Инъекционная лекарственная форма для лечения острого инсульта, способ ее изготовления и применение

Инъекционная лекарственная форма для лечения острого инсульта включает в качестве действующего вещества терапевтически эффективное количество ноопепта, а в качестве вспомогательных веществ, по меньшей мере, одно, выбранное из группы, включающей лактозу, сахарозу, поливиниловый спирт, поливинилпирролидон, сорбит, маннит, глицин, водные растворы, жирные масла, этилолеат, глицерин, спирт этиловый, пропиленгликоль, полиэтиленоксид 400, бензилбензоат, бензиловый спирт и другие вспомогательные вещества, разрешенные к медицинскому применению. Инъекционная лекарственная форма обладает стабильностью при хранении, легко высвобождает действующее вещество, что обеспечивает его высокую биодоступность. Инъекционная лекарственная форма отвечает всем требованиям Государственной Фармакопии XI издания. Лекарственный препарат ноопепт (этиловый эфир N-фенилацетил-L-пролилглицина) в виде инъекционной лекарственной формы проявляет высокую ноотропную и нейропротекторную активность на моделях обширного ишемического инсульта и геморрагического инсульта. 3 н. и 5 з.п. ф-лы, 1 табл.

 

Изобретение относится к медицине, в частности к фармакологии и фармацевтике, и касается инъекционной формы лекарственного препарата НООПЕПТ для лечения ранних стадий инсульта.

Инсульт - сосудистое поражение мозга, обусловленное либо недостаточностью кровообращения (ишемический инсульт), либо кровоизлиянием в мозг (геморрагический инсульт). Согласно мировой статистике, ежегодно инсульт поражает 6 млн. человек, причем если распространенность его в мире составляет 460-560 случаев на 100 тысяч населения, то в России этот показатель составляет 1050 случаев. Инсульт занимает третье место среди причин смертности в мире и второе в России. Частота развития ишемических инсультов составляет 70-80%, на долю геморрагических приходится 20-30%. В течение первого месяца заболевания погибает 15-30% больных ишемическими инсультами и от 30 до 70% больных геморрагическим инсультом.

Успешность лечения больных инсультами определяется, главным образом, ранними сроками начала терапии, стратегия которой существенно отличается при ишемическом и геморрагическом инсульте. Терапия ишемического инсульта направлена на восстановление проходимости артерии, предупреждение дальнейшего нарастания тромба, а затем на предотвращение гибели нейронов в зоне "полутени" (пенумбры) с помощью нейропротекторов. При геморрагическом инсульте применение нейропротекторов также целесообразно, но противопоказаны препараты, препятствующие тромбообразованию. Однако дифференциальная диагностика этих двух форм на самых ранних этапах болезни затруднена, а в более чем 25% случаев оказалась вообще невозможной. Указанные факты диктуют необходимость разработки таких препаратов, которые могут быть эффективными при обеих формах инсультов. Из числа таких препаратов, применяемых в настоящее время, можно указать на блокаторы каналов кальция, однако существенным недостатком этих препаратов является наличие кардиоваскулярных эффектов, которые приводят к "обкрадыванию мозга".

Лекарственный препарат НООПЕПТ - этиловый эфир N-фенилацетил-L-пролилглицина (патент РФ № 2119496, опубликован в БИ № 27, 1998 г.), относящийся к новой группе соединений, обладает различными типами психотропной активности, в том числе антиамнестическим, антигипоксическим и анорексигенным действием.

Ранее была разработана фармацевтическая композиция, содержащая эффективные дозы НООПЕПТА для перорального применения, преимущественно в виде таблеток, которая может применяться для лечения больных, страдающих снижением умственных способностей, вызванным мозговой травмой, старением, пренатальной гипоксией или алкоголизмом, а также ослабляющих проявление синдрома отмены бензодиазепиновых транквилизаторов (заявка на выдачу патента РФ на изобретение № 2004123357). В настоящее время в качестве ноотропного препарата (лекарственная форма для перорального применения, таблетки по 5 мг) НООПЕПТ прошел I и IIa фазу клинических испытаний, показавших безопасность препарата и его эффективность для лечения умеренных когнитивных нарушений цереброваскулярного и посттравматического генеза.

