Комбинированная терапия для лечения иммуновоспалительных заболеваний

Настоящее изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и касается композиции для лечения пациента, имеющего диагноз или риск развития иммуновоспалительного заболевания. Композиции по настоящему изобретению используются как средство лечения или профилактики иммуновоспалительного заболевания и включают нестероидный иммунофилинзависимый иммунодепрессант (NsIDI) и усилитель NsIDI (NsIDIE), выбранный из селективного ингибитора обратного захвата серотонина (SSRI), трициклического антидепрессанта (ТСА), феноксифенола, антигистаминного агента, фенотиазина или агониста мю-опиоидных рецепторов. Использование данного изобретения позволяет повысить эффективность подавления секреции провоспалительных цитокинов, тем самым повысить эффективность лечения иммуновоспалительного заболевания. 5 н. и 34 з.п. ф-лы, 26 табл.

 

Уровень техники

Изобретение относится к лечению иммуновоспалительных заболеваний.

Иммуновоспалительные заболевания характеризуются неправильной активацией иммунной защиты организма. Вместо борьбы с внедрившимися в организм инфекционными агентами иммунный ответ направляется на собственные ткани организма или трансплантированные ткани и повреждает их. При различных заболеваниях иммунная система нацеливается на различные ткани. Например, при рассеянном склерозе иммунный ответ направлен против нейрональной ткани, в то время как при болезни Крона мишенью является желудочно-кишечный тракт. Иммуновоспалительные заболевания поражают миллионы людей и включают такие состояния, как астма, аллергические внутриглазные воспалительные заболевания, артрит, атопический дерматит, атопическая экзема, диабет, гемолитическая анемия, воспалительные дерматозы, воспалительное заболевание кишечника или желудочно-кишечные заболевания (например, болезнь Крона и язвенный колит), рассеянный склероз, астенический бульбарный паралич, зуд/воспаление, псориаз, ревматоидный артрит, цирроз и системная красная волчанка.

Современные схемы лечения иммуновоспалительных заболеваний обычно опираются на иммунодепрессанты. Эффективность указанных агентов может варьировать, а их использование часто сопровождается неблагоприятными побочными эффектами. Таким образом, существует потребность в улучшенных терапевтических агентах и способах лечения иммуновоспалительных заболеваний.

Сущность изобретения

Заявители установили, что комбинация нестероидного иммунофилинзависимого иммунодепрессанта (NsIDI) (например, циклоспорина А) и усилителя нестероидного иммунофилинзависимого иммунодепрессанта (NsIDIE) (например, селективного ингибитора обратного захвата серотонина (SSRI), трициклического антидепрессанта, феноксифенола, антигистаминного агента, фенотиазина или агониста мю-опиоидных рецепторов) является более эффективной для подавления секреции провоспалительных цитокинов, чем каждый из указанных агентов по отдельности. Таким образом, комбинации NsIDI и NsIDIE, а также их структурных или функциональных аналогов можно использовать в противовоспалительной комбинации по настоящему изобретению.

Соединения, пригодные для настоящего изобретения, включают соединения, описанные в настоящем документе, в любых своих фармацевтически приемлемых формах, включая их изомеры, такие как диастереомеры и энантиомеры, соли, эфиры, сольваты и полиморфы, а также рацемические смеси и чистые изомеры соединений, описанных в настоящем документе.

В одном аспекте изобретение относится к композиции, содержащей нестероидный иммунофилинзависимый иммунодепрессант (NsIDI) и усилитель нестероидного иммунофилинзависимого иммунодепрессанта (NsIDIE) в количествах, которые совместно являются достаточными in vivo для уменьшения секреции или выработки провоспалительных цитокинов или для лечения иммуновоспалительного заболевания.

Необязательно, композиция дополнительно содержит нестероидное противовоспалительное лекарственное средство (NSAID), ингибитор СОХ-2, биопрепарат, модифицирующие заболевание противоревматические лекарственные средства (DMARD), ксантин, антихолинергическое соединение, агонист бета-рецептора, бронходилятатор, нестероидный ингибитор кальциневрина, аналог витамина D, псорален, ретиноид или 5-аминосалициловую кислоту. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения композицию изготавливают для местного или системного введения.

Настоящее изобретение относится также к способу уменьшения секреции или выработки провоспалительных цитокинов у пациента; указанный способ включает введение пациенту композиции, содержащей нестероидный иммунофилинзависимый иммунодепрессант (NsIDI) и усилитель нестероидного иммунофилинзависимого иммунодепрессанта (NsIDIE), одновременно или в течение 14 дней для каждого, в количествах, достаточных in vivo для уменьшения секреции или выработки провоспалительных цитокинов у пациента.

Настоящее изобретение также относится к способу уменьшения секреции или выработки провоспалительных цитокинов у пациента. Способ включает введение пациенту NsIDI и NsIDIE одновременно или в течение 14 дней для каждого в количествах, достаточных in vivo для уменьшения секреции или выработки провоспалительных цитокинов у пациента.

Помимо этого, изобретение относится к способу лечения пациента с диагнозом или в группе риска развития иммуновоспалительного заболевания. Способ включает введение пациенту NsIDI и NsIDIE одновременно или в течение 14 дней для каждого в количествах, достаточных для лечения пациента.

Изобретение относится также к способу уменьшения секреции или выработки провоспалительных цитокинов в клетке (например, в клетке млекопитающего in vivo). Способ включает контактирование клетки с NsIDI и NsIDIE одновременно или в течение 14 дней для каждого в количествах, достаточных для уменьшения секреции или выработки провоспалительных цитокинов в клетке.

Изобретение относится также к набору, содержащему композицию, содержащую NsIDI и NsIDIE, и инструкции по введению композиции пациенту с диагнозом или с риском развития иммуновоспалительного заболевания.

Изобретение относится также к набору, содержащему NsIDI и NsIDIE, и инструкции по введению NsIDI и NsIDIE пациенту с диагнозом или с риском развития иммуновоспалительного заболевания.

Изобретение относится также к набору, содержащему NsIDI, и инструкции по введению NsIDI и NsIDIE пациенту с диагнозом или с риском развития иммуновоспалительного заболевания.

Изобретение относится также к набору, содержащему NsIDIE, и инструкции по введению NsIDIE и NsIDI пациенту с диагнозом или с риском развития иммуновоспалительного заболевания.

Изобретение относится также к способу идентификации комбинаций соединений, пригодных для подавления секреции провоспалительных цитокинов у пациента, который нуждается в указанном лечении. Способ включает контактирование клетки in vitro с NsIDI и соединением-кандидатом и (b) определение наличия или отсутствия уменьшения соединением-кандидатом уровней цитокинов в клетках крови со стимулированной секрецией цитокинов по сравнению с клетками, контактировавшими с NsIDI, но не контактировавшими с соединением-кандидатом, или с клетками, контактировавшими с соединением-кандидатом, но не с NsIDI; при этом снижением уровней цитокинов идентифицируют комбинацию как комбинацию, которая является пригодной для лечения пациента, который нуждается в указанном лечении.

В предпочтительных вариантах осуществления любого из предыдущих аспектов NsIDI представляет собой, например, ингибитор кальциневрина, такой как циклоспорин, такролимус, аскомицин, пимекролимус или ISAtx247, или FK506-связывающий белок, такой как рапамицин или эверолимус.

В предпочтительных вариантах осуществления любого из предыдущих аспектов усилитель NsIDI (NsIDIE) представляет собой, например, селективный ингибитор обратного захвата серотонина (SSRI), трициклический антидепрессант (ТСА), феноксифенол, антигистаминный агент, фенотиазин или агонист мю-опиоидных рецепторов.

Под «нестероидным иммунофилинзависимым иммунодепрессантом» или «NsIDI» подразумевается любой нестероидный агент, который уменьшает выработку или секрецию провоспалительных цитокинов, связывает иммунофилин или вызывает понижающую регуляцию провоспалительной реакции. NsIDI включают ингибиторы кальциневрина, такие как циклоспорин, такролимус, аскомицин, пимекролимус, а также другие агенты (пептиды, пептидные фрагменты, химически модифицированные пептиды или пептидные миметики), которые ингибируют фосфатазную активность кальциневрина. NsIDI также включают рапамицин (сиролимус) и эверолимус, которые связываются с FK506-связывающим белком, FKBP-12 и блокируют индуцированную антигеном пролиферацию белых кровяных клеток и секрецию цитокинов.

Под «усилителем нестероидного иммунофилинзависимого иммунодепрессанта» или «NsIDIE» подразумевается любое соединение, которое повышает эффективность нестероидного иммунофилинзависимого иммунодепрессанта. NsIDIE включают селективные ингибиторы обратного захвата серотонина, трициклические антидепрессанты, феноксифенолы (например, триклозан), антигистаминные агенты, фенотиазины и агонисты мю-опиоидных рецепторов.

Под «антигистаминным агентом» подразумевается соединение, которое блокирует действие гистамина. Классы антигистаминных агентов включают, без ограничения, этаноламины, этилендиамин, фенотиазин, алкиламины, пиперазины и пиперидины.

Под «селективным ингибитором обратного захвата серотонина» или «SSRI» подразумевается любой член класса соединений, которые (i) ингибируют захват серотонина нейронами центральной нервной системы, (ii) имеют коэффициент ингибирования (Ki) 10 нМ или менее и (iii) селективность в отношении серотонина по сравнению с норэпинефрином, т.е. соотношение Ki(норэпинефрин) и Ki(серотонин) составляет более 100. Обычно SSRI вводят в дозах более 100 мг в день, когда их используют в качестве антидепрессантов. Примеры SSRI для применения по настоящему изобретению описаны в настоящем документе.

Под «трициклическим антидепрессантом» или «ТСА» подразумевается соединение, имеющее одну из следующих формул (I), (II), (III) или (IV):

где каждый Х независимо представляет собой H, Cl, F, Br, I, CH₃, CF₃, OH, OCH₃, CH₂CH₃ или OCH₂CH₃; Y представляет собой CH₂, O, NH, S(O)_0-2, (CH₂)₃, (CH)₂, CH₂O, CH₂NH, CHN или CH₂S; Z представляет собой С или S; А представляет собой разветвленную или неразветвленную, насыщенную или мононенасыщенную углеводородную цепь, имеющую от 3 до 6 атомов углерода включительно; каждый В представляет собой, независимо, H, Cl, F, Br, I, CX₃, CH₂CH₃, OCX₃ или OCX₂CX₃; а D представляет собой CH₂, O, NH, S(O)_0-2.

В предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения каждый Х независимо представляет собой H, Cl или F; Y представляет собой (CH₂)₂; Z представляет собой С; А представляет собой (CH₂)₃; и каждый В представляет собой, независимо, H, Cl или F.

Примерами трициклических антидепрессантов являются мапротилин, амоксапин, 8-гидроксиамоксапин, 7-гидроксиамоксапин, локсапин, локсапина сукцинат, локсапина гидрохлорид, 8-гидроксилоксапин, амитриптилин, кломипрамин, доксепин, имипрамин, тримипрамин, дезипрамин, нортриптилин и протриптилин.

Под «кортикостероидом» подразумевается любое натуральное или синтетическое соединение, характеризующееся гидрированной циклопентанопергидрофенантреновой кольцевой системой и обладающее иммунодепрессантной и/или противовоспалительной активностью. Натуральные кортикостероиды обычно вырабатываются корой надпочечников. Синтетические кортикостероиды могут быть галогенированными. Примеры кортикостероидов приводятся в настоящем документе.

Под «низкомолекулярным иммуномодулятором» подразумевается нестероидное, не являющееся NsIDI соединение, которое уменьшает выработку или секрецию провоспалительных цитокинов, вызывает понижающую регуляцию провоспалительной реакции или как-либо иначе модулирует иммунную систему независимо от иммунофилина. Примерами низкомолекулярных иммуномодуляторов являются ингибиторы р38 МАР киназы, такие как VX 702 (Vertex Pharmaceuticals), SCIO 469 (Scios), дорамапимод (Boehringer Ingelheim), RO 30201195 (Roche) и SCIO 323 (Scios), ингибиторы ТАСЕ, такие как DPC 333 (Bristol Myers Squibb), ингибиторы ICE, такие как праналказан (Vertex Pharmaceuticals) и ингибиторы IMPDH, такие как микофенолят (Roche) и меримеподиб (Vertex Pharmaceuticals).

Под «низкой дозой» подразумевается доза, которая по меньшей мере на 5% меньше (например, по меньшей мере на 10%, 20%, 50%, 80%, 90% или даже 95%) самой низкой стандартной рекомендованной дозы конкретного соединения, изготовленного для данного пути введения, для лечения любого заболевания или состояния человека. Например, низкая доза кортикостероида, изготовленного для введения путем ингаляции, будет отличаться от низкой дозы кортикостероида, изготовленного для перорального введения.

Под «высокой дозой» подразумевается доза, которая по меньшей мере на 5% больше (например, по меньшей мере на 10%, 20%, 50%, 100%, 200% или даже 300%) самой высокой стандартной рекомендованной дозы конкретного соединения, изготовленного для данного пути введения, для лечения любого заболевания или состояния человека.

Под «умеренной дозой» подразумевается доза между низкой дозой и высокой дозой.

Под «лечением» подразумевается введение или назначение фармацевтической композиции для лечения или профилактики иммуновоспалительного заболевания.

Под «пациентом» подразумевается любое животное (например, человек). Другие животные, которых можно лечить с использованием способов, композиций и наборов по настоящему изобретению, включают лошадей, собак, кошек, свиней, коз, кроликов, хомячков, обезьян, морских свинок, крыс, мышей, ящериц, змей, овец, крупный рогатый скот, рыбу и птиц. В одном варианте осуществления настоящего изобретения пациент, подвергаемый лечению с использованием SSRI или ТСА, описанному в настоящем документе, не имеет клинической депрессии, тревожности или панического расстройства, обсессивно-компульсивного расстройства, алкоголизма, расстройства питания, расстройства, сопровождающегося дефицитом внимания, пограничного расстройства личности, расстройства сна, головной боли, предменструального синдрома, нарушений сердечного ритма, шизофрении, синдрома Туретта или фобий.

Под «достаточным количеством» подразумевается количество соединения в способах, композициях и наборах по настоящему изобретению, которое требуется для лечения или профилактики иммуновоспалительного заболевания клинически подходящим способом. Достаточное количество активного соединения, используемое в практике настоящего изобретения для терапевтического лечения состояний, вызванных или вносящих свой вклад в иммуновоспалительное заболевание, варьирует в зависимости от способа введения, возраста, массы тела и общего состояния здоровья пациента. В конечном итоге вопрос о подходящем количестве и схеме дозирования решает лечащий врач.

Под «более эффективным» подразумевается, что способ, композиция или набор демонстрируют более высокую эффективность, являются менее токсичными, более безопасными, более удобными, легче переносятся или менее дорогостоящи или обеспечивают более хорошие результаты лечения, чем другой способ, композиция или набор, с которым производится сравнение. Эффективность может оценить специалист с использованием любого стандартного способа, который подходит в конкретных условиях.

Термин «иммуновоспалительное заболевание» охватывает ряд состояний, включая аутоиммунные заболевания, пролиферативные заболевания кожи и воспалительные дерматозы. Иммуновоспалительные заболевания приводят к разрушению здоровой ткани воспалительным процессом, дисрегуляции иммунной системы и нежелательной пролиферации клеток. Примерами иммуновоспалительных заболеваний являются обыкновенные угри, острый респираторный дистресс-синдром, болезнь Аддисона, аллергический ринит, аллергические внутриглазные воспалительные заболевания, ANCA-связанный васкулит малых сосудов, анкилозирующий спондилит, артрит, астма, атеросклероз, атопический дерматит, аутоиммунный гепатит, аутоиммунная гемолитическая анемия, аутоиммунный гепатит, болезнь Бехчета, паралич Белла, буллезный пемфигоид, церебральная ишемия, хроническое обструктивное заболевание легких, цирроз, синдром Когана, контактный дерматит, ХОЗЛ, болезнь Крона, синдром Кушинга, дерматомиозит, сахарный диабет, дискоидная красная волчанка, эозинофильный фасциит, узловатая эритема, эксфолиативный дерматит, фибромиалгия, очаговый гломерулосклероз, очаговый сегментарный гломерулосклероз, гигантоклеточный артериит, подагра, подагрический артрит, реакция «трансплантат против хозяина», экзема рук, пурпура Геноха-Шенлейна, герпес беременных, гирсутизм, идиопатический цератосклерит, идиопатический пневмофиброз, идиопатическая тромбоцитопеническая пурпура, иммунная тромбоцитопеническая пурпура, воспалительное заболевание кишечника или желудочно-кишечные расстройства, воспалительные дерматозы, плоский лишай, волчаночный нефрит, лимфоматозный трахеобронхит, отек желтого пятна, рассеянный склероз, астенический бульбарный паралич, миозит, неспецифическое фиброзирующее заболевание легких, остеоартрит, панкреатит, пемфигоид беременных, вульгарная пузырчатка, периодонтит, нодозный полиартериит, ревматическая полимиалгия, pruritis scroti, зуд/воспаление, псориаз, псориатический артрит, гистоплазмоз легких, ревматоидный артрит, рецидивирующая полихондрия, розацеа, вызванная саркоидозом, розацеа, вызванная склеродермой, розацеа, вызванная синдромом Свита, розацеа, вызванная системной красной волчанкой, розацеа, вызванная крапивницей, розацеа, вызванная болью, связанной с герпесом зостер, саркоидоз, склеродерма, сегментарный гломерулосклероз, синдром септического шока, тендинит или бурсит плечевого сустава, синдром Шегрена, болезнь Стилла, гибель клеток головного мозга, вызванная инсультом, болезнь Свита, системная красная волчанка, системный склероз, артериит Такаясу, височный артериит, токсический некролиз эпидермиса, отторжение трансплантата и синдромы, связанные с отторжением трансплантата, туберкулез, диабет 1 типа, язвенный колит, увеит, васкулит и грануломатоз Вегенера.

«Некожные воспалительные заболевания» включают, например, ревматоидный артрит, воспалительное заболевание кишечника, астму и хроническое обструктивное заболевание легких.

«Кожные воспалительные заболевания» или «воспалительные дерматозы» включают, например, псориаз, острый фебрильный нейтрофильный дерматоз, экзему (например, астеатотическую экзему, дисгидротическую экзему, везикулярную пальмоплантарную экзему), круговой плазмацеллюлярный баланит, баланопостит, болезнь Бехчета, кольцевидную эритему, пепельный дерматоз, экссудативную многоформную эритему, кольцевидную гранулему, блестящий лишай, плоский лишай, склерозирующий и атрофический лишай, лихеноидный зудящий дерматит, шиповидный лишай, монетовидный дерматит, гангренозную пиодерму, саркоидоз, субкорнеальный пустулезный дерматоз, крапивницу и преходящий акантолитический дерматоз.

Под «пролиферативным заболеванием кожи» подразумевается доброкачественное или злокачественное заболевание, которое характеризуется ускоренным делением клеток в эпидермисе или дерме. Примерами пролиферативных заболеваний кожи являются псориаз, атопический дерматит, неспецифический дерматит, первичный контактный дерматит, аллергический контактный дерматит, базальные и плоскоклеточные карциномы кожи, ламеллярный ихтиоз, эпидермолитический гиперкератоз, предраковый кератоз, угри и себоррейный дерматит.

Специалисту понятно, что конкретное заболевание, расстройство или состояние можно охарактеризовать как пролиферативное заболевание кожи и воспалительный дерматоз. Примером указанного заболевания является псориаз.

Под «замедленным высвобождением» или «контролируемым высвобождением» подразумевается, что терапевтически активный компонент высвобождается из композиции с контролируемой скоростью таким образом, чтобы терапевтически благоприятные уровни компонента в крови (но ниже токсических уровней) поддерживались в течение увеличенного периода времени, например приблизительно от 12 до 24 часов, что делает возможным получение лекарственных форм, которые вводятся каждые 12 или 24 часа.

В общих описаниях соединений по настоящему изобретению количество атомов конкретного типа в заместительной группе обычно приводится в виде пределов, например алкильная группа, содержащая от 1 до 7 атомов углерода, или С_1-7 алкил. Ссылки на указанные пределы предназначены для включения конкретных ссылок на группы, имеющие каждое из целых чисел атомов в указанных пределах. Например, алкильная группа от 1 до 7 атомов углерода включает каждый из С₁, С₂, С₃, С₄, С₅, С₆ и С₇. С_1-7 гетероалкил, например, включает от 1 до 7 атомов углерода, помимо одного или более гетероатомов. Другие количества атомов и другие типы атомов могут быть указаны таким же способом.

Под «ацилом» подразумевается химическая часть формулы R-C(O)-, где R выбран из С_1-7 алкила, С_2-7 алкенила, С_2-7 алкинила, С_2-6 гетероциклила, С_6-12 арила, С_7-14 алкарила, С_3-10 алкгетероциклила или С_1-7 гетероалкила.

Под «алкокси» подразумевается химический заместитель формулы -OR, где R выбран из С_1-7 алкила, С_2-7 алкенила, С_2-7 алкинила, С_2-6 гетероциклила, С_6-12 арила, С_7-14 алкарила, С_3-10 алкгетероциклила или С_1-7 гетероалкила.

Под «арилокси» подразумевается химический заместитель формулы -OR, где R представляет собой С_6-12 арильную группу.

Под «С_6-12 арилом» подразумевается ароматическая группа, имеющая кольцевую систему, составленную из атомов углерода с конъюгированными π-электронами (например, фенил). Арильная группа имеет от 6 до 12 атомов углерода. Арильные группы могут, необязательно, включать моноциклические, бициклические или трициклические кольца, в которых каждое кольцо, желательно, имеет пять или шесть членов. Арильная группа может быть замещенной или незамещенной. Примеры заместителей включают алкил, гидрокси, алкокси, арилокси, сульфгидрил, алкилтио, арилтио, галогенид, фторалкил, карбоксил, гидроксиалкил, карбоксиалкил, амино, аминоалкил, монозамещенный амино, дизамещенный амино и четвертичные аминогруппы.

Под «амидо» подразумевается химический заместитель формулы -NRR', где атом азота является частью амидной связи (например, -C(O)-NRR') и где R и R' каждый независимо выбран из С_1-7 алкила, С_2-7 алкенила, С_2-7 алкинила, С_2-6 гетероциклила, С_6-12 арила, С_7-14 алкарила, С_3-10 алкгетероциклила или С_1-7 гетероалкила, или NRR' образует С_2-6 гетероциклическое кольцо, как определено выше, но содержащее по меньшей мере один атом азота, такое как, среди прочих, пиперидино, морфолино и азабицикло.

Под «галогенидом» подразумевается бром, хлор, йод или фтор.

Термин «фармацевтически приемлемая соль» представляет такие соли, которые, по медицинским меркам, являются пригодными для использования в контакте с тканями человека и низших животных, без чрезмерной токсичности, раздражения, аллергической реакции и т.п., и имеют соразмерное соотношение пользы и риска. Фармацевтически приемлемые соли хорошо известны специалистам. Соли можно изготавливать in situ во время конечного выделения и очистки соединений по настоящему изобретению или отдельно, путем взаимодействия функции свободного основания и подходящей органической кислоты. Репрезентативные примеры кислотно-аддитивных солей включают ацетат, адипат, альгинат, аскорбат, аспартат, бензолсульфонат, бензоат, бисульфат, борат, бутират, камфорат, камферсульфонат, цитрат, циклопентанпропионат, диглюконат, додецилсульфат, этансульфонат, фумарат, глюкогептонат, глицерофосфат, гемисульфат, гептонат, гексаноат, гидробромид, гидрохлорид, гидройодид, 2-гидроксиэтансульфонат, изетионат, лактобионат, лактат, лаурат, лаурилсульфат, малат, малеат, малонат, мезилат, метансульфонат, 2-нафталинсульфонат, никотинат, нитрат, олеат, оксалат, пальмитат, памоат, пектинат, персульфат, 3-фенилпропионат, фосфат, пикрат, пивалат, пропионат, стеарат, сукцинат, сульфат, тартрат, тиоцианат, толуолсульфонат, ундеканоат, соли валерата и т.п. Репрезентативные примеры солей щелочных или щелочно-земельных металлов включают соли натрия, лития, калия, кальция, магния и т.п., а также соли с нетоксичными аммониевыми, четвертичными аммониевыми и аминовыми катионами, включая, без ограничения, аммоний, тетраметиламмоний, тетраэтиламмоний, метиламин, диметиламин, триметиламин, триэтиламин, этиламин и т.п.

Соединения, пригодные для настоящего изобретения, включают соединения, описанные в настоящем документе, в любой из их фармацевтически приемлемых форм, включая изомеры, такие как диастереомеры и энантиомеры, соли, эфиры, амиды, тиоэфиры, сольваты и полиморфы, а также рацемические смеси и чистые изомеры соединений, описанных в настоящем документе. В качестве примера, под «пароксетином» подразумевается свободное основание, а также любая его фармацевтически приемлемая соль (например, пароксетина малеат, пароксетина гидрохлорида полугидрат и пароксетина мезилат).

Другие признаки и преимущества изобретения будут понятны из следующего подробного описания, а также из формулы изобретения.

Подробное описание

Изобретение относится к способам, композициям и наборам для введения эффективного количества нестероидого иммунофилинзависимого иммунодепрессанта (NsIDI), такого как циклоспорин А, и усилителя нестероидного иммунофилинзависимого иммунодепрессанта (NsIDIE), например селективного ингибитора обратного захвата серотонина, трициклического антидепрессанта, феноксифенола, антигистаминного агента, фенотиазина или агониста мю-опиоидных рецепторов.

Изобретение далее описывается более подробно.

Нестероидные иммунофилинзависимые иммунодепрессанты

В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способам, композициям и наборам, включающим NsIDI и NsIDIE, необязательно, с кортикостероидом или другим агентом, описанным в настоящем документе.

У здоровых индивидуумов иммунная система использует клеточные эффекторы, такие как В-клетки и Т-клетки, для борьбы с инфекционными микробами и патологическими типами клеток, при этом оставляя нормальные клетки интактными. У индивидуумов с аутоиммунным расстройством или трансплантированным органом активированные Т-клетки повреждают здоровые ткани. Ингибиторы кальциневрина (например, циклоспорины, такролимус, пимекролимус) и рапамицин имеют в качестве мишени многие типы иммунорегулирующих клеток, включая Т-клетки, и подавляют иммунный ответ при трансплантации органов и аутоиммунных заболеваниях.

Циклоспорины

Циклоспорины представляют собой продукты метаболизма грибов, которые включают класс циклических олигопептидов, которые действуют как иммунодепрессанты. Циклоспорин А и его дейтерированный аналог ISAtx247 представляют собой гидрофобный циклический полипептид, состоящий из одиннадцати аминокислот. Циклоспорин А связывается и образует комплекс с внутриклеточным рецептором циклофилином. Комплекс циклоспорин/циклофилин связывается с кальциневрином, Са²⁺-кальмодулинзависимой серин-треонинспецифичной протеинфосфатазой, и ингибирует его. Кальцинурин опосредует процессы сигнальной трансдукции, которые требуются для активации Т-клеток (см. обзор Schreiber et al., Cell 70:365-368, 1991). Циклоспорины и их функциональные и структурные аналоги подавляют зависящий от Т-клеток иммунный ответ путем ингибирования запускаемой антигеном сигнальной трансдукции. Указанное ингибирование уменьшает экспрессию провоспалительных цитокинов, таких как IL-2.

Многие циклоспорины (например, циклоспорин A, B, C, D, E, F, G, H и I) вырабатываются грибами. Циклоспорин А имеется на рынке под торговым наименованием NEORAL от компании Novartis. Структурные и функциональные аналоги циклоспорина А включают циклоспорины, имеющие один или более фторированных аминокислот (описаны, например, в патенте США №5227467), циклоспорины, имеющие модифицированные аминокислоты (описаны, например, в патентах США №№5122511 и 4798823), и дейтерированные циклоспорины, такие как ISAtx247 (описаны в патентной публикации США № 20020132763). Дополнительные аналоги циклоспорина описаны в патентах США №№6136357, 4384996, 5284826 и 5709797. Аналоги циклоспорина включают, без ограничения, D-Sar (α-SMe)³Val²-DH-Cs (209-825), Allo-Thr-2-Cs, Norvaline-2-Cs, D-Ala (3-ацетиламин)-8-Cs, Thr-2-Cs и D-MeSer-3-Cs, D-Ser (O-CH₂CH₂-OH)-8-Cs и D-Ser-8-Cs, которые описаны в Cruz et al. (Antimicrob. Agents Chemother. 44:143-149, 2000).

Циклоспорины являются высокогидрофобными и легко выпадают в осадок в присутствии воды (например, при контакте с жидкостями организма). Способы изготовления композиций циклоспорина с улучшенной биодоступностью описаны в патентах США №№4388307, 6468968, 5051402, 5342625, 5977066 и 6022852. Циклоспориновые микроэмульсионные композиции описаны в патентах США №№5866159, 5916589, 5962014, 5962017, 6007840 и 6024978.

Циклоспорины можно вводить как внутривенно, так и перорально, но предпочтительным является пероральное введение. Для противодействия гидрофобности циклоспорин А для внутривенного введения помещают в носитель - этанолполиоксиэтилированное касторовое масло, который необходимо разбавлять перед введением. Циклоспорин А может быть изготовлен, например, в форме микроэмульсии в 25 мг или 100 мг таблетках или в растворе 100 мг/мл для перорального введения (NEORAL^TM).

Обычно доза перорального циклоспорина для пациента варьирует в зависимости от состояния пациента, но некоторые стандартные рекомендованные дозы, известные ранее для схем лечения, приводятся в настоящем документе. Пациенты с трансплантированными органами обычно получают первоначальную дозу перорального циклоспорина А от 12 до 15 мг/кг в день. Затем постепенно уменьшают на 5% в неделю до достижения поддерживающей дозы 7-12 мг/кг в день. Для большинства пациентов предпочтительной для внутривенного введения является доза 2-6 мг/кг в день. Пациенты с болезнью Крона или язвенным колитом обычно получают 6-8 мг/кг в день. Пациенты с системной красной волчанкой обычно получают 2,2-6,0 мг/кг в день. При псориазе или ревматоидном артрите обычными являются дозы 0,5-4 мг/кг в день. Другие подходящие дозы составляют 0,5-5 мг/кг в день, 5-10 мг/кг в день, 10-15 мг/кг в день, 15-20 мг/кг в день или 20-25 мг/кг в день. Часто циклоспорины вводят в комбинации с другими иммунодепрессантами, такими как глюкокортикоиды. Дополнительная информация представлена в таблице 1.

