Биологически активный стимулятор и способ повышения неспецифической резистентности с его применением

Изобретение относится к области ветеринарной медицины и может быть использовано для повышения общей неспецифической резистентности животных. Спиртовой экстракт смеси равных количеств травы и соцветий эхинации пурпурной, мать-и-мачехи, цветов липы мелколистной и корней солодки используют как биологически активный стимулятор. Для повышения общей неспецифической резистентности телятам в дополнение к инъекции неспецифического иммуноглобулина экстракт назначают в виде водного раствора 7-8%-ной концентрации для применения внутрь в дозе 2,5-3,0 мл/кг массы животного в течение 10-15 суток с интервалом в 24 ч. Изобретение расширяет арсенал средств, обладающих иммуностимулирующим действием, и позволяет эффективно повысить неспецифическую резистентность животного за счет применения нетоксичного и экологически чистого средства. 2 н.п. ф-лы, 3 табл.

 

Изобретение относится к ветеринарии, касается средства растительного происхождения, обладающего иммуностимулирующим действием, и может быть использовано для повышения общей неспецифической резистентности у молодняка сельскохозяйственных животных.

Устойчивость организма животных к неблагоприятным воздействиям внешней среды определяется состоянием его защитных сил, что делает необходимым, наряду с вакцинацией, укрепление естественной резистентности к действию микробных факторов.

Известен ряд неспецифических стимуляторов иммунитета (синтетического, бактериального, растительного происхождения), различающихся по структуре и механизмам действия.

Из известных препаратов растительного происхождения иммуностимулирующие свойства наиболее изучены у препаратов элеутерококка, пустырника, препаратов из семян тыквы, травы эхинацеи пурпурной, левзеи сафлоровидной. Однако данные об иммунотропном действии этих препаратов отличаются противоречивостью /1, 2, 3, 4, 5, 6/.

Известен также препарат растительного происхождения тетраиммунофит - фитоэкстракционный препарат из травы зверобоя, листа сены, плодов шиповника и корнеплодов свеклы, обладающий иммуностимулирующим действием на гуморальный иммунный ответ /7/.

Наиболее близким к заявленному является средство, обладающее иммуностимулирующим действием, представляющее собой водный экстракт из трав зверобоя продырявленного (Hypericum perforatum L.), тимьяна ползучего (Thymus serpyllum), мяты перечной (Mentha piperita L.) и мать-и-мачехи (Tussilago farfara), взятых в равных количествах /8/.

С целью расширения арсенала средств, обладающих иммуностимулирующим действием, предлагается использовать экстракт из травы и соцветий эхинации пурпурной (Echinazea purpurea), листьев мать-и-мачехи (Tussilago farfara), цветов липы мелколистной (Tilia cordata Mill.) и корней солодки (Glycyrrhiza glabra), взятых в равных количествах.

Эхинацея пурпурная (Echinazea purpurea) - многолетнее травянистое растение с коротким корневищем, плод - серовато-бурая семянка. Разводится в южной и средней полосах европейской части России. Собирают цветочные корзинки в июле-августе, корневища с корнями - поздней осенью. Химический состав: эфирное масло (в цветочных корзинках 0,13-0,48%), в состав которого входит нециклический секвитерпен, гликозид, бетаин, смола, органические кислоты (пальмитиновая, линолевая, церотиновая), фитостерины (в корнях). В народной и научной медицине эхинацею пурпурную применяют в комплексной терапии рецидивирующих инфекционно-воспалительных заболеваний верхних и нижних дыхательных путей. Противопоказания к применению: гиперчувствительность, аутоиммунные заболевания, туберкулез, лейкоз, беременность, период лактации, детский возраст, хронические заболевания печени.

Мать-и-мачеха (Tussilago farfara) встречается повсеместно. Собирают листья в первую половину лета. Химический состав: слизь, при гидролизе которой образуются глюкоза, галактоза, уроновые кислоты, горькие гликозиды, эфирное масло, сапонины, фитостерин, каротиноиды, яблочная и винная кислоты и др. В народной и научной медицине мать-и-мачеху применяют как отхаркивающее, мягчительное, противовоспалительное, дезинфицирующее и потогонное средство.