Описана эффективность субстанции НООПЕПТА на модели малого ишемического инсульта, вызванного фотоиндуцированным тромбозом, при котором объем поражения коры головного мозга не превышал 2% объема полушария мозга (Ostrovskaya R.U., Romanova G.A., Gudasheva T.A. et al., Behav. Pharmacol., 1999, 10, 549-553). Было выявлено уменьшение объема поражаемой зоны и показано, что в основе нейропротекторного действия препарата НООПЕПТ лежит способность предотвращать развитие таких метаболических нарушений, как накопление свободно-радикальных форм кислорода, внутриклеточного кальция и избыточного глютамата. Эти принципиально важные свойства препарата в сочетании с выявленной у него антикоагулянтной и фибринолитической активностью при отсутствии антиагрегантного действия (т.е. влияния на первичный гемостаз) исключают развитие при его использовании повышенной кровоточивости, опасной в условиях геморрагического инсульта.

Сущность изобретения заключается в разработке инъекционной лекарственной формы препарата НООПЕПТ, которая при парентеральном введении на моделях массивного ишемического инсульта (объем поражения составляет 18-20% от объема всего полушария мозга) и геморрагического инсульта обеспечивает быстрое наступление эффекта и возможность применения у тех больных, у которых в силу их состояния применение пероральной формы препарата невозможно.

Была разработана инъекционная лекарственная форма в виде фармацевтической композиции, содержащая в качестве действующего вещества лекарственный препарат НООПЕПТ, а также достаточное количество вспомогательных веществ, что позволило получить стабильную при хранении лекарственную форму, легко высвобождающую активное вещество и обеспечивающую его высокую биодоступность.

НООПЕПТ, с одной стороны, мало растворим в воде, и для его растворения необходимо использовать вспомогательные вещества, способствующие повышению его растворимости, а с другой стороны, являясь сложным эфиром, он при контакте с водой подвергается гидролизу, и для получения устойчивой инъекционной лекарственной формы необходимо снижать скорость его деструкции.

Эти проблемы были решены путем использования водных растворов, жирных масел, этилолеата, спирта этилового, глицерина, пропиленгликоля, полиэтиленоксида 400, бензилового сприта, бензилбензоата.

Стабильность инъекционной лекарственной формы НООПЕПТА была достигнута с помощью изготовления сухих твердых порошков, пористых масс, полученных в виде сухих рассыпок, лиофилизированных порошков, содержащих терапевтически эффективные количества препарата и вспомогательных формообразующих веществ, в качестве которых используют лактозу, сахарозу, поливиниловый спирт, поливинилпирролидон, сорбит, маннит, глицин.

В качестве наполнителя в композиции может применяться одно или более соединений, способных обеспечить получение инъекционной массы надлежащего качества. Желательно применение наполнителя в количестве, близком к нижнему пределу интервала массы наполнителя.

Для стерилизации препарата вследствие термолабильности его субстанции был использован метод стерильной фильтрации.

Далее представлены возможные составы для получения инъекционной лекарственной формы НООПЕПТА.

1. Получение сухой рассыпки порошков.

Для получения стабильной инъекционной лекарственной формы НООПЕПТА методом сухой рассыпки готовят тритурации ноопепта и вспомогательных веществ с целью повышения растворимости субстанции и стабильности раствора. В качестве наполнителя в композиции для получения сухой рассыпки могут быть использованы лактоза, сахароза, маннит, глицин и другие вспомогательные вещества, разрешенные к медицинскому применению. Содержимое ампулы растворяют в воде для инъекций или в физиологическом растворе непосредственно перед инъекцией.

Фармацевтическая композиция выполнена в твердой форме, по внешнему виду представляет собой аморфный порошок в ампуле или флаконе. В ампуле или флаконе содержится:

Ноопепт - 0,0005-0,02 г.

Лактоза - 0,005-0,2 г.

2. Получение инъекционного раствора на основе неводных растворителей.

Для исключения контакта НООПЕПТА с водой в качестве растворителя для получения инъекционного раствора могут быть использованы следующие вещества и их композиции: жирные масла, этилолеат, глицерин, спирт этиловый, пропиленгликоль, полиэтиленоксид 400, бензилбензоат, бензиловый спирт и другие растворители, разрешенные к медицинскому применению. В качестве растворителя в композиции данного изобретения может применяться одно или более соединений, способных обеспечить получение инъекционного раствора надлежащего качества.