ТАБЛИЦА 1
Соединение	Атопический дерматит	Псориаз	RA	Болезнь Крона	UC	Трансплантат	SLE
Cs (NEORAL)	N/A	0,5-4 мг/кг в день	0,5-4 мг/кг в день	6-8 мг/кг в день (перорально-через фистулу)	6-8 мг/кг в день (перорально)	˜7-12 мг/кг в день	2,2-6,0 мг/кг в день
Такролимус	0,03-0,1% крем/дважды в день (тюбики по 30 и 60 граммов)	0,05-1,15 мг/кг в день (перорально)	1-3 мг в день (перорально)	0,1-0,2 мг/кг в день (перорально)	0,1-0,2 мг/кг в день (перорально)	0,1-0,2 мг/кг в день (перорально)	N/A
Пимекролимус	1% крем/дважды в день (тюбики по 15, 30 и 100 граммов)	40-60 мг в день (перорально)	40-60 мг в день (перорально)	80-160 мг в день (перорально)	160-240 мг в день (перорально)	40-120 мг в день (перорально)	40-120 мг в день (перорально)
Обозначения
CsA = циклоспорин А
RA = ревматоидный артрит
UC = язвенный колит
SLE = системная красная волчанка

Такролимус

Такролимус (PROGRAF, Fujisawa), известный так же как FK506, представляет собой иммунодепрессант, который нацелен на пути внутриклеточной сигнальной трансдукции Т-клеток. Такролимус связывается с белком, связывающим внутриклеточный белок FK506 (FKBP-12), который не является структурно родственным циклофилину (Harding et al. Nature 341:758-7601, 1989; Siekienka et al., Nature 341:755-757, 1989 и Soltoff et al., J. Biol. Chem. 267:17472-17477, 1992). Комплекс FKBP/FK506 связывается с кальциневрином и ингибирует фосфатазную активность кальциневрина. Указанное ингибирование предотвращает дефосфорилирование и ядерную транслокацию NFAT, ядерного компонента, который инициирует транскрипцию гена, требующегося для выработки лимфокина (например, IL-2, гамма-интерферона) и активации Т-клеток. Таким образом такролимус ингибирует активацию Т-клеток.

Такролимус представляет собой макролидный антибиотик, который вырабатывается в Streptomyces tsukubaensis. Он подавляет иммунную систему и пролонгирует выживание трансплантированных органов. В настоящее время он доступен в виде лекарственных форм для перорального и инъекционного введения. Капсулы такролимуса содержат 0,5 мг, 1 мг или 5 мг безводного такролимуса в желатиновой капсульной оболочке. Композиция для инъекций содержит 5 мг безводного такролимуса в касторовом масле и спирте, который перед введением разводят 9% хлоридом натрия или 5% декстрозой. В то время как пероральное введение является предпочтительным, пациенты, не способные принимать пероральные капсулы, могут получать такролимус в инъекционной форме. Первоначальную дозу следует назначать не раньше чем через шесть месяцев после трансплантации посредством продолжительной внутривенной инфузии.

Такролимус и аналоги такролимуса описаны Tanaka et al. (J. Am. Chem. Soc., 109:5031, 1987) и в патентах США №№4894366, 4929611 и 4956352. Родственные FK506 соединения, включая FR-900520, FR-900523 и FR-900525, описаны в патенте США №5254562; О-арил-, О-алкил-, О-алкенил- и О-алкинилмакролиды описаны в патентах США №№5250678, 532248, 5693648; амино-О-арилмакролиды описаны в патенте США №5262533; алкилиденмакролиды описаны в патенте США №5284840; N-гетероарил-, N-алкилгетероарил, N-алкенилгетероарил и N-алкинилгетероарил описаны в патенте США №5208241; аминомакролиды и их производные описаны в патенте США №5208228; фтормакролиды описаны в патенте США №5189042; амино-О-алкил-, О-алкенил- и О-алкинилмикролиды описаны в патенте США №5162334 и галогенмакролиды описаны в патенте США №5143918.

В то время как предложенные дозировки будут варьировать в зависимости от состояния пациента, стандартные рекомендованные дозы, использовавшиеся ранее для схем лечения, приводятся ниже. Пациенты с болезнью Крона или язвенным колитом обычно получают 0,1-0,2 мг/кг в день такролимуса перорально. Пациенты с трансплантированными органами обычно получают дозы перорального такролимуса 0,1-0,2 мг/кг в день. Пациенты с ревматоидным артритом обычно получают 1-3 мг/кг в день перорального такролимуса. Для лечения псориаза пациенту вводят 0,01-0,15 мг/кг в день перорального такролимуса. Атопический дерматит можно лечить нанесением дважды в день на пораженный участок кожи крема, содержащего 0,03-0,1% такролимуса. Пациенты, получающие пероральные капсулы такролимуса, обычно получают первую дозу не раньше шести месяцев после трансплантации, или через восемь-двенадцать часов после окончания внутривенной инфузии такролимуса. Другие предложенные дозировки такролимуса включают 0,005-0,01 мг/кг в день, 0,01-0,03 мг/кг в день, 0,03-0,05 мг/кг в день, 0,05-0,07 мг/кг в день, 0,07-0,10 мг/кг в день, 0,10-0,25 мг/кг в день или 0,25-0,5 мг/кг в день.

Такролимус в значительной степени метаболизируется оксидазной системой смешанной функции, в частности системой цитохрома Р-450. Главным механизмом метаболизма является деметилирование и гидроксилирование. В то время как различные метаболиты такролимуса, вероятно, обладают иммунодепрессантной биологической активностью, соообщается, что 13-диметиловый метаболит обладает такой же активностью, как такролимус.

Производные пимекролимуса и аскомицина

Аскомицин является близким структурным аналогом FK506 и является мощным иммунодепрессантом. Он связывается к FKBP-12 и подавляет его пролин-ротамазную активность. Комплекс аскомицин-FKBP ингибирует кальциневрин, фосфатазу типа 2В.

Пимекролимус (также известный как SDZ ASM-981) представляет собой 33-эпихлорпроизводное аскомицина. Он вырабатывается штаммом Streptomyces hygroscopicus var. ascomyceitus. Подобно такролимусу, пимекролимус (ELIDEL^TM, Novartis) связывается с FKBP-12, ингибирует фосфатазную активность кальциневрина и ингибирует активацию Т-клеток путем блокирования транскрипции ранних цитокинов. В частности, пимекролимус ингибирует выработку IL-2 и высвобождение других провоспалительных цитокинов.

Структурные и функциональные аналоги пимекролимуса описаны в патенте США №6384073. Пимекролимус является особенно подходящим для лечения атопического дерматита. В настоящее время пимекролимус доступен в форме 1% крема. В то время как индивидуальное дозирование будет варьировать в зависимости от состояния пациента, некоторые стандартные рекомендованные дозы приводятся ниже. Пероральный пимекролимус можно назначать для лечения псориаза или ревматоидного артрита в дозах 40-60 мг в день. Для лечения болезни Крона или язвенного колита можно назначать дозы пимекролимуса 80-160 мг в день. Пациентам с трансплантированными органами можно вводить 160-240 мг пимекролимуса в день. Пациентам с диагнозом системной красной волчанки можно вводить 40-120 мг пимекролимуса в день. Другие подходящие дозировки пимекролимуса включают 0,5-5 мг в день, 5-10 мг в день, 10-30 мг в день, 40-80 мг в день, 80-120 мг в день или даже 120-200 мг в день.

Рапамицин

Рапамицин (RAPAMUNE® сиролимус, Wyeth) представляет собой циклический лактон, вырабатываемый Streptomyces hygroscopicus. Рапамицин представляет собой иммунодепрессант, который ингибирует активацию и пролиферацию Т-лимфоцитов. Подобно циклоспоринам, такролимусу и пимекролимусу, рапамицин образует комплекс с иммунофилином FKBP-12, но комплекс рапамицин-FKBP-12 не ингибирует фосфатазную активность кальциневрина. Комплекс рапамицин-иммунофилин связывается с мишенью рапамицина у млекопитающих (mTOR), киназой, которая требуется для осуществления клеточного цикла, и ингибирует ее. Ингибирование активности mTOR-киназы блокирует пролиферацию Т-клеток и секрецию лимфокинов.

Структурные и функциональные аналоги рапамицина включают моно- и диацилированные производные рапамицина (патент США №4316885); водорастворимые пролекарства рапамицина (патент США №4650803); сложные эфиры карбоновых кислот (публикация РСТ № WO 92/05179); карбаматы (патент США №5118678); амидные эфиры (патент США №5118678); биотиновые эфиры (патент США №5504091); фторированные эфиры (патент США №5100883); ацетали (патент США № 5151413); силиловые эфиры (патент США №5120842); бициклические производные (патент США №5120725); димеры рапамицина (патент США №5120727); О-арил-, О-алкил-, О-алкенил- и О-алкиниловые производные (патент США № 5258389) и дейтерированный рапамицин (патент США №6503921). Дополнительные аналоги рапамицина описаны в патентах США №№5202332 и 5169851.

Эверолимус (40-О-(2-гидроксиэтил)рапамицин, CERTICAN^TM, Novartis) представляет собой иммунодепрессантный макролид, который является структурно родственным рапамицину и, как было установлено, является особенно эффективным для профилактики острого отторжения трансплантированного органа при комбинированном введении с циклоспорином А.

В настоящее время рапамицин имеется на рынке в виде жидких и таблеточных композиций для перорального введения. RAPAMUNE^ТМ в виде жидкости содержит 1 мг/мл рапамицина, которую разводят в воде или апельсиновом соке перед приемом. Таблетки, содержащие 1 или 2 мг рапамицина, также доступны. Рапамицин предпочтительно дают один раз в день как можно быстрее после трансплантации. Он быстро и полностью всасывается после перорального введения. Обычно доза рапамицина для пациента варьирует в зависимости от состояния пациента, но некоторые стандартные рекомендованные дозы приводятся ниже. Первоначальная ударная доза рапамицина составляет 6 мг. Последующие поддерживающие дозы 2 мг в день являются обычными. Альтернативно, можно использовать ударную дозу 3 мг, 5 мг, 10 мг, 15 мг, 20 мг или 25 мг с поддерживающей дозой 1 мг, 3 мг, 5 мг, 7 мг или 10 мг в день. Для пациентов с массой тела менее 40 кг дозы рапамицина обычно рассчитывают по площади поверхности тела; обычно используют ударную дозу 3 мг/м² в день и поддерживающую дозу 1 мг/м² в день.

Пептидные части

Пептиды, пептидные части, пептидные фрагменты как натуральные, так и синтетические или химически модифицированные, которые нарушают опосредованное кальциневрином дефосфорилирование и ядерную транслокацию NFAT, являются подходящими для применения в практике настоящего изобретения. Примеры пептидов, которые действуют как ингибиторы кальциневрина путем ингибирования активации NFAT и фактора транскрипции NFAT, описаны, например, Aramburu et al., Science 285:2129-2133, 1999), и Aramburu et al., Mol. Cell 1:627-637, 1998. Как класс ингибиторов кальциневрина указанные агенты являются пригодными для способов по настоящему изобретению.

Селективные ингибиторы обратного захвата серотонина

В одном варианте осуществления способы, композиции и наборы по настоящему изобретению используют селективный ингибитор обратного захвата серотонина (SSRI) или его структурный или функциональный аналог в комбинации с нестероидным иммунофилинзависимым иммунодепрессантом (NsIDI). Подходящие SSRI включают церикламин (например, церикламина гидрохлорид), циталопрам (например, циталопрама гидробромид), кловоксамин, цианодотиепин, дапоксетин, эсциталопрам (например, эсциталопрама оксалат), фемоксетин (например, фемоксетина гидрохлорид), флуоксетин (например, флуоксетина гидрохлорид); флувоксамин (например, флуоксамина малеат), ифоксетин, индалпин (например, индалпина гидрохлорид), инделоксазин (например, инделоксазина гидрохлорид), литоксетин, милнаципран (например, милнаципрана гидрохлорид), пароксетин (например, пароксетина гидрохлорида полугидрат, пароксетина малеат, пароксетина мезилат), сертралин (например, сертралина гидрохлорид), сибутрамин, таметралина гидрохлорид, виквалин и зимелдин (например, зимелдина гидрохлорид).

SSRI представляют собой лекарственные средства, которые ингибируют захват 5-гидрокситриптамина (5-НТ) нейронами центральной нервной системы. SSRI демонстрируют селективность в отношении 5-НТ по сравнению с захватом норэпинефрина. Они с меньшей долей вероятности, чем трициклические антидепрессанты, вызывают антихолинергические побочные эффекты и являются менее опасными при передозировке. SSRI, такие как пароксетин, сертралин, флуоксетин, циталопрам, флувоксамин, нор₁-циталопрам, венлафаксин, милнаципран, нор₂-циталопрам, норфлуоксетин или норсертралин, используют для лечения различных психиатрических расстройств, включая депрессию, тревожные расстройства, панические атаки и обсессивно-компульсивное расстройство. Дозировки, указанные в настоящем документе, представляют собой стандартные рекомендованные дозы для лечения психических расстройств. При практическом осуществлении способов по настоящему изобретению эффективные количества могут быть различными.

Введение каждого лекарственного средства в комбинации может, независимо, осуществляться от одного до четырех раз в день в течение периода времени от одного дня до одного года и даже в течение всей жизни пациента. Постоянное, длительное введение будет показано во многих случаях. Обычно доза SSRI для пациента варьирует в зависимости от его состояния. SSRI можно вводить перорально, посредством суппозитория или посредством инъекции. Часто дозы вводят перорально один раз в день в форме таблетки или жидкого концентрата.

Церикламин

Церикламин имеет следующую структуру:

Структурные аналоги церикламина представляют собой соединения, имеющие следующую формулу:

а также их фармацевтически приемлемые соли, где R₁ представляет собой С₁-С₄ алкил, а R₂ представляет собой Н или С₁-С₄ алкил, R₃ представляет собой Н, С₁-С₄ алкил, С₁-С₄ алкенил, фенилалкил или циклоалкилалкил с 3-6 циклическими атомами углерода, алканоил, фенилалканоил или циклоалкилкарбонил, имеющий от 3 до 6 циклических атомов углерода, или R₂ и R₃ образуют, вместе с атомом азота, к которому они присоединены, гетероцикл, насыщенный 5-7 связями цепи, который может иметь в качестве второго гетероатома, не связанного непосредственно с атомом азота, кислород, серу или азот, последний азотный гетероатом, возможно, несет С₂-С₄ алкил.

Примерами структурных аналогов церикламина являются 2-метил-2-амино-3-(3,4-дихлорфенил)пропанол, 2-пентил-2-амино-3-(3,4-дихлорфенил)пропанол, 2-метил-2-метиламино-3-(3,4-дихлорфенил)пропанол, 2-метил-2-диметиламино-3-(3,4-дихлорфенил)пропанол и их фармацевтически приемлемые соли.

Циталопрам

Циталопрам HBr (CELEXA^TM) представляет собой рацемическое бициклическое фталановое производное, обозначаемое (±)-1-(3-диметиламинопропил)-1-(4-фторфенил)-1,3-дигидроизобензофуран-5-карбонитрил, HBr. Циталопрам подвергается значительному метаболизму; главными метаболитами являются нор₁-циталопрам и нор₂-циталопрам. Циталопрам доступен для перорального введения в форме 10 мг, 20 мг и 40 мг таблеток. Раствор CELEXA^TM для перорального введения содержит циталопрам HBr в количестве, эквивалентном 2 мг/мл основания циталопрама. CELEXA^TM обычно вводят в первоначальной дозе 20 мг один раз в день, обычно с повышением дозы до 40 мг в день. Повышения дозы обычно производят с прирастанием 20 мг с интервалами не менее одной недели.

Циталопрам имеет следующую структуру:

Структурные аналоги циталопрама представляют собой соединения, имеющие следующую формулу:

а также их фармацевтически приемлемые соли, где каждый из R₁ и R₂,независимо, выбран из группы, состоящей из брома, хлора, фтора, трифторметила, циано и R-CO-, где R представляет собой С₁-С₄ алкил.

Примерами структурных аналогов циталопрама (которые, таким образом, являются структурными аналогами SSRI по настоящему изобретению) являются 1-(4'-фторфенил)-1-(3-диметиламинопропил)-5-бромфталан; 1-(4'-хлорфенил)-1-(3-диметиламинопропил)-5-хлорфталан; 1-(4'-бромфенил)-1-(3-диметиламинопропил)-5-хлорфталан; 1-(4'-фторфенил)-1-(3-диметиламинопропил)-5-хлорфталан; 1-(4'-хлорфенил)-1-(3-диметиламинопропил)-5-трифторметилфталан; 1-(4'-бромфенил)-1-(3-диметиламинопропил)-5-трифторметилфталан; 1-(4'-фторфенил)-1-(3-диметиламинопропил)-5-трифторметилфталан; 1-(4'-фторфенил)-1-(3-диметиламинопропил)-5-фторфталан; 1-(4'-хлорфенил)-1-(3-диметиламинопропил)-5-фторфталан; 1-(4'-хлорфенил)-1-(3-диметиламинопропил)-5-фталанкарбонитрил; 1-(4'-фторфенил)-1-(3-диметиламинопропил)-5-фталанкарбонитрил; 1-(4'-цианфенил)-1-(3-диметиламинопропил)-5-фталанкарбонитрил; 1-(4'-цианфенил)-1-(3-диметиламинопропил)-5-хлорфталан; 1-(4'-цианфенил)-1-(3-диметиламинопропил)-5-трифторметилфталан; 1-(4'-фторфенил)-1-(3-диметиламинопропил)-5-фталанкарбонитрил; 1-(4'-хлорфенил)-1-(3-диметиламинопропил)-5-ионилфталан; 1-(4'-хлорфенил)-1-(3-диметиламинопропил)-5-пропионилфталан и их фармацевтически приемлемые соли.

Кловоксамин

Кловоксамин имеет следующую структуру:

Структурные аналоги кловоксамина представляют собой соединения, имеющие следующую формулу:

а также их фармацевтически приемлемые соли, где Hal представляет собой хлор, бром или фтор, а Rпредставляет собой циано, метокси, этокси, метоксиметил, этоксиметил, метоксиэтокси или цианометильную группу.

Примерами структурных аналогов кловоксамина являются О-(2-аминоэтил)оксим 4'-хлор-5-этоксивалерофенона; О-(2-аминоэтил)оксим 4'-хлор-5-(2-метоксиэтокси)валерофенона; О-(2-аминоэтил)оксим 4'-хлор-6-метоксикапрофенона; О-(2-аминоэтил)оксим 4'-хлор-6-этоксикапрофенона; О-(2-аминоэтил)оксим 4'-бром-5-(2-метоксиэтокси)валерофенона; О-(2-аминоэтил)оксим 4'-бром-5-метоксивалерофенона; О-(2-аминоэтил)оксим 4'-хлор-6-цианкапрофенона; О-(2-аминоэтил)оксим 4'-хлор-5-цианвалерофенона; О-(2-аминоэтил)оксим 4'-бром-5-цианвалерофенона и их фармацевтически приемлемые соли.

Фемоксетин

Фемоксетин имеет следующую структуру:

Структурные аналоги фемоксетина представляют собой соединения, имеющие следующую формулу:

где R₁ представляет собой С₁-С₄ алкил, или С₂-С₄ алкинил, или фенильную группу, необязательно замещенную С₁-С₄ алкилом, С₁-С₄ алкилтио, С₁-С₄ алкокси, бромом, хлором, фтором, нитро, ациламино, метилсульфонилом, метилендиокси или тетрагидронафтилом, R₂ представляет собой С₁-С₄ алкил или С₂-С₄ алкинил, а R₃ представляет собой водород, С₁-С₄ алкил, С₁-С₄ алкокси, трифторалкил, гидрокси, бром, хлор, фтор, метилтио или аралкилокси.

Примеры структурных аналогов фемоксетина описаны в примерах 7-67 патента США №3912747, включенного в настоящий документ в качестве ссылки.

Флуоксетин

Флуоксетина гидрохлорид ((±)-N-метил-3-фенил-3-[((альфа), (альфа),(альфа)-трифтор-п-толил)окси]пропиламина гидрохлорид) продается как PROZAC^TM в 10 мг, 20 мг и 40 мг таблетках для перорального введения. Главным метаболитом флуоксетина является норфлуоксетин. Флуоксетина гидрохлорид также можно вводить в форме перорального раствора, эквивалентного 20 мг/5 мл флуоксетина. Композиция с замедленным высвобождением содержит гранулы флуоксетина гидрохлорида в энтеросолюбильной оболочке, в количестве, эквивалентном 90 мг флуоксетина. Дозу 20 мг в день, которую вводят по утрам, обычно рекомендуют в качестве первоначальной дозы. Вопрос о повышении дозы можно рассматривать спустя несколько недель, если не наблюдается клинического улучшения. Дозы свыше 20 мг в день можно вводить один раз в день (по утрам) или дважды в день (например, утром и днем), и они не должны превышать максимальную дозу 80 мг в день.

Флуоксетин имеет следующую структуру:

Структурные аналоги флуоксетина представляют собой соединения, имеющие следующие формулу:

а также их фармацевтически приемлемые соли, где каждый R₁, независимо, представляет собой водород или метил; R представляетсобой нафтил или

где каждый из R₂ и R₃ независимо представляет бром, хлор, фтор, трифторметил, С₁-С₄ алкил, С₁-С₃ алкокси или С₃-С₄ алкенил; и каждый из n и m независимо представляет собой 0, 1 или 2. Когда R представляет собой нафтил, он может представлять собой как α-нафтил, так и β-нафтил.

Примерами структурных аналогов флуоксетина являются метансульфонат 3-(п-изопропоксифенокси)-3-фенилпропиламина, п-гидроксибензоат N,N-диметил 3-(3',4'-диметоксифенокси)-3-фенилпропиламина, бромид N,N-диметил 3-(α-нафтокси)-3-фенилпропиламина, йодид N,N-диметил 3-(β-нафтокси)-3-фенил-1-метилпропиламина, нитрат 3-(2'-метил-4',5'-дихлорфенокси)-3-фенилпропиламина, глутарат 3-(п-т-бутилфенокси)-3-фенилпропиламина, лактат N-метил 3-(2'-хлор-п-толилокси)-3-фенил-1-метилпропиламина, цитрат 3-(2',4'-дихлорфенокси)-3-фенил-2-метилпропиламина, малеат N,N-диметил 3-(м-анизилокси)-3-фенил-1-метилпропиламина, сульфат N-метил 3-(п-толилокси)-3-фенилпропиламина, 2,4-динитробензоат N,N-диметил 3-(2',4'-дифторфенокси)-3-фенилметилпропиламина, дигидрофосфат 3-(о-этилфенокси)-3-фенилпропиламина, малеат N-метил 3-(2'-хлор-4'-изопропилфенокси)-3-фенил-2-метилпропиламина, сукцинат N,N-диметил 3-(2'-алкил-4'-фторфенокси)-3-фенилпропиламина, фенилацетат N,N-диметил 3-(о-изопропоксифенокси)-3-фенилпропиламина, β-фенилпропионат N,N-диметил 3-(о-бромфенокси)-3-фенилпропиламина, пропиолат N-метил 3-(п-йодфенокси)-3-фенилпропиламина и деканоат N-метил 3-(3-н-пропилфенокси)-3-фенилпропиламина.

Флувоксамин

Флувоксамина малеат (LUVOX^TM) химически обозначается как малеат 5-метокси-4'-(трифторметил)валерофенон (Е)-О-(2-аминоэтил)оксима. Флувоксамина малеат продается в 50 мг и 100 мг таблетках. Лечение обычно начинают с 50 мг один раз в день перед сном, а затем дозу повышают до 100 мг один раз в день перед сном спустя несколько дней, если препарат хорошо переносится. Эффективная суточная доза обычно составляет от 100 до 200 мг, но может вводиться максимум до 300 мг.

Флувоксамин имеет следующую структуру:

Структурные аналоги флувоксамина представляют собой соединения, имеющие следующую формулу:

а также их фармацевтически приемлемые соли, где Rпредставляет собой циано, цианметил, метоксиметил или этоксиметил.

Индалпин

Индалпин имеет следующую структуру:

Структурные аналоги индалпина представляют собой соединения, имеющие следующую формулу:

или их фармацевтически приемлемые соли, где R₁ представляет собой атом водорода, С₁-С₄ алкил или аралкил, где алкил имеет от 1 до 2 атомов углерода, R₂ представляет собой водород, С₁-С₄ алкил, С₁-С₄ алкокси или С₁-С₄ алкилтио, хлор, бром, фтор, трифторметил, нитро, гидрокси или амино, последний, необязательно, замещен одной или двумя С₁-С₄ алкильными группами, ацильной группой или С₁-С₄ алкильсульфонильной группой; А представляет собой -СО или -СН₂- группу; и n представляет собой 0, 1 или 2.

Примерами структурных аналогов индалпина являются индолил-3-(пиперидил-4-метил)кетон; (метокси-5-индолил-3)(пиперидил-4-метил)кетон; (хлор-5-индолил-3)(пиперидил-4-метил)кетон; (индолил-3)-1-(пиперидил-4)-3-пропанон; индолил-3-пиперидил-4-кетон; (метил-1-индолил-3)(пиперидил-4-метил)кетон; (бензил-1-индолил-3)(пиперидил-4-метил)кетон; [(метокси-5-индолил-3)-2-этил]пиперидин; [(метил-1-индолил-3)-2-этил]-4-пиперидин; [(индолил-3)-2-этил]-4-пиперидин; (индолил-3-метил)-4-пиперидин; [(хлор-5-индолил-3)-2-этил]-4-пиперидин; [(индолил-b-3)-3-пропил]-4-пиперидин; [(бензил-1-индолил-3)-2-этил]-4-пиперидин и их фармацевтически приемлемые соли.

Инделоксазин

Инделоксазин имеет следующую структуру:

Структурные аналоги инделоксазина представляют собой соединения, имеющие следующую формулу:

и их фармацевтически приемлемые соли, где R₁ и R₂ каждый представляет собой водород, С₁-С₄ алкил или фенил; R₂ представляет собой водород, С₁-С₄ алкил, С₄-С₇ циклоалкил, фенил или бензил; одна из пунктирных линий представляет собой простую связь, а другая представляет собой двойную связь, или их таутомерные смеси.

Примерами структурных аналогов инделоксазина являются 2-(7-инденилоксиметил)-4-изопропилморфолин; 4-бутил-2-(7-инденилоксиметил)морфолин; 2-(7-инденилоксиметил)-4-метилморфолин; 4-этил-2-(7-инденилоксиметил)морфолин; 2-(7-инденилоксиметил)морфолин; 2-(7-инденилоксиметил)-4-пропилморфолин; 4-циклогексил-2-(7-инденилоксиметил)морфолин; 4-бензил-2-(7-инденилоксиметил)морфолин; 2-(7-инденилоксиметил)-4-фенилморфолин; 2-(4-инденилоксиметил)морфолин; 2-(3-метил-7-инденилоксиметил)морфолин; 4-изопропил-2-(3-метил-7-инденилоксиметил)морфолин; 4-изопропил-2-(3-метил-4-инденилоксиметил)морфолин; 4-изопропил-2-(3-метил-5-инденилоксиметил)морфолин; 4-изопропил-2-(1-метил-3-фенил-6-инденилоксиметил)морфолин; 2-(5-инденилоксиметил)-4-изопропилморфолин; 2-(6-инденилоксиметил)-4-изопропилморфолин и 4-изопропил-2-(3-фенил-6-инденилоксиметил)морфолин, а также их фармацевтически приемлемые соли.

Милнаципрам

Милнаципрам (IXEL^TM, Cypress Bioscience Inc.) имеет химическую формулу (Z)-1-диэтиламинокарбонил-2-аминоэтил-1-фенилциклопропангидрохлорат и продается в 25 мг и 50 мг таблетках для перорального введения. Его обычно вводят в дозах 25 мг один раз, 25 мг два раза в день или 50 мг два раза в день для лечения тяжелой депрессии.

Милнаципрам имеет следующую структуру:

Структурные аналоги милнаципрама представляют собой соединения, имеющие следующую формулу:

а также их фармацевтически приемлемые соли, где каждый Rнезависимо представляет собой водород, бром, хлор, фтор, С₁-С₄ алкил, С₁-С₄ алкокси, гидрокси, нитро или амино; каждый из R₁ и R₂, независимо, представляет собой водород, С₁-С₄ алкил, С₆-С₁₂ арил или С₇-С₁₄ алкиларил, необязательно замещенный, предпочтительно,в пара-положении, бромом, хлором или фтором, или R₁ и R₂ вместе образуют гетероциклическое кольцо, имеющее 5 или 6 членов с соседними атомами азота; R₃ и R₄ представляют собой водород или С₁-С₄ алкил, или R₃ и R₄ образуют с соседним атомом азота гетероцикл, имеющий 5 или 6 членов, необязательно содержащий дополнительный гетероатом, выбранный из азота, серы и кислорода.

Примерами структурных аналогов милнаципрама являются 1-фенил-1-аминокарбонил-2-диметиламинометилциклопропан; 1-фенил-1-диметиламинокарбонил-2-диметиламинометилциклопропан; 1-фенил-1-этиламинокарбонил-2-диметиламинометилциклопропан; 1-фенил-1-диэтиламинокарбонил-2-аминометилциклопропан; карбоксамид 1-фенил-2-диметиламинометил-N-(4'-хлорфенил)циклопропана; карбоксамид 1-фенил-2-диметиламинометил-N-(4'-хлорбензил)циклопропана; карбоксамид 1-фенил-2-диметиламинометил-N-(2-фенилэтил)циклопропана; карбоксамид (3,4-дихлор-1-фенил)-2-диметиламинометил-N,N-диметилциклопропана; 1-фенил-1-пирролидинокарбонил-2-морофолинометилциклопропан; 1-п-хлорфенил-1-аминокарбонил-2-аминометилциклопропан; 1-ортохлорфенил-1-аминокарбонил-2-диметиламинометилциклопропан; 1-п-гидроксифенил-1-аминокарбонил-2-диметиламинометилциклопропан; 1-п-нитрофенил-1-диметиламинокарбонил-2-диметиламинометилциклопропан; 1-п-аминофенил-1-диметиламинокарбонил-2-диметиламинометилциклопропан; 1-п-толил-1-метиламинокарбонил-2-диметиламинометилциклопропан; 1-п-метоксифенил-1-аминометилкарбонил-2-аминометилциклопропан и их фармацевтически приемлемые соли.

Пароксетин

Пароксетина гидрохлорид (полугидрат гидрохлорида (-)-транс-4R-(4'-фторфенил)-3S-[3',4'-метилендиоксифенокси)метил]пиперидина) продается как PAXIL^TM. Таблетки с контролируемым высвобождением содержат пароксетина гидрохлорид в количестве, эквивалентном 12,5 мг, 25 мг или 37,5 мг дозам. Один слой таблетки состоит из разлагаемого барьерного слоя, а другой содержит активный материал в гидрофильном матриксе. Рекомендованная первоначальная доза PAXIL^TM составляет 25 мг в день. Некоторые пациенты, которые не реагируют на 25 мг дозу, могут выиграть от повышения дозы с приращениями 12,5 мг в день до максимальной дозы 62,5 мг в день. Изменения доз обычно производят с интервалами по меньшей мере в одну неделю.

