Способ получения гипериммунной сыворотки против гемофилеза и пастереллеза свиней

Изобретение относится к области биотехнологии. Способ включает приготовление антигена из инактивированных и концентрированных культур Pasterella multocida сероваров A, B и D и Haemophilus pleuropneumoniae сероваров 1 и П, грундиммунизацию и гипериммунизацию возрастающими дозами антигена с последующим крововзятием и выделением целевого продукта. При этом в качестве продуцентов используют волов. Гипериммунизацию продуцентов проводят 7-10 - кратными внутримышечными инъекциями в общей дозе каждого антигена 1800-2400 миллиардов микробных клеток с интервалом 2-3 дня. А грундиммунизацию осуществляют подкожно в разные участки тела двукратно сначала по 10-15 миллиардов микробных клеток, а через 14 дней по 20-25 миллиардов микробных клеток с добавлением 10 см3 гидроокиси алюминия. Способ нетрудоемок, прост в исполнении, позволяет увеличить выход сыворотки в 3,2-3,5 раза. 3 табл.

 

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения гипериммунной сыворотки для лечения и профилактики гемофилеза и пастереллеза свиней. Известен способ изготовления гипериммунной сыворотки против гемофилеза, стрептококкоза и пастереллеза свиней, получаемой от продуцентов свиней (RU 2118169 А61К 39/02, 39/09, 39/102 - прототип).

Однако данный способ экономически нецелесообразен: во-первых, не всегда в хозяйстве имеют место три вида инфекции: гемофилез, стрептококкоз и пастереллез; во-вторых, срок эксплуатации свиней составляет 5-6 месяцев (в зависимости от длины хвоста и клинического состояния продуцентов). Напротив, срок эксплуатации волов не менее 5 лет.

Технический результат заявляемого изобретения состоит в повышении выхода целевого продукта и упрощении способа.

Указанный технический результат предлагаемого способа достигается тем, что для создания грундиммунитета волам (не более одного раза в пять лет) двукратно подкожно в разные участки тела вводят инактивированные и концентрированные гемофилезный и пастереллезный антигены: сначала по 10-15 миллиардов микробных тел (млрд м.т), а через 14 дней - по 20-25 млрд м.т. с добавлением 10 см3 гидроокиси алюминия.

Гипериммунизацию волов проводят 7-10 внутримышечными инъекциями в возрастающих дозах инактивированных и концентрированных антигенов, очищенных от культуральной жидкости в общей дозе каждого антигена 1800-2400 млрд м.т. с интервалом 2-3 дня.

В процессе эксплуатации после каждого взятия крови (16-17 см3 крови на 1 кг массы тела) через 1-2 дня проводят очередные внутримышечные инъекции инактивированного концентрированного гемофилезного и пастереллезного антигенов в дозе по 400-500 млрд м.т. каждого, а через 8-10 дней после этого от продуцентов снова берут кровь.

Примеры выполнения грундиммунизации.

Пример 1. Для создания грундиммунитета волам двукратно подкожно в разные участки тела вводили инактивированные и концентрированные гемофилезные и пастереллезные антигены: сначала по 10 млрд м.т., а через 14 дней - по 20 млрд м.т. с добавлением 10 см3 гидроокиси алюминия.

Результаты определения активности.

Титры сыворотки после грундирования составили:

контроль (прототип)
к Pasteurella multocidaA 1:21:2
реакция пассивнойВ 1:41:4
гемагглютинации (РПГА)D 1:21:2
Haemophilus pleuropneumoniae 58701:81:8
Реакция агглютинации (РА) ГУ-191:161:16

Пример 2. В сравнении с примером 1 увеличили дозы антигенов при грундиммунизации:

Вводили антигены: сначала по 15 млрд м.т., а через 14 дней - по 25 млрд м.т. с добавлением 10 см3 гидроокиси алюминия.

Результаты определения активности.

Титры сыворотки после грундирования составили:

контроль (прототип)
к Pasteurella multocidaA 1:21:2
реакция пассивнойВ 1:41:4
гемагглютинации (РПГА)D 1:21:2
Haemophilus pleuropneumoniae 58701:81:8
Реакция агглютинации (РА) ГУ-191:161:16

Увеличение дозы антигенов при грундиммунизации сначала до 15 млрд м.т., а через 14 дней до 25 млрд м.т. не привело к повышению титра антител после грундирования.

Пример 3. Увеличили дозы антигенов при грундиммунизации:

Вводили антигены: сначала по 16 млрд м.т., а через 14 дней - по 26 млрд м.т. с добавлением 10 см3 гидроокиси алюминия.

Результаты определения активности.

Титры сыворотки после грундирования составили:

контроль (прототип)
к Pasteurella multocidaA 1:21:2
реакция пассивнойВ 1:41:4
гемагглютинации (РПГА)D 1:21:2
Haemophilus pleuropneumoniae 58701:81:8
Реакция агглютинации (РА) ГУ-191:161:16

Увеличение дозы антигенов при грундиммунизации свыше сначала 15 млрд м.т., а через 14 дней - свыше 25 млрд м.т. не привело к повышению титра антител после грундирования.