Фармацевтическая композиция выполнена в жидкой форме, по внешнему виду представлянт собой вязкую жидкость, в ампуле. В ампуле содержится:

Ноопепт - 0,0005-0,02 г.

Масло оливковое - до 1 мл.

3. Получение лиофилизата для приготовления инъекционного раствора.

Для получения стабильного при хранении и хорошо растворимого лиофилизата для инъекций применяют вспомогательные формообразующие вещества, в качестве которых используют лактозу, сахарозу, поливиниловый спирт, поливинилпирролидон, сорбит, маннит, глицин и другие вспомогательные вещества, разрешенные к медицинскому применению.

В качестве наполнителя в композиции данного изобретения может применяться одно или более соединений, способных обеспечить получение лиофилизированной массы надлежащего качества.

В качестве растворителя для получения раствора для сублимационного высушивания используется вода очищенная, смесь воды очищенной со спиртом этиловым, трет-бутанолом.

Далее представлены возможные составы для получения лиофилизированной лекарственной формы НООПЕПТА.

Фармацевтическая композиция выполнена в твердой форме, по внешнему виду представляет собой аморфный порошок или рыхлую таблетку в ампуле или флаконе. В каждой ампуле или флаконе содержится:

Ноопепт - 0,0005-0,02 г.

Маннит - 0,005-0,2 г.

Фармацевтическая композиция на основе НООПЕПТА может быть получена любым известным способом лиофилизации. Один из таких способов включает следующие стадии:

1) приготовление раствора, содержащего ноопепт и вспомогательные вещества;

2) стерильная фильтрация полученного раствора;

3) розлив раствора в ампулы или флаконы;

4) сушка раствора в сублимационной установке с предварительным замораживанием в морозильной камере или в камере сублимационной установки;

5) запайка ампул, укупорка флаконов с готовым продуктом.

Для стерилизации препарата используются следующие методы: 1) асептического приготовления; 2) термической стерилизации; 3) стерильной фильтрации.

Далее приводятся примеры, иллюстрирующие эффективность НООПЕПТА на модели массивной кортикальной ишемии и геморрагического инсульта.

Пример № 1. Изучение эффективности инъекционной лекарственной формы НООПЕПТА на модели массивной кортикальной ишемии.

Эксперименты выполнены на белых беспородных самцах крыс весом 350-450 г, наркотизированных хлоралгидратом (400 мг/кг, в/б), которым проводили перевязку левой сонной артерии, а затем под микроскопом (увеличение 14.0×3.3) производили окклюзию средней мозговой артерии (ОСМА) проксимальнее места ее бифуркации на фронтальную и париетальную ветви. После завершения операции животных случайным образом делили на 2 группы. Животным опытной группы вводили НООПЕПТ в виде инъекционной лекарственной формы для парентерального применения. Препарат вводился внутрибрюшинно через 30 минут, затем через 2, 24 и 48 часов после операции. Животным контрольной группы в те же сроки вводили физиологический раствор (0.9% хлористый натрий). Через 72 часа после ОСМА животных декапитировали (наркоз хлоралгидратом 800 мг/кг, в/б). Из замороженного при -20°С готовили 5 фронтальных срезов толщиной 2.5 мм, которые окрашивали раствором 2,3,5-трифенилтетразолий хлорида (ТФТХ). С помощью морфометрической программы Auc1 проводили планиметрию, определяли объем зоны поражения и процент объема зоны поражения относительно объема ипсилатерального полушария. Для сравнения выраженности изменений в различных срезах использовалась условная шкала, в которой поражение 75% полушария оценивалось как 2.5 балла,60% - 2 балла, 45% - 1.5 балла, 20% - 1 балл, 5% - 0,5 балла, 0% - 0 баллов.

Указанная операция создает обширное ишемическое поражение коры головного мозга, локализующееся в пределах фронто-париетальной и дорсо-латеральной зон. У контрольных животных, леченых физиологическим раствором, общий объем поражения составляет 18.65±2.65%. Максимальное ишемическое повреждение имеет место на уровне 2-го и 3-го срезов (таблица).