Пароксетин имеет следующую структуру:

Структурные аналоги пароксетина представляют собой соединения, имеющие следующую формулу:

и их фармацевтически приемлемые соли, где R₁ представляет собой водород или С₁-С₄ алкил, а атом фтора может быть в любом из доступных положений.

Сертралин

Сертралин (гидрохлорид (1S-цис)-4-(3,4-дихлорфенил)-1,2,3,4-тетрагидро-N-метил-1-нафталинамина) продается как ZOLOFT^TM в виде 25 мг, 50 мг и 100 мг таблеток для перорального введения. Поскольку сертралин подвергается в значительной степени метаболическим превращениям в ряд метаболитов, которые могут быть терапевтически активными, указанными метаболитами можно заменить сертралин в противовоспалительной комбинации по настоящему изобретению. Метаболизм сертралина включает, например, окислительное N-деметилирование с возникновением N-десметилсертралина (норсертралина). ZOLOFT обычно вводят в дозе 50 мг один раз в день.

Сертралин имеет следующую структуру:

Структурные аналоги сертралина представляют собой соединения, имеющие следующую формулу:

где R₁ выбран из группы, состоящей из водорода и С₁-С₄ алкила; R₂ представляет собой С₁-С₄ алкил; Х и Y каждый выбран изгруппы, состоящей из водорода, фтора, хлора, брома, трифторметила, С₁-С₃ алкокси и циано; а W выбран из группы, состоящей из водорода, фтора, хлора, брома, трифторметила, С₁-С₃ алкокси. Предпочтительные аналоги сертралина находятся в цис-изомерной конфигурации. Термин «цис-изомерный» относится к относительной ориентации NR₁R₂ и фенильной частей на циклогексеновом кольце (т.е. они обе ориентированы на одной и той же стороне кольца). Поскольку оба 1- и 4-углеродных атомасимметрично замещены, каждое цис-соединение имеет две оптически активные энантиомерные формы, обозначаемые (относительно атома углерода 1) как цис-(1R) и цис-(1S) энантиомеры.

Особенно подходящими являются следующие соединения как в (1S)-энантиомерной, так и в (1S)(1R)-рацемической форме, и их фармацевтически приемлемые соли: цис-N-метил-4-(3,4-дигидрофенил)-1,2,3,4-тетрагидро-1-нафталинамин; цис-N-метил-4-(4-бромфенил)-1,2,3,4-тетрагидро-1-нафталинамин; цис-N-метил-4-(4-хлорфенил)-1,2,3,4-тетрагидро-1-нафталинамин; цис-N-метил-4-(3-трифторметилфенил)-1,2,3,4-тетрагидро-1-нафталинамин; цис-N-метил-4-(3-трифторметил-4-хлофенил)-1,2,3,4-тетрагидро-1-нафталинамин; цис-N,N-диметил-4-(4-хлорфенил)-1,2,3,4-тетрагидро-1-нафталинамин; цис-N,N-диметил-4-(3-трифторметилфенил)-1,2,3,4-тетрагидро-1-нафталинамин и цис-N-метил-4-(4-хлорфенил)-7-хлор-1,2,3,4-тетрагидро-1-нафталинамин. Представляет интерес также (1R)-энантиомер цис-N-метил-4-(3,4-дигидрофенил)-1,2,3,4-тетрагидро-1-нафталинамина.

Сибутрамина гидрохлорида моногидрат

Сибутрамина гидрохлорида моногидрат (MERIDIA^TM) представляет собой агент для перорального введения, предназначенный для лечения ожирения. Сибутрамина гидрохлорид представляет собой рацемическую смесь (+) и (-) энантиомеров циклобутанметанамина, моногидрат гидрохлорида 1-(4-хлорфенил)-N,N-диметил-(альфа)-(2-метилпропил). Каждая капсула MERIDIA^TM содержит 5 мг, 10 мг или 15 мг сибутрамина гидрохлорида моногидрата. Рекомендованная начальная доза MERIDIA^TM составляет 10 мг, которую вводят один раз в день во время приема пищи или вне приема пищи. Если наблюдается неадекватная потеря веса, дозу можно титровать спустя несколько недель до общего количества 15 мг один раз в день. Обычно для пациентов, которые не переносят дозу 10 мг, сохраняют дозу 5 мг.

Зимелдин

Зимелдин имеет следующую структуру:

Структурные аналоги зимелдина представляют собой соединения, имеющие следующую формулу:

и их фармацевтически приемлемые соли, где пиридиновое ядро связано в орто-, мета- или пара-положении с соседним атомом углерода и где R₁ выбран из группы, состоящей из Н, хлора, фтора и брома.

Примерами структурных аналогов зимелдина являются (е)- и (z)-3-(4'-бромфенил-3-(2''-пиридил)диметилаллиламин; 3-(4'-бромфенил-3-(3''-пиридил)диметилаллиламин; 3-(4'-бромфенил-3-(4''-пиридил)диметилаллиламин и их фармацевтически приемлемые соли.

Структурные аналоги любых из представленных выше SSRI рассматриваются в настоящем документе как аналоги SSRI и, таким образом, могут использоваться в любых из способов, композиций и наборов по настоящему изобретению.

Метаболиты

Фармакологически активные метаболиты любых из вышеупомянутых SSRI также можно использовать в способах, композициях и наборах по настоящему изобретению. Примерами метаболитов являются дидезметилциталопрам, дезметилциталопрам, дезметилсертралин и норфлуоксетин.

Аналоги

Функциональные аналоги SSRI также можно использовать в способах, композициях и наборах по настоящему изобретению. Примеры функциональных аналогов SSRI представлены ниже. Одним классом аналогов SSRI являются SNRI (селективные ингибиторы обратного захвата серотонина и норэпинефрина), который включает венлафаксин и дулоксетин.

Венлафаксин

Венлафаксина гидрохлорид (EFFEXOR^TM) представляет собой антидепрессант для перорального введения. Он обозначается как гидрохлорид (R/S)-1-[2-(диметиламин)-1-(4-метоксифенил)этил]циклогексанола или гидрохлорид (±)-1-[(альфа)-[(диметиламин)метил]-п-метоксибензил]циклогексанола. Прессованные таблетки содержат венлафаксина гидрохлорид в количестве, эквивалентном 25 мг, 37,5 мг, 50 мг, 75 мг или 100 мг венлафаксина. Рекомендованная начальная доза венлафаксина составляет 75 мг в день, которую вводят двумя или тремя разделенными дозами во время приема пищи. В зависимости от переносимости и потребности в дополнительном клиническом эффекте дозу можно увеличить до 150 мг в день. Если желательно, дозу можно еще увеличить до 225 мг в день. При увеличении дозы приращения до 75 мг в день обычно производят с интервалами не менее четырех дней.

Венлафаксин имеет следующую структуру:

Структурные аналоги венлафаксина представляют собой соединения, имеющие следующую формулу:

а также их фармацевтически приемлемые соли, где А представляет собой часть формулы:

где пунктирная линия представляет необязательную ненасыщенность; R₁ представляет собой водород или алкил; R₂ представляет С₁-С₄ алкил, R₄ представляет собой водород, С₁-С₄ алкил, формил или алканоил; R₃ представляет собой водород или С₁-С₄ алкил; R₅ и R₆ независимо представляют собой водород, гидроксил, С₁-С₄ алкил, С₁-С₄ алкокси,С₁-С₄ алканоилокси, циано, нитро, алкилмеркапто, амино, С₁-С₄ алкиламино, диалкиламино, С₁-С₄ алканамидо, галоген, трифторметил или, взятые вместе, метилендиокси; а n представляет собой 0, 1, 2, 3 или 4.

Дулоксетин

Дулоксетин имеет следующую структуру:

Структурные аналоги дулоксетина представляют собой соединения, описанные формулой, раскрытой в патенте США №4956388, включенном в настоящий документ в качестве ссылки.

Другими аналогами SSRI являются 4-(2-фторфенил)-6-метил-2-пиперазинотиено[2,3-d]пиримидин; гидрохлорид 1,2,3,4-тетрагидро-N-метил-4-фенил-1-нафтиламина; гидрохлорид 1,2,3,4-тетрагидро-N-метил-4-фенил-(Е)-1-нафтиламина; гидрохлорид N,N-диметил-1-фенил-1-фталанпропиламина; гидрохлорид гамма-(4-(трифторметил)фенокси)бензолпропанамина; ВР 554; СР 53261; О-дезметилвенлафаксин; WY 45818; WY 45881; N-(3-фторфенил)пароксетин; Lu 19005 и SNRI, описанные в РСТ публикации № WO04/004734.

Стандартные рекомендованные дозировки SSRI

Стандартные рекомендованные дозировки для примеров SSRI приведены в таблице 2, ниже. Другие стандартные дозировки представлены, например, в Merck Manual of Diagnosis & Therapy (17-е изд., M.H. Beers et al., Merck & Co.) и в Physician's Desk Reference 2003 (57-е изд., Medical Economics Staff et al., Medical Economics Co., 2002).

ТАБЛИЦА 2
Соединение	Стандартная доза
Флуоксетин	20-80 мг в день
Сертралин	50-200 мг в день
Пароксетин	20-50 мг в день
Флувоксамин	50-300 мг в день
Циталопрам	10-80 мг в день
Эсциталопрам	10 мг четыре раза в день

Трициклические антидепрессанты

В другом варианте осуществления настоящего изобретения, в способах, композициях и наборах по настоящему изобретению используют трициклические антидепрессанты (ТСА) или их структурные или функциональные аналоги в комбинации с нестероидным иммунофилинзависимым иммунодепрессантом (NsIDI). Мапротилин (торговое наименование LUDIOMIL) представляет собой вторичный аминовый трициклический антидепрессант, который ингибирует обратный захват норэпинефрина и является структурно родственным имипрамину, дибензазепину. В то время как указанные агенты используются для лечения тревожности и депрессии, заявители в настоящем документе сообщают, что мапротилин повышает эффективность иммунодепрессанта, и она является пригодной для противовоспалительной комбинации по настоящему изобретению.

Мапротилин (торговое наименование LUDIOMIL) и структурные аналоги мапротилина имеют трехкольцевые молекулярные ядра (см. формулу (IV), выше). Указанные аналоги включают другие трициклические антидепрессанты (ТСА), имеющие вторичные аминовые боковые цепи (например, нортриптилин, протриптилин, дезипрамин), а также N-деметилированные метаболиты ТСА, имеющие третичные аминовые боковые цепи. Предпочтительно, структурные и функциональные аналоги мапротилина включают трициклические антидепрессанты, которые являются селективными ингибиторами обратного захвата норэпинефрина. Трициклические соединения, которые можно использовать в способах, композициях и наборах по настоящему изобретению, включают амитриптилин, амоксапин, кломипрамин, дезипрамин, дотиепин, доксепин, имипрамин, лофепрамин, мапротилин, миансерин, миртазапин, нортриптилин, октриптилин, оксапротилин, протриптилин, тримипрамин, 10-(4-метилпиперазин-1-ил)пиридо(4,3-b)(1,4)бензотиазепин; 11-(4-метил-1-пиперазинил)-5Н-дибензо(b,e)(1,4)диазепин; 5,10-дигидро-7-хлор-10-(2-морфолино)этил)-11Н-дибензо(b,e)(1,4)диазепин-11-он; 2-(2-(7-гидрокси-4-дибензо(b,f)(1,4)тиазепин-11-ил-1-пиперазинил)этокси)этанол; 2-хлор-11-(4-метил-1-пиперазинил)-5Н-дибензо(b,e)(1,4)диазепин; 4-(11Н-дибенз(b,e)азепин-6-ил)пиперазин; 8-хлор-11-(4-метил-1-пиперазинил)-5Н-дибензо(b,e)(1,4)диазепин-2-ол; моногидрохлорид 8-хлор-11-(4-метил-1-пиперазинил)-5Н-дибензо(b,e)(1,4)диазепина; (Z)-2-бутендиоат 5Н-дибензо(b,e)(1,4)диазепина; адиназолам; аминептин; амитриптилиноксид; бутриптилин; клотиапин; клозапин; демексиптилин; 11-(4-метил-1-пиперазинил)дибенз(b,f)(1,4)оксазепин; 11-(4-метил-1-пиперазинил)-2-нитродибенз(b,f)(1,4)оксазепин; моногидрохлорид 2-хлор-11-(4-метил-1-пиперазинил)дибенз(b,f)(1,4)оксазепина; дибензепин; 11-(4-метил-1-пиперазинил)дибензо(b,f)(1,4)тиазепин; диметакрин; флуацизин; флуперлапин; имипрамина N-оксид; иприндол; лофепрамин; мелитрацен; метапрамин; метиапин; метралиндол; миансерин; миртазапин; 8-хлор-6-(4-метил-1-пиперазинил)морфантридин; N-ацетиламоксапин; номифензин; норкломипрамин; норклозапин; ноксиптилин; опипрамол; оксапротилин; перлапин; пизотилин; пропизепин; кветиапин; хинупрамин; тианептин; томоксетин; флупентиксол; клопентиксол; пифлутиксол; хлорпротиксен и тиотиксен. Другие трициклические соединения описаны, например, в патентах США №№2554736; 3046283; 3310553; 3177209; 3205264; 3244748; 3271451; 3272826; 3282942; 3299139; 3312689; 3389139; 3399201; 3409640; 3419547; 3438981; 3454554; 3467650; 3505321; 3527766; 3534041; 3539573; 3574852; 3622565; 3637660; 3663696; 3758528; 3922305; 3963778; 3978121; 3981917; 4017542; 4017621; 4020096; 4045560; 4045580; 4048223; 4062848; 4088647; 4128641; 4148919; 4153629; 4224321; 4224344; 4250094; 4284559; 4333935; 4358620; 4548933; 4691040; 4879288; 5238959; 5266570; 5399568; 5464840; 5455246; 5512575; 5550136; 5574173; 5681840; 5688805; 5916889; 6545057; и 6600065, и фенотиазепиновые соединения, которые удовлетворяют формуле (I) патентных заявок США №№10/617424 или 60/504310.

ТСА обычно используют в виде однократных пероральных доз до эквивалентной 150 мг имипрамина. ТСА метаболизируются посредством окисления микросомальными ферментами печени с последующим конъюгированием с глюкуроновой кислотой. Метаболиты ТСА могут заменять вторичные аминовые трициклические антидепрессанты, такие как мапротилин, в противовоспалительной комбинации по настоящему изобретению. 10-гидроксиметаболиты ТСА являются особенно подходящими для использования в способах по настоящему изобретению, при условии, что они обладают биологической активностью оригинального трициклического антидепрессанта, но являются менее токсичными.

Стандартные рекомендованные дозировки ТСА

Обычно дозы мапротилина для пациента варьируют в зависимости от состояния пациента, но некоторые стандартные рекомендованные дозы приводятся в настоящем документе. Мапротилин, который в настоящее время доступен в форме 25, 50 и 100 мг таблеток, наиболее часто назначают в дозах 100-150 мг в день, хотя можно вводить стандартные рекомендованные дозы 1-25 мг в день, 25-100 мг в день, 100-150 мг в день, 150-225 мг в день или 225-350 мг в день. Большинство антидепрессантов хорошо всасываются после перорального введения, хотя возможно также внутримышечное введение некоторых ТСА (например, амитриптилина, кломипрамина).

Триклозан

В одном варианте осуществления в способах, композициях и наборах по настоящему изобретению используют триклозан или другой феноксифенол или его структурный или функциональный аналог в комбинации с нестероидным иммунофилинзависимым иммунодепрессантом (NsIDI).

Триклозан представляет собой хлорзамещенный феноксифенол, который действует как антибиотик широкого спектра. Заявители в настоящем документе сообщают, что триклозан также повышает эффективность иммунодепрессантов, таких как циклоспорин, и он является пригодным для противовоспалительной комбинации по настоящему изобретению для лечения иммуновоспалительного заболевания, пролиферативного заболевания кожи, реакции отторжения трансплантата органа или реакции «трансплантат против хозяина». Структурные аналоги триклозана включают хлорзамещенные феноксифенолы, такие как 5-хлор-2-(2,4-дихлорфенокси)фенол, гексахлорофен, дихлорофен, а также другие галогенированные гидроксидифенильные эфирные соединения. Функциональные аналоги триклозана включают клотримазол, а также различные антимикробные агенты, такие как сульфид селена, кетоконазол, триклокарбон, пиритион цинка, итраконазол, азиатская кислота, хинокитиол, мипироцин, клинацицина гидрохлорид, бензоилпероксид, бензилпероксид, миноциклин, октопирокс, циклопирокс, эритромицин, цинк, тетрациклин, азелаиновая кислота и ее производные, феноксиэтанол, этилацетат, клиндамицин, меклоциклин. Функциональные и структурные аналоги триклозана также описаны, например, в патентах США №№ 5043154, 5800803, 6307049 и 6503903.

Триклозан может достигать своей антибактериальной активности путем связывания и ингибирования бактериального фермента Fab1, который требуется для синтеза жирных кислот в бактериях. Структурные и функциональные аналоги триклозана, включая антибиотики, которые связывают Fab1, также могут быть подходящими для комбинаций по настоящему изобретению.

Стандартные рекомендованные дозировки триклозана

В то время как предложенные дозы будут варьировать в зависимости от состояния пациента, стандартные рекомендованные дозы приводятся ниже. Обычно пациент будет получать 3,24 мг на 1 кг, хотя количества от 0,5 до 3,24 или от 3,24 до 5,0 также можно использовать. Другие подходящие дозы триклозана включают 0,5 мг/кг, 1,0 мг/кг, 1,5 мг/кг, 2,0 мг/кг, 2,5 мг/кг, 3,0 мг/кг, 3,5 мг/кг, 4,0 мг/кг и 4,5 мг/кг для людей. Предпочтительно, триклозан применяют местно в композиции, содержащей от 0,5 до 3% триклозана. Другие пригодные композиции содержат 0,1%, 0,5%, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 7,5% или 10% триклозана.

Антигистаминные агенты

В еще одном варианте осуществления в способах, композициях и наборах по настоящему изобретению используют антагонист гистаминовых рецепторов (его или аналог) и нестероидный иммунофилинзависимый ингибитор для пациента, который нуждается в указанном лечении.

Антигистаминные агенты представляют собой соединения, которые блокируют действие гистамина. Классы антигистаминных агентов включают

(1) этаноламины (например, бромдифенгидрамин, карбиноксамин, клемастин, дименгидринат, дифенгидрамин, дифенилпиралин и доксиламин);

(2) этилендиамины (например, фенирамин, пириламин, трипеленнамин и трипролидин);

(3) фенотиазины (например, диэтазин, этопропазин, метдилазин, прометазин, триэтилперазин и тримепразин);

(4) алкиламины (например, акривастин, бромфенирамин, хлорфенирамин, дезбромфенирамин, дексхлорфенирамин, пирробутамин и трипролидин);

(5) пиперазины (например, буклизин, цетиризин, хлорциклизин, циклизин, меклизин, гидроксизин);

(6) пиперидины (например, астемизол, азатадин, ципрогептадин, дезлоратадин, фексофенадин, лоратадин, кетотифен, олопатадин, фениндамин и терфенадин);

(7) атипичные антигистаминные агенты (например, азеластин, левокабастин, метапирилен и фенилтоксамин).

В способах, композициях и наборах по настоящему изобретению можно использовать как неседатирующие, так и седатирующие антигистаминные агенты. Особенно желательными антигистаминными агентами для применения в способах, композициях и наборах по настоящему изобретению являются неседатирующие антигистаминные агенты, такие как лоратадин и дезлоратадин. Седатирующие антигистаминные агенты также можно использовать в способах, композициях и наборах по настоящему изобретению. Предпочтительными седатирующими антигистаминными агентами для использования в способах, композициях и наборах по настоящему изобретению являются азатадин, бромдифенгидрамин, хлорфенирамин, клемизол, ципрогептадин, дименгидринат, дифенгидрамин, доксиламин, меклизин, прометазин, пириламин, тиэтилперазин и трипеленнамин.

Другими антигистаминными агентами, подходящими для использования в способах, композициях и наборах по настоящему изобретению, являются акривастин, агистан, антазолин, астемизол, азеластин (например, азеластина гидрохлорид), бамипин, бепотастин, биетанаутин, бромфенирамин (например, бромфенирамина малеат), карбиноксамин (например, карбиноксамина малеат), цетиризин (например, цетиризина гидрохлорид), цетоксим, хлороциклизин, хлоропирамин, хлоротен, хлорфеноксамин, циннаризин, клемастин (например, клемастина фумарат), клобензепам, клобензтропин, клоцинизин, циклизин (например, циклизина гидрохлорид, циклизина лактат), дептропин, дексхлорфенирамин, дексхлорфенирамина малеат, дифенилпиралин, доксепин, эбастин, эмбрамин, эмедастин (например, эмедастина дифумарат), эпинастин, этимемазина гидрохлорид, фексофенадин (например, фексофенадина гидрохлорид), гистапирродин, гидроксизин (например, гидроксизина гидрохлорид, гидроксизина памоат), изопрометазин, изотипендил, левокабастин (например, левокабастина гидрохлорид), мебгидролин, меквитазин, метафурилен, метапирилен, метрон, мизоластин, олапатадин (например, олапатадина гидрохлорид), орфенадрин, фениндамин (например, фениндамина тартрат), фенирамин, фенилтолоксамин, п-метилдифенилгидрамин, пирробутамин, сетастин, таластин, терфенадин, тенилдиамин, тиазинамий (например, тиазинамия метилсульфат), тонзиламина гидрохлорид, толпропамин, трипролидин и тритоквалин.

Структурные аналоги антигистаминных агентов также можно использовать по настоящему изобретению. Аналоги антигистаминных агентов включают, без ограничения, 10-пиперазинилпропилфенотиазин, дигидрохлорид 4-(3-(2-хлорфенотиазин-10-ил)пропил)-1-пиперазинэтанола 1-(10-(3-(4-метил-1-пиперазинил)пропил)-10Н-фенотиазин-2-ил)-(9CI)-1-пропанон, 3-метоксиципрогептадин, гидрохлорид 4-(3-(2-хлор-10Н-фенотиазин-10-ил)пропил)пиперазин-1-этанола, 10,11-дигидро-5-(3-(4-этоксикарбонил-4-фенилпиперидин)пропилиден-5Н-дибензо(a,d)циклогептен, ацепрометазин, ацетофеназин, алимемазин (например, алимемазина гидрохлорид), аминопромазин, бензимидазол, бутаперазин, карфеназин, хлорфенэтазин, хлормидазол, цинпразол, дезметиластемизол, дезметилципрогептадин, диэтазин (например, диэтазина гидрохлорид), этопропазин (например, этопропазина гидрохлорид), гидрохлорид 2-(п-бромфенил-(п'-толил)метокси)-N,N-диметилэтиламина, метилбромид N,N-диметил-2-(дифенилметокси)этиламида, ЕХ-10-542А, фенэтазин, фупразол, метил 10-(3-(4-метил-1-пиперазинил)пропил)фенотиазин-2-илкетон, лерисетрон, медриламин, мезоридазин, метилпромазин, N-дезметилпрометазин, нилпразол, нортиоридазин, перфеназин (например, перфеназина энантат), 10-(3-диметиламинопропил)-2-метилтиофенотиазин, гидрохлорид 4-(дибензо(b,e)тиепин-6(11Н)илиден)-1-метилпиперидина, прохлорперазин, промазин, пропиомазин (например, пропиомазина гидрохлорид), ротоксамин, рупатадин, Sch 37370, Sch 434, текастемизол, тиазинамий, тиопропазат, тиоридазин (например, тиоридазина гидрохлорид) и 3-(10,11-дигидро-5Н-дибензо(a,d)циклогептен-5-илиден)тропан.

Другие соединения, которые являются пригодными для применения по настоящему изобретению, представляют собой AD-0261, AHR-5333, алинастин, арпромидин, ATI-19000, бермастин, биластин, Bron-12, каребастин, хлорфенамин, клофуренадин, корзум, DF-1105501, DF-11062, DF-1111301, EL-301, элбанизин, F-7946T, F-9505, HE-90481, HE-90512, гивенил, HSR-609, икотидин, КАА-276, KY-234, ламиакаст, LAS-36509, LAS-36674, левоцетиризин, левопротилин, метоклопрамид, NIP-531, ноберастин, оксатомид, PR-881-884A, квисултазин, рокастин, селенотифен, SK&F-94461, SODAS-HC, тагоризин, ТАК-427, темеластин, UCB-34742, UCB-35440, VUF-K-8707, Wy-49051 и ZCR-2060.

Также другие соединения, которые являются пригодными для применения по настоящему изобретению, описаны в патентах США №№3956296; 4254129; 4254130; 4282833; 4283408; 4362736; 4394508; 4285957; 4285958; 4440933; 4510309; 4550116; 4692456; 4742175; 4833138; 4908372; 5204249; 5375693; 5578610; 5581011; 5589487; 5663412; 5994549; 6201124 и 6458958.

Стандартные рекомендованные дозы антигистаминных агентов

Стандартные рекомендованные дозы для нескольких приведенных в качестве примера антигистаминных агентов показаны в таблице 3. Другие стандартные дозы указаны, например, в Merck Manual of Diagnosis & Therapy (17-е изд., M.H. Beers et al., Merck & Co.) и в Physicians' Desk Reference 2003 (57-е изд., Medical Economics Staff et al., Medical Economics Co., 2002).

ТАБЛИЦА 3
Соединение	Стандартная доза
Дезлоратадин	5 мг один раз в день
Тиэтилперазин	10 мг 1-3 раза в день
Бромдифенгидрамин	12,5-25 мг каждые 4-6 часов
Прометазин	25 мг два раза в день
Ципрогептадин	12-16 мг в день
Лоратадин	10 мг один раз в день
Клемизол	100 мг в/в или в/м
Азатадин	1-2 мг два раза в день
Цетиризин	5-10 мг один раз в день
Хлорфенирамин	2 мг каждые 6 часов или 4 мг каждые 6 часов
Дименгидрамин	50-100 мг каждые 4-6 часов
Дифенгидрамин	25 мг каждые 4-6 часов или 38 мг каждые 4-6 часов*
Доксиламин	25 мг один раз в день или 12,5 мг каждые четыре часа*
Фексофенадин	60 мг два раза в день или 180 мг один раз в день
Меклизин	25-100 мг в день
Пириламин	30 мг каждые 6 часов
Трипеленнамин	25-50 мг каждые 4-6 часов или 100 мг два раза в день (продолжительное высвобождение)*

Пример антагониста гистаминовых рецепторов: лоратадин

Лоратадин (CLARITIN) представляет собой трициклический пиперидин, который действует как селективный антагонист периферических гистаминовых рецепторов Н1. Заявители сообщают в настоящем документе, что лоратадин и его структурные и функциональные аналоги, такие как пиперидины, трициклические пиперидины, антагонисты гистаминовых рецепторов Н1, являются пригодными для использования в противовоспалительной комбинации по настоящему изобретению для лечения иммуновоспалительных заболеваний, реакции отторжения трансплантата органа и реакции «трансплантат против хозяина».

Функциональные и/или структурные аналоги лоратадина включают другие антагонисты гистаминовых рецепторов Н1, такие как AHR-11325, акривастин, антазолин, астемизол, азатадин, азеластин, бромфенирамин, каребастин, цетиризин, хлорфенирамин, хлорциклизин, клемастин, ципрогептадин, дезкарбоэтоксилоратадин, дексхлорфенирамин, дименгидринат, дифенилпиралин, дифенгидрамин, эбастин, фексофенадин, гидроксизин, кетотифен, лодоксамид, левокабастин, метдилазин, меквитазин, оксатомид, фенирамин, пириламин, прометазин, пириламин, сетастин, тазифиллин, темеластин, терфенадин, тримепразин, трипеленнамин, трипролидин, утризин и сходные соединения (описанные, например, в патентах США №№3956296, 4254129, 4254130, 4283408, 4362736, 4394508, 4285957, 4285958, 4440933, 4510309, 4550116, 4692456, 4742175, 4908372, 5204249, 5375693, 5578610, 5581011, 5589487, 5663412, 5994549, 6201124 и 6458958).

Лоратадин, цетиризин и фексофенадин представляют собой второе поколение антагонистов гистаминовых рецепторов Н1, которые не имеют седативных эффектов, присущих многим антагонистам гистаминовых рецепторов Н1 первого поколения. Пиперидиновые антагонисты гистаминовых рецепторов Н1 включают лоратадин, ципрогептадина гидрохлорид (PERIACTIN) и фениндиамина тартрат (NOLAHIST). Пиперазиновые антагонисты гистаминовых рецепторов Н1 включают гидроксизина гидрохлорид (ATARAX),гидроксизина памоат (VISTARIL), циклизина гидрохлорид (MAREZINE), циклизина лактат и меклизина гидрохлорид.

Стандартные рекомендованные дозы лоратадина

Композиции лоратадина для перорального введения включают таблетки, reditabs и сироп. Таблетки лоратадина содержат 10 мг микронизированного лоратадина. Сироп лоратадина содержит 1 мг/мл микронизированного лоратадина, а reditabs содержат 10 мг микронизированного лоратадина в таблетках, которые быстро распадаются во рту. В то время как предложенные дозировки будут варьировать в зависимости от состояния пациента, стандартные рекомендованные дозы приводятся ниже. Лоратадин обычно вводят один раз в день в дозе 10 мг, хотя другие суточные дозы, пригодные для использования в противовоспалительной комбинации по настоящему изобретению, включают 0,01-0,05 мг, 0,05-1 мг, 1-3 мг, 3-5 мг, 5-10 мг, 10-15 мг, 15-20 мг, 20-30 мг и 30-40 мг.

Лоратадин быстро всасывается после перорального введения. Он метаболизируется в печени до дезкарбоэтоксилоратадина системой цитохрома Р450 3А4 и цитохрома Р450 2D6. Метаболиты лоратадина являются также пригодными для использования в противовоспалительной комбинации по настоящему изобретению.

Фенотиазины

В другом варианте осуществления в способах, композициях и наборах по настоящему изобретению используют фенотиазин или его структурный или функциональный аналог в комбинации с нестероидным иммунофилинзависимым иммунодепрессантом (NsIDI).

