Способ прогнозирования частой заболеваемости у детей дошкольного возраста с лимфоаденопатией

Изобретение относится к области медицины, а именно к педиатрии, и может быть использовано для прогнозирования частой заболеваемости детей дошкольного возраста, больных лимфоаденопатией. Сущность способа: в периферической венозной крови определяют соотношение содержания СД45RА+/СД45RО+ лимфоцитов. При значении, равном или большем 2,5, прогнозируют частые ОРВИ с точность 82,6%. Использование способа позволяет повысить точность прогнозирования частой заболеваемости ОРВИ детей дошкольного возраста с лимфоаденопатией, а также дает возможность проведения ранней профилактики по предупреждению частых заболеваний ОРВИ. 1 табл.

 

Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, и может быть использовано для прогнозирования частой заболеваемости ОРВИ у детей дошкольного возраста (Дети дошкольного возраста - дети 3 - 7 лет. // Кучма В.Р. Руководство по гигиене и охране здоровья школьников/ В.Р.Кучма, Г.Н.Сердюковская, А.К.Демин. - М.: Российская ассоциация общественного здоровья, 2000. - С.18) с лимфоаденопатией.

Актуальность разработки способа определяется высокой частотой ОРВИ у детей, среди которых на долю часто болеющих детей (ЧБД) приходится 67,7-75% (1).

По данным различных авторов, ЧБД составляют в общей популяции детского населения в среднем 14-40% (2).

Лимфоаденопатии часто сопровождаются и осложняются ОРВИ. Это определяет актуальность проблемы и необходимость в ранние сроки выделить группу детей с высоким риском частых ОРВИ при лимфоаденопатии для своевременного выполнения мероприятий, направленных на предотвращение заболеваемости.

1. Известен способ прогнозирования частой инфекционной заболеваемости путем определения лизоцима в слюне у детей старшего школьного возраста: в первые сутки приезда в санаторий определяют количественный уровень лизоцима в слюне и при повышении его более 20 условных единиц прогнозируют обострение ЛОР-патологии (Патент №2038601. Способ прогнозирования острой заболеваемости носоглоточных путей у детей. /Л.А.Жданова, В.А.Поберская. (Россия. Республика Крым). // БИ - 1995. - №18. - С.209).

Недостатки способа:

- показатель изменения лизоцимной активности слюны относится к неспецифическим факторам местной защиты, состояние которой зависит от многих факторов;

- обострение ЛОР-патологии прогнозируется у детей старшего школьного возраста, что менее актуально по сравнению с младшим возрастом;

- исследование проводится в условиях санатория, что недоступно всем детям.

2. Известен способ прогнозирования заболеваемости респираторно-вирусными инфекциями детей первого года жизни, отличающийся тем, что в пуповинной крови новорожденного определяют абсолютное содержание лимфоцитов и Т-лимфоцитов и при уровне лимфоцитов менее 1,5×10⁹/л, а Т-лимфоцитов - менее 0,4×10⁹/л прогнозируют повышенную заболеваемость ребенка (Патент №2097763, Способ прогнозирования заболеваемости острыми респираторно-вирусными инфекциями детей первого года жизни. / Г.Ф.Железникова, В.В.Иванова, Г.П.Курбатова, З.У.Гнилевская. (Россия). // Изобретения. - 1997. - №33. - С.454).

Недостатки способа:

- лимфоциты и Т-лимфоциты определяются методом розеткообразования, при этом используются нестандартизованные реактивы;

- не указывается максимальный срок, на который рассчитан прогноз;

- используется пуповинная кровь, а значит, исследование выполняется на момент рождения и недоступно для других возрастных групп;

3. Известен способ прогнозирования заболеваемости респираторными инфекциями у детей раннего возраста. Сущность изобретения: у ребенка, посещающего детское дошкольное учреждение, на 10-й день после начала посещения в пробе мочи проводят цветную осадочную реакцию по Кимбаровскому, а на 5-й день проводят кардиоинтервалографию, по результатам которых рассчитывают величину моды и при значении первого показателя выше 52,4 усл.ед., а второго - ниже 0,45 с прогнозируют у ребенка частую заболеваемость ОРВИ в течение первого года посещения дошкольного учреждения (Патент №2018832. Способ прогнозирования заболеваемости респираторными инфекциями у детей раннего возраста. / О.И.Пузырев, А.К.Агеев. (Россия). // Изобретения. - 1994. - №16. - С.120).

Недостатки способа:

- исследование относится только к детям, посещающим детское дошкольное учреждение;

- прогноз распространяется только на один год посещения детского дошкольного учреждения;

- цветная осадочная реакция Кимбаровского является неспецифической, выпадает положительной при самых разнообразных патологических процессах, применяется в клинике внутренних болезней для оценки тяжести патологического процесса и эффективности лечения;

- метод кардиоинтервалографии является неспецифическим и применяется для оценки функциональных нарушений частоты сердечного ритма;

- используются 2 неспецифических и разнонаправленных метода.