Увеличение дозы антигенов не выгодно с экономической точки зрения.

Пример 4. Уменьшили дозы антигенов при грундиммунизации:

Вводили антигены: сначала по 9 млрд м.т., а через 14 дней - по 19 млрд м.т. с добавлением 10 см3 гидроокиси алюминия.

Результаты определения активности.

Титры сыворотки после грундирования составили:

контроль (прототип)
к Pasteurella multocidaА нет антител1:2
реакция пассивнойВ 1:21:4
гемагглютинации (РПГА)D нет антител1:2
Haemophilus pleuropneumoniae 58701:21:8
Реакция агглютинации (РА) ГУ-191:21:16

Уменьшение дозы антигенов меньше сначала 10 млрд м.т., а через 14 дней - меньше 20 млрд м.т. привело к снижению титра антител после грундирования.

Таблица 1
ПримерыIIIIIIIVКонтроль(прототип свиньи)
Доза антигеновI инъекция10151691-2 (пастерелла)
(млрд м.т.)2-3 (гемофилы)
II инъекция202526192-4 (пастерелла)
6-8(гемофилы)
АктивностьP.multocida
сывороткиРПГА А1:21:21:201:2
В1:41:41:41:21:4
D1:21:21:201:2
H.pleuropneum.
РА 58701:81:81:81:21:8
ГУ-191:161:161:161:21:16

Способ осуществляют следующим образом.

Пример 1. Грундиммунизацию осуществляли подкожно в разные участки тела двукратно сначала по 10-15 млрд м.т., а через 14 дней - по 20-25 млрд м.т. с добавлением 10 см3 гидроокиси алюминия.

Гипериммунизацию волов проводили путем 10 внутримышечных инъекций в возрастающих дозах инактивированного и концентрированного гемофилезного и пастереллезного антигенов, очищенных от культуральной жидкости в общем количестве 2400 млрд м.т. каждого антигена с интервалом 2-3 дня по схеме:

40-60-100-150-250-350-450 - 2-недельный перерыв - 200-300-500 млрд м.т.

Результаты определения активности.

Титры полученной сыворотки составили:

контроль (прототип)
к Pasteurella multocidaA 1:1281:128
реакция пассивнойВ 1:5121:512
гемагглютинации (РПГА)D 1:1281:128
Haemophilus pleuropneumoniae 58701:3201:320
Реакция агглютинации (РА) ГУ-191:6401:640

Пример 2. Грундирование проводили так, как это описано в примере 1. В сравнении с примером 1 увеличено количество инъекций и дозы антигенов при гипериммунизации. Проводят 11 инъекций в общем количестве 3000 млрд м.т. каждого антигена по схеме: 40-60-100-150-250-350-450 - 2-х недельный перерыв - 200-300-500-600 млрд м.т.

Результаты определения активности.

Титры получаемой сыворотки составили:

Контроль (прототип)
к P.multocidaA 1:1281:128
РПГАВ 1:5121:512
D 1:1281:128
H.pleuropneumoniae 58701:3201:320
PA ГУ-191:6401:640

Увеличение числа инъекций больше 10 и общего количества антигенов больше 2400 млрд м.т. не привело к дальнейшему повышению титра антител сыворотки. Увеличение количества антигенов и числа инъекций нецелесообразно, так как оказывает дополнительную нагрузку на иммунную систему продуцентов и не выгодно с экономической точки зрения.

Пример 3. Грундирование проводили так, как это описано в примере 1. Уменьшили количество инъекций при гипериммунизации до 7 при уменьшении общего количества вводимых микробных тел до 1800 миллиардов:

40-60-100-200-300-500-600 млрд м.т.

Титры полученной сыворотки составили:

Контроль (прототип)
к P.multocidaA1:1281:128
РПГАВ1:5121:512
D1:1281:128
H.pleuropneumoniae 58701:3201:320
PA ГУ-191:6401:640

Уменьшение числа инъекций до 7 при уменьшении общего количества антигенов до 1800 млрд м.т.не привело к снижению титра антител в сыворотке.

Пример 4. Грундирование проводили так, как это описано в примере 1. Уменьшили количество инъекций при гипериммунизации до 6 при уменьшении общего количества вводимых микробных тел до 1300 каждого антигена по схеме:

40-60-150-250-350-450 млрд м.т.

Титры полученной сыворотки составили:

Контроль (прототип)
к P.multocidaA1:641:128
РПГАВ1:2561:512
D1:641:128
H.pleuropneumoniae 58701:1601:320
PA ГУ-191:3201:640

Уменьшение числа инъекций до 6 при уменьшении общего количества вводимых антигенов до 1300 млрд м.т. каждого антигена привело к снижению титров антител в полученной сыворотке.