Фенотиазины, которые являются пригодными для использования в способах, композициях и наборах по настоящему изобретению, включают соединения, имеющие общую формулу (V):

или их фармацевтически приемлемые соли, где R² выбран из группы, состоящей из CF₃, Cl, F, OCH₃, COCH₃, CN, OCF₃, COCH₂CH₃, CO(CH₂)₂CH₃ и SCH₂CH₃; R⁹ выбран из группы, состоящей из

каждый из R¹, R³, R⁴, R⁵, R⁶, R⁷ и R⁸ независимо представляет собой H, OH, F, OCF₃ или ОСН₃; и W выбран из группы, состоящей из

В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения фенотиазин представляет собой конъюгат фенотиазина, включающий фенотиазин, ковалентно связанный посредством линкера с массивной группой более 200 дальтон или заряженной группой менее 200 дальтон. Указанные конъюгаты сохраняют свою противовоспалительную активность in vivo и обладают менее выраженным действием на центральную нервную систему по сравнению с родительским фенотиазином. Конъюгаты фенотиазина, которые являются пригодными для способов, наборов и композиций по настоящему изобретению, представляют собой соединения, имеющие общую формулу (VI):

В формуле (VI) R² выбран из группы, состоящей из CF₃, галогена, OCH₃, COCH₃, CN, OCF₃, COCH₂CH₃, CO(CH₂)₂CH₃, S(O)₂CH₃, S(O)₂N(CH₃)₂ и SCH₂CH₃; A¹ выбран из группы, состоящей из G¹,

каждый из R¹, R³, R⁴, R⁵, R⁶, R⁷ и R⁸ независимо представляет собой H, OH, F, OCF₃ или ОСН₃; R³², R³³, R³⁴ и R³⁵ каждый независимо выбран из Н или С_1-6 алкила; W выбран из группы, состоящей из NO,

и G¹ представляет собой связь между фенотиазином и линкером, L.

Линкер L описывается формулой (VII):

В формуле (VII) G¹ представляет собой связь между фенотиазином и линкером, G² представляет собой связь между линкером и массивной группой или между линкером и заряженной группой, каждый из Z¹, Z², Z³ и Z⁴ независимо выбран из O, S и NR³⁹; R³⁹ представляет собой водород или С_1-6 алкил; каждый из Y¹ и Y² независимо выбран из карбонила, тиокарбонила, сульфонила, фосфорила или аналогичных кислотообразующих групп; o, p, s, t, u и v каждый независимо представляет собой 0 или 1; и R⁹ представляет собой С_1-6 алкил, линейный или разветвленныйгетероалкил из 1-10 атомов, С_2-10 алкен, С_2-10 алкин, С_5-10 арил, циклическую систему из 3-10 атомов, -(СН₂СН₂O)_qCH₂CH₂-, где q представляет собой целое число от 1 до 4, или химическую связь, связывающую G¹-(Z¹)_o-(Y¹)_u-(Z²)_s с (Z³)_t-(Y²)_v-(Z⁴)_p-G².

Массивной группой может быть натуральный полимер или синтетический полимер. Натуральные полимеры, которые можно использовать, включают, без ограничения, гликопротеины,полипептиды или полисахариды. Желательно, когда массивная группа включает натуральный полимер, натуральный полимер выбран из альфа-1-кислого гликопротеина и гиалуроновой кислоты. Синтетические полимеры, которые можно использовать в качестве массивных групп, включают, без ограничения, полиэтиленгликоль и синтетический полипептид N-hxg.

Наиболее часто назначаемым членом фенотиазинового семейства является хлорпромазин, который имеет следующую структуру:

Хлорпромазин представляет собой фенотиазин, который длительное время использовали для лечения психотических расстройств. Фенотиазины включают функциональные и структурные аналоги хлорпромазина, такие как ацепромазин, хлорфенетазин, хлорпромазин, циамемазин, энантат, флуфеназин, мепазин,мезоридазина бесилат, метотримепразин, метоксипромазин, норхлорпромазин, перазин, перфеназин, прохлорперазин, прометазин, пропиомазин, путаперазин, тиэтилперазин, тиопропазат, тиоридазин, трифторперазин или трифлупромазин (или любая их соль из указанных выше); и функциональные аналоги, которые действуют как антагонисты допаминовых рецепторов D2 (например, сульприд, пимозид, спиперон, клебоприд, бупропион и галоперидол).

Хлорпромазин в настоящее время доступен в следующих формах: таблетках, капсулах, суппозиториях, пероральных концентратах и сиропах, а также в форме композиций для инъекций.

Поскольку хлорпромазин подвергается в значительной степени метаболической трансформации в ряд метаболитов, которые могут быть терапевтически активными, указанные метаболиты можноиспользовать вместо хлорпромазина в противовоспалительной комбинации по настоящему изобретению. Метаболизм хлорпромазина включает, например, окислительное N-деметилирование, в результате которого получается соответствующий первичный и вторичный амин, ароматическое окисление, в результате которого получается фенол, N-окисление, в результате которого получается N-оксид, S-окисление, в результате которого получается сульфоксид или сульфон, окислительное дезаминирование аминопропильной боковой цепи, в результате которого получаются фенотиазиновые ядра, и глюкуронидация фенольных гидроксильных групп и третичной аминогруппы, в результате которой получается четвертичный аммониевый глюкуронид.

В других примерах метаболитов хлорпромазина, пригодных для противовоспалительной комбинации по настоящему изобретению, каждая из позиций 3, 7 и 8 фенотиазина может быть независимо замещена гидроксильной или метоксильной частью.

Другим фенотиазином является этопропазин (торговое наименование PARSITAN), антихолинергический фенотиазин, который используют в качестве антидискинетика для лечения двигательных расстройств, таких как болезнь Паркинсона. Этопропазин также обладает антигистаминными свойствами. Заявители в настоящем документе сообщают, что этопропазин также повышает эффективность иммунодепрессантов, таких как циклоспорины. В противоположность антипсихотическим фенотиазинам, которые имеют три атома углерода между позицией 10 центрального кольца и первым атомом азота аминогруппы боковой цепи на указанной позиции, фенотиазины с сильным антихолинергическим действием (например, этопропазин, диэтазин) имеют только два атома углерода, отделяющие аминогруппу от позиции 10 центрального кольца.

Структурные аналоги этопропазина включают трифторперазина дигидрохлорид, тиоридазина гидрохлорид и прометазина гидрохлорид. Дополнительные структурные аналоги этопропазина включают 10-[2,3-бис(диметиламино)пропил]фенотиазин, гидрохлорид 10-[2,3-бис(диметиламино)пропил]фенотиазина, 10-[2-(диметиламино)пропил]фенотиазин, гидрохлорид 10-[2-(диметиламино)пропил]фенотиазина и 10-[2-(диэтиламино)этил]фенотиазин и их смеси (см., например, патент США №4833138).

Этопропазин действует путем ингибирования бутирилхолинэстеразы. Функциональные аналоги этопропазина включают другие антихолинергические соединения, такие как Artane (тригексифенидил), Cogentin (бензтропин), бипериден (патент США №5221536), карамифен, этопропазин, проциклидин (Kemadrin) и тригексифенидил. Антихолинергические фенотиазины в значительной степени метаболизируются, главным образом, до N-дезалкилированных и гидроксилированных метаболитов. Метаболиты этопропазина могут заменять этопропазин в противовоспалительной комбинации по настоящему изобретению.

Стандартные рекомендованные дозы фенотиазина

Обычно дозировка хлорпромазина варьирует в зависимостиотсостояния пациента, но некоторые стандартные рекомендованные дозы приведены ниже. Хлорпромазин можно вводить перорально, посредством суппозитория или инъекцией. Часто дозы вводят с интервалами 4-6 часов в течение дня. Каждая доза обычно составляет 0,25-0,5 мг, 0,5-1,0 мг, 1-5 мг, 0,5-2 мг, 5-10 мг, 10-25 мг, 25-50 мг, 50-75 мг или 75-100 мг. Обычно суммарная доза составляет 0,25 г, 0,50 г, 0,75 г, 1,0 г, 1,5 г или 2,0 г в день.

Этопропазин, который в настоящее время доступен в форме 10 и 50 мг таблеток, обычно вводят перорально. Сначала пациентам обычно назначают 50 мг дозу этопропазина один или два раза в день. Другие стандартные рекомендованные дозы этопропазина составляют 1-10 мг в день, 10-25 мг в день, 50-100 мг в день, 100-400 мг в день, 500-600 мг в день или 600-700 мг в день.

Агонисты мю-опиоидных рецепторов

В еще одном варианте осуществления настоящего изобретения, в способах, композициях и наборах по настоящему изобретению используют агонист мю-опиоидных рецепторов (или его аналог) и нестероидный иммунофилинзависимый ингибитор для пациента, который нуждается в указанном лечении. Лоперамида гидрохлорид (IMMODIUM) представляет собой агонист мю-опиоидных рецепторов, пригодный для лечения диареи (патент США №3714159). Заявители в настоящем документе сообщают, что лоперамид и аналоги лоперамида повышают эффективность иммунодепрессанта и являются пригодными для лечения иммуновоспалительного заболевания, реакции отторжения трансплантата органа или реакции «трансплантат против хозяина». Лоперамид представляет собой пиперидиновое бутирамидное производное, которое является родственным меперидину и дифеноксилату. Он действует путем расслабления гладкой мускулатуры и замедления перистальтики кишечника. Другие функционально и/или структурно родственные соединения включают меперидин и дифеноксилат, функциональные и структурные аналоги лоперамида описаны, например, в патентах США №№4066654, 4069223, 4072686, 4116963, 4125531, 4194045, 4824853, 4898873, 5143938, 5236947, 5242944, 5849761 и 6353004. Функциональные аналоги лоперамида включают пептидные и низкомолекулярные агонисты мю-опиоидных рецепторов (описаны в патенте США №5837809). Указанные агенты также являются пригодными для использования в противовоспалительной комбинации по настоящему изобретению. Лоперамид действует путем связывания опиоидных рецепторов в кишечнике и изменения перистальтики желудочно-кишечного тракта.

Стандартные рекомендованные дозы лоперамида

Лоперамид в настоящее время доступен в пероральных композициях в форме 2 мг таблеток. В то время как предложенные дозировки будут варьировать в зависимости от состояния пациента, стандартные рекомендованные дозы приводятся ниже. Обычно доза для взрослых составляет первоначально 4 мг, с последующими 2 мг дозами, или 16 мг в день. Другие подходящие дозы включают 0,5-1 мг, 1-2 мг, 2-4 мг, 4-8 мг, 8-12 мг или 12-16 мг.

Кортикостероиды

Если желательно, композиции и способы по настоящему изобретению можно использовать с обычными лекарственными средствами, включая кортикостероиды. Один или более кортикостероидов можно вводить в способе по настоящему изобретению или можно изготавливать с нестероидным иммунофилинзависимым усилителем, или его аналогом, или метаболитом, в виде композиции по настоящему изобретению. Подходящие кортикостероиды включают 11-альфа,17-альфа,21-тригидроксипрегн-4-ен-3,20-дион; 11-бета,16-альфа,17,21-тетрагидроксипрегн-4-ен-3,20-дион; 11-бета,16-альфа,17,21-тетрагидроксипрегн-1,4-диен-3,20-дион; 11-бета,17-альфа,21-тригидрокси-6-альфа-метилпрегн-4-ен-3,20-дион; 11-дегидрокортикостерон; 11-дезоксикортизол; 11-гидрокси-1,4-андростадиен-3,17-дион; 11-кетотестостерон; 14-гидроксиандрост-4-ен-3,6,17-трион; 15,17-дигидроксипрогестерон; 16-метилгидрокортизон; 17,21-дигидрокси-16-альфа-метилпрегна-1,4,9(11)-триен-3,20-дион; 17-альфа-гидроксипрегн-4-ен-3,20-дион; 17-альфа-гидроксипрегненолон; 17-гидрокси-16-бета-метил-5-бета-прегн-9(11)-ен-3,20 дион; 17-гидрокси-4,6,8(14)-прегнатриен-3,20-дион; 17-гидроксипрегна-4,9(11)диен-3,20-дион; 18-гидроксикортикостерон; 18-гидроксикортизон; 18-оксокортизол; 21-дезоксиальдостерон; 21-дезоксикортизон; 2-дезоксиэкдизон; 2-метилкортизон; 3-дегидроэкдизон; 4-прегнен-17-альфа,20-бета,21-триол-3,11-дион; 6,17,20-тригидроксипрегн-4-ен-3-он; 6-альфа-гидроксикортизол; 6-альфа-фторпреднизолон, 6-альфа-метилпреднизолон, 6-альфа-метилпреднизолона 21-ацетат, 6-альфа-метилпреднизолона 21-гемисукцинатная натриевая соль, 6-бета-гидроксикортизол, 6-альфа,9-альфа-дифторпреднизолона 21-ацетат 17 бутират, 6-гидроксикортикостерон; 6-гидроксидексаметазон; 6-гидроксипреднизолон; 9-фторкортизон; альклометазона дипропионат; альдостерон; альгестон; альфадерм; амадинон; амцинонид; анагестон; андростендион; анекортава ацетат; беклометазон; беклометазона дипропионат; беклометазона дипропионата моногидрат; бетаметазона 17-валерат; бетаметазон-натрий ацетат; бетаметазон-натрий фосфат; бетаметазона валерат; боластерон; будесонид; калустерон; хлормадинон; хлорпреднизон; хлорпреднизона ацетат; холестерин; клобетазол; клобетазола пропионат; клобетазон; клокортолон; клокортолона пивалат; клогестон; клопреднол; кортикостерон; кортизол; кортизола ацетат; кортизола бутират; кортизола ципионат; кортизола октаноат; кортизол-натрий фосфат; кортизол-натрий сукцинат; кортизола валерат; кортизон; кортизона ацетат; кортодоксон; датураолон; дефлазакорт; 21-дезоксикортизол; дегидроэпиандростерон; делмадинон; дезоксикортикостерон; депродон; дезцинолон; десонид; дезоксиметазон; дексафен; дексаметазон; дексаметазона 21-ацетат; дексаметазона ацетат; дексаметазон-натрий фосфат; дихлоризон; дифлоразон; дифлоразона диацетат; дифлукортолон; дигидроэлатерицин а; домопреднат; доксибетазол; экдизон; экдистерон; эндризон; эноксолон; флуцинолон; флудрокортизон; флудрокортизона ацетат; флугестон; флуметазон; флуметазона пивалат; флумоксонид; флунисолид; флуоцинолон; флуоционолона ацетонид; флуоцинонид; 9-фторкортизон; флуокортолон; фторгидроксиандростендион; фторметолон; фторметолона ацетат; флуоксиместерон; флупредниден; флупреднизолон; флурандренолид; флутиказон; флутиказона пропионат; формеболон; форместан; формокортал; гестонорон; глидеринин; галцинонид; гирканозид; галометазон; галопредон; галопрогестерон; гидрокортиозона ципионат; гидрокортизон; гидрокортизона 21-бутират; гидрокортизона ацепонат; гидрокортизона ацетат; гидрокортизона бутепрат; гидрокортизона бутират; гидрокортизона ципионат; гидрокортизона гемисукцинат; гидрокортизона пробутат; гидрокортизон-натрий фосфат; гидрокортизон-натрий сукцинат; гидрокортизона валерат; гидроксипрогестерон; инокостерон; изофлупредон; изофлупредона ацетат; изопредниден; меклоризон; мекортолон; медрогестон; медроксипрогестерон; медризон; мегестрол; мегестрола ацетат; меленгестрол; мепреднизон; метандростенолон; метилпреднизолон; метилпреднизолона ацепонат; метилпреднизолона ацетат; метилпреднизолона гемисукцинат; метилпреднизолон-натрий сукцинат; метилтестостерон; метриболон; мометазон; мометазона фуроат; мометазона фуроата моногидрат; низон; номегестрол; норгестомет; норвинистерон; оксиместерон; параметазон; параметазона ацетат; понастерон; преднизоламат; преднизолон; преднизолона 21-гемисукцинат; преднизолона ацетат; преднизолона фарнезилат; преднизолона гемисукцинат; преднизолон-21(бета-D-глюкуронид); преднизолона метасульфобензоат; преднизолона натрийфосфат; преднизолона стеаглат; преднизолона тебутат; преднизолона тетрагидрофталат; преднизон; преднивал; преднилиден; прегненолон; процинонид; тралонид; прогестерон; промегестон; рапонтистерон; римексолон; роксиболон; рубростерон; стизофиллин; тиксокортол; топтерон; триамцинолон; триамцинолона ацетонид; триамцинолона ацетонида 21-пальмитат; триамцинолона диацетат; триамцинолона гексацетонид; тримегестон; туркестерон и вортманнин.

Стандартные рекомендованные дозы для различных стероидных комбинаций представлены в таблице 4.

ТАБЛИЦА 4 Стандартные рекомендованные дозы кортикостероидов
Показание	Путь	Лекарственное средство	Доза	Схема
Псориаз	перорально	преднизолон	7,5-60 мг	в день или разделенными дозами два раза в день
	перорально	преднизон	7,5-60 мг	в день или разделенными дозами два раза в день
Астма	ингаляция	беклометазона дипропионат	42 мкг на одно срабатывание баллончика	4-8 срабатываний баллончика два раза в день
	ингаляция	будесонид	(200 мкг/ингаляция)	1-2 ингаляции два раза в день
	ингаляция	флунизолид	(250 мкг на одно срабатывание баллончика)	2-4 срабатывания баллончика два раза в день
	ингаляция	флутиказона пропионат	(44, 110 или 220 мкг на одно срабатывание баллончика)	2-4 срабатывания баллончика два раза в день
	ингаляция	триамцинолона ацетонид	(100 мкг на одно срабатывание баллончика)	2-4 срабатывания баллончика два раза в день
ХОЗЛ	перорально	преднизон	30-40 мг	в день
Болезнь Крона	перорально	будесонид	9 мг	в день
Язвенный колит	перорально	преднизон	40-60 мг	в день
	перорально	гидрокортизон	300 мг (в/в)	в день
	перорально	метилпреднизолон	40-60 мг	в день
Ревматоидный артрит	перорально	преднизон	7,5-10 мг	в день

Другие стандартные дозы кортикостероидов приведены, например, в Merck Manual of Diagnosis & Therapy (17-е изд., M.H. Beers et al., Merck & Co.) и в Physicians' Desk Reference 2003 (57-е изд., Medical Economics Staff et al., Medical Economics Co., 2002). В одном варианте осуществления настоящего изобретения доза кортикостероида составляет дозу, эквивалентную дозе преднизолона, как определено в настоящем документе. Например, низкая доза кортикостероида может рассматриваться как доза, эквивалентная низкой дозе преднизолона.

Модуляторы стероидных рецепторов

Необязательно, композиции и способы по настоящему изобретению можно использовать в комбинации с модуляторами стероидных рецепторов (например, антагонистами и агонистами) в качестве замены кортикостероида или дополнительно к нему. Таким образом, в одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к комбинации NsIDI (или его аналога или метаболита) и NsIDIE и, необязательно, модулятора глюкокортикоидных рецепторов или модулятора других стероидных рецепторов и к способам лечения с их помощью иммуновоспалительных заболеваний.

Модуляторы глюкокортикоидных рецепторов, которые можно использовать в способах, композициях и наборах по настоящему изобретению, включают соединения, описанные в патентах США №№6380207, 6380223, 6448405, 6506766 и 6570020, в патентных заявках США №№ 20030176478, 20030171585, 20030120081, 20030073703, 2002015631, 20020147336, 20020107235, 20020103217 и 20010041802 и в РСТ публикации № WO00/66522, каждая из которых включена в настоящий документ в качестве ссылки. Другие модуляторы стероидных рецепторов, которые также можно использовать в способах, композициях и наборах по настоящему изобретению, включают соединения, описанные в патентах США №№6093821, 6121450, 5994544, 5696133, 5696127, 5693647, 5693646, 5688810, 5688808 и 5696130, каждый из которых включен в настоящий документ в качестве ссылки.

Другие соединения

Другие соединения, которые можно использовать дополнительно к комбинации NsIDI/NsIDIE в способах, композициях и наборах по настоящему изобретению, включают А-348441 (Karo Bio), экстракт коры надпочечников (GlaxoSmithKline), альсактид (Aventis), амебукорт (Schering AG), амелометазон (Taisho), ATSA (Pfizer), битолтерол (Elan), CBP-2011 (InKine Pharmaceutical), цебарацетам (Novartis), CGP-13774 (Kissei), циклесонид (Altana), циклометазон (Aventis), клобетазона бутират (GlaxoSmithKline), клопреднол (Hoffmann-La Roche), коллисмицин А (Kirin), кукурбитацин Е (NIH), дефлазакорт (Aventis), депродона пропионат (SSP), дексаметазона ацефурат (Schering-Plough), дексаметазона линолеат (GlaxoSmithKline), дексаметазона валерат (Abbott), дифлупреднат (Pfizer), домопреднат (Hoffmann-La Roche), эбиратид (Aventis), этипреднола диклоацетат (IVAX), флуазакорт (Vicuron), флумоксонид (Hoffmann-La Roche), флуокортинбутил (Schering AG), флуокортолона моногидрат (Schering AG), GR-250495X (GlaxoSmithKline), галометазон (Novartis), галопредон (Dainippon), HYC-141 (Fidia), икометазона энбутат (Hovione), интроцинонид (AstraZeneca), L-6485 (Vicuron), Lipocort (Draxis Health), лоцикортон (Aventis), меклоризон (Schering-Plough), нафлокорт (Bristol-Myers Squibb), NCX-1015 (NicOx), NCX-1020 (NicOx), NCX-1022 (NicOx), никокортонид (Yamanouchi), NIK-236 (Nikken Chemicals), NS-126 (SSP), Org-2766 (Akzo Nobel), Org-6632 (Akzo Nobel), P16CM, пропилместеролон (Schering AG), RGH-1113 (Gedeon Richter), рофлепонид (AstraZeneca), рофлепонида пальмитат (AstraZeneca), RPR-106541 (Aventis), RU-26559 (Aventis), Sch-19457 (Schering-Plough), T25 (Matrix Therapeutics), TBI-PAB (Sigma-Tau), тикабезона пропионат (Hoffmann-La Roche), тифлуадом (Solvay), тимобезон (Hoffmann-La Roche), TSC-5 (Takeda) и ZK-73634 (Schering AG).

Лечение

Настоящее изобретение относится к способам подавления секреции провоспалительных цитокинов как к средству для лечения иммуновоспалительного заболевания, пролиферативного заболевания кожи, реакции отторжения трансплантата органа или реакции «трансплантат против хозяина». Подавление секреции цитокинов достигается введением одного или более NsIDIE в комбинации с одним или более NsIDI. В то время как примеры описывают конкретные NsIDIE и NsIDI, понятно, что часто желательной является комбинация множества агентов. Например, метотрексат, гидроксихлорохин и сульфазин часто вводят для лечения ревматоидного артрита. Дополнительные лекарственные средства описаны ниже.

Хроническое обструктивное заболевание легких

В одном варианте осуществления способы, композиции и наборы по настоящему изобретению используют для леченияхронического обструктивного заболевания легких (ХОЗЛ-COPD). Если желательно, один или более агентов, обычно используемых для лечения ХОЗЛ, можно использовать вместо или вместе с NsIDI в способах, композициях и наборах по настоящему изобретению. Указанные агенты включают ксантины (например, теофиллин), антихолинергические соединения (например, ипратропий, тиотропий), биопрепараты, низкомолекулярные иммуномодуляторы и агонисты бета-рецепторов/бронходилятаторы (например, ибутерола сульфат, битолтерола мезилат, эпинефрин, формотерола фумарат, изопротеронол, левалбутерола гидрохлорид, метапротеренола сульфат, пирбутерола ацетат, сальметерола ксинафоат и тербуталин). Таким образом, в одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к комбинации трициклического соединения и бронходилятатора и к способам лечения ХОЗЛ с ее помощью.

Псориаз

Способы, композиции и наборы по настоящему изобретению можно использовать для лечения псориаза. Если желательно, один или более антипсориатических агентов, обычно используемых для лечения псориаза, можно использовать вместо или вместе с NsIDI в способах, композициях и наборах по настоящему изобретению. Указанные агенты включают биопрепараты (например, алефацепт, инфликсамаб, аделимумаб, эфализумаб, этанерцепт и CDP-870), низкомолекулярные иммуномодуляторы (например, VX 702, SCIO 469, дорамапимод, RO 30201195, SCIO 323, DPC 333, праналказан, микофенолят и меримеподиб), нестероидные иммунофилинзависимые иммунодепрессанты (например, циклоспорин, такролимус, пимекролимус и ISAtx247), аналоги витамина D (например, кальципотриен, кальципотриол), псоралены (например, метоксален), ретиноиды (например, ацитретин, тазоретен), DMARD (например, метотрексат) и антралин. Таким образом, в одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к комбинации трициклического соединения и антипсориатического агента и к способам лечения псориаза с ее помощью.

Воспалительное заболевание кишечника

Способы, композиции и наборы по настоящему изобретению можно использовать для лечения воспалительного заболевания кишечника. Если желательно, один или более агентов, обычно используемых для лечения воспалительного заболевания кишечника, можно использовать вместо или вместе с NsIDI в способах, композициях и наборах по настоящему изобретению. Указанные агенты включают биопрепараты (например, инфликсамаб, аделимумаб и CDP-870), низкомолекулярные иммуномодуляторы (например, VX 702, SCIO 469, дорамапимод, RO 30201195, SCIO 323, DPC 333, праналказан, микофенолят и меримеподиб), нестероидные иммунофилинзависимые иммунодепрессанты (например, циклоспорин, такролимус, пимекролимус и ISAtx247), 5-аминосалициловую кислоту (например, мезаламин, сульфасалазин, динатрий-балсалазид и олсалазин-натрий), DMARD (например, метотрексат и азатиоприн) и алосетрон. Таким образом, в одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к комбинации трициклического соединения и одного из вышеупомянутых агентов и к способам лечения воспалительного заболевания кишечника с ее помощью.

Ревматоидный артрит

Способы, композиции и наборы по настоящему изобретению можно использовать для лечения ревматоидного артрита. Если желательно, один или более агентов, обычно используемых для лечения ревматоидного артрита, можно использовать вместо или вместе с NsIDI в способах, композициях и наборах по настоящему изобретению. Указанные агенты включают NSAID (например, напроксен-натрий, диклофенак-натрий, диклофенак-калий, аспирин, сулиндак, дифлунизал, пироксикам, индометацин, ибупрофен, набуметон, холин-магний-трисалицилат, салицилат натрия, салицилсалициловую кислоту (салсалат), фенопрофен, флурбипрофен, кетопрофен, меклофенамат-натрий, мелоксикам, оксапрозин, сулиндак и толметин), ингибиторы СОХ-2 (например, рофекоксиб, целекоксиб, вальдекоксиб и лумиракоксиб), биопрепараты (например, инфликсамаб, аделимумаб, этанерцепт, CDP-870, ритуксимаб и атлизумаб), низкомолекулярные иммуномодуляторы (например, VX 702, SCIO 469, дорамапимод, RO 30201195, SCIO 323, DPC 333, праналказан, микофенолят и меримеподиб), нестероидные иммунофилинзависимые иммунодепрессанты (например, циклоспорин, такролимус, пимекролимус и ISAtx247), 5-аминосалициловую кислоту (например, мезаламин, сульфасалазин, динатрий-балсалазид и олсалазин-натрий), DMARD (например, метотрексат, лефлуномид, миноциклин, ауранофин, золото-натрий тиомалат, ауротиоглюкоза и азатиоприн), гидроксихлорохина сульфат и пеницилламин). Таким образом, в одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к комбинации трициклического соединения и любого из вышеупомянутых агентов и к способам лечения ревматоидного артрита с ее помощью.

Астма

Способы, композиции и наборы по настоящему изобретению можно использовать для леченияастмы. Если желательно, один или более агентов, обычно используемых для лечения астмы, можно использовать вместо или вместе с NsIDI в способах, композициях и наборах по настоящему изобретению. Указанные агенты включают бета-2 агонисты/бронходилятаторы/модификаторы лейкотриенов (например, зафирлукаст, монтелукаст и зилейтон), биопрепараты (например, омализумаб), низкомолекулярные иммуномодуляторы, антихолинергические соединения, ксантины, эфедрин, гуаифенезин, кромолин-натрий, недокромил-натрий и иодид калия. Таким образом, в одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к комбинации трициклического соединения и любого из вышеупомянутых агентов и к способам лечения астмы с ее помощью.

Введение

В конкретных вариантах осуществления любого из способов по настоящему изобретению NsIDI и NsIDIE вводят в пределах 10 дней друг от друга, в пределах пяти дней друг от друга, в пределах двадцати четырех часов друг от друга или одновременно. Соединения могут быть изготовлены в форме единой композиции или могут быть изготовлены и введены по отдельности. Одно или оба соединения можно вводить в низкой дозе или в высокой дозе, каждая из которых определена в настоящем документе. Может быть желательным введение пациенту других соединений, таких как кортикостероид, NSAID (например, напроксен-натрий, диклофенак-натрий, диклофенак-калий, аспирин, сулиндак, дифлунизал, пироксикам, индометацин, ибупрофен, набуметон, холин-магний-трисалицилат, салицилат натрия, салицилсалициловая кислота, фенопрофен, флурбипрофен, кетопрофен, меклофенамат-натрий, мелоксикам, оксапрозин, сулиндак и толметин), ингибитор СОХ-2 (например, рофекоксиб, целекоксиб, вальдекоксиб и лумиракоксиб), модулятор глюкортикоидных рецепторов или DMARD. Комбинация лекарственных средств по настоящему изобретению является особенно пригодной для лечения иммуновоспалительных заболеваний в комбинации с другими антицитокиновыми агентами или агентами, которые модулируют иммунный ответ для положительного воздействия на заболевание, такими как агенты, которые влияют на адгезию клеток или биопрепараты (т.е. агенты, которые блокируют действие IL-6, IL-1, IL-2, IL-12, IL-15 или TNF (например, этанерцепт, аделимумаб, инфликсимаб или CDP-870). В данном примере (что касается агентов, блокирующих эффект TNFα) комбинированная терапия уменьшает выработку цитокинов, этанерцепт или инфликсимаб действуют на оставшуюся фракцию воспалительных цитокинов, обеспечивая усиленное лечение.

Терапия по настоящему изобретению может осуществляться в отдельности или в сочетании с другой терапией и может проводиться на дому, в кабинете врача, клинике, амбулаторном отделении больницы или в больнице. Лечение, необязательно, начинают в больнице, так, чтобы врач мог непосредственно наблюдать эффекты терапии и вносить те изменения в лечение, которые потребуются, или его начинают в амбулаторных условиях. Продолжительность терапии зависит от типа заболевания или расстройства, возраста и состояния пациента, стадии и типа заболевания пациента и от того, как пациент реагирует на лечение. Кроме того, человек, имеющий более высокий риск развития воспалительного заболевания (например, человек, претерпевающий возрастные гормональные изменения), может получать лечение для ингибирования или задержки начала симптомов.

