Способ гистологического исследования поверхности ожоговых ран
Владельцы патента RU 2317544:
Государственное учреждение Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт скорой помощи им. И.И. Джанелидзе (RU)
Изобретение относится к медицине, в частности к экспресс-диагностике раневой инфекции у тяжелообожженных пострадавших. Для осуществления способа исследуют биопсийный материал раневой поверхности с использованием фиксирующего раствора, состоящего из ледяной уксусной кислоты, 40% формалина, этилового спирта 96° в соотношении 1:2:17 и концентрацией этилового спирта от 50° до абсолютного для обезвоживания. Способ позволяет в короткие сроки определить степень микробного обсеменения и глубину инвазии раневой поверхности с обожженных участков кожи, выявить группы риска среди тяжелообожженных, и на основе этого оптимизировать лечебную тактику.
Изобретение относится к медицине, в частности к экспресс-диагностике раневой инфекции, развивающейся у пострадавших с тяжелым термическим поражением в первые 14 суток после травмы, и может быть использовано в хирургии, анестезиологии и реаниматологии.
Известны способы диагностики раневой инфекции на основании клинических данных, количественных и качественных бактериологических исследований раневого отделяемого и гистологического исследования биоптатов раневой поверхности. Недостатком этих способов являются значительные временные затраты (до нескольких суток), что затрудняет своевременное прогнозирование развития осложнений, кроме того, бактериологический метод исследования не позволяет определить глубину микробной инвазии.
Ближайшим по технической сущности к заявляемому является способ стандартного гистологического исследования биоптатов пораженных участков кожных покровов, который заключается в фиксации биоптата, обезвоживании в спиртах и окраске гистологических препаратов.
Недостатком гистологического исследования, выбранного в качестве прототипа, является длительность приготовления гистологических препаратов, так как парафиновая заливка биоптата кожи по технологии требует не менее 3-4 суток. Имеющиеся в литературе методы быстрой парафиновой заливки биоптатов позволяет сократить срок исследования до 48 ч. Таким образом, окончательный результат гистологического исследования биоптата можно получить только на 3-5 сутки. Такое длительное проведение исследования не позволяет своевременно выявить степень инвазии раневой поверхности микроорганизмами, скорректировать дозировку и препарат для антибактериальной терапии, а в целом снизить риск развития генерализации инфекции.
Задачей данного изобретения является сокращение длительности исследования.
Согласно изобретению, поставленная задача решается тем, что в способе гистологического исследования поверхности ожоговых ран, заключающемся в фиксации биоптата, обезвоживании в спиртах и окраске гистологических препаратов, в качестве фиксирующего раствора используют ледяную уксусную кислоту, 40% формалин, этиловый спирт 96° в соотношении 1:2:17, а для обезвоживания используют этиловый спирт в восходящих концентрациях от 50° до абсолютного.
Применение в качестве фиксирующего раствора ледяной уксусной кислоты, 40% формалина, этилового спирта 96° в соотношении 1:2:17 позволяет сократить время фиксации биоптата. Данный состав способствует быстрому проникновению фиксирующей жидкости в ткани за счет усиления свойств формалина присутствующими в фиксирующем растворе уксусной кислоты и этилового спирта.
Применение спиртов в концентрации от 50° до абсолютного позволяет сократить время обезвоживания биоптата. Предложенные концентрации спирта позволяют постепенно обезвоживать материал, а время выдержки в спиртах (по 10 минут) являются оптимальными для сохранения структуры данного типа ткани.
По данным патентной и научно-технической литературы, применение вышеописанных фиксирующих растворов и спиртов для обезвоживания в диагностике ожеговых ран неизвестно.