Липа мелколистная (Tilia cordata Mill.) - крупное долговечное дерево, растет в зоне широколиственных лесов европейской части России. Собирают соцветия с прицветниками, почки, листья, кору и семена. Химический состав: в цветах липы содержатся эфирное масло (около 0,05%), полисахариды (7-10%), включающие галактозу, глюкозу, рамнозу, арабинозу, ксилозу и галактуроновую кислоту, флаваноиды (4-5%), аскорбиновую кислоту и каротин: в листьях липы - белок, аскорбиновая кислота (131 мг%), каротин; в плодах - жирное масло (до 60%). В народной и научной медицине настои и отвары соцветий липы применяют в качестве жаропонижающего и противовоспалительного средства при гриппе, простудных и респираторных заболеваниях, бронхитах, инфекционных болезнях у детей, невралгиях, циститах и др. Измельченные свежие почки или свежие и размоченные листья используют как наружное противовоспалительное, болеутоляющее и мягчительное средство, прикладываемое к ожогам, воспалительным уплотнениям и язвам.

Солодка голая (Glycyrrhiza glabra L.) - многолетнее корнеотпрысковое травянистое растение семейства. В диком виде произрастает на юге Западной Европы, в Средиземноморье, Передней Азии, Иране, Турции, Афганистане, Китае, в России - на юге европейской части и в Западной Сибири. Собирают корневища с корнями весной или летом. Химический состав: тритерпеновый сапонин глицирризин - кальциевая и калиевая соли глицирризоновой кислоты (23%), флаваноиды, производные флаванона и халкона, полисахариды (крахмал, пектиновые вещества), аскорбиновая кислота. Препараты корня солодки применяют как отхаркивающее и слабительное (порошок, экстракты сухой и густой, сироп, эликсир грудной), как противовоспалительное, спазмолитическое и антисекреторное средство при язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, антиаллергическое, противовоспалительное при бронхиальной астме, экземах, аллергических дерматитах.

Экстракт из травы и соцветий эхинации пурпурной, мать-и-мачехи, цветов липы мелколистной и корней солодки готовится фармакопейным способом в соотношении сырья к извлекателю 1:10. В качестве экстрагента используют этиловый спирт концентрацией 70%. Лекарственное сырье измельчают до частиц размером 1-3 мм, смешивают в равных количествах, навеску сырья помещают в стеклянный сосуд, добавляют расчетное количество этилового спирта концентрацией 70%, выдерживают 7 суток в темном месте при температуре 15-20°С. Затем спиртовую настойку процеживают через холст или два слоя марли, отжимая сырье, фильтруют.

Пример: в стеклянный сосуд поместили 500 г лекарственного сырья (равные количества из травы и соцветий эхинации пурпурной, мать-и-мачехи, цветов липы мелколистной и корней солодки), добавили 5,0 л этилового спирта концентрацией 70%, поставили в темное место и выдерживали при температуре 15-20°С в течение 7 суток, после чего процедили через холст, отжимая сырье.

Для повышения общей неспецифической резистентности телят на фоне внутримышечной инъекции неспецифического иммуноглобулина применяют биологически активный стимулятор в соответствии с изобретением в виде раствора 7-8%-ной концентрации, который готовят на охлажденной кипяченой воде и дают внутрь в течение 10-15 дней с интервалом в 24 часа в дозе 2,5-3,0 мл/кг массы животного.

Сущность способа поясняется примерами.