Пути введения при различных вариантах осуществления настоящего изобретения включают, без ограничения, местное, чрескожное и системное введение (такое как внутривенное, внутримышечное, подкожное, ингаляционное, ректальное, буккальное, вагинальное, интраперитонеальное, внутрисуставное, офтальмическое или пероральное введение). Используемый в настоящем документе термин «системное введение» относится ко всем некожным путям введения и конкретно включает местный и чрескожный пути введения.

В комбинированной терапии дозировка и частота введения каждого компонента комбинации могут контролироваться независимо. Например, одно соединение можно вводить три раза в день, в то время как второе соединение можно вводить один раз в день. Комбинированную терапию можно осуществлять перемежающимися циклами, которые включают периоды отмены лечения, так что организм пациента имеет возможность восстановиться от непредвиденных побочных эффектов. Соединение также можно изготавливать в форме единой композиции таким образом, что за одно введение доставляют оба соединения.

Изготовление фармацевтических композиций

Введение комбинации по настоящему изобретению (например, комбинации NsIDI/NsIDIE) можно осуществлять любыми подходящими средствами, которые приводят к подавлению уровней провоспалительных цитокинов в области-мишени. Соединение может содержаться в любом подходящем количестве в любом подходящем носителе и обычно присутствует в количестве 1-95% мас. от общей массы композиции. Композицию можно изготавливать в виде такой лекарственной формы, которая является пригодной для перорального, парентерального (например, внутривенного, внутримышечного), ректального, кожного, назального, вагинального, ингаляционного, с помощью накожного пластыря или окулярного пути введения. Так, композиция может быть в форме, например, таблеток, капсул, пилюль, порошков, гранулятов, суспензий, эмульсий, растворов, гелей, включая гидрогели, паст, мазей, кремов, пластырей, микстур, осмотических устройств доставки, суппозиториев, клизм, препаратов для инъекций, имплантатов, спреев или аэрозолей. Фармацевтические композиции можно изготавливать согласно обычной фармацевтической практике (см., например, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20-е издание, 2000 г., A.R. Gennaro, Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, и Encyclopedia of Pharmaceutical Technology, изд. J. Swarbrick и J.C. Boylan, 1988-1999, Marcel Dekker, New York).

Каждое соединение комбинации может быть изготовлено в виде композиции с использованием ряда способов, известных специалистам. Например, первый и второй агенты могут быть изготовлены в виде композиции вместе или по отдельности. Желательно первый и второй агенты изготавливать в виде композиции вместе, для одновременного или почти одновременного введения агентов. Указанные комбинированные композиции могут включать NsIDI и NsIDIE, изготовленные в виде композиции вместе в форме пилюли, капсулы, жидкости и т.п. Следует понимать, что когда идет речь об изготовлении композиции «комбинации NsIDI/NsIDIE», технология изготовления также подходит для изготовления композиций отдельных агентов комбинации, а также других комбинаций по настоящему изобретению. С помощью использования различных стратегий изготовления композиций для различных агентов можно подобрать удобно совпадающие фармакокинетические профили для каждого агента.

Индивидуально или по отдельности изготовленные композиции агента могут быть упакованы вместе в виде набора. Неограничивающие примеры включают наборы, которые содержат, например, две пилюли, пилюлю и порошок, суппозиторий и жидкость во флаконе, два крема для местного применения и т.п. Набор может включать необязательные компоненты, которые помогают введению стандартной дозы пациентам, такие как флаконы для растворения порошкообразных форм, шприцы для инъекций, изготовленные по заказу IV системы доставки, ингаляторы и т.п. Кроме того, набор со стандартными дозами может содержать инструкции по приготовлению и введению композиций. Набор можно изготавливать в виде стандартной дозы для одноразового использования одним пациентом, для многоразового использования конкретным пациентом (с постоянной дозой или с изменением содержания отдельных соединений по мере прогрессирования терапии); или набор может содержать множество доз, подходящих для введения множеству пациентов («большие упаковки»). Компоненты набора могут быть собраны в картонные коробки, блистерные упаковки, бутылки, тубы и т.п.

Композиции с контролируемым высвобождением

Введение комбинации NsIDI/NsIDIE по настоящему изобретению, в которой один или оба активных агента изготовлены в виде композиции таким образом, что происходит их контролируемое высвобождение, является полезным, когда NsIDI или имеет (i) узкий терапевтический индекс (например, разница между концентрацией в плазме, приводящей к вредным побочным эффектам или токсическим реакциям, и концентрацией в плазме, приводящей к терапевтическому эффекту, является маленькой; обычно терапевтический индекс TI определяется как соотношение средней летальной дозы (LD₅₀) и действующей средней дозы (ED₅₀)); (ii) узкий интервал всасывания в желудочно-кишечном тракте; (iii) короткий биологический полупериод существования или (iv) фармакокинетический профиль каждого компонента должен быть модифицирован для максимизации вклада каждого агента при совместном применении в количество, которое является терапевтически эффективным для подавления цитокинов. Соответственно, композиции с замедленным высвобождением можно использовать для того, чтобы избежать частого введения, которое может требоваться для поддержания уровней в плазме обоих агентов на терапевтическом уровне. Например, в предпочтительных пероральных фармацевтических композициях по настоящему изобретению полупериод существования и среднее время нахождения составляют от 10 до 20 часов для одного или обоих агентов в комбинации по настоящему изобретению.

Можно следовать многим стратегиям для получения контролируемого высвобождения, при котором скорость высвобождения компенсирует скорость метаболизма терапевтического соединения. Например, контролируемое высвобождение может достигаться путем соответствующего выбора параметров и ингредиентов при изготовлении композиции (например, соответствующих композиций и покрытий с контролируемым высвобождением). Примеры включают композиции для одной или множества стандартных таблеток или капсул, масляные растворы, суспензии, эмульсии, микрокапсулы, микросферы, наночастицы, пластыри и липосомы. Механизм высвобождения можно контролировать таким образом, чтобы NsIDI и/или NsIDIE высвобождались с периодическими интервалами, высвобождение может быть одновременным; или можно влиять на отсроченное высвобождение одного из агентов комбинации, если раннее высвобождение одного конкретного агента является предпочтительным по отношению к другому.

Композиции с контролируемым высвобождением могут включать разлагающийся или неразлагающийся полимер, гидрогель, органогель или другую физическую систему, которая модифицирует биологическое всасывание, полупериод существования или биологическое разложение агента. Композиция с контролируемым высвобождением может представлять собой материал, которым смазывают пораженный участок или как-либо иначе наносят на пораженный участок, как внутри, так и снаружи. В одном примере изобретение относится к биоразлагаемому болюсу или имплантату, который хирургическим способом помещают на участок, представляющий интерес, или неподалеку от него (например, проксимальнее сустава, пораженного артритом). В другом примере имплантат композиции с контролируемым высвобождением может быть помещен в орган, такой как нижний отдел кишечника, для лечения воспалительного заболевания кишечника.

Гидрогели можно использовать в композициях с контролируемым высвобождением для комбинаций NsIDI/NsIDIE по настоящему изобретению. Указанные полимеры формируют из макромеров с полимеризуемым неразлагаемым участком, который отделен по меньшей мере одним разлагаемым участком. Например, водорастворимый неразлагаемый участок может образовывать центральное ядро макромера и иметь по меньшей мере два разлагаемых участка, которые присоединены к ядру таким образом, что после разложения неразлагаемые участки (в частности, полимеризованный гель) отделяются, как описано в патенте США №5626863. Гидрогели могут включать акрилаты, которые можно легко полимеризовать посредством нескольких инициирующих систем, таких как эозиновая краска, ультрафиолетовый или видимый свет. Гидрогели также могут включать полиэтиленгликоли (PEG), которые являются высокогидрофильными и биосовместимыми. Гидрогели могут также включать олигогликолевую кислоту, которая представляет собой поли(α-гидроксикислоту), которая может легко разлагаться гидролизом сложноэфирной связи до гликолевой кислоты, нетоксичного метаболита. Другие удлинения цепи могут включать полимолочную кислоту, поликапролактон, полиортоэфиры, полиангидриды или полипептиды. Вся сеть может быть превращена гелеобразованием в биоразлагаемую сеть, которую можно использовать для заключения в ней и гомогенного диспергирования комбинаций NsIDI/NsIDIE по настоящему изобретению для доставки с контролируемой скоростью.

Хитозан и смеси хитозана с натрийкарбоксиметилцеллюлозой (CMC-Na) используют в качестве носителей для замедленного высвобождения лекарственных средств, как описано Inouye et al., Drug Design and Delivery 1:297-305, 1987. Смеси указанных соединений и агентов комбинаций NsIDI/NsIDIE по настоящему изобретению, будучи спрессованными при 200 кг/см², образуют таблетку, из которой активный агент медленно высвобождается после введения субъекту. Профиль высвобождения может быть изменен варьрованием соотношений хитозана, CMC-Na и активного агента (агентов). Таблетки могут также содержать другие добавки, включая лактозу, СаНРО₄ дигидрат, сахарозу, кристаллическую целлюлозу или натрий-кроскармеллозу. Несколько примеров приведены в таблице 5.

Таблица 5
Материалы	Компоненты таблетки (мг)
Активный агент	20	20	20	20	20	20	20	20	20	20	20	20
Хитозан	10	10	10	10	10	20	3,3	20	3,3	70	40	28
Лактоза		110				220	36,7
CMC-Na	60	60	60	60	60	120	20	120	20		30	42
CaHPO4·2H2O			110					220	36,7	110	110	110
Сахароза	110
Кристаллическая целлюлоза					110
Натрий-кроскармеллоза				110

Baichwal в патенте США №6245356 описывает твердые лекарственные формы с замедленным высвобождением для перорального введения, которые включают агломерированные частицы терапевтически активного лекарственного средства (например, комбинации NsIDI/NsIDIE или ее компонента по настоящему изобретению) в аморфной форме, гелеобразующий агент, ионизирующийся агент, повышающий прочность геля, и инертный разбавитель. Гелеобразующий агент может представлять собой смеси ксантановой камеди и камеди плодов рожкового дерева, способные образовывать поперечные сшивки с ксантановой камедью, когда на камеди воздействует жидкость окружающей их среды. Предпочтительно, ионизирующийся агент, повышающий прочность геля, действует, повышая прочность поперечных сшивок между ксантановой камедью и камедью плодов рожкового дерева, пролонгируя таким образом высвобождение лекарственного компонента из композиции. Помимо ксантановой камеди и камеди плодов рожкового дерева, приемлемые гелеобразующие агенты, которые также можно использовать, включают гелеобразующие агенты, хорошо известные специалистам. Примеры включают натуральные или модифицированные натуральные камеди, такие как альгинаты, каррагенан, пектин, гуаровую камедь, модифицированный крахмал, гидроксипропилметилцеллюлозу, метилцеллюлозу и другие целлюлозные материалы или полимеры, такие как, например, натрийкарбоксиметилцеллюлоза и гидроксипропилцеллюлоза, и их смеси.

В другой композиции, пригодной для комбинаций по настоящему изобретению, Baichwal и Staniforth в патенте США № 5 135 757 описывают текучий гранулят с замедленным высвобождением для использования в качестве фармацевтического наполнителя, который включает приблизительно от 20 до 70 мас.% или более гидрофильного материала, который включает гетерополисахарид (такой как, например, ксантановая камедь или ее производное) и полисахаридный материал, способный образовывать сшивки с гетерополисахаридом (таким как, например, галактоманнаны и, наиболее предпочтительно, камедь плодов рожкового дерева) в присутствии водных растворов, и приблизительно от 30 до 80 мас.% инертного фармацевтического наполнителя (такого как, например, лактоза, декстроза, сахароза, сорбит, ксилит, фруктоза или их смеси). После смешивания наполнителя с комбинацией NsIDI/NsIDIE или агентом комбинации по настоящему изобретению смесь непосредственно прессуют в твердые лекарственные формы, такие как таблетки. Сформированные таким образом таблетки медленно высвобождают лекарственное средство после проглатывания и воздействия на них желудочного сока. Путем варьирования количества наполнителя относительно лекарственного средства можно получить профиль медленного высвобождения.

В другой композиции, пригодной для комбинаций по настоящему изобретению, Shell в патенте США №5007790 описывает лекарственные формы с замедленным высвобождением лекарственного средства для перорального введения, которые высвобождают лекарственное средство в раствор со скоростью, контролируемой растворимостью лекарственного средства. Лекарственная форма включает таблетку или капсулу, которая включает множество частиц дисперсии лекарственного средства с ограниченной растворимостью в гидрофильном, набухающем в воде, сшитом полимере, который поддерживает свою физическую целостность в период введения дозы, но затем быстро растворяется. После проглатывания частицы набухают, способствуя задержке в желудке, и позволяют желудочному соку проникать в частицы, растворять лекарственное средство и вымывать его из частиц, гарантируя, что лекарственное средство достигнет желудка в форме раствора, который причиняет меньше вреда желудку, чем лекарственное средство в твердом состоянии. Запрограмированное конечное растворение полимера зависит от природы полимера и степени поперечной сшивки. Полимер не является волокнистым и в значительной степени растворяется в воде в несшитом состоянии, а степень поперечной сшивки является достаточной для того, чтобы полимер оставался нерастворенным в течение желательного периода времени, обычно, по меньшей мере, приблизительно от 4 часов до 8 часов, вплоть до 12 часов; выбор зависит от инкорпорированного лекарственного средства и вида лечения. Примерами подходящих сшитых полимеров, которые можно использовать в изобретении, являются желатин, альбумин, альгинат натрия, карбоксиметилцеллюлоза, поливиниловый спирт и хитин. В зависимости от полимера сшивки можно достигать термической или радиационной обработкой или с использованием сшивающих агентов, таких как альдегиды, полиаминокислоты, ионы металлов и т.п.

Силиконовые микросферы для рН-контролируемой желудочно-кишечной доставки лекарственного средства, которые пригодны для композиции комбинаций NsIDI/NsIDIE по настоящему изобретению, описаны Carelli et al., Int. J. Pharmaceutics 179: 73-83, 1999. Описанные микросферы являются рН-чувствительными полувзаимнопроникающими полимерными гидрогелями, изготовленными из различных пропорций поли(метакриловая кислота-со-метилметакрилата) (Eudragit L100 или Eudragit S100) и сшитого полиэтиленгликоля 8000, которые инкапсулированы в силиконовые микросферы размером от 500 до 1000 мкм.

Композиции с замедленным высвобождением могут включать покрытие, которое не является легко растворимым в воде, но которое медленно разрушается и удаляется водой, или через которое вода может медленно проникать. Так, например, на комбинации NsIDI/NsIDIE можно наносить распылением раствор связующего агента при условиях непрерывной текучести, так, как описано Kitamori et al., патент США №4036948. Примеры водорастворимых связующих агентов включают прежелатинизированный крахмал (например, прежелатинизированный кукурузный крахмал, прежелатинизированный белый картофельный крахмал), прежелатинизированный модифицированный крахмал, водорастворимые целлюлозы (например, гидроксипропилцеллюлоза, гидроксиметилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, карбоксиметилцеллюлоза), поливинилпирролидон, поливиниловый спирт, декстрин, аравийскую камедь и желатин, связующие агенты, растворимые в органических растворителях, такие как производные целлюлозы (например, ацетофталат целлюлозы, фталат гидроксипропилметилцеллюлозы, этилцеллюлоза).

Комбинации по настоящему изобретению или их компоненты, обладающие свойствами замедленного высвобождения, также можно изготавливать с использованием технологии распылительной сушки. Еще одну форму комбинаций NsIDI/NsIDIE с замедленным высвобождением можно изготовить микрокапсуляцией частиц агентов комбинации в мембраны, которые действуют как микродиализные ячейки. В указанных композициях желудочный сок проникает через стенки микрокапсулы и вызывает ее набухание, что позволяет активному агенту (агентам) покидать ее путем диализа (см., например, Tsuei et al., патент США №5589194). Одна имеющаяся в продаже система с замедленным высвобождением указанного вида состоит из микрокапсул, имеющих мембраны из смеси аравийской камеди/желатина/этилового спирта. Указанный продукт можно приобрести у компании Eurand Limited (Франция) под торговым наименованием Diffucaps^TM. Изготовленные таким способом микрокапсулы можно помещать в обычные желатиновые капсулы или таблетировать.

Композиции NsIDIE, таких как SSRI, c пролонгированным и/или контролируемым высвобождением известны. Например, Paxil CR® от компании GlaxoSmithKline представляет собой форму пароксетина гидрохлорида с пролонгированным высвобождением в разлагаемом полимерном матриксе (GEOMATRIX^TM), см. также патенты США №№4839177, 5102666 и 5422123), которая также имеет энтеросолюбильное покрытие для задержки начала высвобождения лекарственного средства до тех пор, пока таблетки не пройдут через желудок. Например, патент США №5102666 описывает полимерную композицию с контролируемым высвобождением, включающую реакционный комплекс, образованный взаимодействием (1) компонента кальций-поликарбофила, который набухает в воде, но не растворяется в ней, волокнистого сшитого карбоксифункционального полимера, полимера, содержащего (а) множество повторяющихся единиц, из которых по меньшей мере около 80% содержат по меньшей мере одну карбоксильную функциональность, и (b) приблизительно от 0,05 до 1,5% сшивающего агента, практически не содержащего полиалкенилового полиэфира; процентные доли основаны на весе неполимеризованной повторяющейся единицы и сшивающего агента соответственно с (2) водой, в присутствии активного агента, выбранного из группы, состоящей из SSRI, такого как пароксетин. Количество кальций-поликарбофила составляет приблизительно от 0,1 до 99% мас., например, приблизительно 10%. Количество активного агента составляет приблизительно от 0,0001 до 65% мас., например, приблизительно от 5 до 20%. Количество воды составляет приблизительно от 5 до 200% мас., например приблизительно от 5 до 10%. Взаимодействие осуществляют при рН приблизительно от 3 до 10, например приблизительно от 6 до 7. Кальций-поликарбофил исходно присутствует в форме кальциевой соли, содержащей приблизительно от 5 до 25% кальция.

Другие примеры композиций с пролонгированным высвобождением описаны в патенте США №5422123. Так, система для контролируемого высвобождения активного вещества, который представляет собой SSRI, такой как пароксетин, включающая (а) ядро-депо, включающее эффективное количество активного вещества и имеющее определенную геометрическую форму, и (b) поддерживающую платформу, нанесенную на ядро-депо, в которой ядро-депо содержит по меньшей мере активное вещество и по меньшей мере один член, выбранный из группы, состоящей из (1) полимерного материала, который набухает при контакте с водой или водными жидкостями, и гелеобразующего полимерного материала, в котором соотношение набухающего полимерного материала и гелеобразующего полимерного материала находится в пределах от 1:9 до 9:1, и (2) единственного полимерного материала, обладающего как свойством набухания, так и гелеобразующим свойством, и в которой поддерживающая платформа представляет собой эластичную подложку, нанесенную на указанное ядро-депо таким образом, что она частично покрывает поверхность ядра-депо и претерпевает изменения вследствие гидратации ядра-депо и обладает свойством медленно растворяться в воде и/или медленно превращаться в гель в водных жидкостях. Поддерживающая платформа может включать полимеры, такие как гидроксипропилметилцеллюлоза, пластификаторы, такие как глицерид, связующие агенты, такие как поливинилпирролидон, гидрофильные агенты, такие как лактоза и диоксид кремния, и/или гидрофобные агенты, такие как стеарат магния и глицериды. Полимер (полимеры) обычно составляет до 30-90% мас. от массы поддерживающей платформы, например приблизительно от 35 до 40%. Пластификатор может составлять по меньшей мере до 2% мас. от массы поддерживающей платформы, например приблизительно от 15 до 20%. Связующий агент (агенты), гидрофильный агент (агенты) и гидрофобный агент (агенты) обычно составляют в целом приблизительно до 50% мас. от массы поддерживающей платформы, например приблизительно от 40 до 50%.

В другом примере композицию венлафаксина с пролонгированным высвобождением (Effexor XR®) можно приобрести у компании Wyeth Pharmaceuticals. Указанная композиция включает венлафаксина гидрохлорид, микрокристаллическую целлюлозу и гидроксипропилметилцеллюлозу, покрытые смесью этилцеллюлозы и гидроксипропилметилцеллюлозы (см. патенты США №№6403120 и 6419958).

Композицию будесонида с контролируемым высвобождением (капсулы 3 мг) для лечения воспалительного заболевания кишечника можно приобрести у компании AstraZeneca (продается как "Entocort^TM"). Для того чтобы сделать возможными низкие уровни доз активного вещества, активное вещество микронизируют, смешивают с использованием подходящих способа с известными разбавителями, такими как крахмал и лактоза, и гранулируют с PVP (поливинилпирролидоном). После этого гранулят ламинируют внутренним слоем с замедленным высвобождением, устойчивым к рН 6,8, и внешним слоем с замедленным высвобождением, устойчивым к рН 1,0. Внутренний слой изготовлен из Eudragit® RL (сополимера акрилового и метакрилового эфиров с низким содержанием четвертичных аммониевых групп), а внешний слой изготовлен из Eudragit® L (анионного полимера, синтезированного из метакриловой кислоты и метилового эфира метакриловой кислоты).

Для комбинации NsIDI/NsIDIE по настоящему изобретению можно изготовить двухслойную таблетку, в которой различные заказанные грануляты изготовлены для каждого агента комбинации, и два агента спрессованы на двухслойном прессе с формированием единой таблетки. Например, 12,5 мг, 25 мг, 37,5 мг или 50 мг пароксетина, как NsIDIE, изготавливают в форме композиции с контролируемым высвобождением, в результате чего пароксетин, имеющий t_1/2 от 15 до 20 часов, можно объединять в одной и той же таблетке с циклоспорином, изготовленным таким образом, что его t_1/2 приближается к указанному параметру пароксетина. Примеры композиций пароксетина с пролонгированным высвобождением, включая композиции для двухслойных таблеток, можно найти в патенте США №6548084. Помимо контролирования скорости высвобождения циклоспорина in vivo, можно включать энтеросолюбильное или обеспечивающее отсроченное высвобождение покрытие, которое задерживает начало высвобождения лекарственного средства таким образом, что T_max циклоспорина приближается к указанному параметру пароксетина (т.е. от 5 до 10 часов).

Циклодекстрины представляют собой циклические полисахариды, содержащие натуральные D(+)-глюкопиранозные единицы с α-(1,4) связью. Альфа-, бета- и гамма-циклодекстрины, которые содержат соответственно шесть, семь или восемь глюкопиранозных единиц, используют наиболее широко, а подходящие примеры описаны в WO91/11172, WO94/02518 и WO98/55148. Что касается структуры, циклический характер циклодекстрина образует форму торуса или пончика, имеющую внутреннюю аполярную или гидрофобную полость, вторичные гидроксильные группы, расположенные на одной стороне циклодекстринового торуса, и первичные гидроксильные группы, расположенные на другой стороне. Сторона, на которой расположены вторичные гидроксильные группы, имеет больший диаметр, чем сторона, на которой расположены первичные гидроксильные группы. Гидрофобная природа внутренней полости циклодекстрина позволяет включать в нее разнообразные соединения (Comprehensive Supramolecular Chemistry, том 3, J.L. Atwood et al., изд. Pergamon Press (1996); Cserhati, Analytical Biochemistry 225: 328-32, 1995; Husain et al., Applied Spectroscopy 46: 652-8, 1992. Циклодекстрины использовались в качестве средства доставки различных терапевтических соединений путем формирования комплексов включения с различными лекарственными средствами, которые могут поместиться в гидрофобную полость циклодекстрина, или путем формирования нековалентно связанных комплексов с другими биологически активными молекулами. Патент США №4727064 описывает фармацевтические препараты, состоящие из лекарственного средства с существенно низкой растворимостью в воде и аморфной водорастворимой смесью на основе циклодекстринов, в которых лекарственное средство формирует комплекс включения с циклодекстринами смеси.

Формирование комплекса лекарственное средство - циклодекстрин может модифицировать растворимость, скорость растворения, биодоступность и/или стабильность лекарственного средства.

Сульфобутилэфир-β-циклодекстрин (SBE-β-CD, от компании CyDex, Inc., Overland Park, KA, США с торговым наименованием CAPTISOL®) также можно использовать в качестве вспомогательного агента при изготовлении композиций агентов комбинаций по настоящему изобретению с замедленным высвобождением. Например, была изготовлена таблетка, которая включает преднизолон и SBE-β-CD, спрессованные в матриксе из гидроксипропилметилцеллюлозы (см. Rao et al., J. Pharm. Sci. 90: 807-16, 2001). В другом примере использования различных циклодекстринов ЕР 1109806 В1 описывает циклодекстриновые комплексы пароксетина, в которых α-, β- или γ-циклодекстрины, включая eptakis(2,6-ди-α-метил)-β-циклодекстрин, (2,3,6-три-О-метил)-β-циклодекстрин, моносукцинил eptakis(2,6-ди-О-метил)-β-циклодекстрина или 2-гидроксипропил-β-циклодекстрин, в безводной или гидратированной форме образовывали комплексы с соотношениями агента и циклодекстрина от 1:0,25 до 1:20.

Были изготовлены также полимерные циклодекстрины, как описано в патентных заявках США №№10/021 294 и 10/021 312. Образованные таким способом циклодекстриновые полимеры могут быть пригодными для изготовления композиций с агентами комбинаций по настоящему изобретению. Указанные многофункциональные полимерные циклодекстрины можно приобрести у компании Insert Therapeutics, Inc., Pasadena, CA, США.

В качестве альтернативы прямому комплексированию с агентами циклодекстрины можно использовать в качестве вспомогательной добавки, например в качестве носителя, разбавителя или солюбилизатора. Композиции, которые включают циклодекстрины и другие агенты комбинаций по настоящему изобретению (т.е. NsIDI или NsIDIE), можно изготовить способами, аналогичными способам изготовления циклодекстриновых композиций, описанных в настоящем документе.

Липосомные композиции

Один или оба компонента комбинации NsIDI/NsIDIE по настоящему изобретению или смеси двух компонентов вместе для введения можно инкорпорировать в липосомные носители. Липосомные носители состоят из трех основных типов липидных компонентов, образующих пузырьки. Первый включает липиды, образующие пузырьки, которые будут формировать массу пузырьковой структуры в липосоме. Обычно указанные липиды, образующие пузырьки, включают любые амфипатические липиды, имеющие гидрофобные и полярные части головной группы и которые (а) могут спонтанно формировать двухслойные пузырьки в воде, как, например, фосфолипиды, или (b) являются стабильно инкорпорированными в двухслойные липидные структуры, причем их гидрофобная часть находится в контакте с внутренней гидрофобной областью двухслойной мембраны, а его полярная часть головной группы ориентирована в направлении внешней полярной поверхности мембраны.

Липиды, образующие пузырьки указанного типа, представляют собой, предпочтительно, липиды, имеющие две углеводородные цепи, обычно ацильные цепи и полярную головную группу. В данный класс входят фосфолипиды, такие как фосфатидилхолин (РС), РЕ, фосфатидная кислота (РА), фосфатидилинозит (PI) и сфингомиелин (SM), у которых две углеводородные цепи обычно имеют длину 14-22 атомов углерода и которые имеют различные степени ненасыщенности. Описанные выше липиды и фосфолипиды, ацильные цепи которых имеют различные степени насыщенности, можно получить коммерческим путем или можно изготовить в соответствии с опубликованными способами. Другие липиды, которые можно включить в настоящее изобретение, представляют собой гликолипиды и стеролы, такие как холестерин.

Второй основной компонент включает липид, образующий пузырьки, который дериватизирован с полимерной цепью, которая будет формировать полимерный слой в композиции. Липиды, образующие пузырьки, которые можно использовать в качестве второго основного липидного компонента, образующего пузырьки, представляют собой любой из липидов, описанных для первого основного липидного компонента, образующего пузырьки. Липиды, образующие пузырьки, с диацильными цепями, такие как фосфолипиды, являются предпочтительными. Одним примером фосфолипида является фосфатидилэтаноламин (РЕ), который обеспечивает реакционноспособную аминогруппу, которая является удобной для присоединения к активированным полимерам. Примером РЕ является дистеарил РЕ (DSPE).

Предпочтительным полимером в дериватизированном липиде является полиэтиленгликоль (PEG), предпочтительно цепь PEG, имеющая молекулярную массу от 1000 до 15000 дальтон, более предпочтительно, от 2000 до 10000 дальтон, наиболее предпочтительно, от 2000 до 5000 дальтон. Другие гидрофильные полимеры, которые могут быть подходящими, включают поливинилпирролидон, полиметилоксазолин, полиэтилоксазолин, полигидроксипропилметакриламид, полиметакриламид и полидиметилакриламид, полимолочную кислоту, полигликолевую кислоту и дериватизированные целлюлозы, такие как гидроксиметилцеллюлоза или гидроксиэтилцеллюлоза.

Помимо этого, подходящими могут быть блок-сополимеры или статистические сополимеры указанных полимеров, особенно включающие сегменты PEG. Способы получения липидов, дериватизированных с гидрофильными полимерами, такими как PEG, хорошо известны, например как описано в патенте США №5013556.

Третьим основным компонентом липида, образующего пузырьки, который является оптимальным, является липидный якорь, посредством которого нацеливаемая часть прикрепляется к липосоме через полимерную цепь в якоре. Кроме того, нацеливаемая группа располагается на дистальном конце полимерной цепи таким образом, что биологическая активность нацеливаемой группы не утрачивается. Липидный якорь имеет гидрофобную часть, которая служит для закрепления липида на внешнем слое поверхности двухслойной липосомы, полярную головную группу, к которой присоединяется ковалентной связью внутренний конец полимера, и свободный (внешний) конец полимера, который активирован или может быть активирован для образования ковалентной связи с нацеливаемой частью. Способы получения молекул липидного якоря указанного типа описаны ниже.

Липидные компоненты, используемые для формирования липосом, предпочтительно, присутствуют в молярных соотношениях приблизительно 70-90% липидов, образующих пузырьки, 1-25% липида, дериватизированного полимером, и 0,1-5% липидного якоря. Пример композиции включает 50-70 мольных % недериватизированного РЕ, 20-40 мольных % холестерина, 0,1-1 мольный % полимера PE-PEG (3500) с химически реакционноспособной группой на свободном конце для присоединения нацеливаемой части, 5-10 мольных % РЕ, дериватизированного полимерными цепями PEG 3500, и 1 мольный % альфа-токоферола.

Липосомы предпочтительно изготавливают преимущественно однородного размера в выбранных пределах размеров обычно приблизительно от 0,03 до 0,5 микрон. Один эффективный способ сортировки по размеру для REV и MLV включает экструзию водной суспензии липосом через ряд поликарбонатных мембран, имеющих выбранный унифицированный размер пор в пределах от 0,03 до 0,2 микрон, обычно 0,05, 0,08, 0,1 или 0,2 микрона. Размер пор мембраны приблизительно соответствует наибольшим размерам липосом, получаемых экструзией через данную мембрану, особенно, если препарат экструдируют два или более раз через одну и ту же мембрану. Способы гомогенизации также пригодны для уменьшения размеров липосом до 100 нм или менее.