Таблица
Влияние инъекционной лекарственной формы НООПЕПТА на выраженность ишемического поражения коры головного мозга (оценка срезов по баллам)
	1	2	3	4	5
Физ р-р (n=8)	0,5±0,11	1,44±0,2	1,38±0,22	0,69±0.15	0,19±0.1
Ноопепт 0.5 мг/кг(n=9)	0,06±0,01*	1,06±0,1*	0,8±0,2*	0,63±0.12	0,19±0.1
*р<0.05

Терапия НООПЕПТОМ ведет к достоверному уменьшению объема повреждения на уровне трех первых срезов при отсутствии достоверных изменений на уровне 4-го и 5-го срезов (таблица). Общая площадь поражения снижалась до 12.21±2.65%. Из сравнения с группой контрольных животных следует, что НООПЕПТ, примененный после ишемизирующего воздействия, уменьшает общий объем поражения на 34.5% (р<0.05). Совокупность полученных данных свидетельствует о том, что изучаемый препарат, введенный после осуществления ишемизирующего воздействия, достоверно ослабляет выраженность морфологических изменений коры головного мозга, обусловленных коагуляцией средне-мозговой артерии в сочетании с перевязкой ипсилатеральной сонной артерии.

В отдельной серии экспериментов животные обучались в тесте условного рефлекса пассивного избегания (УРПИ), вырабатываемого в аппарате "Lafayette Instrument Со", USA), состоящем из ярко освещенной висячей платформы, присоединенной к темной камере с электрифицированным полом. В силу врожденного норкового рефлекса крыса при обучении заходила в темную камеру, где получала электроболевое раздражение. Оценку памяти проводили через 24 часа после обучения, регистрируя число животных, не зашедших в темную камеру в течение 180 с, а для зашедших - латентное время захода. Как показано ранее в многочисленных контрольных экспериментах на интактных крысах они обычно не заходят в опасную камеру или заходят в самом конце тестирования (средний латентный период 158±12.1 с). У ишемизированных животных, леченых физиологическим раствором, латентность захода составляет 20±6.1 с (большинство животных не помнили о нанесенном накануне раздражении и быстро заходили в опасную камеру). Группа ишемизированных животных, леченых ноопептом, демонстрировала увеличение латентного периода до 67±9.3 с, что свидетельствует об улучшении памяти.

Пример № 2. Изучение эффективности инъекционной лекарственной формы НООПЕПТА на модели геморрагического инсульта.

В экспериментах на самцах беспородных белых крыс наркотизированных нембуталом (40 мг/кг, в/м) моделирование интрацеребральной посттравматической гематомы (ГИ) осуществляли механической деструкцией мозговой ткани в области внутренней капсулы и введением в место повреждения крови, взятой из-под языка (0,02-0,03 мл). Все животные были случайным образом разделены на 4 группы (в каждой по 10-15 животных): 1) интактные животные, которым вводился физиологический раствор 2) животные с ГИ, которым вводился физиологический раствор; 3) группа животных с ГИ, которым вводился НООПЕПТ в дозе 0.5 мг/кг однократно; 4) животные с ГИ, леченные НООПЕПТОМ повторно, в течение 14-ти дней в той же дозе. Физиологический раствор или инъекционную лекарственную форму НООПЕПТА в дозе 0,5 мг/кг вводили внутрибрюшинно, причем первую инъекцию животным 3-й группы однократно, а животным 4-й группы - первое введение осуществляли также через 4 ч, второе - через 8 ч, на вторые и третьи сутки осуществляли по две инъекции, с 4-го по 14-й день - по одной инъекции в день.

Анализ неврологического статуса выживших животных показал, что наличие слабых неврологических нарушений было выявлено у 85% животных в группе 2 (ГИ + физиологический раствор) и лишь у 24% крыс с ГИ, леченых НООПЕПТОМ. Препарат уменьшал также частоту развития тяжелых неврологических симптомов: если в группе к 7-му, 14-му дням этот показатель составлял 65 и 70%, НООПЕПТ достоверно ослаблял неврологический дефицит, при этом более выражено его действие проявлялось на 7-е, 14-е сутки, этот показатель снижался до 20 и 18% соответственно.