Пример 1. Стимулирующее влияние на факторы неспецифической резистентности оценивали в эксперименте на клинически здоровых телятах 5-7-дневного возраста в двух сериях опытов. В обеих сериях опытов, отобранных методом аналогов, телят распределяли на пять групп. В первой серии телятам первых четырех групп применяли внутрь заявленный биологический стимулятор в виде водного раствора 7%-ной концентрации в течение 10 дней с интервалом в 24 часа в дозах 2,0; 2,5; 3,0 и 3,5 мл/кг массы животного. Телята пятой группы биологического стимулятора не получали и служили контролем. Во второй серии телятам первых четырех групп заявленный биологический стимулятор применяли внутрь на фоне внутримышечной инъекции неспецифического иммуноглобулина. Естественную резистентность оценивали по показателям бактерицидной активности сыворотки крови (определяли по методу О.В.Смирновой и Т.А.Кузьминой, 1966), лизоцимной активности сыворотки крови (определяли по методу В.Г.Дорофейчук, 1968), β-лизинной активности сыворотки крови (определяли по методу О.В.Бухариной и др., 1970) и функциональной активности нейтрофилов крови (определяли в реакции восстановления нитросинего тетразолия по А.Н.Маянскому и др., 1979). Результаты представлены в таблице 1.

Как видно из таблицы 1, при испытанных дозах получены стабильные результаты в обеих сериях опытов. В качестве оптимальной дозы для применения на практике можно рекомендовать дозу 2,5 мл/кг массы животного, обеспечившую максимальные показатели относительно контроля и граничных доз. Граничные дозы обеспечивают повышение показателей относительно контроля, но являются экономически нецелесообразными.

Таблица 1
Влияние биологически активного стимулятора на показатели общей неспецифической резистентности в зависимости от дозы
Показатели	Группы животных
Первая (n=10)	Вторая (n=10)	Третья (n=10)	Четвертая (n=10)	Пятая (n=10)
Первая серия
Бактерицидная активность сыворотки крови, %
Лизоцимная активность сыворотки крови, %
Бетализинная активность, %
Функциональная активность нейтрофилов крови (НСТ-тест), %:
спонтанный
индуцированный
Вторая серия
Бактерицидная активность сыворотки крови, %
Лизоцимная активность сыворотки крови, %
Бетализинная активность, %
Функциональная активность нейтрофилов крови (НСТ-тест), %:
спонтанный
индуцированный

Примечание: в числителе - показатели до начала опыта, в знаменателе - показатели после окончания опыта

Пример 2. Стимулирующее влияние биологически активного стимулятора в соответствии с изобретением на факторы неспецифической резистентности в зависимости от продолжительности применения изучали на клинически здоровых телятах 5-6-дневного возраста. Подобранных по принципу аналогов телят распределяли на две группы - опытную и контрольную. Телятам опытной группы биологически активный стимулятор в соответствии с изобретением применяли внутрь в дозе 2,5 мл/кг массы животного в течение 10-15 дней с интервалом в 24 часа, телятам контрольной группы препарата не назначали. Изменение иммунобиологических показателей определяли в динамике в возрасте 6, 16, 20 и 30 дней. Результаты представлены в таблице 2.

Таблица 2
Влияние биологически активного стимулятора на иммунологические показатели в динамике
Показатели	Возраст, сут.
6	16	20	30
Т-лимфоциты, %
В-лимфоциты, %
Фагоцитарная активность, %
Бактерицидная активность, %
Лизоцимная активность, %
Иммуноглобулины, %
G
М
Общий белок, г/л
Примечание: в числителе - показатели опытных, в знаменателе - показатели контрольных животных

Как видно из таблицы 2, в возрасте 6 суток различия практически отсутствовали. У животных опытной группы к 16-дневному возрасту происходило повышение основных показателей клеточного и гуморального иммунитета, которое продолжилось до 20-дневного возраста, и в отличие от животных контрольной группы положительная тенденция сохранялась до 30-дневного возраста. Важное практическое значение имело увеличение количества иммуноглобулинов в сыворотке крови подопытных телят, что свидетельствовало о лучшей усвояемости новорожденными молозивных и более раннем начале синтеза собственных иммуноглобулинов.

