Способ оценки эффективности дезинтоксикационной терапии при воздействии токсинов различной природы
Владельцы патента RU 2334989:
Федеральное государственное учреждение здравоохранения Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (RU)
Изобретение относится к области медицины, в частности к исследованиям нейтрофилов крови при действии токсинов различной природы, и может быть использовано для оценки эффективности дезинтоксикационных мероприятий. Сущность изобретения заключается в том, что эффективность дезинтоксикационной терапии оценивают по результатам цитохимического исследования периферической крови в процессе дезинтоксикационных мероприятий. В качестве биохимического показателя используют состояние ферментных систем, а именно активность кислой фосфатазы и миелопероксидазы в нейтрофилах. Использование способа позволяет быстро оценить эффективность проводимой дезинтоксикационной терапии. 1 табл.
Изобретешь относится к области медицины, в частности к исследованию полиморфноядерных нейтрофилов крови при интоксикации различной этиологии, и может быть использовано при оценки эффективности дезинтоксикационной терапии.
Традиционно качество дезинтоксикационной терапии оценивается по результатам биохимических исследований сыворотки крови, таких как определение содержания общего белка и мочевины, величине тимоловой пробы.
В ряде опубликованных работ отражена динамика цитохимических изменений в лимфоцитах и нейтрофилах крови при развитии различных форм дифтерии, при шигеллезах и сальмонеллезах (Шалыгина Н.Б., Шалыгина А.Ю. 1991 г., Нагоев Б.С. 1993, 2002). Однако все эти исследования относятся к различным бактериальным инфекциям.
Наиболее близким к предлагаемому изобретению является способ контроля эффективности антибиотика при лечении бруцеллеза (Малецкая О.В., Логвиненко О.В., Лямкин Г.И. и др. (Патент РФ №2206898, опубл. 20.06.03, Бюл. №17).
Недостатком данного способа является то, что он относится к инфекции бактериальной природы, при которой информативными считаются такие цитохимичесакие показатели как гликоген, сукцинат дегидрогеназа и катионные белки.
Технической задачей изобретения является повышение контроля за эффективностью действия лекарственных препаратов в процессе дезинтоксикационной терапии.
Сущность изобретения заключается в том, что заявляемый способ основан на постановке дополнительных тестов, используемых для контроля дезинтоксикационной терапии при интоксикации любой природы, основанный на определении к нейтрофилах крови цитохимических показателей, а именно в определении изменения активности миелопероксидазы и кислой фосфатазы.
Ряд исследователей рассматривает интоксикацию как синдром, который, прежде всего, характеризуется расстройством кровообращения с недостаточным снабжением кислородом и нарушением обмена веществ клеток различных органов. Вследствие развития гипоксии страдают кислородозависимые ферменты клетки. Достаточно информативным может быть кислородзависимый фермент. В нашем случае мы определяли активность миелопероксидазы в клетках крови белых мышей. Из литературных источников (Юлиу Щутеу, Траян Бэндинэ, Атансие Кафрицэ и др. «Шок, терминология и классификация». Бухарест, Военное издательство, 1987 г.) известно, что изменение активности кислой фосфатазы является одним из основных маркеров тяжести интоксикации организма. Изменение активности данного фермента в нейтрофилах крови так же учитывалось нами при проведении экспериментов. Исследование активности ферментов проводили по известным методикам (Сафронова В.М., Локтев Н.А., Руднев С.М. Практическое пособие по цитоэнзимохимическим методам исследований. Депонировано в ВИНИТИ, 1994, №1424 - В94, 49 с.)
Заявляемый способ осуществлялся следующим образом.
Беспородным белым мышам массой 18-20 г из питомника СтавНИПЧИ внутрибрюшинно однократно вводили сальмонеллезный токсин в дозе 0,2 мг (0,25LD50) на мышь. Другой группе животных вводили четыреххлористый углерод однократно в дозе 0,2 мл в 50% масляном растворе, что также составляло 0,25LD50. В качестве дезинтоксикационных препаратов при введении четыреххлористого углерода использовали смесь аскорбиновой кислоты, L-токоферола, эссенциале, силинита натрия и АТФ. При сальмонеллезной интоксикации - аскорбиновую кислоту, эссенциале, L-токоферол, селинит натрия и рибоксин. Препараты вводили ежедневно в течение 6 дней, липосомальнуто форму вводили шестикратно, через 2 дня на третий, что связано с пролонгированным действием комплекса. Кровь на исследование, в количестве 0,1 мл, брали из сердца умерщвленных хлороформированием животных на 3, 10, 20, 30 сутки после начала дезинтоксикационных мероприятий.
Об эффективности дезинтоксикационной терапии судили по результатам цитоэнзимохимических исследований, в процессе которых в нейтрофилах крови определяли активность кислой фосфатазы и миелопероксидазы. Параллельно в сыворотке крови определяли содержание общего белка и мочевины
У животных, которым вводили четыреххлористый углерод, на 3 сутки проведения дезитоксикационных мероприятий активность кислой фосфатазы повышалась по сравнению с контролем (1,74±0,01 ед. Кэплоу, 1,01±0,01 ед. Кэплоу), однако, была достоверно ниже, чем у животных, не получавших препараты (1,87±0,03 ед. Кэплоу). В эти же сроки отмечали угнетение миелопероксидазной активности в нейтрофилах крови (0,78±0,07 ед. Кэплоу) по сравнению с интактными животными (1,41±0,09 ед. Кэппоу).