Липосомные композиции по настоящему изобретению включают по меньшей мере один поверхностно-активный агент. Подходящие поверхностно-активные агенты, пригодные для изготовления композиций комбинаций NsIDI/NsIDIE, описанных в настоящем документе, включают соединения, принадлежащие к следующим классам: полиэтоксилированные жирные кислоты, диэфиры PEG-жирная кислота, смеси моноэфиров и диэфиров PEG-жирная кислота, эфиры полиэтиленгликольглицерина и жирных кислот, продукты трансэтерификации спирт-масло, полиглицеризированные жирные кислоты, эфиры пропиленгликоля и жирных кислот, смеси сложных эфиров пропиленгликоля и сложных эфиров глицерина, моно- и диглицериды, стерол и производные стерола, эфиры полиэтиленгликольсорбитана и жирных кислот, алкиловые эфиры полиэтиленгликоля, сложные эфиры сахаров, полиэтиленгликольалкилфенолы, блок-сополимеры полиоксиэтилен-полиоксипропилен, эфиры сорбитана и жирных кислот, эфиры низших спиртов и жирных кислот и ионные поверхностно-активные агенты. Имеющиеся в продаже примеры каждого класса наполнителей приведены ниже.

Полиэтоксилированные жирные кислоты можно использовать в качестве наполнителей для изготовления композиций комбинаций NsIDI/NsIDIE, описанных в настоящем документе. Примеры имеющихся в продаже поверхностно-активных моноэфиров полиэтоксилированных жирных кислот включают монолаурат PEG 4-100 (серия Crodet L, Croda), моноолеат PEG 4-100 (серия Crodet О, Croda), моностеарат PEG 4-100 (серия Crodet S, Croda, и серия Myrj, Atlas/ICI), дистеарат PEG 400 (серия Cithrol 4DS, Croda), монолаурат PEG 100, 200 или 300 (серия Cithrol ML, Croda), моноолеат PEG 100, 200 или 300 (серия Cithrol MO, Croda), диолеат PEG 400 (серия Cithrol 4DО, Croda), моностеарат PEG 400-1000 (серия Cithrol MS, Croda), стеарат PEG-1 (Nikkol MYS-1EX, Nikko, и Coster K1, Condea), стеарат PEG-2 (Nikkol MYS-2, Nikko), олеат PEG-2 (Nikkol MYO-2, Nikko), лаурат PEG-4 (Mapeg® 200 ML, PPG), олеат PEG-4 (Mapeg® 200 MO, PPG), стеарат PEG-4 (Kessco® PEG 200 MS, Stepan), стеарат PEG-5 (Nikkol TMGS-5, Nikko), олеат PEG-5 (Nikkol TMGO-5, Nikko), олеат PEG-6 (Algon OL 60, Auschem SpA), олеат PEG-7 (Algon OL 70, Auschem SpA), лаурат PEG-6 (Kessco® PEG300 ML, Stepan), лаурат PEG-7 (Lauridac 7, Condea), стеарат PEG-6 (Kessco® PEG300 MS, Stepan), лаурат PEG-8 (Mapeg® 400 ML, PPG), олеат PEG-8 (Mapeg® 400 MO, PPG), стеарат PEG-8 (Mapeg® 400 MS, PPG), олеат PEG-9 (Emulgante A9, Condea), стеарат PEG-9 (Cremophor S9, BASF), лаурат PEG-10 (Nikkol MYL-10, Nikko), олеат PEG-10 (Nikkol MYO-10, Nikko), стеарат PEG-12 (Nikkol MYS-10, Nikko), лаурат PEG-12 (Kessco® PEG 600 ML, Stepan), олеат PEG-12 (Kessco® PEG 600 MO, Stepan), рицинолеат PEG-12 (CAS # 9004-97-1), стеарат PEG-12 (Mapeg® 600 MS, PPG), стеарат PEG-15 (Nikkol TMGS-15, Nikko), олеат PEG-15 (Nikkol TMGO-15, Nikko), лаурат PEG-20 (Kessco® PEG 1000 ML, Stepan), олеат PEG-20 (Kessco® PEG 1000 MO, Stepan), стеарат PEG-20 (Mapeg® 1000 MS, PPG), стеарат PEG-25 (Nikkol MYS-25, Nikko), лаурат PEG-32 (Kessco® PEG 1540 ML, Stepan), олеат PEG-32 (Kessco® PEG 1540 MO, Stepan), стеарат PEG-32 (Kessco® PEG 1540 MS, Stepan), стеарат PEG-30 (Myrj 51), лаурат PEG-40 (Crodet L40, Croda), олеат PEG-40 (Crodet O40, Croda), стеарат PEG-40 (Emerest® 2715, Henkel), стеарат PEG-45 (Nikkol MYS-45, Nikko), стеарат PEG-50 (Myrj 53), стеарат PEG-55 (Nikkol MYS-55, Nikko), олеат PEG-100 (Crodet O-100, Croda), стеарат PEG-100 (Ariacel 165, ICI), олеат PEG-200 (Albunol 200 MO, Taiwan Surf.), олеат PEG-400 (LACTOMUL, Henkel) и олеат PEG-600 (Albunol 600 MO, Taiwan Surf.). Композиции одного или обоих компонентов комбинаций NsIDI/NsIDIE по настоящему изобретению могут включать одну или более полиэтоксилированных жирных кислот, указанных выше.

Диэфиры полиэтиленгликоля и жирных кислот также можно использовать в качестве наполнителей для комбинаций NsIDI/NsIDIE, описанных в настоящем документе. Примеры имеющихся в продаже диэфиров полиэтиленгликоля и жирных кислот включают дилаурат PEG-4 (Mapeg® 200 DL, PPG), диолеат PEG-4 (Mapeg® 200 DO, PPG), дистеарат PEG-4 (Kessco® PEG 200 DS, Stepan), дилаурат PEG-6 (Kessco® PEG 300 DL, Stepan), диолеат PEG-6 (Kessco® PEG 300 DO, Stepan), дистеарат PEG-6 (Kessco® PEG 300 DS, Stepan), дилаурат PEG-8 (Mapeg® 400 DL, PPG), диолеат PEG-8 (Mapeg® 400 DO, PPG), дистеарат PEG-8 (Mapeg® 400 DS, PPG), дипальмитат PEG-10 (Polyaldo 2PKFG), дилаурат PEG-12 (Kessco® PEG 600 DL, Stepan), дистеарат PEG-12 (Kessco® PEG 600 DS, Stepan), диолеат PEG-12 (Mapeg® 600 DO, PPG), дилаурат PEG-20 (Kessco® PEG 1000 DL, Stepan), диолеат PEG-20 (Kessco® PEG 1000 DO, Stepan), дистеарат PEG-20 (Kessco® PEG 1000 DS, Stepan), дилаурат PEG-32 (Kessco® PEG 1540 DL, Stepan), диолеат PEG-32 (Kessco® PEG 1540 DO, Stepan), дистеарат PEG-32 (Kessco® PEG 1540 DS, Stepan), диолеат PEG-400 (серия Cithrol 4DO, Croda) и дистеарат PEG-400 (серия Cithrol 4DS, Croda). Композиции комбинации NsIDI/NsIDIE по настоящему изобретению могут включать один или более диэфиров полиэтиленгликоля и жирных кислот, указанных выше.

Смеси моно- и диэфиров PEG и жирных кислот можно использовать в качестве наполнителей для изготовления композиций комбинации NsIDI/NsIDIE, описанных в настоящем документе. Примеры имеющихся в продаже смесей моно- и диэфиров PEG и жирных кислот включают моно-, дилаурат PEG 4-150 (Kessco® PEG 200-6000 mono, Dilaurate, Stepan), моно-, диолеат PEG 4-150 (Kessco® PEG 200-6000 mono, Dioleate, Stepan) и моно-, дистеарат PEG 4-150 (Kessco® PEG 200-6000 mono, Distearate, Stepan). Композиции комбинаций NsIDI/NsIDIE по настоящему изобретению могут включать одну или более смесей моно- и диэфиров PEG и жирных кислот, указанных выше.

Помимо этого, эфиры полиэтиленгликоль глицерина и жирных кислот можно использовать в качестве наполнителей для изготовления композиций комбинаций NsIDI/NsIDIE, описанных в настоящем документе. Примеры имеющихся в продаже эфиров полиэтиленгликоль глицерина и жирных кислот включают PEG-20 глицериллаурат (Tagat® L, Goldschmidt), PEG-30 глицериллаурат (Tagat® L2, Goldschmidt), PEG-15 глицериллаурат (серия Glycerox L, Croda), PEG-40 глицериллаурат (серия Glycerox L, Croda), PEG-20 глицерилстеарат (Capmul® EMG, ABITEC) и Aldo® MS-20 KFG, Lonza), PEG-20 глицерилолеат (Tagat® О, Goldschmidt) и PEG-30 глицерилолеат (Tagat® О2, Goldschmidt). Композиции комбинаций NsIDI/NsIDIE по настоящему изобретению могут включать один или более эфиров полиэтиленгликоль глицерина и жирных кислот, указанных выше.

Продукты трансэтерификации спирт - масло также можно использовать в качестве наполнителей для изготовления композиций комбинаций NsIDI/NsIDIE, описанных в настоящем документе. Примеры имеющихся в продаже продуктов трансэтерификации спирт - масло включают PEG-3 касторовое масло (Nikkol СО-3, Nikko), PEG-5, 9 и 16 касторовое масло (серия ACCONON CA, ABITEC), PEG-20 касторовое масло (Emalex C-20, Nihon Emulsion), PEG-23 касторовое масло (Emulgante EL23), PEG-30 касторовое масло (Incrocas 30, Croda), PEG-35 касторовое масло (Incrocas-35, Croda), PEG-38 касторовое масло (Emulgante EL 65, Condea), PEG-40 касторовое масло (Emalex C-40, Nihon Emulsion), PEG-50 касторовое масло (Emalex C-50, Nihon Emulsion), PEG-56 касторовое масло (Eumulgin® PRT 56, Pulcra SA), PEG-60 касторовое масло (Nikkol СО-60TX, Nikko), PEG-100 касторовое масло, PEG-200 касторовое масло (Eumulgin® PRT 200, Pulcra SA), PEG-5 гидрогенизированное касторовое масло (Nikkol НСО-5, Nikko), PEG-7 гидрогенизированное касторовое масло (Cremophor WO7, BASF), PEG-10 гидрогенизированное касторовое масло (Nikkol НСО-10, Nikko), PEG-20 гидрогенизированное касторовое масло (Nikkol НСО-20, Nikko), PEG-25 гидрогенизированное касторовое масло (Simulsol® 1292, Seppic), PEG-30 гидрогенизированное касторовое масло (Nikkol НСО-30, Nikko), PEG-40 гидрогенизированное касторовое масло (Cremophor RH 40, BASF), PEG-45 гидрогенизированное касторовое масло (Cerex ELS 450, Auschem Spa), PEG-50 гидрогенизированное касторовое масло (Emalex HC-50, Nihon Emulsion), PEG-60 гидрогенизированное касторовое масло (Nikkol НСО-60, Nikko), PEG-80 гидрогенизированное касторовое масло (Nikkol НСО-80, Nikko), PEG-100 гидрогенизированное касторовое масло (Nikkol НСО-100, Nikko), PEG-6 кукурузное масло (Labrafil® M 2125 CS, Gattefosse), PEG-6 миндальное масло (Labrafil® M 1966 CS, Gattefosse), PEG-6 масло абрикосовых косточек (Labrafil® M 1944 CS, Gattefosse), PEG-6 оливковое масло (Labrafil® M 1980 CS, Gattefosse), PEG-6 арахисовое масло (Labrafil® M 1969 CS, Gattefosse), PEG-6 гидрогенизированное пальмоядерное масло (Labrafil® M 2130 BS, Gattefosse), PEG-6 пальмоядерное масло (Labrafil® M 2130 CS, Gattefosse), PEG-6 триолеин (Labrafil® M 2735 CS, Gattefosse), PEG-8 кукурузное масло (Labrafil® WL 2609 BS, Gattefosse), PEG-20 кукурузные глицериды (Crovol M40, Croda), PEG-20 миндальные глицериды (Crovol А40, Croda), PEG-25 триолеат (TAGAT® ТО, Goldschmidt), PEG-40 пальмоядерное масло (Crovol РК-70), PEG-60 кукурузные глицериды (Crovol M70, Croda), PEG-60 миндальные глицериды (Crovol А70, Croda), PEG-4 каприловый/каприновый триглицериды (Labrafac® Hydro, Gattefosse), PEG-8 каприловый/каприновый глицериды (Labrasol, Gattefosse), PEG-6 каприловый/каприновый глицериды (SOFTIGEN®767, Huls), лауроилмакрогол-32 глицерид (GELUCIRE 44/14, Gattefosse), стеароилмакрогол глицерид (GELUCIRE 50/13, Gattefosse), моно-, ди-, три-, тетраэфиры растительных масел и сорбита (SorbitoGlyceride, Gattefosse), пентаэритритилтетраизостеарат (Crodamol PTIS, Croda), пентаэритритилдистеарат (Albunol DS, Taiwan Surf.), пентаэритритилтетраолеат (Liponate PO-4, Lipo Chem.), пентаэритритилтетрастеарат (Liponate PS-4, Lipo Chem.), пентаэритритилтетракаприлаттетракапрат (Liponate PE-810, Lipo Chem.) и пентаэритритилтетраоктаноат (Nikkol Pentarate 408, Nikko). Также включены в качестве масел в данную категорию поверхностно-активных агентов жирорастворимые витамины, такие как витамины A, D, E, K и т.п. Так, производные указанных витаминов, такие как токоферил PEG-1000 сукцинат (TPGS от компании Eastman), также являются подходящими поверхностно-активными агентами. Композиции комбинаций NsIDI/NsIDIE по настоящему изобретению могут включать один или более продуктов трансэтерификации спирт - масло, указанных выше.

Полиглицеризированные жирные кислоты также можно использовать в качестве наполнителей для изготовления композиций комбинаций NsIDI/NsIDIE, описанных в настоящем документе. Примеры имеющихся в продаже полиглицеризированных жирных кислот включают полиглицерил-2 стеарат (Nikkol DGMS, Nikko), полиглицерил-2 олеат (Nikkol DGMO, Nikko), полиглицерил-2 изостеарат (Nikkol DGMIS, Nikko), полиглицерил-3 олеат (Caprol® 3GO, ABITEC), полиглицерил-4 олеат (Nikkol Tetraglyn 1-O, Nikko), полиглицерил-4 стеарат (Nikkol Tetraglyn 1-S, Nikko), полиглицерил-6 олеат (Drewpol 6-1-O, Stepan), полиглицерил-10 лаурат (Nikkol Decaglyn 1-L, Nikko), полиглицерил-10 олеат (Nikkol Decaglyn 1-О, Nikko), полиглицерил-10 стеарат (Nikkol Decaglyn 1-S, Nikko), полиглицерил-6 рицинолеат (Nikkol Hexaglyn PR-15, Nikko), полиглицерил-10 линолеат (Nikkol Decaglyn 1-LN, Nikko), полиглицерил-6 пентаолеат (Nikkol Hexaglyn 5-О, Nikko), полиглицерил-3 диолеат (Cremophor GO32, BASF), полиглицерил-3 дистеарат (Cremophor GS32, BASF), полиглицерил-4 пентаолеат (Nikkol Tetraglyn 5-O, Nikko), полиглицерил-6 диолеат (Caprol® 6G20, ABITEC), полиглицерил-2 диолеат (Nikkol DGDO, Nikko), полиглицерил-10 триолеат (Nikkol Decaglyn 3-О, Nikko), полиглицерил-10 пентаолеат (Nikkol Decaglyn 5-О, Nikko), полиглицерил-10 септаолеат (Nikkol Decaglyn 7-О, Nikko), полиглицерил-10 тетраолеат (Caprol® 10G40, ABITEC), полиглицерил-10 декаизостеарат (Nikkol Decaglyn 10-IS, Nikko), полиглицерил-101 декаолеат (Drewpol 10-10-O, Stepan), полиглицерил-10 моно-, диолеат (Caprol® PGE 860, ABITEC) и полиглицерилполирицинолеат (Polymuls, Henkel). Композиции комбинаций NsIDI/NsIDIE по настоящему изобретению могут включать одну или более полиглицеризированных жирных кислот, указанных выше.

Помимо этого, эфиры пропиленгликоля и жирных кислот можно использовать в качестве наполнителей для изготовления композиций комбинаций NsIDI/NsIDIE, описанных в настоящем документе. Примеры имеющихся в продаже эфиров пропиленгликоля и жирных кислот включают пропиленгликольмонокаприлат (Capryol 90, Gattefosse), пропиленгликольмонолаурат (Lauroglycol 90, Gattefosse), пропиленгликольолеат (Lutrol OP2000, Gattefosse), пропиленгликольмиристат (Mirpyl), пропиленгликольмоностеарат (LIPO PGMS, Lipo Chem.), пропиленгликольгидроксистеарат, пропиленгликольрицинолеат (PROPYMULS, Henkel), пропиленгликольизостеарат, пропиленгликольмоноолеат (Myverol P-O6, Eastman), пропиленгликольдикаприлатдикапрат (Captex® 200, ABITEC), пропиленгликольдиоктаноат (Captex® 800, ABITEC), пропиленгликолькаприлаткапрат (LABRAFAC PG, Gattefosse), пропиленгликольдилаурат, пропиленгликольдистеарат (Kessco® PGDS, Stepan), пропиленгликольдикаприлат (Nikkol Sefsol 228, Nikko) и пропиленгликольдикапрат (Nikkol PDD, Nikko). Композиции комбинаций NsIDI/NsIDIE по настоящему изобретению могут включать один или более эфиров пропиленгликоля и жирных кислот, указанных выше.

Смеси сложных эфиров пропиленгликоля и сложных эфиров глицерина также можно использовать в качестве наполнителей для изготовления композиций комбинаций NsIDI/NsIDIE, описанных в настоящем документе. Одна предпочтительная смесь составлена из эфиров пропиленгликоля и глицерина и олеиновой кислоты (Arlacel 186). Примеры указанных поверхностно-активных агентов включают олеик (ATMOS 300, ARLACEL 186, ICI) и стеарик (ATMOS 150). Композиции комбинаций NsIDI/NsIDIE по настоящему изобретению могут включать одну или более смесей сложных эфиров пропиленгликоля и сложных эфиров глицерина, указанных выше.

Кроме того, моно- и диглицериды можно использовать в качестве наполнителей для изготовления композиций комбинаций NsIDI/NsIDIE, описанных в настоящем документе. Примеры имеющихся в продаже моно- и диглицеридов включают монопальмитолеин (C16:1) (Larodan), моноэлаидин (C18:1) (Larodan), монокапроин (C6) (Larodan), монокаприлин (Larodan), монокаприн (Larodan), монолаурин (Larodan), глицерилмономиристат (С14) (Nikkol MGM, Nikko), глицерилмоноолеат (С18:1) (PECEOL, Gattefosse), глицерилмоноолеат (Myverol, Eastman), глицерилмоноолеат/линолеат (OLICINE, Gattefosse), глицерилмонолинолеат (Maisine, Gattefosse), глицерилрицинолеат (Softigen® 701, Huls), глицерилмонолаурат (ALDO® MLD, Lonza), глицерилмонопальмитат (Emalex GMS-P, Nihon), глицерилмоностеарат (Capmul® GMS, ABITEC), глицерилмоно- и диолеат (Capmul® GMO-К, ABITEC), глицерилпальмитиновый/стеариновый (CUTINA MD-A, ESTAGEL-G18), глицерилацетат (Lamegin® EE, Grunau GmbH), глицериллаурат (Imwitor® 312, Huls), глицерилцитрат/лактат/олеат/линолеат (Imwitor® 374, Huls), глицерилкаприлат (Imwitor® 308, Huls), глицерилкаприлат/капрат (Capmul® МСМ, ABITEC), моно- и диглицериды каприловой кислоты (Imwitor® 988, Huls), каприловые/каприновые глицериды (Imwitor® 742, Huls), моно- и диацетилированные моноглицериды (Myvacet® 9-45, Eastman), глицерилмоностеарат (Aldo® MS, Arlacel 129, ICI), моно- и диглицеридные эфиры молочной кислоты (LAMEGIN GLP, Henkel), дикапроин (С6) (Larodan), дикаприн (С10) (Larodan), диоктаноин (CS) (Larodan), димиристин (С14) (Larodan), дипальмитин (С16) (Larodan), дистеарин (Larodan), глицерилдилаурат (С12) (Capmul® GDL, ABITEC), глицерилдиолеат (Capmul® GDO, ABITEC), эфиры глицерина и жирных кислот (GELUCIRE 39/01, Gattefosse), дипальмитолеин (С16:1) (Larodan), 1,2- и 1,3-диолеин (С18:1) (Larodan), диэлаидин (С18:1) (Larodan) и дилинолеин (С18:2) (Larodan). Композиции комбинаций NsIDI/NsIDIE по настоящему изобретению могут включать один или более моно- и диглицеридов, указанных выше.

Стерол и производные стерола также можно использовать в качестве наполнителей для изготовления композиций комбинаций NsIDI/NsIDIE, описанных в настоящем документе. Примеры имеющихся в продаже стеролов и производных стерола включают холестерин, ситостерол, ланостерол, эфир PEG-24 и холестерина (Solulan C-24, Amerchol), PEG-30 холестанол (серия Phytosterol GENEROL, Henkel), PEG-25 фитостерол (Nikkol BPSH-25, Nikko), PEG-5 соевый стерол (Nikkol BPS-5, Nikko), PEG-10 соевый стерол (Nikkol BPS-10, Nikko), PEG-20 соевый стерол (Nikkol BPS-20, Nikko) и PEG-30 соевый стерол (Nikkol BPS-30, Nikko). Композиции комбинаций NsIDI/NsIDIE по настоящему изобретению могут включать один или более стеролов и производных стерола, указанных выше.

Эфиры полиэтиленгликольсорбитана и жирных кислот также можно использовать в качестве наполнителей для изготовления композиций комбинаций NsIDI/NsIDIE, описанных в настоящем документе. Примеры имеющихся в продаже эфиров полиэтиленгликольсорбитана и жирных кислот включают PEG-10 сорбитанлаурат (Liposorb L-10 Lipo Chem.), PEG-20 сорбитанмонолаурат (Tween® 20, Atlas/ICI), PEG-4 сорбитанмонолаурат (Tween® 21, Atlas/ICI), PEG-80 сорбитанмонолаурат (Hodag PSML-80, Calgene), PEG-6 сорбитанмонолаурат (Nikkol GL-1, Nikko), PEG-20 сорбитанмонопальмитат (Tween® 40, Atlas/ICI), PEG-20 сорбитанмоностеарат (Tween® 60, Atlas/ICI), PEG-4 сорбитанмоностеарат (Tween® 61, Atlas/ICI), PEG-8 сорбитанмоностеарат (DACOL MSS, Condea), PEG-6 сорбитанмоностеарат (Nikkol TS106, Nikko), PEG-20 сорбитантристеарат (Tween® 65, Atlas/ICI), PEG-6 сорбитантетрастеарат (Nikkol GS-6, Nikko), PEG-60 сорбитантетрастеарат (Nikkol GS-460, Nikko), PEG-5 сорбитанмоноолеат (Tween® 81, Atlas/ICI), PEG-6 сорбитанмоноолеат (Nikkol ТО-106, Nikko), PEG-20 сорбитанмоноолеат (Tween® 80, Atlas/ICI), PEG-40 сорбитанолеат (Emalex ET 8040, Nihon Emulsion), PEG-20 сорбитантриолеат (Tween® 85, Atlas/ICI), PEG-6 сорбитантетраолеат (Nikkol GO-4, Nikko), PEG-30 сорбитантетраолеат (Nikkol GO-430, Nikko), PEG-40 сорбитантетраолеат (Nikkol GO-440, Nikko), PEG-20 сорбитанмоноизостеарат (Tween® 120, Atlas/ICI), PEG сорбитолгексаолеат (Atlas G-1086, ICI), полисорбат 80 (Tween® 80, Pharma), полисорбат 85 (Tween® 85, Pharma), полисорбат 20 (Tween® 20, Pharma), полисорбат 40 (Tween® 40, Pharma), полисорбат 60 (Tween® 60, Pharma) и PEG-6 сорбитолгексастеарат (Nikkol GS-6, Nikko). Композиции комбинаций NsIDI/NsIDIE по настоящему изобретению могут включать один или более эфиров полиэтиленгликольсорбитана и жирных кислот, указанных выше.

Помимо этого, алкиловые эфиры полиэтиленгликоля можно использовать в качестве наполнителей для изготовления композиций комбинаций NsIDI/NsIDIE, описанных в настоящем документе. Примеры имеющихся в продаже алкиловых эфиров полиэтиленгликоля включают PEG-2 олеиловый эфир, oleth-2 (Brij 92/93, Atlas/ICI), PEG-3 олеиловый эфир, oleth-3 (Volpo 3, Croda), PEG-5 олеиловый эфир, oleth-5 (Volpo 5, Croda), PEG-10 олеиловый эфир, oleth-10 (Volpo 10, Croda), PEG-20 олеиловый эфир, oleth-20 (Volpo 20, Croda), PEG-4 лауриловый эфир, laureth-4 (Brij 30, Atlas/ICI), PEG-9 лауриловый эфир, PEG-23 лауриловый эфир, laureth-23 (Brij 35, Atlas/ICI), PEG-2 цетиловый эфир (Brij 52, ICI), PEG-10 цетиловый эфир (Brij 56, ICI), PEG-20 цетиловый эфир (Brij 58, ICI), PEG-2 стеариловый эфир (Brij 72, ICI), PEG-10 стеариловый эфир (Brij 76, ICI), PEG-20 стеариловый эфир (Brij 78, ICI) и PEG-100 стеариловый эфир (Brij 700, ICI). Композиции комбинаций NsIDI/NsIDIE по настоящему изобретению могут включать один или более алкиловых эфиров полиэтиленгликоля, указанных выше.

Сложные эфиры сахаров также можно использовать в качестве наполнителей для изготовления композиций комбинаций NsIDI/NsIDIE, описанных в настоящем документе. Примеры имеющихся в продаже сложных эфиров сахаров включают дистеарат сахарозы (SUCRO ESTER 7, Gattefosse), дистеарат/моностеарат сахарозы (SUCRO ESTER 11, Gattefosse), дипальмитат сахарозы, моностеарат сахарозы (Crodesta F-160, Croda), монопальмитат сахарозы (SUCRO ESTER 15, Gattefosse) и монолаурат сахарозы (Saccharose monolaurate 1695, Mitsubisbi-Kasei). Композиции комбинаций NsIDI/NsIDIE по настоящему изобретению могут включать один или более сложных эфиров сахаров, указанных выше.

Полиэтиленгликольалкилфенолы также можно использовать в качестве наполнителей для изготовления композиций комбинаций NsIDI/NsIDIE, описанных в настоящем документе. Примеры имеющихся в продаже полиэтиленгликольалкилфенолов включают серию PEG-10-100 нонилфенол (серия Triton X, Rohm & Haas) и серию PEG-15-100 октилфенольный эфир (серия Triton N, Rohm & Haas). Композиции комбинаций NsIDI/NsIDIE по настоящему изобретению могут включать один или более полиэтиленгликольалкилфенолов, указанных выше.

Блок-сополимеры полиоксиэтилен-полиоксипропилен также можно использовать в качестве наполнителей для изготовления композиций комбинаций NsIDI/NsIDIE, описанных в настоящем документе. Указанные поверхностно-активные агенты продаются под различными торговыми наименованиями, включая один или более из серии Synperonic PE (ICI), серию Pluronic® (BASF), Lutrol (BASF), Supronic, Monolan, Pluracare и Plurodac. Родовым термином для указанных сополимеров является «полоксамер» (CAS 9003-11-6). Указанные полимеры имеют формулу (Х):

где "а" и "b" обозначают число единиц полиоксиэтилена и полиоксипропилена соответственно. В продаже имеются указанные сополимеры с молекулярными массами в пределах от 1000 до 15000 дальтон и с соотношениями этиленоксид/пропиленоксид от 0,1 до 0,8 по массе. Композиции комбинаций NsIDI/NsIDIE по настоящему изобретению могут включать один или более блок-сополимеров полиоксиэтилен-полиоксипропилен, указанных выше.

Полиоксиэтилены, такие как PEG 300, PEG 400 и PEG 600, можно использовать в качестве наполнителей для изготовления композиций комбинаций NsIDI/NsIDIE, описанных в настоящем документе.

Эфиры сорбитана и жирных кислот также можно использовать в качестве наполнителей для изготовления композиций комбинаций NsIDI/NsIDIE, описанных в настоящем документе. Примеры имеющихся в продаже эфиров сорбитана и жирных кислот включают монолаурат сорбитана (Span-20, Atlas/ICI), монопальмитат сорбитана (Span-40, Atlas/ICI), моноолеат сорбитана (Span-80, Atlas/ICI), моностеарат сорбитана (Span-60, Atlas/ICI), триолеат сорбитана (Span-85, Atlas/ICI), сесквиолеат сорбитана (Arlacel-C, ICI), тристеарат сорбитана (Span-65, Atlas/ICI), моноизостеарат сорбитана (Crill 6, Croda) и сесквистеарат сорбитана (Nikkol SS-15, Nikko). Композиции комбинаций NsIDI/NsIDIE по настоящему изобретению могут включать один или более эфиров сорбитана и жирных кислот, указанных выше.

Эфиры низших спиртов (от С₂ до С₄) и жирных кислот (от С₈ до С₁₈) являются подходящими поверхностно-активными агентами для использования в настоящем изобретении. Примеры указанных поверхностно-активных агентов включают этилолеат (Crodamol ЕО, Croda), изопропилмиристат (Crodamol IPM, Croda), изопропилпальмитат (Crodamol IPP, Croda), этиллинолеат (Nikkol VF-E, Nikko) и изопропиллинолеат (Nikkol VF-IP, Nikko). Композиции комбинаций NsIDI/NsIDIE по настоящему изобретению могут включать один или более эфиров низших спиртов и жирных кислот, указанных выше.