4. Наиболее близким по техническому решению является способ прогнозирования частой заболеваемости у детей раннего возраста с минимальной мозговой дисфункцией.

Сущность способа состоит в том, что в периферической крови ребенка с минимальной мозговой дисфункцией после 1 года определяют содержание СД72+лимфоцитов и при повышении их более 20,31% прогнозируют частые ОРЗ в возрасте ребенка до трех лет (Патент №2142639. Способ прогнозирования частой заболеваемости у детей раннего возраста с минимальной мозговой дисфункцией. / О.М.Филькина, О.Ю.Кочерева, Т.Г.Шанина, М.Д.Васильев, Н.С.Чиненова, Н.Ю.Сотникова, А.В.Кудряшова. (Россия). // Изобретения. - 1999. - №34. - С.319).

Указанный способ выбран нами в качестве прототипа.

Недостатки способа:

- прогноз ограничивается возрастом детей до 3-х лет;

- прогноз относится к детям с наличием минимальной мозговой дисфункции;

- СД72 относится к маркерам В-лимфоцитов, а при ОРВИ принимают участие и Т-лимфоциты;

- точность способа - 78,5%.

Перечисленные недостатки могут быть устранены в заявляемом способе.

Заявленный технический результат достигается путем определения содержания в периферической венозной крови ребенка дошкольного возврата методом проточной цитофлюорометрии СД45RА+ и СД45RО+ лимфоцитов и при соотношении СД45RА+/СД45RО+, равном 2,5 или более, прогнозируют частые ОРВИ с точностью 82,6%.

Новизна заявляемого способа заключается в том, что впервые предлагается прогнозировать частую заболеваемость ОРВИ у детей дошкольного возраста с лимфоаденопатией по соотношению содержания СД45RА+ к СД45RО+ лимфоцитов. Оценка соотношения этих клеток ранее не использовалась. Установлены нормативные параметры этого показателя. Отдельно каждый показатель использовался для оценки содержания в периферической венозной крови «наивных», т.е. не контактировавших ранее с антигеном, лимфоцитов и клеток памяти (3). В периферической венозной крови определение содержания СД45RО+ лимфоцитов применялось для диагностики наружного генитального эндометриоза (4), а СД45RА+ лимфоцитов для диагностики онкологических заболеваний (5). В перитонеальной жидкости определение содержания СД45RА+ и СД45RО+ лимфоцитов использовалось для диагностики наружного генитального эндометриоза (6). Соотношение этих клеток отражает развитие иммунного ответа, что имеет непосредственное отношение к возникновению частой заболеваемости ОРВИ.

Отличительные признаки способа: установлен новый прогностический параметр соотношения содержания СД45RА+ к СД45RО+ лимфоцитов, при значении которого, равном 2,5 или более, прогнозируют частую заболеваемость ОРВИ у детей дошкольного возраста с лимфоаденопатией.

Способ осуществляется следующим образом:

1) Производят забор периферической венозной крови в пробирку в количестве 1,0 мл с гепарином.

2) Выделение лимфоцитов из 1 мл периферической венозной крови осуществляют стандартным методом - центрифугированием в градиенте плотности фиколл-верографин при 1500 об/мин в течение 30 минут.

3) В пробирку, содержащую 100 мкл лимфоцитов в концентрации 1×10⁶ кл/мл, добавляют 20 мкл моноклональных анти-СД45RА+ антител, меченных FITC или РЕ, в другую пробирку добавляют 20 мкл моноклональных анти-СД45RО+ антител, меченных FITC или РЕ. Клетки инкубируют с моноклональными антителами в течение 30 минут при комнатной температуре в темноте, после чего отмывают 1 раз 1 мл физиологического раствора центрифугированием при 1500 об/мин в течение 2 минут. Клетки в пробирке ресуспензируют в 500 мкл физиологического раствора.

4) Учет реакции проводят на проточном цитометре, определяя в лимфоцитарном гейте процентное (относительное) содержание СД45RА+ и СД45RО+ лимфоцитов.

5) Рассчитывают соотношение СД45RА+/СД45RО+ лимфоцитов, при значении которого, равном 2,5 или более, прогнозируют частые ОРВИ у детей с точностью 82,6%.

Сущность заявляемого способа поясняется следующими примерами.