При регистрации поведения животных в тесте УРПИ показан ноотропный эффект препарата НООПЕПТ. Например, если в контрольной группе при воспроизведении рефлекса на 7 сутки после операции 92% животных помнили о нанесенном в темной камере болевом стимуле и не заходили в нее, а у животных после ГИ, леченных физиологическим раствором, только 30% помнили об этом и не заходили в нее, НООПЕПТ, вводимый однократно в дозе 0,5 мг/кг и повторно в той же дозе, достоверно увеличивал количество обучившихся животных до 67% и 60%. Инъекционный препарат достоверно увеличивал латентный период захода в темную камеру. Если в группе контроля этот показатель составлял 160±18 с, то в группе животных с ГИ, леченных физиологическим раствором, он уменьшался до 60±15 с, а у животных с ГИ, леченных НООПЕПТОМ, имело место достоверное увеличение латентного периода (до 135±15 с), что свидетельствует о выраженном антиамнестическом эффекте препарата.

В тесте открытого поля было показано, что в группе крыс с ГИ, леченных физиологическим раствором, наблюдалось достоверное снижение горизонтальной и вертикальной активности, количества обследований отверстий. НООПЕПТ при введении в дозе 0.5 мг/кг, как однократно, так и в течение 14-ти дней, достоверно увеличивал активность. При изучении влияния инъекционной формы НООПЕПТА на координацию движений и миорелаксацию животных в тестах вращающегося стержня и горизонтальной перекладины выявлены нарушения в группах инсультных крыс. Инъекционный препарат, введенный в дозе 0,5 мг/кг однократно, в 2 раза снижал количество животных с нарушениями координации движений на 7- и 14-е сутки после операции, а при хроническом введении по схеме в течение 14-ти дней статистически достоверно (до 3-х раз) снижал количество животных с ухудшениями координации движений на протяжении всего времени наблюдения.

Важно подчеркнуть, что как в случае ишемического, так и в случае геморрагического инсультов инъекционная лекарственная форма препарата НООПЕПТ вводилась после повреждающего воздействия, при этом если на модели ишемии интервал составлял 30 мин, то в условиях геморрагического инсультов первая инъекция проводилась через 4 ч. Этот факт свидетельствует о достаточно широком "терапевтическом окне" для изученного препарата.

1. Инъекционная лекарственная форма на основе ноопепта для лечения острого инсульта, включающая в качестве действующего вещества терапевтически эффективное количество ноопепта, а в качестве вспомогательных веществ, по меньшей мере, одно, выбранное из группы, включающей лактозу, сахарозу, поливиниловый спирт, поливинилпирролидон, сорбит, маннит, глицин, водные растворы, жирные масла, этилолеат, глицерин, спирт этиловый, пропиленгликоль, полиэтиленоксид 400, бензилбензоат, бензиловый спирт и другие вспомогательные вещества, разрешенные к медицинскому применению.

2. Инъекционная лекарственная форма по п.1, отличающаяся тем, что она содержит в каждой ампуле или флаконе 0,0005-0,020 г ноопепта.

3. Инъекционная лекарственная форма по п.1, в виде сухой рассыпки, содержащей

Ноопепт	0,0005-0,020 г
Лактоза	0,005-0,2 г

4. Инъекционная лекарственная форма по п.1, содержащая

Ноопепт	0,0005-0,020 г
Масло оливковое	до 1 мл

5. Инъекционная лекарственная форма по п.1 в виде лиофилизированного порошка, содержащая

Ноопепт	0,0005-0,020 г
Маннит	0,005-0,2 г

6. Способ приготовления инъекционной лекарственной формы, охарактеризованной в любом из пп.1-5, включающий смешивание ноопепта и соответствующих вспомогательных веществ, и при необходимости, стерилизацию инъекционной лекарственной формы; розлив раствора в ампулы или флаконы; сушку растворов в сублимационной установке; запайку ампул или укупорку флаконов с готовой продукцией.

7. Применение инъекционной лекарственной формы, охарактеризованной в любом из пп.1-5, для лечения острого инсульта.

8. Применение по п.7 для экстренного лечения ишемической или геморрагической форм инсульта.