Помимо этого, ионные поверхностно-активные агенты можно использовать в качестве наполнителей для изготовления композиций комбинаций NsIDI/NsIDIE, описанных в настоящем документе. Примеры подходящих ионных поверхностно-активных агентов включают капроат натрия, каприлат натрия, капрат натрия, лаурат натрия, миристат натрия, миристолат натрия, пальмитат натрия, пальмитолеат натрия, олеат натрия, рицинолеат натрия, линолеат натрия, линоленат натрия, стеарат натрия, лаурилсульфат натрия (додецил), тетрадецилсульфат натрия, лаурилсаркозинат натрия, диоктилсульфосукцинат натрия, холат натрия, таурохолат натрия, гликохолат натрия, дезоксихолат натрия, тауродезоксихолат натрия, гликодезоксихолат натрия, урсодезоксихолат натрия, хенодезоксихолат натрия, таурохенодезоксихолат натрия, гликохенодезоксихолат натрия, холилсаркозинат натрия, N-метилтаурохолат натрия, фосфатиды яичного желтка, гидрогенизированный лецитин сои, димиристоиллецитин, лецитин, гидроксилированный лецитин, лизофосфатидилхолин, кардиолипин, сфингомиелин, фосфатидилхолин, фосфатидилэтаноламин, фосфатидную кислоту, фосфатидилглицерин, фосфатидилсерин, диэтаноламин, фосфолипиды, фосфат полиоксиэтилен-10 олеилового эфира, продукты этерификации жирных спиртов или этоксилатов жирных спиртов с фосфорной кислотой или ангидридом, эфирными карбоксилатами (окислением концевой ОН группы этоксилатов жирных спиртов), сукцинилированные моноглицериды, стеарилфумарат натрия, стеароилпропиленгликольгидросукцинат, моно/диацетилированные эфиры винной кислоты и моно- и диглицеридов, эфиры лимонной кислоты и моно- и диглицеридов, глицериллактоэфиры жирных кислот, ациллактилаты, лактиловые эфиры жирных кислот, стеароил-2-лактилат натрия, стеароиллактилат натрия, альгинатные соли, пропиленгликольальгинат, этоксилированные алкилсульфаты, алкилбензолсульфоны, α-олефинсульфонаты, ацилизетионаты, ацилтаураты, сульфонаты алкилглицериловых эфиров, октилсульфосукцинат натрия, ундециленамидео-МЕА-сульфосукцинат натрия, бромид гексадецилтриаммония, бромид децилтриметиламмония, бромид цетилтриметиламмония, хлорид додециламмония, соли алкилбензилдиметиламмония, соли диизобутилфеноксиэтоксидиметилбензиламмония, соли алкилпиридиния, бетаины (триалкилглицин), лаурилбетаин (N-лаурил,N,N-диметилглицин) и этоксилированные амины (амин полиоксиэтилен-15 кокосового масла). Для простоты противоионы представлены выше. Специалисту будет понятно, однако, что можно использовать любой биологически приемлемый противоион. Например, хотя жирные кислоты показаны как натриевые соли, другие катионные противоионы также можно использовать, такие как, например, катионы щелочных металлов или аммония. Композиции комбинаций NsIDI/NsIDIE по настоящему изобретению могут включать один или более ионных поверхностно-активных агентов, указанных выше.

Наполнители, имеющиеся в композициях по настоящему изобретению, присутствуют в таких количествах, что носитель образует прозрачную или опалесцирующую водную дисперсию NsIDI, NsIDIE или комбинации NsIDI/NsIDIE, секвестированных внутри липосомы. Относительное количество поверхностно-активного наполнителя, необходимое для изготовления липосомных композиций или композиций твердых липидных наночастиц, определяют с использованием известных методик. Например, липосомы можно изготавливать с использованием ряда технологий, таких, которые подробно описаны в Szoka et al., 1980. Многослойные пузырьки (MLV) можно сформировать с использованием простой технологии гидратации липидной пленки. При данной процедуре смесь липосомообразующих липидов того типа, который подробно описан выше, растворенную в подходящем органическом растворителе, выпаривают в сосуде с получением тонкой пленки, которую затем покрывают водной средой. Липидная пленка гидратируется с образованием MLV обычно размером приблизительно от 0,1 до 10 микрон.

Если необходимо, можно применить другую признанную технологию получения липосом. Например, применение липосом для облегчения захвата клеткой описано в патентах США №№4897355 и 4394448.

Дополнительное применение

Соединения по настоящему изобретению можно применять в иммуномодулирующих или механистических исследованиях для того, чтобы определить, являются ли другие комбинации или отдельные агенты столь же эффективными как комбинация по настоящему изобретению в отношении ингибирования секреции или выработки провоспалительных цитокинов или в отношении модулирования иммунного ответа с использованием исследований, хорошо известных специалистам, примеры которых описаны в настоящем документе. Например, соединения-кандидаты можно комбинировать с NsIDIE (или его метаболитом или аналогом) и наносить на стимулированные РВМС. По истечении подходящего периода времени клетки исследуют на предмет секреции или выработки цитокинов или другого подходящего иммунного ответа. Относительные эффекты комбинаций по сравнению друг с другом и по сравнению с отдельными агентами сравнивают и идентифицируют эффективные соединения и комбинации.

Комбинации по настоящему изобретению также являются полезными инструментами для освещения механистической информации о биологических путях, участвующих в воспалении. Указанная информация может привести к разработке новых комбинаций или отдельных агентов для ингибирования воспаления, вызванного провоспалительными цитокинами. Способы, известные специалистам, для установления биологических путей, можно использовать для определения пути или сети путей, на которые воздействует контактирование клеток, стимулированных вырабатывать провоспалительные цитокины, с соединениями по настоящему изобретению. Указанные способы могут включать анализ клеточных составляющих, которые экспрессируются или репрессируются после контакта с соединениями по настоящему изобретению по сравнению с необработанными положительными или отрицательными контрольными соединениями, и/или новыми отдельными агентами или комбинациями, или анализ некоторых других видов метаболической активности клетки, такой как ферментативная активность, поглощение питательных веществ и пролиферация. Анализируемые клеточные компоненты могут включать генные транскрипты и экспрессию белков. Подходящие способы могут включать стандартные биохимические методики, нанесение радиоактивной метки на соединения по настоящему изобретению (например, метки ¹⁴С или ³Н) и наблюдение связывания соединений с белками, например, с использованием двумерных гелей, установление профилей экспрессии генов. После идентификации указанные соединения можно использовать на моделях in vivo для дальнейшего обоснования инструмента или разработки новых противовоспалительных агентов.

Следующие примеры предназначены для иллюстрации изобретения. Они не должны истолковываться как ограничивающие каким бы то ни было образом настоящее изобретение.

Пример 1: Исследование активности подавления провоспалительных цитокинов

Матриксы с разведенными соединениями анализировали на предмет подавления IFNγ, IL-1β, IL-2, IL-4, IL-5 и TNFα, как описано ниже.

IFNγ

100 мкл суспензии разведенных человеческих белых кровяных клеток, содержавшихся в каждой лунке полистиролового 384-луночного планшета (NalgeNunc), стимулировали на предмет секреции IFNγ посредством обработки конечной концентрацией 10 нг/мл форбол 12-миристата 13-ацетата (Sigma, P-1585) и 750 нг/мл иономицина (Sigma, I-0634). Различные концентрации каждогоиспытуемого соединения добавляли во время стимуляции. Через 16-18 часов инкубации при 37°С в увлажняемом инкубаторе планшет центрифугировали, а надосадочную жидкость переносили в белый непрозрачный полистироловый 384-луночный планшет (NalgeNunc, Maxisorb), покрытый анти-IFNγ антителом (Endogen, #M-700A-E). Через два часа инкубации планшет промывали (Tecan Power Washer 384) физиологическим раствором с фосфатным буфером (PBS), содержавшим 0,1% Tween 20 (монолаурата полиоксиэтиленсорбитана), и инкубировали в течение дополнительного часа с другим анти-IFNγ антителом, которое было помечено биотином (Endogen, M701B) и пероксидазой хрена (HRP), связанной со стрептавидином (PharMingen, #13047E). После промывания планшета 0,1% Tween20/PBS добавляли HPR-люминесцентный субстрат в каждую лунку и измеряли интенсивность света с использованием планшет-люминометра LJL Analyst.

IL-2

100 мкл суспензии разведенных человеческих белых кровяных клеток, содержавшихся в каждой лунке полистиролового 384-луночного планшета (NalgeNunc), стимулировали на предмет секреции IL-2 посредством обработки конечной концентрацией 10 нг/мл форбол 12-миристата 13-ацетата (Sigma, P-1585) и 750 нг/мл иономицина (Sigma, I-0634). Различные концентрации каждого испытуемого соединения добавляли во время стимуляции. Через 16-18 часов инкубации при 37°С в увлажняемом инкубаторе планшет центрифугировали, а надосадочную жидкость переносили в белый непрозрачный полистироловый 384-луночный планшет (NalgeNunc,Maxisorb), покрытый анти-IL-2 антителом (PharMingen, #555051). Через два часа инкубации планшет промывали (Tecan PowerWasher 384) физиологическим раствором с фосфатным буфером (PBS), содержавшим 0,1% Tween 20, и инкубировали в течение дополнительного часа с другим анти-IL-2 антителом, которое было помечено биотином (Endogen, M600B) и HRP, связанной со стрептавидином (PharMingen, #13047E). После промывания планшета 0,1% Tween 20/PBS добавляли HPR-люминесцентный субстрат в каждуюлунку и измеряли интенсивность света с использованием планшет-люминометра LJL Analyst.

Стимуляция TNFα форбол 12-миристатом 13-ацетатом

Влияние комбинаций испытуемых соединений на секрецию TNFα исследовали на белых кровяных клетках из лейкоцитной пленки человека, стимулированных форбол 12-миристатом 13-ацетатом следующим образом. Человеческие белые кровяные клетки из лейкоцитной пленки разбавляли 1:50 в средах (RPMI; Gibco BRL, #11875-085), 10% фетальной телячьей сыворотке (Gibco BRL, #25140-097), 2% пенициллине/стрептомицине (Gibco BRL, #15140-122)), и 50 мкл разбавленных белых кровяных клеток помещали в каждую лунку аналитического планшета. Лекарственные средства добавляли до обозначенной концентрации. Через 16-18 часов инкубации при 37°С в увлажняемом инкубаторе в атмосфере 5% СО₂ планшет центрифугировали, а надосадочную жидкость переносили в белый непрозрачный полистироловый 384-луночный планшет (NalgeNunc, Maxisorb), покрытый анти-TNF-α антителом (PharMingen, #551220). Через два часа инкубации планшет промывали (Tecan PowerWasher 384) PBS, содержавшим 0,1% Tween 20, и инкубировали в течение дополнительного часа с меченным биотином анти-TNF-α антителом (PharMingen, #554511) и HRP, связанной со стрептавидином (PharMingen, #13047E). Планшет затем снова промывали 0,1% Tween 20/PBS. Добавляли HPR-люминесцентный субстрат в каждую лунку и измеряли интенсивность света в каждой лунке с использованием планшет-люминометра.

Стимуляция TNFα липополисахаридом

100 мкл суспензии разведенных человеческих белых кровяных клеток, содержавшихся в каждой лунке полистиролового 384-луночного планшета (NalgeNunc), стимулировали на предмет секреции TNFα посредством обработки конечной концентрацией 2 мкг/мл липополисахарида (Sigma, L-4130). Различные концентрации каждого испытуемого соединения добавляли во время стимуляции. Через 16-18 часов инкубации при 37°С в увлажняемом инкубаторе планшет центрифугировали, а надосадочную жидкость переносили в белый непрозрачный полистироловый 384-луночный планшет (NalgeNunc, Maxisorb), покрытый анти-TNFα антителом (PharMingen, #551220). Через два часа инкубации планшет промывали (Tecan PowerWasher 384) PBS, содержавшим 0,1% Tween 20, и инкубировали в течение дополнительного часа с другим анти-TNFα антителом, которое было помечено биотином (PharMingen, #554511) и HRP, связанной со стрептавидином (PharMingen, #13047E). После промывания планшета 0,1% Tween 20/PBS добавляли HPR-люминесцентный субстрат в каждую лунку и измеряли интенсивность света с использованием планшет-люминометра LJL Analyst.

Процент ингибирования

Процент ингибирования (%I) для каждой лунки рассчитывали с использованием следующей формулы:

%I=[(средн. для необработанных лунок - обработанная лунка)/(средн. для необработанных лунок)] x 100

Средняя величина для необработанных лунок (средн. для необработанных лунок) представляет собой арифметическую среднюю величину для 40 лунок из того же планшета, обработанных только носителем. Отрицательные величины ингибирования получаются в результате локальных вариаций в обработанных лунках по сравнению с необработанными лунками.

Пример 2: Подготовка соединений

Маточные растворы, содержавшие NsIDI и NsIDIE, изготавливали в диметилсульфоксиде (DMSO) до конечной концентрации от 0 до 40 мкМ. Эталонные планшеты изготавливали таким образом, что они содержали разведения маточных растворов соединений, описанных выше. Эталонные планшеты герметично запечатывали и хранили при -20°С до использования.

Маточные растворы NsIDI

Маточный раствор, содержавший циклоспорин А, изготавливали с концентрацией 1,2 мг/мл в DMSO. Маточный раствор такролимуса изготавливали с концентрацией 0,04 мг/мл в DMSO.

Маточные растворы NsIDIE

Маточные растворы, содержавшие сертралин, флуоксетин или флувоксамин, изготавливали с концентрацией 10 мг/мл в DMSO. Маточный раствор, содержавший мапротилин, изготавливали с концентрацией 10 мг/мл в DMSO. Маточный раствор, содержавший триклозан, изготавливали с концентрацией 10 мг/мл в DMSO. Маточный раствор, содержавший лоратадин, изготавливали с концентрацией 10 мг/мл в DMSO. Маточный раствор, содержавший хлорпромазин или этопропазин, изготавливали с концентрацией 10 мг/мл в DMSO. Маточный раствор, содержавший лоперамид, изготавливали с концентрацией 10 мг/мл в DMSO.

Эталонные планшеты изготавливали таким образом, что они содержали разведения маточных растворов соединений, описанных выше. Эталонные планшеты герметично запечатывали и хранили при -20°С до использования.

Конечные планшеты для отдельных агентов изготавливали переносом 1 мкл маточного раствора из конкретного эталонного планшета на планшет для разведений, содержавший 100 мкл сред (RPMI; Gibco BRL, #11875-085), 10% фетальной телячьей сыворотки (Gibco BRL, #25140-097), 2% пенициллина/стрептомицина (Gibco BRL, #15140-122)), с использованием жидкостного манипулятора Packard Mini-Trak. Указанный планшет для разведений затем перемешивают и аликвоту 5 мкл переносят в конечный планшет для анализа, который предварительно заполняли средами RPMI 50 мкл на лунку, содержавшими соответствующий стимулятор для активации секреции IFNγ, IL-1β, IL-2 или TNFα (см. пример 1).

Пример 3: Комбинация циклоспорина А и сертралина уменьшает секрецию IL-2 in vitro

Секрецию IL-2 определяли с использованием ELISA, как описано выше, после стимуляции форбол 12-миристатом 13-ацетатом и иономицином. Эффекты различных концентраций циклоспорина А, сертралина и комбинации циклоспорина А и сертралина сравнивали с контрольными лунками. Указанные лунки стимулировали форбол 12-миристатом 13-ацетатом и иономицином, но не добавляли циклоспорина А или сертралина.

Результаты данного эксперимента показаны в таблице 6. Эффекты агентов по отдельности и в комбинации показаны как процент ингибирования секреции IL-2.

Данные показывают, что в настоящем исследовании циклоспорин А максимально ингибирует выработку IL-2 на 83,5% при концентрации 1 мкМ. Добавление 8 мкМ сертралина уменьшает концентрацию циклоспорина А, которая требуется для такого же ингибирования, до 0,031 мкМ, т.е. уменьшает концентрацию циклоспорина А в 32 раза.

Таблица 6 % ингибирования IL-2 в РВМС PI
Циклоспорин А (мкМ)
Сертралин (мкМ)		0	0,008	0,016	0,031	0,062	0,125	0,25	0,5	1,0
	0	-0,4	0,0	-1,7	18,6	44,4	68,5	75,1	80,6	83,5
	0,25	2,3	1,7	3,4	17,5	46,4	66,8	77,9	81,1	83,2
	0,5	-2,9	0,6	13,1	22,2	48,5	71,4	79,5	82,6	84,2
	1	3,2	-0,5	8,3	27,4	50,1	72,6	79,8	83,2	85,9
	2	-0,8	9,0	6,4	28,5	64,4	79,1	83,8	87,0	87,4
	4	3,0	11,0	25,1	56,8	81,6	88,3	89,8	91,0	92,2
	8	20,8	34,9	55,7	85,4	92,4	94,5	95,2	95,5	95,4
	16	70,9	81,6	90,7	93,6	94,8	95,7	96,0	96,3	96,4
32	86,3	90,1	89,2	92,2	90,1	95,7	96,2	95,8	91,5

Пример 4: Комбинация циклоспорина А и сертралина уменьшает секрецию IFNγ in vitro

Секрецию IFNγ определяли с использованием ELISA, как описано выше, после стимуляции форбол 12-миристатом 13-ацетатом и иономицином. Эффект различных концентраций циклоспорина А, сертралина и циклоспорина А в комбинации с сертралином сравнивали с контрольными лунками, стимулированными без циклоспорина А или сертралина. Результаты данного эксперимента показаны в таблице 7. Эффекты агентов по отдельности и в комбинации показаны как процент ингибирования секреции IFNγ.

Данные показывают, что в настоящем исследовании циклоспорин А максимально ингибирует выработку IFNγ на 95,5% при концентрации 1 мкМ. Добавление 8 мкМ сертралина демонстрирует эффект уменьшения дозы циклоспорина А, почти удваивая ингибирование IFNγ 0,062 мкМ циклоспорином А, достигая 83,4% ингибирования.

Таблица 7 % ингибирования IFNγ в РВМС PI
Циклоспорин А (мкМ)
Сертралин (мкМ)		0	0,0077	0,015	0,031	0,062	0,12	0,25	0,5	1,0
	0	-6,3	4,4	12,9	20,1	47,0	76,5	93,1	95,3	95,5
	0,25	0,0	5,6	8,6	18,6	41,8	78,1	93,2	95,3	95,4
	0,5	0,0	-10,5	7,6	22,3	49,2	80,5	94,0	95,6	95,8
1	4,5	5,7	11,4	22,9	47,4	82,3	93,9	95,4	95,7
	2	7,7	10,9	18,6	34,0	61,6	89,4	95,0	96,0	95,7
	4	26,0	29,0	33,5	46,3	71,4	91,2	95,7	96,7	96,8
	8	50,1	54,2	60,6	69,5	83,4	94,2	96,7	97,0	97,1
	16	78,2	82,8	80,9	85,2	91,9	96,0	97,3	97,6	96,6
32	92,2	94,0	93,1	95,3	96,7	96,7	97,9	97,8	95,8

Пример 5: Комбинация циклоспорина А и сертралина уменьшает секрецию TNF-α in vitro

Секрецию TNF-α определяли с использованием ELISA, как описано выше, после стимуляции форбол 12-миристатом 13-ацетатом и иономицином. Эффект различных концентраций циклоспорина А, сертралина и циклоспорина А в комбинации с сертралином сравнивали с контрольными лунками, стимулированными без циклоспорина А или сертралина. Результаты данного эксперимента показаны в таблице 8. Эффекты агентов по отдельности и в комбинации показаны как процент ингибирования секреции TNF-α.

Данные показывают, что в настоящем исследовании циклоспорин А максимально ингибирует выработку TNF-α на 94,2% при концентрации 1 мкМ. Добавление 8 мкМ сертралина демонстрирует эффект уменьшения дозы циклоспорина А, удваивая ингибирование TNF-α 0,031 мкМ циклоспорином А, достигая 85,4% ингибирования.

Таблица 8 % ингибирования TNF-α в РВМС PI
Циклоспорин А (мкМ)
Сертралин (мкМ)		0	0,0077	0,015	0,031	0,062	0,12	0,25	0,5	1,0
	0	-1,8	10,9	11,2	38,4	61,8	82,0	92,6	94,0	94,2
	0,25	-1,8	10,6	14,0	32,0	60,5	81,1	92,7	94,1	93,3
	0,5	-6,4	4,0	23,7	38,9	70,0	87,5	93,1	94,6	95,0
	1	-0,4	13,2	22,7	40,9	63,9	88,7	92,3	95,3	95,4
	2	-0,6	22,5	33,1	55,1	72,0	91,3	95,0	95,7	95,5
	4	23,5	37,8	46,8	62,0	84,6	94,6	95,9	96,4	96,9
	8	59,1	70,8	73,5	85,4	93,5	96,5	97,0	97,3	97,1
	16	73,8	93,4	92,4	95,7	97,4	97,6	98,2	95,0	97,7
32	96,0	70,2	97,4	98,1	98,0	98,0	97,5	97,9	74,5

Пример 6: Комбинация циклоспорина А и флуоксетина уменьшает секрецию IL-2 in vitro

Секрецию IL-2 определяли с использованием ELISA, как описано выше, после стимуляции форбол 12-миристатом 13-ацетатом и иономицином. Эффект различных концентраций циклоспорина А, флуоксетина и циклоспорина А в комбинации с флуоксетином сравнивали с контрольными лунками, стимулированными без циклоспорина А или флуоксетина. Результаты данного эксперимента показаны в таблице 9. Эффекты агентов по отдельности и в комбинации показаны как процент ингибирования секреции IL-2.

Данные показывают, что в настоящем исследовании добавление 21 мкМ флуоксетина в комбинации с 0,062 мкМ циклоспорином А ингибирует секрецию IL-2 на 98,8%, усиливая ингибирование, которое достигалось 0,062 мкМ циклоспорином А в отдельности.

Таблица 9 % ингибирования IL-2 в РВМС PI
Циклоспорин А (мкМ)
Флуоксетин (мкМ)		0	0,0077	0,015	0,031	0,062	0,12	0,25	0,5	1,0
	0	-0,8	7,7	20,2	48,5	72,4	91,2	94,7	95,2	100,3
	0,65	0,8	12,7	15,8	47,3	75,1	86,7	92,9	94,6	98,4
	1,3	-2,1	11,2	22,3	49,5	73,1	78,7	93,0	93,1	91,6
	2,6	0,6	8,8	28,3	47,2	71,3	84,7	91,5	93,1	92,2
	5,2	-0,2	11,2	25,5	55,2	77,1	82,6	89,1	91,0	92,6
	10	16,1	24,3	45,5	66,5	91,2	91,3	93,6	92,4	89,4
	21	47,4	63,4	74,7	91,7	98,8	96,8	94,0	93,5	106,3
	42	90,3	94,2	91,7	105,2	109,8	109,3	102,0	107,0	106,0
84	103,4	109,6	110,0	109,7	110,8	104,4	103,9	108,1	105,2

Пример 7: Комбинация такролимуса и флувоксамина уменьшает секрецию IL-2 in vitro

Секрецию IL-2 определяли с использованием ELISA, как описано выше, после стимуляции форбол 12-миристатом 13-ацетатом и иономицином. Эффект различных концентраций такролимуса, флувоксамина и такролимуса в комбинации с флувоксамином сравнивали с контрольными лунками, стимулированными без такролимуса или флувоксамина. Результаты данного эксперимента показаны в таблице 10. Эффекты агентов по отдельности и в комбинации показаны как процент ингибирования секреции IL-2.

Данные показывают, что в настоящем исследовании такролимус максимально ингибирует выработку IL-2 на 87% при концентрации 0,05 мкМ. Добавление 10 мкМ флувоксамина демонстрирует эффект уменьшения дозы циклоспорина А, достигая 85% ингибирования IL-2 0,013 мкМ такролимусом.

Таблица 10 % ингибирования IL-2 в РВМС PI
Такролимус (мкМ)
Флувокса-мин (мкМ)		0	0,0004	0,0008	0,0016	0,0031	0,0062	0,013	0,025	0,05
	0	-6,7	0,73	-4,4	8,1	19	44	60	76	87
	0,65	1,1	2	-1,1	13	17	39	63	79	86
	1,3	3,6	2,7	7,8	12	26	48	64	80	91
	2,6	4,6	1,7	7,4	8,8	17	43	62	80	90
	5,2	-1,4	-0,98	5,4	12	23	48	70	78	90
	10	-2	7,9	2,9	7,1	30	55	68	83	91
	21	3,6	4,6	8	15	33	53	76	88	94
	42	8,1	14	10	25	48	70	85	92	97
84	22	31	43	54	75	92	98	103	106

Пример 8: Комбинация циклоспорина А и пароксетина уменьшает секрецию IL-2 in vitro

Секрецию IL-2 определяли с использованием ELISA, как описано выше, после стимуляции форбол 12-миристатом 13-ацетатом и иономицином. Эффекты различных концентраций циклоспорина А, пароксетина и циклоспорина А в комбинации с пароксетином сравнивали с контрольными лунками, стимулированными без циклоспорина А или пароксетина. Результаты данного эксперимента показаны в таблице 11. Эффекты агентов по отдельности и в комбинации показаны как процент ингибирования секреции IL-2.

Данные показывают, что в настоящем исследовании циклоспорин А ингибирует выработку IL-2 на 97,7% при концентрации 1 мкМ. Добавление 8,9 мкМ пароксетина демонстрирует эффект уменьшения дозы циклоспорина А, достигая 90,7% ингибирования IL-2 0,062 мкМ циклоспорином А.

Таблица 11 % ингибирования IL-2 в РВМС PI
Циклоспорин А (мкМ)
Пароксетин (мкМ)		0	0,0077	0,015	0,031	0,062	0,12	0,25	0,5	1,0
	0	1,0	-1,7	29,7	43,9	68,4	86,2	98,3	96,8	97,7
	0,56	-2,4	5,0	23,4	47,6	69,1	85,1	91,5	97,9	102,7
	1,1	-0,3	2,7	30,4	39,9	71,8	89,5	95,2	97,9	97,7
	2,2	4,8	10,5	26,8	42,7	69,6	88,5	95,4	92,1	100,4
	4,4	1,9	31,2	40,7	57,6	83,2	94,4	95,2	94,0	97,4
	8,9	21,6	38,7	61,3	74,1	90,7	91,9	92,5	95,9	92,2
	18	54,2	71,0	81,2	88,2	90,6	93,4	96,4	98,1	107,0
	36	83,5	89,8	94,3	102,5	100,5	99,5	99,1	104,3	100,7
72	95,7	98,3	98,9	99,9	95,5	97,8	97,9	105,8	104,3

Пример 9: Комбинация циклоспорина А и пароксетина уменьшает секрецию IL-2 in vitro

Секрецию IL-2 определяли с использованием ELISA, как описано выше, после стимуляции форбол 12-миристатом 13-ацетатом и иономицином. Эффект различных концентраций циклоспорина А, пароксетина и циклоспорина А в комбинации с пароксетином сравнивали с контрольными лунками, стимулированными без циклоспорина А или пароксетина. Результаты данного эксперимента показаны в таблице 12. Эффекты агентов по отдельности и в комбинации показаны как процент ингибирования секреции IL-2.

Таблица 12 % ингибирования IL-2 в РВМС PI
Циклоспорин А (мкМ)
Пароксетин (мкМ)		0	0,0077	0,015	0,031	0,062	0,12	0,25	0,5	1,0
	0	1,0	-1,7	29,7	43,9	68,4	86,2	98,3	96,8	97,7
	0,56	-2,4	5,0	23,4	47,6	69,1	85,1	91,5	97,9	102,7
	1,1	-0,3	2,7	30,4	39,9	71,8	89,5	95,2	97,9	97,7
2,2	4,8	10,5	26,8	42,7	69,6	88,5	95,4	92,1	100,4
	4,4	1,9	31,2	40,7	57,6	83,2	94,4	95,2	94,0	97,4
	8,9	21,6	38,7	61,3	74,1	90,7	91,9	92,5	95,9	92,2
	18	54,2	71,0	81,2	88,2	90,6	93,4	96,4	98,1	107,0
	36	83,5	89,8	94,3	102,5	100,5	99,5	99,1	104,3	100,7
72	95,7	98,3	98,9	99,9	95,5	97,8	97,9	105,8	104,3

Пример 10: Комбинация циклоспорина А и мапротилина уменьшает секрецию IL-2 in vitro

Секрецию IL-2 определяли с использованием ELISA, как описано выше, после стимуляции форбол 12-миристатом 13-ацетатом и иономицином. Эффекты различных концентраций циклоспорина А, мапротилина и циклоспорина А в комбинации с мапротилином сравнивали с контрольными лунками. Указанные лунки стимулировали форбол 12-миристатом 13-ацетатом и иономицином, но не добавляли циклоспорина А или мапротилина.

Результаты данного эксперимента показаны в таблице 13. Эффекты агентов по отдельности и в комбинации показаны как процент ингибирования секреции IL-2. Указанные результаты были усреднены по экспериментам, выполненным с белыми кровяными клетками, взятыми у двух разных доноров.

Таблица 13 % ингибирования
Циклоспорин А (мкМ)
Мапротилин (мкМ)		0,00	0,0032	0,0064	0,013	0,026	0,052	0,10	0,21	0,41
	0,00	-15,60	-12,75	-13,52	-8,52	11,51	34,60	63,75	77,15	81,65
	0,25	-11,33	-17,35	-16,60	-11,45	3,38	35,40	63,50	77,50	81,95
	0,50	-13,60	-11,69	-13,59	-9,68	3,42	41,85	74,55	75,35	81,10
	1,00	-12,50	-10,55	-11,86	-3,55	14,10	44,55	75,50	76,40	81,35
	2,00	-11,75	-12,52	-6,86	5,82	20,83	59,30	76,45	77,70	80,00
	4,00	2,26	12,16	8,33	12,76	44,55	69,35	74,90	79,85	81,80
	8,00	42,00	43,50	46,70	53,50	69,95	77,75	84,30	84,85	86,15
	16,00	68,00	71,10	78,05	79,25	84,65	81,80	84,30	87,20	86,85
32,00	77,90	81,60	83,25	81,65	85,00	85,95	84,65	86,75	86,15

Пример 11: Комбинация циклоспорина А и мапротилина уменьшает секрецию TNF-α in vitro

Секрецию TNF-α определяли с использованием ELISA, как описано выше, после стимуляции липополисахаридом. Эффект различных концентраций циклоспорина А, мапротилина и циклоспорина А в комбинации с мапротилином сравнивали с контрольными лунками, стимулированными без циклоспорина А или мапротилина. Результаты показаны в таблице 14. Эффекты агентов по отдельности и в комбинации показаны как процент ингибирования секреции TNF-α. Указанные результаты представляют собой средние величины по экспериментам, выполненным с белыми кровяными клетками, взятыми у двух доноров.

