Способ лечения "сухой" формы возрастной макулярной дегенерации

Изобретение относится к медицине, а точнее к офтальмологии, и может быть использовано для лечения «сухой» формы возрастной макулярной дегенерации. Транспупиллярно облучают макулярную область сетчатки низкоинтенсивным лазерным излучением. Через 3 часа проводят внутривенное введение аутологичных культивированных мезенхимальных стволовых клеток костного мозга пациента. Способ обеспечивает улучшение микроциркуляции и активизирует репаративные процессы. 1 з.п. ф-лы.

 

Изобретение относится к медицине, а точнее к офтальмологии, и может быть использовано для лечения «сухой» формы возрастной макулярной дегенерации.

Возрастная макулярная дегенерация (ВМД) - одно из самых распространенных и малоизученных глазных заболеваний, являющихся основной причиной полной потери зрения у людей старше 60 лет в индустриально развитых странах. По данным Всемирной организации здравоохранения, 25-30 миллионов человек в мире страдают ВМД. Ввиду постоянного старения общества ВМД является одной из серьезных медицинских и социальных проблем. Наиболее распространенной клинической формой ВМД является неэкссудативная или «сухая» форма, встречающаяся в 90% случаев и характеризующаяся медленным прогрессирующим снижением зрения (Т.Н.Киселева, Г.С.Полунин, Э.Г.Елисеева и др. Современные аспекты патогенеза и клиники возрастной макулярной дегенерации // Офтальмология. - 2005. - Т.2. - №1).

Одним из перспективных методов лечения дистрофической патологии сетчатки может явиться применение мезенхимальных стволовых клеток (МСК),однако такие методы еще недостаточно разработаны.

Стволовые клетки обладают рядом существенных достоинств: могут обеспечивать регенерацию поврежденных участков через продукцию различных факторов роста и ключевых метаболитов; способны разворачивать программы пролиферации и дифференцировки, восполняя тем самым недостаток активно работающих клеток; могут интегрироваться в патологически измененные сетчатки и образовывать клетки с ретинальным фенотипом. В офтальмологии терапевтический потенциал стволовых клеток изучался на животных с наследственной ретинальной патологией, близкой к пигментному ретиниту человека (Lund et al. Subretinal transplantation of genetically modified human cell lines attenuates loss of visual function in dystrophic rats // PNAS. - 2001. - V.98. - №.17. P.9942-9947; Rander et al. Light-driven retinal ganglion cell responses in blind rd mice after neuronal transplantation // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. - 2001. - V.42. - P.1057-1065; Woch et al., 2001; Sagdullaev et al. Retinal transplantation-induced recovery of retinotectal visual function in rodent model of retinitis pigmentosa // Invest. Ophthal. Vis. Sci - 2003. - V.44. - P.1686-1695).

Хотя стволовые клетки взрослого организма обладают более ограниченным потенциалом дифференцировки, чем эмбриональные стволовые клетки, получаемые при культивировании клеток бластоцисты, их применение более безопасно. Кроме того, с точки зрения этики, они являются более приемлемым для клинического использования материалом.

Существующие методы лечения «сухой» формы возрастной макулярной дегенерации (Киселева Т.Н., Лагутина Ю.М., Кравчук Е.А. и др. Комплексное лечение возрастной макулярной дегенерации с применением препарата Фезам // Офтальмология. - 2005. - №2. - С.63-67) отличаются непродолжительностью достигаемого эффекта.

Задачей изобретения является повышение эффективности лечения возрастной макулярной дегенерации.

Техническим результатом является улучшение или стабилизация зрительных функций. Технический результат достигается за счет того, что:

1. Транспупиллярное лазерное облучение макулярной области сетчатки низкоинтенсивным лазерным излучением способствует улучшению миркоциркуляции в облучаемой зоне.

2. Внутривенное (системное) введение аутологичных культивированных МСК костного мозга пациента после лазерного облучения макулярной области сопровождается их избирательной адгезией в участках повреждения, что способствует активации репаративных процессов за счет размножения и дифференцировки трансплантированных и резидентных стволовых клеток.

Заявленный технический результат может быть получен только при использовании всей совокупности приемов предложенного нами способа.