Пример 1. Ребенок Ю. 4 года. После перенесенного ОРВИ в мае 2003 года обследовался с диагнозом «Лимфоаденопатия вирусно-бактериальной этиологии». Общее состояние средней тяжести. Обнаружена генерализованная лимфоаденопатия с наличием множественных лимфоузлов переднешейной и заднешейной групп 6 степени увеличения, а также единичных аксиллярных и паховых лимфоузлов 4 степени увеличения. Все лимфоузлы безболезненны, подвижны, эластичны, не спаяны с окружающими тканями. В общем анализе крови лимфоцитов - 8,4×10⁹/л, лимфомононуклеаров - 70%. В анализе периферической венозной крови соотношение СД45RА+/СД45RО+лимфоцитов=2,6. Прогнозировалась частая заболеваемость. При последующем наблюдении в 2004 году болел 6 раз ОРВИ, в 2005 году - 8 раз. Прогноз подтвердился.

Пример 2. Ребенок С., 3 года. В течение 2-х месяцев до обследования отмечались температурные «свечи» до 38-39° 2 раза в месяц. В январе 2004 года обследовался с диагнозом «Лимфоаденопатия вирусно-бактериальной этиологии. Субфебрилитет неясной этиологии. Постинфекционная нейтропения». Обнаружена генерализованная лимфоаденопатия с наличием множественных лимфоузлов переднешейной, заднешейной и аксиллярной групп 4 степени увеличения. Лимфоузлы безболезненны, эластичные, мягкие, подвижные. В общем анализе крови лейкоцитов - 3,1×10⁹/л, нейтрофилов - 26%, лимфомононуклеаров - 37%. В анализе периферической крови соотношение СД45RA+/СД45RO+клеток=2,5. Прогнозировалась частая заболеваемость. При последующем наблюдении в 2004 году болел 6 раз ОРВИ, в 2005 году - 7 раз. Прогноз подтвердился.

Пример 3. Ребенок С., 5 лет. Увеличение лимфоузлов обнаружено родителями случайно. Обследовался в июле 2003 года с диагнозом «Лимфоаденопатия вирусно-бактериальной этиологии». Обнаружены множественные лимфоузлы переднешейной группы 5 степени увеличения - безболезненные, эластичные, подвижные, мягкие. В общем анализе крови лейкоцитов - 6,7×10⁹/л, лимфомононуклеаров - 21%. В анализе периферической венозной крови соотношение СД45RA+/СД45RO+=1,3. Частая заболеваемость не прогнозировалась. При дальнейшем наблюдении в 2004 и 2005 годах перенесла ОРВИ по 2 раза в год. Прогноз подтвердился.

Заявленным способом обследовано 23 ребенка. Результаты исследования приведены в таблице.

Таблица
Показатель	Количество обследованных
Всего обследовано женщин	23
Истинно-положительный результат	9
Ложно-положительный результат	2
Истинно-отрицательный результат	10
Ложно-отрицательный результат	2
Итого:
точность заявляемого способа - 82,6%,
чувствительность заявляемого способа - 80,0%,
специфичность заявляемого способа - 83,3%.

Преимущества способа:

1) Высокая точность - 82,6%.

2) Возможность прогнозировать частую заболеваемость у детей с лимфоаденопатией дошкольного возраста.

3) Способ специфичен и дает более точные результаты, чем способ-прототип.

4) Способ прост в исполнении и не требует больших временных затрат.

5) Позволяет провести профилактические мероприятия по предупреждению заболеваемости детей ОРВИ.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Самыгина Г.А. Часто болеющие дети: проблемы патогенеза, диагностики и терапии // Consilium medicum. - Приложение. «Педиатрия». - 2004. - №2. - С.3.

2. Альбицкий В.Ю., Баранов А.А. Часто болеющие дети: клинико-социальные аспекты. Пути оздоровления. - Саратов, 1986. - 183 с.

3. Ярилин А.А. Основы иммунологии. - М.: Медицина, 1999. - 607 с.

4. Патент №2265223. Способ диагностики наружного генитального эндометриоза. / Ю.С.Анциферова, Н.Ю.Сотникова, Л.В.Посисеева, И.Б.Брагин, А.Л.Шор (Россия) // Изобретения. - 2005. - №33.

5. Калагидзе З.Г., Славина Е.Г., Черткова А.И. Регуляторные Т-клетки и опухолевый иммунитет // Медицинская иммунология. - 2005. - Т.7, №2-3. - С.198-199.

6. Изменения фенотипического профиля лимфоцитов перитонеальной жидкости женщин с наружным эндометриозом в зависимости от наличия у них бесплодия / Н.Ю.Сотникова, Д.Н.Шишков, Л.В.Посисеева, Ю.С.Анциферова // Медицинская иммунология. - 2005. - Т.7, №2-3. - С.191-192.

Способ прогнозирования частой заболеваемости у детей путем иммунологического исследования периферической венозной крови, отличающийся тем, что у детей дошкольного возраста с лимфоаденопатией определяют соотношение содержания СД45RА+/СД45RО+ лимфоцитов, и при его значении, равном 2,5 или более, прогнозируют частую заболеваемость ОРВИ.