Таблица 2
ПримерыIIIIIIIVКонтроль(прототип свиньи)
Количество инъекций

антиген
10117610
Кол-во микробных тел (млрд)P.multocida H.pleuropneum.2400 24003000 30001800 18001300 13001000 1000
АктивностьP.multocida
сывороткиРПГА А1:1281:1281 1281:641:128
В1:5121:5121 5121:2561:512
D1:1281:1281 1281:641:128
H.pleuropneum.
PA 58701:3201:3201:3201:1601:320
ГУ-191:6401:6401:6401:3201:640

Предложенный способ апробирован с положительными результатами в лабораторных и производственных условиях.

Предложенный способ в отличие от известного обладает следующими преимуществами:

1/ увеличивается выход сыворотки в 3,2-3,5 раза (табл.3).

Таблица 3
Вид продуцентаВес (кг)Кол-во крови с 1 кг живого веса животного (мл)Выход (мл)
свиньи

волы
150-160

400-450
13

16
1950-2080

6400-7200

2/ более прост в исполнении и менее трудоемок.

Срок эксплуатации свиней 5-6 месяцев (в зависимости от длины хвоста и клинического состояния продуцентов). Процесс иммунизации и крововзятий у этого вида животных крайне трудоемок. Напротив, срок эксплуатации волов - не менее 5 лет.

Отсюда вытекает, что грунд- и гипериммунизация свиней проводится раз в 5-6 месяцев, в то время, как волов - раз в 5 лет.

3/ более экономически целесообразен, что вытекает из пунктов 1 и 2. Кроме того, данная сыворотка может использоваться для лечения и профилактики гемофилеза и пастереллеза в хозяйствах, в которых отсутствует стрептококковая инфекция.

Источник информации

RU 2118169 А61К 39/02, 39/09, 39/102 - прототип.

Способ получения гипериммунной сыворотки против гемофилеза и пастереллеза свиней, включающий приготовление антигена из инактивированных и концентрированных культур Pasterella multocida сероваров А, В и Д и Haemophilus pleuropneumoniae сероваров 1 и П, грундиммунизацию и гипериммунизацию возрастающими дозами антигена с последующим крововзятием и выделением целевого продукта, отличающийся тем, что в качестве продуцентов используют волов, при этом гипериммунизацию проводят 7-10-кратными внутримышечными инъекциями в общей дозе каждого антигена 1800-2400 миллиардов микробных клеток с интервалом 2-3 дня, а грундиммунизацию осуществляют подкожно в разные участки тела двукратно сначала по 10-15 миллиардов микробных клеток, а через 14 дней по 20-25 миллиардов микробных клеток с добавлением 10 см3 гидроокиси алюминия.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к фармакологии и аллергологии и представляет собой стабильную жидкую композицию, содержащую анти-IgE-антитело или моноклональное анти-IgE-антитело, аргинин-HCI, гистидин, полисорбат и может быть использовано для подкожного введения пациенту при необходимости.
Изобретение относится к области химико-фармацевтической промышленности и используется, в частности, для получения лекарственных средств, очищенных с помощью методов хроматографии.
Изобретение относится к ветеринарии и может быть использовано для лечения и профилактики гриппа у домашних птиц, преимущественно кур. .

Изобретение относится к антителам, которые связываются с CTGF. .

Изобретение относится к биотехнологии и иммунологии. .

Изобретение относится к применению всех оптических изомеров и стереоизомеров соединений в соответствии с настоящим изобретением и их смесей и ко всем фармацевтическим композициям и способам лечения, которые могут быть использованы или содержать их.

Изобретение относится к области медицины и касается модуля для уменьшения активности лейкоцитов. .
Изобретение относится к области медицины, а именно к ветеринарии, и может быть использовано для эффективного лечения и профилактики инфекционных заболеваний домашних животных, преимущественно острых респираторных вирусных инфекций и острых респираторных заболеваний.

Изобретение относится к антителам, проявляющим модулированное связывание с Fc R, причем антитело содержит, по меньшей мере, одну замену аминокислоты в Fc-районе исходного Fc-полипептида, в частности, человеческого происхождения.

Изобретение относится к области медицины, а именно к производству лекарственных средств
Изобретение относится к ветеринарии, в частности к комплексному биологическому препарату, который может быть использован для профилактики и лечения телят при диарее вирусно-бактериальной этиологии

Изобретение относится к медицине и касается применения антагониста фактора роста нервов (NGF) для предотвращения или лечения послеоперационной боли
Изобретение относится к биотехнологии, а именно к производству медицинских биологических препаратов

Изобретение относится к медицине, а именно к получению фармацевтических композиций

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению антител против моноцитарного хемоаттрактантного белка-1 (МСР-1), к применению таких антител и может быть использовано в медицине

Изобретение относится к молекулам антител, которые обладают способностью специфически распознавать две области пептида -А4, где первая область содержит аминокислотную последовательность AEFRHDSGY, представленную в SEQ ID NO:1, или ее фрагмент, и где вторая область содержит аминокислотную последовательность VHHQKLVFFAEDVG, представленную в SEQ ID NO:2, или ее фрагмент
Наверх