	2,1±0,7	2,2±0,4
3	59,2±8,3 Р≤0,05	28,3±4,0 Р≤0,05	5,3±1,4	23,3±4,6	1,2±0,5	1,0±0,4
4	45,2±5,8 Р≤0,02	28,1±3,9 Р≤0,05	2,9±0,9	12,8±2,1 Р≤0,01	3,8±0,4 Р≤0,001	2,7±0,4
ПЛОХО ОБУЧАЕМЫЕ ЖИВОТНЫЕ
1	68,0±7,7	33,0±5,1	2,5±0,6	29,1 ±4,4	2,3±0,6	1,1±0,3
2	59,5±6,6	29,4±4,0	5,2±1,0 Р≤0,05	20,2±2,1	2,2±0,6	2,6±0,5 Р≤0,05
3	48,1±5,9	20,3±4,5	4,1±0,8	18,5±3,3	2,7±0,5	2,5±0,4 Р≤0,05
4	45,2±6,3 Р≤0,05	22,7±3,4	3,2±0,6	13,5±2,4 Р≤0,01	3,9±1,0	2,0±0,3
СРЕДНЕ ОБУЧАЕМЫЕ ЖИВОТНЫЕ
1	70,5±6,3	34,9±3,7	3,1±1,3	29,0±2,7	2,1±0,8	1,4±0,5
2	48,8±5,8 Р≤0,02	26,9±3,0	2,6±0,6	15,9±2,9 Р≤0,05	1,8±0,5	1,6±0,4
3	46,0±6,5 Р≤0,02	23,5±3,7	2,9±1,0	15,4±2,1 Р≤0,05	1,8±0,6	2,4±0,6
4	44,1±6,2 Р≤0,02	21,0±3,7 Р≤0,02	2,4±0,9	14,9±2,6 Р≤0,02	3,3±0,8	2,6±0,5
Примечание. Р≤0,001; Р<0,01; Р≤0,02; Р≤0,05 - различия достоверны по отношению к данным 1-х суток каждой группы

Таблица 8 Показатели проверки условного питьевого рефлекса со сложной пространственной ориентировкой через 21 сутки после конфликтной ситуации у хорошо, плохо и средне обучающихся мышей-самцов линии CBA/CaLac (X±m)
Группы животных	Вертикальная активность	Груминг	Дефекация	Количество ошибок	Время достижения поилки, с	Время замирания, с	Количество невротических реакций
Хорошо обучающиеся	5,1±0,9	0,4±0,1	0,0±0,0	6,3±1,1	57,7±7,7	0,3±0,2	0,0±0,0	А
40,1±3,6*	6,5±0,9*	2,1±0,4*	46,2±2,3*	525,5±32,4*	23,0±6,6*	1,7±0,12*	Б
Плохо обучающиеся	16,9±1,6	1,0±0,4	0,1±0,05	15,6±1,4	150,8±18,1	6,3±0,9	0,25±0,05	А
14,3±4,9	2,3±1,0	0,5±0,3	24,5±8,2	229,3±58,8	11,3±4,8	0,75±0,32*	Б
Средне обучающиеся	7,3±1,6	0,8±0,4	0,1±0,06	7,9±1,2	87,9±9,2	2,3±0,9	0,06±0,06	А
19,1±6,3*	2,8±1,0	0,8±0,3*	26,1±8,1*	303,5±108,5*	19,4±12,9*	1,0±0,35*	Б
Примечание. А - исходные значения, Б - усредненные значения, полученные при проверке рефлекса через 21 сутки после конфликтной ситуации, * - различия достоверны по отношению к исходным значениям каждой группы (P≤0,0001; Р≤0,01; Р≤0,02; Р≤0,05)

Таблица 9 Показатели проверки условного питьевого рефлекса со сложной пространственной ориентировкой через 21 сутки после депривации парадоксального сна у хорошо, плохо и средне обучающихся мышей-самцов линии CBA/CaLac (X±m)
Группы животных	Вертикальная активность	Груминг	Дефекация	Количество ошибок	Время достижения поилки,с	Время замирания, с	Количество невротических реакций
Хорошо обучающиеся	3,9±0,5	0,1±0,07	0,0±0,0	5,6±1,2	58,1±9,1	0,0±0,0	0,0±0,0	А
0,7±0,5*	0,1±0,09	0,0±0,0	3,1±1,2	36,9±10,8	0,0±0,0	0,0±0,0	Б
Плохо обучающиеся	16,9±2,2	1,3±0,6	0,0±0,0	17,9±3,2	190,9±29,3	2,3±0,9	0,25±0,01	А
1,3±0,9*	0,3±0,2	0,0±0,0	5,6±2,9*	43,1±18,9*	1,1±0,3	0,13±0,13	Б
Средне обучающиеся	6,7±0,9	0,3±0,2	0,0±0,0	9,6±1,4	90,8±14,8	1,3±0,8	0,0±0,0	А
2,0±0,6*	0,2±0,17	0,0±0,0	7,5±1,0	53,3±16,1	0,3±0,2	0,0±0,0	Б
Примечание. А - исходные значения, Б - усредненные значения, полученные при проверке рефлекса через 21 сутки после конфликтной ситуации, * - различия достоверны по отношению к исходным значениям каждой группы (Р≤0,001; Р≤0,01; Р≤0,02; Р≤0,05)

Способ разделения мышей линии СВА//Calac на типологические группы с учетом особенностей высшей нервной деятельности путем типирования при выработке условного питьевого рефлекса в 3-звенном Т-образном лабиринте, при этом регистрируют количество вертикальных стоек, время достижения поилки, время замирания, число ошибок, совершаемых животным при поиске поилки, количество невротических реакций, отличающийся тем, что типирование проводят в течение 2 дней по 2 побежки каждый день с интервалом 1 ч и при средних значениях 4 побежек: вертикальных стоек - ниже 12, количества ошибок равным или ниже 12, времени достижения поилки равным или менее 100 с, времени неподвижности равным или менее 3 с и при отсутствии невротических реакций животных относят к группе хорошо обучаемых, а животных, у которых 60% и более этих показателей были выше данных показателей и присутствуют невротические реакции, относят к плохо обучаемым.