Пример 3. Эффективность способа повышения общей неспецифической резистентности с применением биологически активного стимулятора в соответствии с изобретением на фоне внутримышечной инъекции неспецифического иммуноглобулина в сравнении с известными изучали в условиях хозяйства, стационарно неблагополучного по желудочно-кишечным болезням телят, обусловленным воздействием на организм ассоциаций вирусов, патогенной и условно-патогенной микрофлоры на фоне нарушения условий содержания и кормления стельных коров и телят. Острые желудочно-кишечные расстройства у молодняка выявляли в 2-3-дневном возрасте. У больных отмечали урежение частоты пульса и дыхания, понижение температуры тела, западение орбиты глаз, синюшность видимых слизистных оболочек, взъерошенность и тусклость шерсти, профузный понос. Бактериологическими и вирусологическими исследованиями подтверждена этиологическая роль рота- и коронавирусов, а также бактерий родов Escherichia и Proteus. Заболеваемость - 87-95%, летальность - 25-30%. По принципу аналогов подбирали клинически здоровых телят 5-7-дневного возраста, которых распределяли на четыре группы. Неспецифический иммуноглобулин инъецировали внутримышечно в дозе 1,0 мл трехкратно с интервалом в 5 дней.

Биологически активный стимулятор в соответствии с изобретением и фитоэкстракт (аналог) применяли внутрь в дозе 2,5 мл/кг массы животного в течение 10-15 дней. Эффективность оценивали по показателям общей неспецифической резистентности, как в примере 1 (таблица 3).

Таблица 3
Эффективность способа повышения общей неспецифической резистентности с применением биологически активного стимулятора
Показатели	Группы телят
1 группа	2 группа	3 группа
Количество животных, гол.		12	12	12
Схема воздействия	НИ + заявленное средство	НИ + фитоэкстракт (аналог)	НИ* (базовый способ)	препараты не применялись (контроль)
Функциональная активность нейтрофилов по НСТ-тесту:
спонтанный, %
индуцированный, %
Бактерицидная активность, %
Лизоцимная активность, %
Бетализинная активность, %
Примечание: *НИ - неспецифический иммуноглобулин **в числителе - показатели до начала опыта, в знаменателе - после окончания опыта

Проведенные нами исследования показали, что экстракт смеси равных количеств травы и соцветий эхинации пурпурной, мать-и-мачехи, цветов липы мелколистной и корней солодки обладает иммуностимулирующей активностью, которая может быть использована для стимуляции естественной резистентности при инфекционных заболеваниях, патогенетически связанных с недостаточностью иммунной системы. Положительное влияние на факторы общей неспецифической резистентности объясняется содержанием в растительном иммуностимуляторе полисахаридов (до 10%), включающих галактозу, глюкозу, рамнозу, арабинозу, галактуроновую кислоту, которые усиливают фагоцитоз, стимулируют выработку макрофагами важных для иммунной системы компонентов. Средство является нетоксичным, содержит биодоступные полезные биологически активные вещества, включающие, например, эфирное масло, флавоноиды, картиноиды, фитостерин, сапонины, обладает экологической чистотой.

Источники информации, принятые во внимание

1. А.Д.Алтунин и др. // Здоровье, разведение и защита мелких домашних животных: Материалы 1 Междунар. конф. - Уфа, 2000.

2. И.Ф.Горлов и др. // Ветеринария, 1996, №7.

3. А.А.Ивановский // Ветеринарный врач, 2000, №2.

4. А.В.Коробко // Ветеринария, 2000, №5.

5. В.П.Николаенко // Ветеринария, 1990, №4.

6. Ш.Б.Садыков // Ветеринария, 1990, №4.

7. Л.А.Макарадзе // Ветеринария, 1999, №3.

8. RU 22501101 С1, 2005.

1. Биологически активный стимулятор, содержащий спиртовой экстракт растительного сырья, отличающийся тем, что в качестве растительного сырья используют смесь равных количеств травы и соцветий эхинации пурпурной, мать-и-мачехи, цветов липы мелколистной и корней солодки.

2. Способ повышения общей неспецифической резистентности, включающий внутримышечную инъекцию неспецифического иммуноглобулина, отличающийся тем, что дополнительно назначают для применения внутрь спиртовой экстракт равных количеств травы и соцветий эхинации пурпурной, мать-и-мачехи, цветов липы мелколистной и корней солодки в виде водного раствора 7-8% концентрации в дозе 2,5-3,0 мл/кг массы животного в течение 10-15 суток с интервалом в 24 ч.