На 10 сутки активность кислой фосфатазы составляла 1,72±0,04 ед. Кэплоу, а миелопероксиадазы 0,94±0,07 ед. Кэплоу.
На 30 сутки сохранялась тенденция к снижению уровня кислой фосфатазы до значения 1,35±0,02 ед. Кэплоу, а миелопероксидазы повышалось до 1,39±0,02 ед. Кэплоу.
Аналогичной была и динамика изменения биохимических показателей в сыворотке крови. На 3 сутки отмечали резкое угнетение содержания общего белка и мочевины (20,0±3,1 г/л, 1,2±0,27 ммоль/л). Использование дезинтоксикационных препаратов сопровождалось повышением уровня исследуемых показателей. Данные представлены в таблице.
К концу эксперимента активность миелопероксидазы в группе животных, получавших стабилизирующую терапию, достоверно не отличалась от данных, полученных в контрольной группе. Активность кислой фосфатазы в нейтрофила крови была выше контрольных величин, однако, прослеживалась тенденция к нормализации исследуемого цитохимического показателя.
При введении белым мышам сальмонеллезного токсина в процессе стабилизирующей терапии были получены следующие результаты.
На третьи сутки наблюдали повышение активности кислой фосфатазы 1,95±0,03 ед. Кэплоу (норма 1,01±0,01 ед. Кэплоу) и угнетение активность миелопероксидазы до 0,75±0,01 ед. Кэплоу (норма - 1,41±0,09 ед. Кэплоу).
На 10 сутки цифровые величины цитохимической активности кислой фосфатазы составляли 1,63±0,05 ед. Кэплоу, миелопероксидазы - 1,02±0,07 ед. Кэплоу.
На 30 сутки сохранялась тенденция к понижению активности кислой фосфатазы (1,43±0,05 ед. Кэплоу) и повышению активности миелопероксидазы (1,39±0,09 ед. Кэплоу).
Изучение биохимических показателей сыворотки крови показало, что низкое содержание мочевины и общего белка (1,0±0,14 ммоль/л, 19,0±4,2 г/л) на 3 сутки наблюдения постепенно увеличивалось и на 30 сутки составляло - общий белок 58±4,2 г/л, мочевина 3,9±0,37 ммоль/л. Наблюдалась тенденция к нормализации данных показателей при проведении дезинтоксикационной терапии.
В результате эксперимента установлено, что дезинтоксикационная терапия способствовала восстановлению активности исследуемых цитохимических показателей крови белых мышей. Изменение уровня ферментов в клетках крови коррелировало с результатами биохимических исследований.
Достоинствами предлагаемого способа является простота постановки цитохимических реакций, возможность быстро оценить эффективность проводимой дезинтоксикационной терапии.
Таким образом использование цитохимических показателей крови может служить как дополнительным, так и самостоятельным тестом для оценки эффективности стабилизирующей терапии при действии токсинов различной природы.
| Таблица 1 Обоснование использования активности кислой фосфатазы и миелопероксидазы в нейтрофилах крови для оценки эффективности стабилизирующих препаратов при интоксикации различной этиологии. | ||||||||||||
| Группы животных | КФ | МПО | Общий белок | Мочевина | ||||||||
| 3 сут | 10 сут | 30 сут | 3 сут | 10 сут | 30 сут | 3 сут | 10 сут | 30 сут | 3 сут | 10 сут | 30 сут | |
| Контроль | 1,01±0,01 | 1,01±0,01 | 1,01±0,01 | 1,41±0,09 | 1,41±0,09 | 1,41±0,09 | 98,0±2,1 | 98,0±2,1 | 98,0±2,1 | 9,3±1,0 | 9,3±1,0 | 9,3±1,0 |
| Четыреххлористый углерод | 1,87±0,03 | 1,79±0,01 | 1,59±0,1 | 0,27±0,04 | 0,38±0,03 | 1,15±0,07 | 20,0±3,1 | 19±3,4 | 45±3 | 1,2±0,27 | 1,4±0,16 | 1,8±0,17 |
| Стабилизирующий препарат | 1,74±0,01 | 1,71±0,04 | 1,35±0,02 | 0,78±0,07 | 0,94±0,07 | 1,39±0,03 | 19,0±4,2 | 46±6,5 | 58±4,2 | 1,0±0,14 | 1,6±0,5 | 3,9±0,37 |
| Сальмонеллезный токсин | 2,13±0,01 | 2,23±0,08 | 1,64±0,03 | 0,19±0,07 | 0,36±0,07 | 1,1±0,03 | 71,0±7,3 | 74,0±4,7 | 86,0±8,7 | 3,0±0,4 | 3,5±0,44 | 4,9±0,81 |
| Стабилизирующий препарат | 1,95±0,03 | 1,61±0,05 | 1,43±0,05 | 0,75±0,01 | 1,02±0,08 | 1,39±0,04 | 83±8,4 | 83,0±3,9 | 90,0±6,3 | 3,5±0,52 | 3,7±0,47 | 5,0±0,98 |
Способ оценки эффективности дезинтоксикационной терапии при воздействии токсинов различной природы в эксперименте путем исследования периферической крови, отличающийся тем, что в процессе дезинтоксикационных мероприятий цитохимически определяют активность кислой фосфотазы и миелопероксидазы в нейтрофилах периферической крови и препарат считают эффективным, если в процессе терапии прослеживается тенденция к нормализации исследуемых цитохимических показателей.