Способ осуществляется следующим образом. За 3 часа до внутривенного введения аутологичных культивированных МСК костного мозга пациента проводят транспупиллярное облучение макулярной области сетчатки низкоинтенсивным лазерным излучением, например, с длиной волны 660 нм, в дозе 0,3-1,0 Дж/см², диаметр пятна лазерного облучения составляет 6 мм.

Для получения клеток костного мозга с целью последующею культивирования МСК, содержащихся в костномозговой популяции, пациентам под местной новокаиновой анестезией проводили пункцию грудины или подвздошной кости и извлекали в строго стерильных условиях примерно 1 мл костного мозга, который помещали в пробирки с раствором гепарина (100 ЕД/мл пунктата). После отстаивания эритроцитов в течение 1-2 часов при комнатой температуре супернатант отсасывали пастеровской пипеткой, выделенные клетки отмывали в среде 199, центрифугировали при 1000 об/мин в течение 10 мин, осадок ресуспендировали в ростовой среде. В качестве ростовой среды использовали среду RPMI-1640, содержащую пенициллин (100 ед/мл) амфотерицин (100 нг/мл), L-глютамин 2 мМ, 20% эмбриональную телячью сыворотку. Культивирование проводилось в стерильных пластиковых флаконах Карреля с площадью дна 25 см², в которые вносили 5×10⁶-10⁷ клеток костного мозга в 8 мл ростовой среды. Флаконы продували газовой смесью, содержащей 5% углекислого газа и 95% воздуха, и помещали их в обычный термостат 37°С. Продувание флаконов такой газовой смесью проводили каждый раз, когда меняли среду или пересевали клетки в новые культуральные флаконы. При достижении сливного (конфлюентного) монослоя клетки пересевали с использованием 0.25% раствора трипсина в новые флаконы вначале с той же площадью дна (25 см²), а впоследствии при нарастании клеточной массы - в большие культуральные флаконы с площадью дна 175 см². Такой метод позволял к концу 5-6 недели от начала культивирования клеток добиться получения популяции аутологичных МСК пациента в количестве (1-2)×10⁸ клеток, необходимых для трансплантации в организм донора исходного костного мозга. Полученные путем культивирования аутологичные МСК после заключительного снятия трипсином с поверхности культуральных флаконов и отмывки физиологическим раствором взвешивали в 200 мл стерильного физиологического раствора с прибавлением гепарина в концентрации 10 ед/мл. Полученную клеточную суспензию использовали для постановки капельницы, продолжительность введения клеток составляла 40-60 мин.

Изобретение поясняется следующими данными.

Под наблюдением находилось 3 пациента (3 глаза) с «сухой» формой ВМД в возрасте от 64 до 75 лет. Острота зрения до лечения у пациентов варьировала от 0,2 до 0,5.

Пациенты были пролечены по предложенному способу. Доза лазерного воздействия при транспупиллярном облучении макулярной области сетчатки составляла от 0,3 до 1,0 Дж/см². Продолжительность введения стволовых клеток - от 40 до 60 мин.

Через месяц после проведенного лечения у пациентов наблюдали следующие результаты терапии. В двух случаях острота зрения повысилась (на 0,2 и 0,32. соответственно) и в одном осталась неизменной. Во всех случаях отмечено повышение фовеальной светочувствительности сетчатки по данным компьютерной периметрии, а также увеличение амплитуды а-волны и b-волны по данным макулярной электроретинограммы, которое свидетельствовало о повышении функциональной активности сетчатки. При исследовании гемодинамики у всех пациентов отмечалось увеличение средней скорости кровотока в глазничной артерии, центральной артерии сетчатки и в задних коротких цилиарных артериях.

Полученные результаты оставались стабильными в сроки от 6 до 12 месяцев.

Таким образом, предложенный способ обеспечивает улучшение или стабилизацию зрительных функций.

1. Способ лечения «сухой» формы возрастной макулярной дегенерации, отличающийся тем, что транспупиллярно облучают макулярную область сетчатки низкоинтенсивным лазерным излучением, через 3 ч проводят внутривенное введение аутологичных культивированных мезенхимальных стволовых клеток костного мозга пациента.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что транспупиллярное облучение макулярной области сетчатки низкоинтенсивным лазерным излучением проводят с длиной волны 660 нм, в дозе 0,3-1,0 Дж/см², диаметр пятна лазерного облучения составляет 6 мм, продолжительность введения стволовых клеток - 40-60 мин.