Таблица 14 % ингибирования
Циклоспорин А (мкМ)
Мапротилин (мкМ)		0,00	0,077	0,015	0,031	0,062	0,12	0,25	0,50	0,99
	0,00	-3,84	19,67	35,90	54,90	84,05	92,80	95,80	94,60	95,75
	0,27	-10,03	29,37	40,35	61,90	80,55	92,25	95,45	95,70	97,25
	0,54	-9,41	21,82	40,25	60,25	77,90	92,95	97,90	96,60	96,15
	1,10	-7,35	11,86	54,70	62,80	80,30	91,95	97,45	95,90	95,95
	2,20	-3,53	7,69	57,20	65,00	85,60	94,00	94,75	97,40	95,95
	4,30	6,62	12,46	50,85	71,50	83,20	94,75	96,10	95,10	95,60
	8,60	8,37	30,85	57,80	71,05	87,85	94,70	95,75	97,10	96,50
	17,00	33,90	50,80	73,10	87,15	90,80	96,10	96,40	97,00	97,55
35,00	70,25	90,65	92,25	96,00	97,15	94,85	96,45	97,70	97,95

Пример 12: Комбинация циклоспорина А и триклозана уменьшает секрецию IL-2 in vitro

Секрецию IL-2 определяли с использованием ELISA, как описано выше, после стимуляции форбол 12-миристатом 13-ацетатом и иономицином. Эффекты различных концентраций циклоспорина А, триклозана и циклоспорина А в комбинации с триклозаном сравнивали с контрольными лунками. Указанные лунки стимулировали форбол 12-миристатом 13-ацетатом и иономицином, но не добавляли циклоспорина А или триклозана.

Результаты данного эксперимента показаны в таблице 15. Эффекты агентов по отдельности и в комбинации показаны как процент ингибирования секреции IL-2. Указанные результаты были усреднены по экспериментам, выполненным с белыми кровяными клетками, взятыми у двух разных доноров.

Таблица 15 % ингибирования
Циклоспорин А (мкМ)
Триклозан (мкМ)		0,00	0,0077	0,015	0,031	0,062	0,12	0,25	0,5	0,99
	0	-7,8	-1,2	22,3	39,6	62,6	86,1	94,1	94,5	95,9
	0,27	-8,1	-3,2	16,6	35,9	62,4	85,4	93,5	95,1	96,1
	0,54	-4,7	0,7	17,4	40,3	62,7	88,6	94,1	96,0	96,8
	1,1	4,2	6,1	21,8	36,2	71,8	84,6	94,9	96,3	96,2
	2,2	1,2	8,1	14,8	33,2	71,4	89,4	94,7	95,9	95,6
	4,3	1,7	9,4	17,1	35,2	71,0	92,3	94,0	95,5	95,6
	8,6	1,7	11,9	24,6	53,7	78,1	91,6	95,1	95,2	96,6
	17	0,5	7,7	29,4	63,3	83,1	94,8	95,9	96,1	96,4
35	53,8	82,5	86,1	94,2	96,6	97,4	96,7	97,8	97,4

Пример 13: Комбинация циклоспорина А и триклозана уменьшает секрецию TNF-α in vitro

Секрецию TNF-α определяли с использованием ELISA, как описано выше, после стимуляции липополисахаридом. Эффект различных концентраций циклоспорина А, триклозана и циклоспорина А в комбинации с триклозаном сравнивали с контрольными лунками, стимулированными без циклоспорина А или триклозана. Результаты данного эксперимента показаны в таблице 16. Эффекты агентов по отдельности и в комбинации показаны как процент ингибирования секреции TNF-α. Результаты данного эксперимента представляют собой средние величины по экспериментам, выполненным с белыми кровяными клетками, взятыми у двух доноров.

Таблица 16 % ингибирования
Циклоспорин А (мкМ)
Триклозан (мкМ)		0	0,0077	0,015	0,031	0,062	0,12	0,25	0,5	0,99
	0	-3,8	19,7	35,9	54,9	84,1	92,8	95,8	94,6	95,8
	0,27	-10,0	29,4	40,4	61,9	80,6	92,3	95,5	95,7	97,3
	0,54	-9,4	21,8	40,3	60,3	77,9	93,0	97,9	96,6	96,2
1,1	-7,3	11,9	54,7	62,8	80,3	92,0	97,5	95,9	96,0
	2,2	-3,5	7,7	57,2	65,0	85,6	94,0	94,8	97,4	96,0
	4,3	6,6	12,5	50,9	71,5	83,2	94,8	96,1	95,1	95,6
	8,6	8,4	30,9	57,8	71,1	87,9	94,7	95,8	97,1	96,5
	17	33,9	50,8	73,1	87,2	90,8	96,1	96,4	97,0	97,6
35	70,3	90,7	92,3	96,0	97,2	94,9	96,5	97,7	98,0

Пример 14: Комбинация циклоспорина А и лоратадина уменьшает секрецию IL-2 in vitro

Секрецию IL-2 определяли с использованием ELISA, как описано выше, после стимуляции форбол 12-миристатом 13-ацетатом и иономицином. Эффекты различных концентраций циклоспорина А, лоратадина и циклоспорина А в комбинации с лоратадином сравнивали с контрольными лунками. Указанные лунки стимулировали форбол 12-миристатом 13-ацетатом и иономицином, но не добавляли циклоспорина А или лоратадина.

Результаты данного эксперимента показаны в таблице 17. Эффекты агентов по отдельности и в комбинации показаны как процент ингибирования секреции IL-2. Результаты, представленные ниже, получены в единственном репрезентативном эксперименте.

Таблица 17 % ингибирования
Циклоспорин А (мкМ)
Лоратадин (мкМ)		0	0,0077	0,015	0,031	0,062	0,12	0,25	0,5	0,99
	0	-20,0	-8,2	-7,7	13,3	46,1	77,9	86,6	93,1	92,8
	0,53	-20,0	-12,1	-15,5	8,8	51,9	81,8	88,3	91,5	92,9
	1,1	-17,8	-18,3	-20,0	7,2	50,2	81,2	78,9	92,3	93,6
	2,1	-16,7	-12,7	-8,4	0,8	38,5	80,6	83,7	89,8	93,2
	4,3	-20,0	-20,0	-8,4	9,9	52,6	79,4	87,8	91,1	91,8
	8,5	-20,0	-11,4	-7,3	4,5	58,4	82,5	87,0	90,5	93,3
	17	-20,0	-16,1	2,8	22,8	70,6	84,6	88,6	92,9	93,6
	34	-19,1	-6,0	10,0	40,5	76,3	86,7	91,2	93,8	95,2
68	-4,3	7,5	22,3	70,1	87,8	92,4	95,0	95,4	95,9

Пример 15: Комбинация циклоспорина А и лоратадина уменьшает секрецию TNF-α in vitro

Секрецию TNF-α определяли с использованием ELISA, как описано выше, после стимуляции липополисахаридом. Эффект различных концентраций циклоспорина А, лоратадина и циклоспорина А в комбинации с лоратадином сравнивали с контрольными лунками, стимулированными без циклоспорина А или лоратадина. Результаты данного эксперимента показаны в таблице 18. Эффекты агентов по отдельности и в комбинации показаны как процент ингибирования секреции TNF-α. Указанные результаты представляют собой средние величины по экспериментам, выполненным с белыми кровяными клетками, взятыми у двух доноров. Результаты, представленные ниже, получены в единственном репрезентативном эксперименте.

Таблица 18 % ингибирования
Циклоспорин А (мкМ)
Лоратадин (мкМ)		0	0,0077	0,015	0,031	0,062	0,12	0,25	0,5	0,99
	0	10,4	10,4	24,7	63,0	82,5	90,2	89,4	84,0	87,7
	0,53	4,9	21,3	37,7	58,5	85,8	90,1	82,6	85,9	92,7
	1,1	-3,8	33,0	39,6	54,7	84,4	89,4	91,5	92,1	92,4
	2,1	18,3	28,4	28,7	56,4	79,9	91,1	92,7	90,7	93,3
	4,3	9,2	26,2	32,9	55,1	84,9	90,4	93,3	93,0	94,2
	8,5	12,5	37,8	51,4	72,3	88,7	93,7	93,8	93,3	93,5
	17	42,1	48,9	62,1	80,4	90,2	97,1	94,1	95,6	95,1
	34	44,9	65,5	72,8	88,0	91,1	93,3	94,4	95,4	95,3
68	69,8	73,5	89,0	87,5	95,9	97,1	93,3	96,7	96,8

Пример 16: Комбинация циклоспорина А и дезлоратадина уменьшает секрецию TNF-α in vitro

Секрецию TNF-α определяли, как описано выше, после стимуляции форбол 12-миристатом 13-ацетатом. Эффект различных концентраций циклоспорина А и дезлоратадина сравнивали с контрольными лунками, стимулированными без циклоспорина А или лоратадина. Результаты данного эксперимента показаны в таблице 19.

Таблица 19 % ингибирования
Циклоспорин А (мкМ)
Дезлоратадин (мкМ)		0	0,0019	0,0039	0,0077	0,015	0,031	0,062	0,12	0,25
	0	-0,1777	1,953	0,975	6,922	17,44	33,95	55,98	72,58	90,68
	0,25	-1,255	5,065	3,345	10,4	21,28	36,2	55,17	75,58	91,6
	0,51	-4,652	3,805	5,8	5,505	14,89	32,55	58,65	79,03	92
	1	6,598	7,185	7,982	12,26	21,1	38,65	65,02	82,45	92,93
	2	10,61	15,79	19,43	25,43	32,85	51,05	66,6	84,27	92,53
	4,1	31,45	38,38	33	38,95	48,93	64,78	78,58	90,38	93,78
	8,1	56	58,73	60,02	63	71,58	78,9	87,2	93,77	95,15
	16	82,18	84,38	83,05	85,28	89,5	91,95	94,2	96	95,83
33	89,4	95,05	94,75	94,97	96,07	95,45	94,42	96,8	95,62

Пример 17: Комбинация циклоспорина А и лоратадина уменьшает секрецию TNF-α in vitro

Секрецию TNF-α определяли, как описано выше, после стимуляции форбол 12-миристатом 13-ацетатом. Эффект различных концентраций циклоспорина и лоратадина сравнивали с контрольными лунками, стимулированными без циклоспорина А или лоратадина. Результаты данного эксперимента показаны в таблице 20.

Таблица 20
Циклоспорин А (мкМ)
Лоратадин (мкМ)		0	0,0019	0,0039	0,0077	0,015	0,031	0,062	0,12	0,25
	0	-0,3725	1,825	5,875	11,71	25,85	52,45	75,95	89	91,95
	0,2	0	1,041	4,4	13,2	29,1	52,4	78,75	90,35	92,95
	0,41	-2,384	2,075	3,525	11,39	27,15	49,7	79,05	90,55	91,15
	0,82	0,3615	0,16	8,96	13,9	31,4	53,5	81,75	91,3	91,65
	1,6	3,4	5,35	13,2	19,4	36,3	61,85	83,45	91,35	90,55
	3,3	4,83	14,5	5,785	24,7	38,2	63,5	84,5	89,25	91,15
	6,5	19,45	27,3	22,2	37,1	50,85	70,4	84,35	90,15	91
	13	30,1	36,95	36,15	46	61,45	73,9	88,1	91,65	92,7
26	40,7	51,25	50,9	55,35	65,6	74,4	89,3	92,05	92,15

Пример 18: Комбинация циклоспорина А и хлорпромазина уменьшает секрецию IL-2 in vitro

Секрецию IL-2 определяли с использованием ELISA, как описано выше, после стимуляции форбол 12-миристатом 13-ацетатом и иономицином. Эффекты различных концентраций циклоспорина А, хлорпромазина и комбинации хлорпромазина и циклоспорина А сравнивали с контрольными лунками. Указанные лунки стимулировали форбол 12-миристатом 13-ацетатом и иономицином, но не добавляли циклоспорина А или хлорпромазина.

Результаты данного эксперимента показаны в таблице 21. Эффекты агентов по отдельности и в комбинации показаны как процент ингибирования секреции IL-2. Результаты, представленные ниже, получены в единственном репрезентативном эксперименте.

Таблица 21 % ингибирования
Циклоспорин А (мкМ)
Хлорпромазин (мкМ)		0	0,0077	0,015	0,031	0,062	0,12	0,25	0,5	0,99
	0	-14,1	-11,7	0,35	28,8	55,6	74,0	78,6	80,1	82,3
	0,6	-13,3	-11,1	-4,7	33,6	54,8	67,2	78,7	84,9	84,2
	1,2	-18,7	-10,8	4,6	28,0	57,8	73,4	78,0	81,9	83,2
	2,5	-12,7	-14,8	-8,7	25,0	55,6	76,1	81,2	82,1	85,8
	5,0	-13,7	-5,9	6,7	36,1	66,1	77,4	81,3	85,7	86,8
	9,9	-1,9	9,5	25,9	58,8	76,7	85,0	87,9	88,4	88,1
	20,0	24,7	49,6	67,4	84,0	89,2	92,0	91,5	93,3	89,8
	40,0	80,7	86,9	89,4	94,4	94,8	94,8	95,3	94,7	94,3
80,0	94,70	92,1	94,9	89,3	95,8	92,7	93,3	94,9	94,3

Пример 19: Комбинация циклоспорина А и хлорпромазина уменьшает секрецию TNF-α in vitro

Секрецию TNF-α определяли с использованием ELISA, как описано выше, после стимуляции липополисахаридом. Эффект различных концентраций циклоспорина А, хлорпромазина и циклоспорина А в комбинации с хлорпромазином сравнивали с контрольными лунками, стимулированными без циклоспорина А или хлорпромазина. Результаты данного эксперимента показаны в таблице 22. Эффекты агентов по отдельности и в комбинации показаны как процент ингибирования секреции TNF-α. Указанные результаты представляют собой средние величины по экспериментам, выполненным с белыми кровяными клетками, взятыми у двух доноров.

Таблица 22 % ингибирования
Циклоспорин А (мкМ)
Хлорпромазин (мкМ)		0	0,0077	0,015	0,031	0,062	0,12	0,25	0,5	0,99
	0,00	-0,4	18,1	30,6	47,9	69,2	82,0	93,9	94,8	95,4
	0,27	4,9	28,0	37,9	54,0	73,6	88,1	94,9	95,5	95,9
	0,54	6,0	20,7	39,8	53,4	69,8	87,3	94,9	96,0	95,3
	1,10	4,0	26,1	30,7	50,1	67,4	86,6	94,5	95,8	96,4
	2,20	14,2	25,4	36,8	53,3	75,1	88,8	96,3	95,3	96,0
	4,30	22,2	29,8	43,5	53,6	75,5	88,1	96,3	95,7	96,5
	8,60	33,4	42,9	51,3	57,1	78,8	88,6	96,8	97,4	97,3
	17,00	46,2	51,3	51,2	63,0	79,2	88,2	97,4	97,0	97,3
35,00	45,5	59,9	56,2	68,7	81,2	91,8	97,4	98,0	97,6

Пример 20: Комбинация циклоспорина А и этопропазина уменьшает секрецию IL-2 in vitro

Секрецию IL-2 определяли с использованием ELISA, как описано выше, после стимуляции форбол 12-миристатом 13-ацетатом и иономицином. Эффекты различных концентраций циклоспорина А, этопропазина и комбинации этопропазина и циклоспорина А сравнивали с контрольными лунками. Указанные лунки стимулировали форбол 12-миристатом 13-ацетатом и иономицином, но не добавляли циклоспорина А или этопропазина.

Результаты данного эксперимента показаны в таблице 23. Эффекты агентов по отдельности и в комбинации показаны как процент ингибирования секреции IL-2. Указанные результаты представляют собой средние величины по экспериментам, выполненным с белыми кровяными клетками, взятыми у двух доноров.

Таблица 23 % ингибирования
Циклоспорин А (мкМ)
Этопропазин (мкМ)		0,00	0,01	0,02	0,03	0,06	0,12	0,25	0,50	0,99
	0,00	-12,7	-2,5	-3,7	22,1	29,3	75,7	91,0	92,1	92,2
	0,27	-8,0	-1,4	2,3	26,1	32,6	73,9	87,7	92,0	89,3
	0,54	-0,7	3,2	3,3	26,4	43,9	76,5	88,3	92,5	92,8
1,10	-9,5	19,1	8,1	25,5	43,8	77,3	89,6	93,8	93,8
	2,20	-10,4	16,1	8,7	24,8	56,0	79,7	91,3	93,9	94,0
	4,30	-6,3	15,6	10,3	28,8	64,7	89,8	91,3	93,6	94,5
	8,60	19,5	15,0	32,2	48,3	81,8	92,1	94,2	95,3	95,3
	17,00	21,0	23,6	53,8	68,3	90,4	95,7	96,3	96,6	96,1
35,00	52,3	80,5	89,2	92,9	96,9	97,3	97,0	97,5	98,1

Пример 21: Комбинация циклоспорина А и этопропазина уменьшает секрецию TNF-α in vitro

Секрецию TNF-α определяли с использованием ELISA, как описано выше, после стимуляции липополисахаридом. Эффект различных концентраций циклоспорина А, этопропазина и циклоспорина А в комбинации с этопропазином сравнивали с контрольными лунками, стимулированными без циклоспорина А или этопропазина. Результаты данного эксперимента показаны в таблице 24. Эффекты агентов по отдельности и в комбинации показаны как процент ингибирования секреции TNF-α. Указанные результаты представляют собой средние величины по экспериментам, выполненным с белыми кровяными клетками, взятыми у двух доноров.

Таблица 24 % ингибирования
Циклоспорин А (мкМ)
Этопропазин (мкМ)		0	0,01	0,02	0,03	0,06	0,12	0,25	0,50	0,99
	0,00	-14,1	-10,6	2,2	39,1	71,6	89,4	95,2	96,2	96,1
	0,27	-10,9	1,4	12,3	41,8	73,7	91,4	93,4	95,7	96,9
	0,54	-13,9	1,5	8,7	42,6	74,7	89,8	94,7	96,7	96,3
	1,10	-14,0	-9,0	16,8	36,1	73,0	88,8	95,8	97,1	96,6
	2,20	-5,5	9,5	23,4	52,6	81,3	92,1	95,8	96,1	96,5
	4,30	-5,6	4,7	22,6	52,3	84,2	94,2	94,9	94,1	96,6
	8,60	12,0	24,8	61,3	72,7	89,9	94,3	94,9	93,2	93,9
	17,00	24,3	50,9	73,9	83,7	92,9	94,2	91,9	93,7	94,7
35,00	69,6	88,7	93,8	95,8	97,5	97,0	96,7	96,1	97,4

Пример 22: Комбинация циклоспорина А и лоперамида уменьшает секрецию IL-2 in vitro

Секрецию IL-2 определяли с использованием ELISA, как описано выше, после стимуляции форбол 12-миристатом 13-ацетатом и иономицином. Эффекты различных концентраций циклоспорина А, лоперамида и комбинации лоперамида и циклоспорина А сравнивали с контрольными лунками. Указанные лунки стимулировали форбол 12-миристатом 13-ацетатом и иономицином, но не добавляли циклоспорина А или лоперамида.

Результаты данного эксперимента показаны в таблице 25. Эффекты агентов по отдельности и в комбинации показаны как процент ингибирования секреции IL-2. Указанные результаты представляют собой средние величины по экспериментам, выполненным с белыми кровяными клетками, взятыми у двух доноров.

Таблица 25 % ингибирования
Циклоспорин А (мкМ)
Лоперамид (мкМ))		0	0,0077	0,015	0,031	0,062	0,12	0,25	0,5	0,99
	0	-13,0	-0,8	-3,2	10,5	36,8	76,1	91,9	92,9	93,9
	0,27	-15,4	-7,4	-9,2	12,0	42,7	83,6	91,2	94,4	94,7
	0,54	-15,4	-10,3	-7,8	6,1	49,8	82,1	92,0	94,2	92,2
	1,1	-13,5	-10,8	-8,2	14,1	44,2	82,9	90,8	94,6	95,6
	2,2	-14,9	-12,2	-3,1	28,4	59,7	83,7	90,1	91,8	94,6
	4,3	-15,5	-12,4	5,4	29,0	66,6	86,0	92,1	93,8	94,9
	8,6	-10,5	-5,1	6,8	42,7	79,8	91,7	94,2	95,5	96,1
	17	4,2	17,6	28,0	72,4	91,5	94,9	95,9	96,2	96,3
35	42,4	67,0	83,3	92,1	96,9	96,9	97,3	97,4	96,6

Пример 23: Комбинация циклоспорина А и лоперамида уменьшаетсекрецию TNF-α in vitro

Секрецию TNF-α определяли с использованием ELISA, как описано выше, после стимуляции липополисахаридом. Эффект различных концентраций циклоспорина А, лоперамида и циклоспорина А в комбинации с лоперамидом сравнивали с контрольными лунками, стимулированными без циклоспорина А или лоперамида. Результаты данного эксперимента показаны в таблице 26. Эффекты агентов по отдельности и в комбинации показаны как процент ингибирования секреции TNF-α. Указанные результаты представляют собой средние величины по экспериментам, выполненным с белыми кровяными клетками, взятыми у двух доноров.

Таблица 26 % ингибирования
Циклоспорин А (мкМ)
Лоперамид (мкМ)		0	0,0077	0,015	0,031	0,062	0,12	0,25	0,5	0,99
	0	-5,5	14,8	34,2	57,1	80,5	91,8	96,3	96,3	96,3
	0,27	2,5	17,9	35,8	54,9	79,5	92,0	95,9	96,5	96,5
	0,54	-5,7	24,6	42,7	49,5	85,2	93,4	96,1	96,4	96,0
	1,1	-1,0	26,6	41,0	54,8	79,4	92,8	95,3	95,5	95,8
	2,2	-6,5	27,4	37,8	71,9	83,8	94,9	95,8	95,6	97,0
	4,3	7,6	27,6	43,4	76,1	91,1	95,6	96,6	96,2	96,5
	8,6	22,0	43,3	65,8	78,3	94,7	96,7	97,2	97,3	97,4
	17	56,2	73,1	84,7	92,4	97,1	97,6	97,6	98,2	98,2
35	87,3	94,2	96,3	97,7	98,8	98,8	98,9	99,0	98,7

Другие варианты осуществления настоящего изобретения

Различные модификации и вариации описанного способа и системы изобретения будут очевидны для специалистов, без отступления от объема и идеи изобретения. Хотя изобретение было описано в связи с конкретными желательными вариантами осуществления, следует понимать, что изобретение в том виде, в котором оно заявлено, не должно чрезмерно ограничиваться указанными конкретными вариантами его осуществления. Действительно, различные модификации описанных способов осуществления изобретения, которые являются очевидными дляспециалистов в области медицины, иммунологии, фармакологии, эндокринологии или в родственных областях, предназначены для включения в объем изобретения.

1. Композиция, включающая нестероидный иммунофилинзависимый иммунодепрессант (NsIDI) и усилитель NsIDI (NsIDIE), который представляет собой селективный ингибитор обратного захвата серотонина (SSRI), трициклический антидепрессант (ТСА), феноксифенол, антигистаминный агент, фенотиазин или агонист мю-опиоидных рецепторов в количествах, которые совместно являются достаточными in vivo для уменьшения секреции или выработки провоспалительных цитокинов или для лечения иммуновоспалительного заболевания.

2. Композиция по п.1, в которой указанный NsIDI представляет собой ингибитор кальциневрина.

3. Композиция по п.2, в которой указанный ингибитор кальциневрина представляет собой циклоспорин, такролимус, аскомицин, пимекролимус или ISAt×247.

4. Композиция по п.1, в которой указанный NsIDI является соединением, которое связывает FК506-связывающий белок.

5. Композиция по п.4, в которой указанное соединение, связывающее FК506-связывающий белок, представляет собой рапамицин или эверолимус.

6. Композиция по п.1, в которой указанный NsIDIE представляет собой селективный ингибитор обратного захвата серотонина (SSRI), трициклический антидепрессант (ТСА), феноксифенол, антигистаминный агент, фенотиазин или агонист мю-опиоидных рецепторов.

7. Композиция по п.6, в которой указанный SSRI выбран из группы, состоящей из флуоксетина, сертралина, пароксетина, флувоксамина, циталопрама и эсциталопрама.

8. Композиция по п.6, в которой указанный ТСА выбран из группы, состоящей из мапротилина, нортриптилина, протриптилина, дезипрамина, амитриптилина, амоксапина, кломипрамина, дотиепина, доксепина, дезипрамина, имипрамина, лофепрамина, миансерина, оксапротилина, октриптилина и тримипрамина.

9. Композиция по п.6, в которой указанный феноксифенол представляет собой триклозан.

10. Композиция по п.6, в которой указанный антигистаминный агент выбран из группы, состоящей из этаноламинов, этилендиаминов, фенотиазинов, алкиламинов, пиперазинов, пиперидинов и атипичных антигистаминных агентов.

11. Композиция по п.6, в которой указанный антигистаминный агент выбран из группы, состоящей из дезлоратадина, тиэтилперазина, бромдифенгидрамина, прометазина, ципрогептадина, лоратадина, клемизола, азатадина, цетиризина, хлорфенирамина, дименгидрамина, дифенгидрамина, доксиламина, фексофенадина, меклизина, пириламина и трипеленнамина.

12. Композиция по п.6, в которой указанный фенотиазин представляет собой хлорпромазин или этопропазин.

13. Композиция по п.6, в которой указанный агонист мю-опиоидных рецепторов представляет собой производное пиперидинбутирамида.

14. Композиция по п.6, в которой указанный агонист мю-опиоидных рецепторов представляет собой лоперамид, меперидин или дифеноксилат.

15. Композиция по любому из пп.1-14, которая изготовлена для местного введения.

16. Композиция по любому из пп.1-14, которая изготовлена для системного введения.

17. Применение композиции, включающей NsIDI и NsIDIE, который представляет собой селективный ингибитор обратного захвата серотонина (SSRI), трициклический антидепрессант (ТСА), феноксифенол, антигистаминный агент, фенотиазин или агонист мю-опиоидных рецепторов в количествах, достаточных in vivo для уменьшения секреции или выработки провоспалительных цитокинов для лечения иммуновоспалительного заболевания.

18. Применение композиции, включающей NsIDI и NsIDIE, который представляет собой селективный ингибитор обратного захвата серотонина (SSRI), трициклический антидепрессант (ТСА), феноксифенол, антигистаминный агент, фенотиазин или агонист мю-опиоидных рецепторов в количествах, достаточных in vivo для уменьшения секреции или выработки провоспалительных цитокинов, для производства лекарственного средства для лечения иммуновоспалительного заболевания.

19. Применение по любому из п.17 или 18, в котором указанное иммуновоспалительное заболевание представляет собой ревматоидный артрит, болезнь Крона, язвенный колит, астму, хроническое обструктивное заболевание легких, ревматическую полимиалгию, гигантоклеточный артериит, системную красную волчанку, атопический дерматит, рассеянный склероз, астенический бульбарный паралич, псориаз, анкилозирующий спондилит или псориатический артрит.

20. Применение по любому из п.17 или 18, в котором указанный NsIDI представляет собой циклоспорин, такролимус, ISAt×247, аскомицин, пимекролимус, рапамицин или эверолимус.

21. Применение по любому из п.17 или 18, в котором указанный NsIDIE представляет собой SSRI, ТСА, феноксифенол, антигистаминный агент, фенотиазин или агонист мю-опиоидных рецепторов.

22. Применение по п.21, в котором указанный SSRI выбран из группы, состоящей из флуоксетина, сертралина, пароксетина, флувоксамина, циталопрама и эсциталопрама.

23. Применение по п.21, в котором указанный ТСА выбран из группы, состоящей из мапротилина, нортриптилина, протриптилина, дезипрамина, амитриптилина, амоксапина, кломипрамина, дотиепина, доксепина, дезипрамина, имипрамина, лофепрамина, миансерина, оксапротилина, октриптилина и тримипрамина.

24. Применение по п.21, в котором указанный феноксифенол представляет собой триклозан.

25. Применение по п.21, в котором указанный антигистаминный агент выбран из группы, состоящей из дезлоратадина, тиэтилперазина, бромдифенгидрамина, прометазина, ципрогептадина, лоратадина, клемизола, азатадина, цетиризина, хлорфенирамина, дименгидрамина, дифенидрамина, доксиламина, фексофенадина, меклизина, пириламина и трипеленнамина.

26. Применение по п.21, в котором указанный фенотиазин представляет собой хлорпромазин или этопропазин.

27. Применение по п.21, в котором указанный агонист мю-опиоидных рецепторов представляет собой лоперамид, меперидин или дифеноксилат.

28. Применение по любому из п.17 или 18, в котором указанная композиция изготовлена для местного введения.

29. Применение по любому из п.17 или 18, в котором указанная композиция изготовлена для системного введения.

30. Набор, включающий

(i) композицию, включающую NsIDI и NsIDIE, который представляет собой селективный ингибитор обратного захвата серотонина (SSRI), трициклический антидепрессант (ТСА), феноксифенол, антигистаминный агент, фенотиазин или агонист мю-опиоидных рецепторов, и

(ii) инструкции по введению указанной композиции пациенту, имеющему диагноз или риск развития иммуновоспалительного заболевания.

31. Набор, включающий

(i) NsIDI,

(ii) NsIDIE, которым является селективный ингибитор обратного захвата серотонина (SSRI), трициклический антидепрессант (ТСА), феноксифенол, антигистаминный агент, фенотиазин или агонист мю-опиоидных рецепторов, и

(iii) инструкции по введению указанных NsIDI и NsIDIE пациенту, имеющему диагноз или риск развития иммуновоспалительного заболевания.

32. Набор по любому из п.30 или 31, в котором указанный NsIDI представляет собой циклоспорин, такролимус, ISAt×247, аскомицин, пимекролимус, рапамицин или эверолимус.

33. Набор по любому из п.30 или 31, в котором указанный NsIDIE представляет собой SSRI, ТСА, феноксифенол, антигистаминный агент, фенотиазин или агонист мю-опиоидных рецепторов.

34. Набор по любому из п.30 или 31, в котором указанный SSRI выбран из группы, состоящей из флуоксетина, сертралина, пароксетина, флувоксамина, циталопрама и эсциталопрама.

35. Набор по любому из п.30 или 31, в котором указанный ТСА выбран из группы, состоящей из мапротилина, нортриптилина, протриптилина, дезипрамина, амитриптилина, амоксапина, кломипрамина, дотиепина, доксепина, дезипрамина, имипрамина, лофепрамина, миансерина, оксапротилина, октриптилина и тримипрамина.

36. Набор по любому из п.30 или 31, в котором указанный феноксифенол представляет собой триклозан.

37. Набор по любому из п.30 или 31, в котором указанный антигистаминный агент выбран из группы, состоящей из дезлоратадина, тиэтилперазина, бромдифенилгидрамина, прометазина, ципрогептадина, лоратадина, клемизола, азатадина, цетиризина, хлорфенирамина, дименгидрамина, дифенидрамина, доксиламина, фексофенадина, меклизина, пириламина и трипеленнамина.

38. Набор по любому из п.30 или 31, в котором указанный фенотиазин представляет собой хлорпромазин или этопропазин.

39. Набор по любому из п.30 или 31, в котором указанный агонист мю-опиоидных рецепторов представляет собой лоперамид, меперидин или дифеноксилат.