Технологическая схема экспресс-метода
| №№ | Наименование проводимых операции | Время в мин |
| I | проводка | |
| 1 | этанол 50° | 10 |
| 2 | этанол 85° | 10 |
| 3 | этанол 95° | 10 |
| 4 | абсолютный этиловый спирт | 10 |
| 5 | абсолютный этиловый спирт | 10 |
| 6 | хлороформ I | 5 |
| 7 | хлороформ II | 5 |
| 8 | хлороформ + парафин в соотношении 1:1 | 5 мин в термостате 37-38°С |
| 9 | парафин I | 10 мин в термостате 66-67°С |
| 10 | парафин II | 10 мин в термостате 66-67°С |
| II | заливка в парафин | |
| III | Приготовление парафиновых срезов толщиной 4-5 мк | |
| IV | Окраска срезов: гематоксилин-эозин, азур-эозин | |
| V | Заключение срезов в полистерол | |
| VI | Гистологическое заключение |
Способ применяется следующим образом. Производится забор биоптата стерильными инструментами до жизнеспособных кровоточащих тканей с разных участков раневой поверхности. Биоптат представляет собой полнослойный фрагмент дермы или струпа размерами 5×5 мм, включающий в случаях наиболее глубокого поражения подкожно-жировую клетчатку. Далее биоптат погружается в фиксирующий раствор. Состав фиксирующего раствора: спирт 96° - 425 мл, формалин - 50 мл, ледяная уксусная кислота - 25 мл. Время фиксации - не менее 2 часов.
Забор биоптатов производится во время перевязок в течение первых 10-12 дней с момента поступления больного в стационар. Для полноценного анализа необходим забор двух биоптатов раневой поверхности.
Примеры:
1. Больной Р. 32 лет, ист. болезни №11261 поступил в ожоговую реанимацию 20.03.06 с диагнозом: ожог горячей водой 55%(45%) / II-IIIa-IIIб ст. туловища, промежности, верхних и нижних конечностей. Шок III ст.
При исследовании биоптата раневой поверхности предлагаемым способом, взятого на 6-е сутки от момента поступления в стационар выявлена массивная инвазия микроорганизмов вглубь ожогового струпа -
стадия по классификации Pruitt IБ. Данные гистологического исследования подтверждены бактериологически (в биоптате обнаружена споровая аэробная палочка со среды накопления).
2. Больной В., 56 лет, ист. болезни №1943, поступил в отделение реанимации с диагнозом: ожог пламенем 32%(30%) / IIIa-IIIб-IV ст. головы, шеи, туловища, левой верхней конечности. Ингаляционная травма III ст. Шок III ст.
В биопсийном материале, исследованным вышеописанным способом, взятом на 5-е сутки после травмы выявлена массивная микробная инвазия в частично сохраненные волосяные фолликулы - стадия IC. При бактериологическом исследовании материала на 7-е сутки после травмы получен обильный рост бактерий рода Corynebacterium, Pseudomonas aeruginosae.
3. Больной Ж., 24 лет, ист. болезни №2551 поступил в отделение реанимации с диагнозом: ожог пламенем 32%(15%) / IIIa-IIIб ст. туловища, верхних конечностей. Шок II ст. При гистологическом исследовании биоптата раневой поверхности предлагаемым способом выявлены микробные колонии в умеренном количестве на поверхности струпа. При бактериологическом посеве биоптата получен рост единичных колоний только с помощью среды обогащения.
Преимуществами данного метода являются оперативное гистологическое заключение и выявление групп риска среди тяжелообожженных на ранних сроках лечения. Предлагаемый способ обеспечивает экспресс-диагностику инвазивных форм раневой инфекции, позволяя провести гистологическое исследование за 7 часов и оптимизировать лечебную тактику. Полученные в процессе гистологического исследования данные подтверждены результатами бактериологического исследования. Способ апробирован на 42 пострадавших с тяжелой термической травмой.
Способ гистологического исследования поверхности ожоговых ран, заключающийся в фиксации биоптата, обезвоживании в спиртах и окраске гистологических препаратов, отличающийся тем, что в качестве фиксирующего раствора используют ледяную уксусную кислоту, 40%-ный формалин и этиловый спирт 96° в соотношении 1:2:17, а для обезвоживания используют этиловый спирт в восходящих концентрациях от 50° до абсолютного.
